兩種處理方法對(duì)脂溶性樣品中正二氫愈瘡酸的研究

1、    兩種處理方法對(duì)脂溶性樣品中正二氫愈瘡酸的研究    張郴+賓婕摘 要：目的：比較兩種處理方法對(duì)脂溶性樣品中正二氫愈瘡酸的萃取和純化效果的影響。方法：選擇了三種脂溶性樣品采用加標(biāo)回收試驗(yàn)的方式，比較了甲醇和水混合萃取溶劑，甲醇：水=8：2（體積比）方法與正己烷一乙腈分配方法對(duì)正二氫愈瘡酸（ngda）純化效果的影響，用高效液相色譜法（hplc）進(jìn)行分析。結(jié)果：用甲醇和水混合萃取法對(duì)正二氫愈瘡酸的萃取效率高，純化效果好。結(jié)論：該方法操作簡(jiǎn)便、快速，適合于正二氫愈瘡酸（ngda）抗氧化劑的提取，從而能夠快速、準(zhǔn)確地獲得樣品信息。關(guān)鍵詞：高效液相色譜；脂溶

2、性樣品；抗氧化劑正二氫愈瘡酸；純化效果：ts207.3 ：a ：1671-2064（2017）04-0193-031 正二氫愈瘡酸簡(jiǎn)介正二氫愈瘡酸是一種主要的木脂素，在美國(guó)西南和墨西哥生長(zhǎng)的一種larrea tridentate coville灌木中被發(fā)現(xiàn)。然而，在飲用了含有正二氫愈瘡酸的茶葉或是食用了含有510%干重的正二氫愈瘡酸膠囊后1，出現(xiàn)了非感染性肝炎的病例2，同時(shí)研究報(bào)告結(jié)論表明過量攝入正二氫愈瘡酸會(huì)導(dǎo)致腎損傷。然而，其他一些報(bào)告顯示了一些抗氧化劑潛在的毒性、致癌性和致突變性3。對(duì)于油脂類樣品的溶劑提取方法，李秀勇等4往油脂樣品中加入飽和nacl溶液，用正己烷飽和乙腈提取，萃取后再用

3、氮?dú)獯蹈啥ㄈ堋｀嵰愕?用正已烷飽和的乙腈直接提取。mitsuo oishi等6用乙酸乙酯，并且配合減壓濃縮手段來(lái)進(jìn)行樣品前處理。但大多數(shù)報(bào)道的前處理方法比較復(fù)雜。國(guó)內(nèi)外關(guān)于正二氫愈瘡酸的檢測(cè)報(bào)道較少，方法主要有hplcdad7-8、hplc-fld9、lc-ms10和毛細(xì)管電泳法11，但大多數(shù)操作繁瑣。本文考查兩種不同處理方法對(duì)脂溶性樣品中的正二氫愈瘡酸的分離、純化效果，用高效液相色譜法快速測(cè)定，該方法簡(jiǎn)單、穩(wěn)定，以為正二氫愈瘡酸的檢測(cè)提供依據(jù)。2 材料與方法2.1 材料2.1.1 儀器高效液相色譜儀：美國(guó)安捷倫1200，配置柱溫箱、梯度洗脫功能和熒光檢測(cè)器），色譜柱capcell pak c

4、r（3.5um，250×4.6 mm），分析天平（德國(guó)賽多利斯）（精確至0.1mg），超聲發(fā)生器（江蘇昆山市超聲儀器有限公司，kq-50da），離心機(jī)（天津市離心儀器有限公司），旋轉(zhuǎn)真空蒸發(fā)器（江蘇常州市澳華達(dá)儀器廠）。2.1.2 試藥正二氫愈瘡酸（純度大于97%；newjersey，usa；a0196169），表香、秘魯、吐嚕樣品購(gòu)于市場(chǎng)，乙腈（色譜純， 美國(guó)tedia天地試劑公司，1008916），甲醇（色譜純，美國(guó)tedia天地試劑公司，1007901），抗壞血酸（天津市化學(xué)試劑三廠），水（自制超純水），正己烷（分析純，天津市永大化學(xué)試劑開發(fā)中心，20050708）。2.2 方

5、法與結(jié)果2.2.1 標(biāo)準(zhǔn)溶液和樣品的配制（1）標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制。準(zhǔn)確稱取約5mg（精確至0.1mg）正二氫愈瘡酸標(biāo)品，置于100ml容量瓶中用0.1%asa甲醇定容至刻度，搖勻。（2）樣品的配制。甲醇和水混合萃取法。分別準(zhǔn)確稱取約2.5g表香、秘魯、吐嚕樣品于100ml具磨口玻璃塞的錐形瓶中，準(zhǔn)確加入30ml甲醇-水組成的混合萃取溶劑，超聲萃取10min；將超聲萃取液移入50ml具塞容量瓶中，分別用5ml上述混合萃取溶劑三次清洗錐形瓶，將清洗溶液注入至容量瓶中，并用混合萃取溶劑定容至刻度后，充分搖勻定容后的萃取溶液；將3ml定容后的萃取液置于10ml帶塞的離心試管中，在5000r/min轉(zhuǎn)速條件

6、下離心分離10min；取1ml上清液過0.45m濾膜后，進(jìn)行液相色譜分析，外標(biāo)法定量。正己烷一乙腈分配法。稱取約1.2g表香、秘魯、吐嚕樣品于離心管中，加人5ml乙睛飽和的正己烷，在液體混勻器上快速混勻以充分溶解樣，加人10ml正己烷飽和的乙睛，于液體混勻器上快速混勻1min，靜置分層，用膠頭吸管將乙睛層轉(zhuǎn)人濃縮瓶?jī)?nèi)。如上操作再用乙睛提取兩次，合并乙睛于濃縮瓶?jī)?nèi)。乙腈提取液在40下，用旋轉(zhuǎn)真空蒸發(fā)器濃縮至約1ml，將濃縮液轉(zhuǎn)至5ml刻度管中，用異丙醇定容至2ml，經(jīng)0.45um濾膜過濾，供分析。2.2.2 結(jié)果（1）hplc色譜條件。高效液相色譜儀：美國(guó)安捷倫1200，色譜柱：capcell

7、pak cr（3.5um，250×4.6mm），流動(dòng)相a：乙腈，流動(dòng)相b：水；05mina相30%，520min，a相3035%。柱溫：40；流速：1ml/min；進(jìn)樣體積：10l；檢測(cè)器檢測(cè)波長(zhǎng)，ex/em=280/306nm；對(duì)照品及樣品的色譜圖如圖1所示。（2）線性關(guān)系考察。分別準(zhǔn)確移取0.1、0.3、0.5、1.0、2.0ml正二氫愈瘡酸對(duì)照品溶液2.2.1（1）至50ml容量瓶中，采用含0.1%asa的甲醇溶液定容至刻度。高效液相色譜儀分析，測(cè)定其峰面積，以濃度x（ug/ml）為橫坐標(biāo)，色譜峰面積y為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。y=12.86 x+0.0151，r=1結(jié)果表明正二

8、氫愈瘡酸標(biāo)品濃度在0.10082.016 ug/ml范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。（3）精密度試驗(yàn)。分別精密吸取2.2.1（1）項(xiàng)下的正二氫愈瘡酸對(duì)照品溶液10l，連續(xù)進(jìn)樣5次，記錄色譜圖，計(jì)算正二氫愈瘡酸的峰面積和相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（rsd），結(jié)果rsd為0.30%。（4）穩(wěn)定性試驗(yàn)。精密吸取甲醇和水混合萃取法制備的同一表香加標(biāo)樣品溶液10l，分別于0，2，4，8，12h進(jìn)樣，記錄色譜圖，計(jì)算正二氫愈瘡酸的峰面積和相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（rsd），結(jié)果rsd為1.06%。 （5）重復(fù)性試驗(yàn)。取同一表香樣品5份，精密稱定，按2.2.1（2）項(xiàng)下方法制備，進(jìn)樣測(cè)定，計(jì)算正二氫愈瘡酸的峰面積和相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（rsd），結(jié)果r

9、sd為0.32%。（6）加標(biāo)回收率試驗(yàn)。對(duì)表香樣品進(jìn)行不同濃度水平的加標(biāo)后，按照2.2.1（2）項(xiàng)下方法制備，計(jì)算其加標(biāo)回收率，結(jié)果正二氫愈瘡酸的平均加樣回收率為99.30%（rsd= 1.51%）。（7）樣品含量測(cè)定。取表香樣品，分別按2.2.1（2）項(xiàng)下方法制備供試品溶液，進(jìn)樣6l，記錄正二氫愈瘡酸的峰面積，由線性方程計(jì)算各自含量，測(cè)定結(jié)果見表1所示。3 結(jié)語(yǔ)實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：甲醇和水混合萃取法操作簡(jiǎn)便、快速、萃取效率高，純化結(jié)果好，適合于藥用正二氫愈瘡酸（ngda）抗氧化劑的提取，從而能夠快速、準(zhǔn)確地獲得樣品信息。相對(duì)而言，正己烷一乙腈分配法操作復(fù)雜、繁瑣、萃取效率低，并且峰型不易分開，純化

10、效果差。由此得出：用甲醇和水混合萃取法可以得到更好的萃取效果。參考文獻(xiàn)1段沅杏，賀兵，李干鵬，等.食品中正二氫愈瘡酸含量的高效液相色譜法熒光法測(cè)定j.云南化工，2011（1）：42-47.2craigo j，callahan m，huang r c， et al.inhibition of human papillomavirus type 16 gene expression by nordihydroguaiaretic acid plant lignan derivatives j.antivir res，2000（1）：19-28.3chen h，teng l，li j n， et a

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