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文檔簡介
1、實驗蛋白質(zhì)的沉淀反應(yīng)與顏色反應(yīng)一、實驗?zāi)康恼莆砧b定蛋白質(zhì)的原理和方法。熟悉蛋白質(zhì)的沉淀反應(yīng),進(jìn)一步熟悉蛋白質(zhì)的有關(guān)反應(yīng)。二、實驗原理蛋白質(zhì)分子中某種或某些集團(tuán)可與顯色劑作用,產(chǎn)生顏色。不同的蛋白質(zhì)由于所含的氨基酸不完全相同,顏色反應(yīng)亦不完全相同。顏色反應(yīng)不是蛋白質(zhì)的專一反應(yīng),一些非蛋白物質(zhì)也可產(chǎn)生同樣的顏色反應(yīng),因此不能根據(jù)顏色反應(yīng)的結(jié)果來決定被測物是否為蛋白質(zhì)。另外,顏色反應(yīng)也可作為一些常用蛋白質(zhì)定量測定的依據(jù)。蛋白質(zhì)是親水性膠體,在溶液中的穩(wěn)定性與質(zhì)點大小、電荷、水化作用有關(guān),但其穩(wěn)定性是有條件的,相對的。如果條件發(fā)生了變化,破壞了蛋白質(zhì)的穩(wěn)定性,蛋白質(zhì)就會從溶液中沉淀出來。三、實驗儀器
2、1、吸管 2 、滴管 3 、試管 4 、電爐 5 、ph 試紙 6 、水浴鍋7、移液管四、實驗試劑 1、卵清蛋白液:雞蛋清用蒸餾水稀釋10-20 倍,3-4 層紗布過濾,濾液放在冰箱里冷藏備用。 2、 0.5% 苯酚: 1g 苯酚加蒸餾水稀釋至200ml。 3、millon s 試劑: 40g 汞溶于 60ml 濃硝酸(水浴加溫助溶)溶解后,冷卻,加二倍體積的蒸餾水,混勻,取上清夜備用。此試劑可長期保存。 4、尿素晶體 5、1%cuso : 1g cuso 晶體溶于蒸餾水,稀釋至100ml 44 6、10%naoh :10g naoh 溶于蒸餾水,稀釋至100ml 7、濃硝酸 8、0.1%茚三
3、酮溶液: 0.1g 茚三酮溶于95% 的乙醇并稀釋至100ml. 9、 冰醋酸 10、濃硫酸 11、飽和硫酸銨溶液:100ml 蒸餾水中加硫酸銨至飽和。 12、硫酸銨晶體:用研缽研成碎末。 13、 95% 乙醇。 14、醋酸鉛溶液:1g 醋酸鉛溶于蒸餾水并稀釋至100ml 15、氯化鈉晶體 16、 10% 三氯乙酸溶液:10g 三氯乙酸溶于蒸餾水中并稀釋至100ml 17、飽和苦味酸溶液:100ml 蒸餾水中加苦味酸至飽和。 18 、 1% 醋酸溶液。五、實驗步驟蛋白質(zhì)的顏色反應(yīng)(一)米倫( millon s)反應(yīng) 1、苯酚實驗:取0.5%苯酚溶液1ml 于試管中,加millon s 試劑 0
4、.5ml ,電爐小心加熱觀察顏色變化。 2、蛋白質(zhì)實驗:取2ml 蛋白液,加millon s 試劑 0.5ml ,出現(xiàn)白色的蛋白質(zhì)沉淀,小心加熱,觀察現(xiàn)象。(二)雙縮脲反應(yīng) 1、取少量尿素晶體放在干燥的試管中,微火加熱熔化,至重新結(jié)晶時冷卻。然后加10%naoh溶液 1ml,搖勻,再加2-4 滴 1% cuso4 溶液,混勻,觀察現(xiàn)象。 2、取蛋白液1ml,加 10%naoh溶液 1ml,搖勻,再加2-4 滴 1% cuso4 溶液,混勻,觀察現(xiàn)象。(三)黃色反應(yīng)取一支試管,加入1ml 蛋白液及濃硝酸5 滴。加熱,冷卻后注意顏色變化。然后再加入10%naoh溶液 1ml,觀察顏色有什么變化。(
5、四)茚三酮反應(yīng)取蛋白液1ml 于試管中,加4-8 滴茚三酮溶液,加熱至沸,即有藍(lán)紫色出現(xiàn)。蛋白質(zhì)的沉淀(一)蛋白質(zhì)的鹽析作用 1、試管中加蒸餾水3ml,加固體硫酸銨至飽和。另一支試管加蛋白液2ml,再加入飽和硫酸銨溶液2ml,搖勻靜置觀察現(xiàn)象。 2、將上述混合液過濾。向濾液中逐漸加入少量固體硫酸銨,直至飽和為止,此時析出為清蛋白。再加入少量蒸餾水,觀察沉淀是否溶解。(二)有機(jī)溶劑沉淀蛋白質(zhì)試管中加蛋白液1ml,加晶體氯化鈉少許,溶解后加95% 乙醇 3ml, 搖勻,觀察現(xiàn)象。(三)重金屬鹽與某些有機(jī)酸沉淀蛋白質(zhì) 1、取試管2 支,各加蛋白液2ml,一支管中滴加1% 醋酸鉛溶液,另一支管中滴加1
6、% 硫酸銅溶液,至有沉淀產(chǎn)生。 2、取一支試管加蛋白液2ml,再加入10% 三氯乙酸1ml,充分混勻,觀察結(jié)果。(四)生物堿試劑沉淀蛋白質(zhì)取一支試管,加入蛋白液2ml 及醋酸 4-5 滴,再加飽和苦味酸數(shù)滴,觀察現(xiàn)象。六、實驗結(jié)果蛋白質(zhì)的顏色反應(yīng)(一)米倫( millon s)反應(yīng) 1、苯酚實驗:溶液即出現(xiàn)玫瑰紅色。 2、蛋白質(zhì)實驗:出現(xiàn)白色的蛋白質(zhì)沉淀,小心加熱后凝固的蛋白質(zhì)出現(xiàn)紅色。(二)雙縮脲反應(yīng) 1、有紫色出現(xiàn)。 2、溶液有藍(lán)紫色出現(xiàn)(三)黃色反應(yīng)先有黃色沉淀生成,加入10%naoh溶液 1ml 后顏色變?yōu)殚冱S色。(四)茚三酮反應(yīng)有藍(lán)紫色出現(xiàn)。蛋白質(zhì)的沉淀(一)蛋白質(zhì)的鹽析作用 1、有
7、蛋白析出。 2、有蛋白質(zhì)析出,加水后可復(fù)溶。(六)有機(jī)溶劑沉淀蛋白質(zhì)取一試管加蛋白液1ml, ,加入晶體氯化鈉少許,待溶解后再加95% 乙醇 3ml, 搖勻,觀察現(xiàn)象(七)重金屬鹽與某些有機(jī)酸沉淀蛋白質(zhì)取試管 2 支,各加蛋白液2ml,一支管中滴加1% 醋酸鉛溶液,另一支管中滴加1% 硫酸銅溶液,至有沉淀產(chǎn)生。(八)生物堿試劑沉淀蛋白質(zhì)取一支試管,加入蛋白液2ml 及醋酸 4-5 滴,再加飽和苦味酸和鞣酸數(shù)滴,觀察現(xiàn)象。七、實驗分析蛋白質(zhì)分子中某種或某些集團(tuán)可與顯色劑作用,產(chǎn)生顏色。不同的蛋白質(zhì)由于所含的氨基酸不完全相同,顏色反應(yīng)亦不完全相同。篇二:自由沉淀實驗報告六、實驗數(shù)據(jù)記錄與整理 1、
8、實驗數(shù)據(jù)記錄沉降柱直徑水樣來源柱高靜置沉淀時間 /min 表面皿表面皿編號質(zhì)量 /g 表面皿和懸浮物總質(zhì)量/g 水樣中懸浮物質(zhì)量/g 水樣體積 /ml 懸浮物沉降柱濃度/工作水( g/ml ) 深/mm 顆粒沉沉淀效速/ 率/ ( mm/s)殘余顆粒百分比 / 0 5 10 20 30 60 120 0 1 2 3 4 5 6 79.0438 80.7412 1.6974 81.7603 83.2075 1.4472 64.1890 65.4972 1.3082 66.1162 67.3286 1.2124 73.7895 74.9385 1.1490 83.4782 84.6290 1.15
9、08 75.0332 76.1573 1.1241 31.0 30.0 30.0 30.0 30.0 31.0 31.0 0.0548 0.0482 0.0436 0.0404 0.0383 0.0371 0.0363 846.0 808.0 780.0 724.0 664.0 500.0 361.0 1.860 0.883 0.395 0.230 0.069 0.021 11.40 20.44 26.28 30.11 32.30 33.76 100 87.96 79.56 73.72 69.89 67.70 66.24 2、實驗數(shù)據(jù)整理(2)繪制沉淀曲線:e-t 、 e-u 、uipi曲線如
10、下: 2-1 、繪制去除率與沉淀時間的曲線如下:圖 2.2 :沉淀時間t 與沉淀效率e 的關(guān)系曲線 2-2、繪制去除率與沉淀速度的曲線如下:圖 2.2 :顆粒沉速u與沉淀效率e 的關(guān)系曲線 2-3、繪制去除率與沉淀速度的曲線如下:(1)選擇 t=60min 時刻: ( 大家注意哦!這部分手寫的,不要直接打印!) 水樣中懸浮物質(zhì)量 =表面皿和懸浮物總質(zhì)量-表面皿質(zhì)量 , 如表格所示。原水懸浮物的濃度:c0? 水樣中懸浮物質(zhì)量1.6974 ?0.0548g/ml 水樣體積31.0 懸浮物的濃度:c5? 水樣中懸浮物質(zhì)量1.1508 ?0.0371g/ml 水樣體積31.0 沉淀速率: u? h?1
11、0(500-250)?0.069mm/s ti?6060?60 c0-c50.0548-0.0371 ?100%?100%?32.30 c00.0548 c50.0371 ?100%?100%?67.70 c00.0548 沉淀效率 :e5? 殘余顆粒百分比p5?篇三:混凝沉淀實驗報告實驗名稱:混凝沉淀實驗一、實驗?zāi)康?1、通過實驗觀察混凝現(xiàn)象、加深對混凝沉淀理論的理解; 2、掌握確定最佳投藥量的方法,選擇和確定最佳混凝工藝條件; 3、了解影響混凝條件的相關(guān)因數(shù)。二、實驗原理 1.混凝作用原理包括三部分: 1)壓縮雙電層作用;2)吸附架橋作用; 3)網(wǎng)捕作用。這三種混凝機(jī)理在水處理過程中不是各
12、自孤立的現(xiàn)象,而往往是同時存在的,只不過隨不同的藥劑種類、投加量和水質(zhì)條件而發(fā)揮作用程度不同,以某一種作用機(jī)理為主。對高分子混凝劑來說,主要以吸附架橋機(jī)理為主。而無機(jī)的金屬鹽混凝劑則三種作用同時存在。膠體表面的電荷值常用電動電位表示,又稱為zeta 電位。一般天然水中的膠體顆粒的 zeta 電位約在 -30mv 以上,投加混凝劑之后,只要該電位降到-15mv 左右即可得到較好的混凝效果。相反,當(dāng)電位降到零,往往不是最佳混凝狀態(tài)。因為水中的膠體顆粒主要是帶負(fù)電的粘土顆粒。膠體間存在著靜電斥力,膠粒的布朗運動,膠粒表面的水化作用,使膠粒具有分散穩(wěn)定性,三者中以靜電斥力影響最大,若向水中投加混凝劑能
13、提供大量的正離子,能加速膠體的凝結(jié)和沉降。 2.混凝劑向水中投加的能使水中膠體顆粒脫穩(wěn)的高價電解質(zhì),稱之為 “混凝劑”?;炷齽┛煞譃闊o機(jī)鹽混凝劑和高分子混凝劑。水處理中常用的混凝劑有:三氯化鐵、硫酸鋁、聚合氯化鋁 (簡稱 pac) 、聚丙烯酰胺等。本實驗使用pac,它是介于alcl3 和 al(oh)3 之間的一種水溶性無機(jī)高分子聚合物,化學(xué)通式為al2(oh)ncl(6-n)m其中 m代表聚合程度,n表示 pac 產(chǎn)品的中性程度。 3.投藥量單位體積水中投加的混凝劑量稱為“投藥量”,單位為 mg/l 。混凝劑的投加量除與混凝劑品種有關(guān)外,還與原水的水質(zhì)有關(guān)。當(dāng)投加的混凝劑量過小時,高價電解質(zhì)
14、對膠體顆粒的電荷斥力改變不大,膠體難以脫穩(wěn), 混凝效果不明顯; 當(dāng)投加的混凝劑量過大時,則高價反離子過多,膠體顆粒會吸附過多的反離子而使膠體改變電性,從而使膠體粒子重新穩(wěn)定。因此混凝劑的投加量有一個最佳值,其大小需要通過試驗確定。 4.影響混凝作用的因素投藥量、水中膠體顆粒的濃度、水溫、水的ph 值等。 5.濁度儀濁度是表現(xiàn)水中懸浮物對光線透過時所發(fā)生的阻礙程度。水中含有泥土、 粉塵、微細(xì)有機(jī)物、浮游動物和其他微生物等懸浮物和膠體物都可使水中呈現(xiàn)濁度。濁度儀采用 90散射光原理。由光源發(fā)出的平行光束通過溶液時,一部分被吸收和散射,另一部分透過溶液。與入射光成90 方向的散射光強(qiáng)度符合雷萊公式,
15、在入射光恒定條件下,在一定濁度范圍內(nèi),散射光強(qiáng)度與溶液的混濁度成正比。因此,我們可以通過測量水樣中微粒的散射光強(qiáng)度來測量水樣的濁度。三、實驗儀器和試劑 1.儀器(1)濁度儀一臺(sgz-2 數(shù)顯濁度儀,上海悅豐儀器儀表有限公司)(2)混凝試驗攪拌儀(my3000-6 普通型混凝試驗攪拌儀,潛江梅寧儀器有限公司)(3)電子天平(賽多利斯科學(xué)儀器,北京有限公司)(4) 沉淀桶( 600ml 燒杯) 6 個; (5) 100ml 取樣瓶 6 個; (6)乳膠管或塑料軟管(直徑 58mm )1520cm; (7) 100ml 燒杯 1 個; (8) 100ml 量筒 1 個;(9) 500ml 量 筒
16、 1 個; (10) 10ml 量筒 1 個; 2.實驗試劑混凝劑:聚合氯化鋁pac; 原水(制備工作已由實驗員完成);自來水四、實驗步驟 1) 制備原水:事先用高嶺土配制濁度為50 ntu 左右的渾水,靜沉1 天以上,取上清液備用。 (已由實驗員完成) 2) 用電子天平稱取混凝劑(pac)3g 溶于 1l 自來水中,濃度為3g/l 。 3) 取 600ml 原水倒入與攪拌儀配套的沉淀桶中。共六個沉淀桶。 4) 根據(jù)原水體積,按照投加量80、120、160、200、 300、400mg/l 計算加藥量,并換算成混凝劑溶液的體積量。換算后,混凝劑溶液的體積分別為:16、24、32、40、60、8
17、0ml。 5) 設(shè)置攪拌儀程序:(1)轉(zhuǎn)速 400 轉(zhuǎn)/ 分,攪拌 1.5 min ; (2)轉(zhuǎn)速 150 轉(zhuǎn)/ 分,繼續(xù)攪拌5 min ;(3)轉(zhuǎn)速 60 轉(zhuǎn)/ 分,繼續(xù)攪拌5 min ; ( 4)轉(zhuǎn)速 0 轉(zhuǎn)/分鐘,沉淀15min 6) 用量筒量取步驟(3)計算的混凝劑量,快速加入沉淀桶中。貼好標(biāo)簽,將六個沉淀桶放置在攪拌儀上。 7) 開啟攪拌儀,按照設(shè)定程序運行。(注意觀察各個沉淀桶的絮凝沉淀情況) 8) 程序結(jié)束后, 打開沉淀桶的小閥門,取每個沉淀桶中上清液50100ml 于清洗好的試管中。 9) 用濁度儀測定上清液濁度并進(jìn)行記錄(速度要快;使用前要調(diào)零;待濁度儀示數(shù)較穩(wěn)定時讀數(shù))五、
18、實驗結(jié)果記錄及處理表. 不同加藥量溶液的濁度加藥量 mg/l pac溶液體積 /ml 濁度 /ntu 8.23 3.30 2.20 以投藥量為橫坐標(biāo),上清液濁度為縱坐標(biāo)繪制不同混凝劑混凝沉淀圖,從圖中求出最低濁度時混凝的投加量。 2.43 4.70 110.00 16 24 32 40 60 80 80 120 160 200 300 400 圖. 不同混凝劑混凝沉淀圖從以上作圖結(jié)果可以看出,以四次方的多項式擬合效果較好(r=1 ) ,當(dāng)溶液的濁度達(dá)到最低點時對應(yīng)的投藥量約為255mg/l ,即該原水的最佳投藥量為255mg/l 。 2 六、結(jié)果與討論 1.實驗時,在攪拌過程中發(fā)現(xiàn)不同沉淀桶中
19、呈現(xiàn)的顏色深淺不一,形成的絮狀顆粒大小也不同。這說明,不同加藥量會對混凝效果產(chǎn)生不同影響。 2.實驗中, 600ml 原水未用量筒進(jìn)行量取,而是直接根據(jù)沉淀桶上的刻度進(jìn)行添加。沉淀桶上的刻度相對不精確,對實驗結(jié)果會產(chǎn)生一定的影響。 3.測定上清液的濁度時,發(fā)現(xiàn)若是測定速度較慢,不同溶液的沉淀時間就不平行。較晚測定的溶液沉淀時間較長,這對實驗結(jié)果的準(zhǔn)確度也會造成影響。 4.測定濁度時發(fā)現(xiàn)濁度儀的示數(shù)不穩(wěn)定,波動較大。造成該結(jié)果的原因可能是由于靜置沉淀的時間不夠長,溶液中的顆粒還處于較為劇烈的運動狀態(tài),這樣測得光源被散射的散射光強(qiáng)度就會有較大變化,導(dǎo)致濁度儀示數(shù)不穩(wěn)定。 5.對實驗數(shù)據(jù)進(jìn)行處理時,
20、發(fā)現(xiàn)可以使用不同次冪的多項式對實驗結(jié)果進(jìn)行擬合。本實驗用四次冪或五次冪的多項式進(jìn)行擬合時,r都等于1。而用三次冪的多項式進(jìn)行擬合的r則等于 0.9999 。根據(jù)觀察擬合曲線的情況,選擇以四次冪多項式擬合。最佳投藥量是根據(jù)曲線進(jìn)行估計的,并未進(jìn)行精確地計算。這樣得出的結(jié)果可能會存在一定的偏差。 22 六、思考題 1.選擇混凝劑種類及確定其投加量時應(yīng)考慮哪些因素?混凝劑的選擇主要取決于膠體和細(xì)微懸浮物的性質(zhì)和濃度。如水中污染物主要呈膠體狀態(tài)且電位較高則營先投加無機(jī)混凝劑使其脫穩(wěn)凝聚;如絮體細(xì)小,還需投加高分子混凝劑或配合使用活性硅酸等助凝劑。同時,用于水處理的混凝劑要求混凝效果好,對人類健康無害,
21、價廉易得,使用方便。對于混凝劑投加量的確定,主要考慮水中微粒種類、性質(zhì)和濃度以及混凝劑品種、投加方式、介質(zhì)條件等。對任何廢水的混凝處理,都存在最佳混凝劑和最佳投藥量的問題,應(yīng)通過試驗確定。 2.混凝操作過程中應(yīng)注意哪些問題? 1)取原水時要攪拌均勻,要一次量取以盡量減少所取原水濃度上的差別。 2)混凝包括混合與凝聚,混合過程 (即混凝劑剛加入水中的混合過程)要求快速避免因時間間隔較長各水樣加藥后反應(yīng)時間長短相差太大而導(dǎo)致混凝效果懸殊。之后則要不斷減慢速度,使脫穩(wěn)膠體粒子相互凝聚?;旌线^程大約要在12 分鐘內(nèi)完成,而凝聚過程則大約需要 2030 分鐘,沉淀過程則大約需要1 個小時。試驗室燒杯試驗
22、可適當(dāng)縮短試驗時間。 3)混凝過程要保持?jǐn)嚢鑳x不被人為擾動,防止對混凝結(jié)果產(chǎn)生影響。篇四: 實驗二報告北京中醫(yī)藥大學(xué)生物化學(xué)實驗報告實驗二蛋白質(zhì)的呈色反應(yīng),沉淀反應(yīng)姓 名:王家偉同 組:湯殷飛日 期: 2011/9/26 學(xué) 號: 0901222 班 級:室 溫:教 師: 09針外實驗室:成 績:實驗室二劉連起一實驗?zāi)康?1 了解蛋白質(zhì)的性質(zhì)。 2 掌握蛋白質(zhì)的鑒定方法。二實驗內(nèi)容 1 蛋白質(zhì)的呈色反應(yīng)。 2 蛋白質(zhì)的沉淀反應(yīng)。三實驗原理及操作(一)蛋白質(zhì)的呈色反應(yīng)蛋白質(zhì)的呈色反應(yīng)是蛋白質(zhì)中某些氨基酸特殊基團(tuán)與一定的化學(xué)試劑作用而呈現(xiàn)的各種顏色反應(yīng),可作為檢查蛋白質(zhì)是否存在的參考。另外,不同的
23、蛋白質(zhì)中氨基酸的種類及含量各不相同,而在某些蛋白質(zhì)內(nèi)還可能缺乏呈某種顏色反應(yīng)的氨基酸。因此不但不同蛋白質(zhì)呈色反應(yīng)的強(qiáng)度不同, 而且某些呈色反應(yīng)在某種蛋白質(zhì)可能不存在。本實驗操作兩種呈色反應(yīng):雙縮脲反應(yīng)與茚三酮反應(yīng),用以比較和鑒別不同的蛋白質(zhì)。 1 雙縮脲反應(yīng)【實驗原理】在濃堿液中,雙縮脲能與硫酸銅結(jié)合生成紫色或紫紅色的復(fù)合物,這一呈色反應(yīng)為雙縮脲反應(yīng),凡含有兩個及多個肽鍵(酰胺鍵)的化合物都可能發(fā)生此反應(yīng),故蛋白質(zhì)及二肽以上的物質(zhì)都有此反應(yīng),但除肽鍵外,有些基團(tuán)如csnh, c(nh2) nh等也有雙縮脲反應(yīng),因此,一切蛋白質(zhì)或多肽都有雙縮脲反應(yīng),但有雙縮脲反應(yīng)的不一定都是蛋白質(zhì)或多肽?!静僮?/p>
24、】(1) 取小試管一支,加1:10 雞蛋白液2 滴, 10%naoh溶液 5 滴及 1% 硫酸銅溶液1 滴,混勻,可見溶液呈紫色。(2) 另取一小試管, 加一小匙尿素 (綠豆大?。?,小火加熱至熔, 嗅其氣味為 (臭味)。繼續(xù)加熱使之凝固,這固體是(雙縮脲),加水 10 滴, 10%naoh溶液 5 滴, 1% 硫酸銅溶液 1 滴,可見溶液變成紫紅色。 2 茚三酮反應(yīng)【實驗原理】凡含有自由氨基的化合物例如蛋白質(zhì),多肽,各種氨基酸(脯氨酸和羥脯氨酸例外)和其它伯胺化合物 (包括氨) 與茚三酮共熱時, 能生成紫藍(lán)色化合物,這種反應(yīng)即茚三酮反應(yīng)?!静僮鳌孔⒁猓河镁凭珶艏訜釙r,酒精燈不要隨便移動,加熱試
25、管口不能對著人,不能用吹氣的方式熄滅酒精燈,以免出現(xiàn)危險情況。當(dāng)維持蛋白質(zhì)膠體溶液的穩(wěn)定因素(水化膜和電荷)遭到破壞時,蛋白質(zhì)析出。如果是非變性沉淀,例如加入中性鹽或者在低溫下加入有機(jī)溶劑脫水,則除去沉淀劑后,蛋白質(zhì)仍可溶解, 此即可逆的沉淀反應(yīng)。如果是變性沉淀, 例如加入重金屬鹽類,生物堿試劑或加熱,則沉淀劑不易除去,沉淀常不能再溶解,此即不可逆的沉淀反應(yīng)。 1. 蛋白質(zhì)的鹽析【實驗原理】水溶液中的蛋白質(zhì)在高濃度的中性鹽 硫酸銨,硫酸鎂,氯化鈉等 中析出的現(xiàn)象,稱為鹽析作用。 鹽析作用包括兩種過程:1)大量電解質(zhì)破壞了蛋白質(zhì)的水化膜從而出現(xiàn)沉淀。2)電解質(zhì)中和了蛋白質(zhì)分子所帶的電荷而沉淀。中
26、性鹽能否沉淀各種蛋白質(zhì)常決定于中性鹽的濃度,蛋白質(zhì)的種類, 溶液的 ph 值以及蛋白質(zhì)的膠體顆粒。 顆粒大者比顆粒小者容易沉淀,如球蛋白多在半飽和的硫酸銨溶液中析出,而清蛋白常在飽和的硫酸銨溶液中析出?!静僮鳌浚?) 取 5ml 雞蛋白溶液于試管中,加入等量飽和硫酸銨溶液,混勻,靜置20 分鐘后,觀察現(xiàn)象是溶液中有白色沉淀析出。(2) 過濾,收集透明濾液,濾液中會有清蛋白,若溶液混濁,須重復(fù)過濾至透明為止。(3) 取 1ml 濾液加固體硫酸銨(0.5g )使達(dá)到飽和,邊加邊振搖到溶液出現(xiàn)混濁,再向混濁液加1.5-2.0ml水, 觀察現(xiàn)象是溶液中沉淀逐漸溶解 2重金屬鹽類沉淀蛋白質(zhì)【實驗原理】蛋
27、白質(zhì)在堿性溶液中帶有較多負(fù)電荷,當(dāng)它與帶正電荷的重金屬離子結(jié)合時即可生成不溶解的沉淀,重金屬鹽類沉淀蛋白質(zhì)能引起蛋白質(zhì)的變性,而中性鹽類即使加入量很多也不改變蛋白質(zhì)原來的性質(zhì)。【操作】【實驗原理】由于溫度升高破壞了蛋白質(zhì)分子內(nèi)部的化學(xué)鍵,引起蛋白質(zhì)變性,因此幾乎所有蛋白質(zhì)都可因加熱而凝固。蛋白質(zhì)在其等電點時不帶電荷,或帶等量的正負(fù)電荷, 此時若溫度升高則容易出現(xiàn)沉淀。在酸性或堿性溶液中,蛋白質(zhì)分子帶有正或負(fù)電荷,較為穩(wěn)定。如果過酸或過堿則易變性,此時若溫度升高, 雖變性卻不沉淀。 在冷卻后加酸或加堿調(diào)節(jié)ph 值達(dá)蛋白質(zhì)等電點時則有沉淀析出?!静僮鳌浚?)取 4支試管,編號,按下表加入試劑(2)
28、取出試管, 冷卻后于第3 管中慢慢滴入10% naoh 溶液,觀察現(xiàn)象是溶液先變渾濁,然后渾濁慢慢溶解,其原因是加入堿溶液后使得溶液ph 值達(dá)到蛋白質(zhì)的等電點,所以有沉淀析出,加入過量的堿溶液使溶液偏離等電點,沉淀溶解。(3)向第4 管中慢慢滴入10% 醋酸,觀察現(xiàn)象為溶液先變渾濁,然后渾濁慢慢溶解,其原因是加入酸溶液后使得溶液ph 值達(dá)到蛋白質(zhì)的等電點,所以有沉淀析出,加入過量的酸溶液使溶液偏離等電點,沉淀溶解。四實驗材料(一)試劑 11:10 雞蛋白溶液 210%naoh 31% 硫酸銅 4尿素 501% 茚三酮乙醇液 6025% 丙氨酸溶液 7飽和硫酸銨溶液 8固體硫酸銨 90 5%naoh 1005% 硫酸鋅 1110% 磺基水楊酸 1210%hcl 131%hac 1410%hac (二)儀器水浴鍋( 100 攝氏度)(三)其它雞蛋
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