2022年2022年黃豆芽微核實驗報告

1、精選學習資料 - - - 歡迎下載生態(tài)工程學院遺傳學設計性試驗報告題目：黃豆根尖微核技術系別：生態(tài)工程學院專業(yè)班級：生物科學2021 級組員姓名：孟迎.羅廷.何忠平蔡國憲.丁琴姓名：羅廷學號：28111202129指導老師：蹇黎完成時間：2021年 6月 11 日精品學習資料精選學習資料 - - - 歡迎下載黃豆根尖微核試驗報告一.試驗目的1.明白環(huán)境誘變物對微核產(chǎn)生的原理；2.把握微核試驗技術；3.明白毒理遺傳學在環(huán)境監(jiān)測中的應用及意義二.試驗原理微核簡稱 mcn,為真核生物細胞中的一種反常結構,往往為細胞經(jīng)輻射或化學藥物的作用而產(chǎn)生；微核為無著絲點的染色體斷片,在有絲分裂后期由于 不能向兩

2、極移動而游離于細胞質(zhì)中,在間期細胞核形成時,可在它鄰近看到如干個圓形的結構,游離于主核之外直徑大約為細胞直徑的1/20 到 1/5 ,這就為微核；微核的折光率及細胞化學反應性質(zhì)和主核一樣；一般認為微核為由有絲分裂后期丟失著絲粒的斷片產(chǎn)生的,但有些試驗也證明整條的染色體或多條染色體也能形成微核；這些斷片或染色體在細胞分裂末期被兩個子細胞核所排斥便形成了第三個核塊；已經(jīng)證明微核率的大小為和用藥的劑量或輻射累積效應呈正相關,這一點和染色體畸變的情形一樣；所以可用簡易的間期微核計數(shù)來代替紛雜的中期畸變?nèi)旧w計數(shù)；由于大量新的化合物的合成,原子能應用,各種各樣工業(yè)廢物的排出,使人們需要有一套高度靈敏.技

3、術簡潔的測試系統(tǒng)來監(jiān)視環(huán)境的變化；微核產(chǎn)生 的概率可與誘變因子的劑量成正比,因此可以用微核顯現(xiàn)的頻率來評判環(huán)境誘 變因子對生物遺傳物質(zhì)的損耗程度；目前微核測試已經(jīng)廣泛應用于輻射損耗. 輻射防護.化學誘變劑.新藥試驗.染色體遺傳疾病及癌癥前期診斷等各方面；隨著經(jīng)濟進展.經(jīng)濟總量增加,廢水排放總量增長快速,污染物排放總量超過水環(huán)境容量,特別在一些人口密集.企業(yè)密布或重污染企業(yè)分布較多的區(qū)域；水質(zhì)惡化問題已經(jīng)比較突出；飲用水水源地有機污染日漸嚴峻,飲用水安全問題已經(jīng)顯現(xiàn),人民群眾生產(chǎn).生活受到影響；利用畢節(jié)市流倉河道河水以黃豆萌發(fā)的芽作為試驗材料進行微核測試,一方面可精確的顯示各種處理誘發(fā)植物精品學

4、習資料精選學習資料 - - - 歡迎下載畸變的成效,另一方面可用于當今進展地區(qū)對河道污染程度的間接反應和監(jiān)測；三.試驗器具.藥品1.試驗材料黃豆種子（貴州工程應用技術學院生態(tài)工程學院試驗中心供應）2.試驗器材光學顯微鏡.試管（10ml）.燒杯.鑷子.手術刀.載玻片.蓋玻片.濾紙等；3.試劑1）nan3疊氮鈉 2）卡諾氏固定液（乙醇和冰醋酸根據(jù)體積比3：1 混合配制）3）卡寶染色液（ carbol fuchsin）又稱改良石炭酸品紅,改良苯酚品紅；種類成分.配置方法儲存時間a 液取 3g 堿性品紅溶于100ml 的 70%乙醇中長期儲存精品學習資料精選學習資料 - - - 歡迎下載取 a 液 1

5、0ml,加入 90ml 的 5%石炭酸（又稱苯酚）水溶b 液液限 2 周 內(nèi)精品學習資料精選學習資料 - - - 歡迎下載取 b 液 55ml,加乙酸和福爾馬林（37甲醛水溶液）各6c液ml染色取原液 c 2030ml,加 45%的乙酸 70 80ml,再加山梨液醇 1.8g4）6mol/l 鹽酸：配制：取 49.5ml 37.5% 的鹽酸,再加入50.5ml 水稀釋至100ml 容量瓶 .四.試驗步驟1.種子處理：黃豆種子洗滌潔凈,室溫（ 25）下用蒸餾水浸泡發(fā)芽24 小時,此間至少換水兩次,所換水應預溫至25；種子吸漲后,移入鋪有潔凈紗布的托盤內(nèi), 在 25溫箱中催芽培育（4-5 天）,起

6、初生根長到2cm時,選取發(fā)育良好的,精品學習資料精選學習資料 - - - 歡迎下載大小與根長相像的芽,進行進一步試驗；2.檢測液采集與處理采集流倉橋不同河段河水,沿河道周邊從夢溪灣到泰豐源,從泰豐源至畢節(jié)技術學院,從碧陽湖至畢節(jié)師專大橋,這三個河段可的上.中.下游三個不同位置的河水混合；瞬時采樣嗎,采集三個樣本,每份兩升以上,水樣暫存于礦泉水瓶或水壺,并做好標記；3.試驗處理每一處理選取6-8 粒生長良好.芽長一樣的種子,放入盛有待測物溶液的培育皿中,浸沒發(fā)芽種子；用被檢測液處理種子,用蒸餾水作陰性對比,處理種子 624h（處理時間可視試驗需要和被測液濃度而定）；4.根尖細胞復原培育將處理后的

7、種子用蒸餾水浸洗三次,每次2-3min ；將洗凈的種子再放入鋪好濾紙的托盤內(nèi)25溫箱中復原培育22-24 小時；5.固定：吸取 5ml 的卡諾氏固定液于10ml 試管中,用刀片或小剪刀切取經(jīng)過處理的長約 0.5-1.0cm的黃豆芽 10-20 條,放入試管內(nèi),用試管塞蓋緊,室溫下固定 20-24 小時,固定液的用量為材料體積的15 倍以上；固定后假如不準時制片,可換入 70% 的乙醇中,置4冰箱內(nèi)儲存?zhèn)溆茫?.酸解：取出固定好的黃豆芽,用蒸餾水沖洗min,洗凈蒸餾水,加入6mol/l 鹽酸將芽浸沒,室溫下酸解10 分鐘,待芽軟化即可；7.染色：解離后材料水洗3min 并吸干,挑取1 個芽的尖部

8、分生組織于載玻片上夾碎搗爛,滴加12 滴改良苯酚品紅染液,染色10 15min,壓片；8.壓片在經(jīng)染色的材料上加一滴染液,蓋上蓋玻片,覆一層吸水紙,用帶橡皮頭 的鉛筆垂直敲打,或以拇指垂直緊壓蓋片 留意勿使蓋片搓動 ,使材料分散壓平,便于觀看；9.鏡檢及微核識別標準精品學習資料精選學習資料 - - - 歡迎下載第一在低倍鏡下找到分生組織區(qū)細胞分散勻稱,分裂相較多的部位,再轉(zhuǎn)高倍鏡觀看； 微核識別標準：（ 1）在主核大小的1/3 以下,并與主核分別的小核；（ 2）小核著色與主核相當或稍淺；（ 3）小核形狀為圓形.橢圓形或不規(guī)章型；每一處理觀看3 個根尖,每個根尖計數(shù)1000 個細胞中的微核數(shù)并進

9、行記錄；10.微核率及微核指數(shù)運算（1）運算微核率（ ）：精品學習資料精選學習資料 - - - 歡迎下載微核率溶液染毒根尖觀看到的溶液染毒根尖觀看到的微核數(shù)細胞數(shù)1000精品學習資料精選學習資料 - - - 歡迎下載精品學習資料精選學習資料 - - - 歡迎下載（2）運算微核指數(shù)（ mi）：微核指數(shù)（ mi ）樣本的微核率陰性對比的微核率精品學習資料精選學習資料 - - - 歡迎下載用微核指數(shù)作為判定試驗樣本為否致黃豆芽細胞突變的指標,以直觀反映試驗材料為否致突變及其嚴峻程度；污染指數(shù)在0 1.5 區(qū)間為基本沒有污染；1.5 2 區(qū)間為輕污染； 2 3.5區(qū)間為中污染； 3.5 以上為重污染,

10、將樣本的黃豆芽微核指數(shù)大于1.5定為開頭產(chǎn)生致突變作用；五.試驗結果1.試驗進程記錄（包括預試驗）1）試驗進程及處理（ 1）從碧陽湖至畢節(jié)學院河段河水處理種子前后發(fā)芽情形（處理1） 從以下記錄可知：種子用檢測液處理后種子芽生長伸長,且芽的直徑變得膨大；但種子及芽的顏色有肯定的變黑,甚至有的種子顯現(xiàn)了潰爛；精品學習資料精選學習資料 - - - 歡迎下載從碧陽湖至畢節(jié)學院河段河水處理前從碧陽湖至畢節(jié)學院河段河水處理后（ 2）從泰豐源至畢節(jié)技術學院河段河水處理前后發(fā)芽情形（處理2） 從以下記錄可知：種子用檢測液處理后種子芽也生長伸長了,芽的直徑也變得膨大,種子及芽的顏色也有肯定的變黑,也有種子潰爛；

11、但為其芽顏色變黑程度較上述試驗（1）的淺,其潰爛種子數(shù)量也較試驗（1）的少；從泰豐源至畢節(jié)技術學院河段河水處理前從泰豐源至畢節(jié)技術學院河段河水處理后（ 3）從夢溪灣至畢節(jié)技術學院河段河水處理前后發(fā)芽情形（處理3） 從以下記錄可知：和上述試驗結果相像,種子用檢測液處理后種子芽也生長伸長了,且芽的直徑變得膨大,種子及芽的顏色也有肯定的變黑,也有種子潰爛；但為相對試驗（2）的試驗結果而言,其芽顏色變黑程度不及試驗（2）的變化明顯,其潰爛種子數(shù)量也較試驗（2）的仍少；精品學習資料精選學習資料 - - - 歡迎下載從夢溪灣至畢節(jié)技術學院河段河水處理前從夢溪灣至畢節(jié)技術學院河段河水處理后（ 4）蒸餾水陰性

12、對比處理前后發(fā)芽情形（陰性對比）從以下記錄可知：種子有蒸餾水處理前后種子,種子的芽僅僅只有伸長生長,沒有顯現(xiàn)直徑的增粗膨大,也沒有顯現(xiàn)芽的變色和根的潰爛等現(xiàn)象；蒸餾水陰性對比處理前蒸餾水陰性對比處理后2）鏡檢下微核的識別及微核數(shù)的記錄在 40×10的高倍鏡下可見：在間期細胞的細胞核的鄰近有如干個圓形的結構,直徑大約為細胞直徑的1/20 到 1/5 的結構,這就為微核；仍可見在分裂期的細胞前期.中期和后期的細胞內(nèi)有為數(shù)不多的染色體,且在染色體四周分布 有很多橢圓形的微核,而在分裂末期的細胞中可見除了少數(shù)不多的染色體被平 均安排到兩個子細胞內(nèi)外,微核并沒有被分到兩個子細胞內(nèi),而為一個子細

13、胞 有很多的微核,而另一個細胞僅僅幾個微核甚至沒有；不同河水處理黃豆芽在顯微鏡下的微核數(shù)記錄精品學習資料精選學習資料 - - - 歡迎下載陰性對比處 理 1處理2處 理 3311163480.13.72.11.63.72.12.1微核數(shù)微核率（ ）微核指數(shù)mi六.試驗分析1.留意事項（1）固定材料假如不能準時使用：可以經(jīng)過90酒精換到70酒精中各 半小時,換入70酒精, 0-4 攝氏度儲存半年,再觀看時換用固定液再處理一 次,成效較好；（2）化學藥品處理濃度太高,會導致細胞核變形,而不為形成微核,故應當多設濃度梯度或進行預試驗；2.試驗結果分析與爭論從碧陽湖至畢節(jié)學院河段河水處理種子（處理1）微核率和微核指數(shù)最大,其河道被污染從,泰豐源至畢節(jié)技術學院河段河水處理種子（處理2）的微核率和微核指數(shù)比從夢溪灣至畢節(jié)技術學院河段河水處理種子（處理3）的大從所采集的三個不同河段其四周的集合人口的密集程度來說,從碧陽湖至畢節(jié)學院河段所處畢節(jié)市城區(qū)位置,加上碧陽湖水庫的建立以及周邊較多建筑工業(yè)的實施,使得該區(qū)域段人口相對較為密集,污染程度相對較大,所以該河段的微核率及微核指數(shù)較大；而從泰豐源至畢節(jié)技術學院與從夢溪灣至畢節(jié)技術學院這兩個河段由于離大路有肯定的距離加上其上游從夢溪灣上去基本上很少有人的過往,因此顯得其