2022年2022年生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)電子教案

1、精選學(xué)習(xí)資料 - - - 歡迎下載學(xué)習(xí)必備歡迎下載生物化學(xué)試驗(yàn)電子教案歡迎同學(xué)們學(xué)習(xí)生物化學(xué)試驗(yàn)第一部分生物化學(xué)試驗(yàn)基本要求及技術(shù)一.生物化學(xué)試驗(yàn)室規(guī)章1. 每個同學(xué)都應(yīng)當(dāng)自覺遵守課堂紀(jì)律,保護(hù)課堂秩序,不遲到,不早退,不大聲談笑；2. 試驗(yàn)前必需認(rèn)真預(yù)習(xí),熟識本次試驗(yàn)的目的.原理.操作步驟,懂得每一操作步驟的意義和明白所用儀器的使用方法, 否就不能開頭試驗(yàn)； 試驗(yàn)過程中要聽從老師的指導(dǎo), 莊重認(rèn)真地按操作規(guī)程進(jìn)行試驗(yàn), 并把試驗(yàn)結(jié)果和數(shù)據(jù)準(zhǔn)時. 照實(shí)記錄在試驗(yàn)記錄本上, 文字簡練.精確,要求同學(xué)們記錄完整精確的試驗(yàn)數(shù)據(jù), 養(yǎng)成良好的實(shí)事求為的工作作風(fēng)和求真務(wù)實(shí)的科學(xué)態(tài)度,嚴(yán)禁偽造試驗(yàn)數(shù)據(jù),弄

2、虛作假；完成試驗(yàn)后經(jīng)教員檢查同意,方可離開試驗(yàn)室,課后寫出試驗(yàn)報告,于下次試驗(yàn)前上交；3. 試驗(yàn)臺面應(yīng)隨時保持潔凈,儀器.藥品擺放整齊, 公用試劑用畢,應(yīng)立刻蓋嚴(yán)放回原處；勿使試劑.藥品灑在試驗(yàn)臺面和地上；試驗(yàn)完畢,儀器須洗凈放好,將試驗(yàn)臺面抹試潔凈,才能離開試驗(yàn)室；4. 使用儀器.藥品.試劑和各種物品必需留意節(jié)?。幌礈旌褪褂脙x器時,應(yīng)當(dāng)心細(xì)致,防止損壞儀器；使用珍貴精密儀器時,應(yīng)嚴(yán)格遵守操作規(guī)程,發(fā)覺故障須立刻報告教員,不得擅自動手檢修；5. 試驗(yàn)室內(nèi)嚴(yán)禁吸煙！煤氣燈應(yīng)隨用隨關(guān),嚴(yán)格做到：人在火在,人走火滅；乙醇.丙酮.乙醚等易燃品不能直接加熱,并要遠(yuǎn)離火源操作和放置；試驗(yàn)完畢, 應(yīng)立刻關(guān)好

3、煤氣開關(guān)和水籠頭,拉下電閘；離開試驗(yàn)室以前應(yīng)認(rèn)真.負(fù)責(zé)地進(jìn)行檢查,嚴(yán)防發(fā)生安全事故；6. 全部試驗(yàn)用的廢液,廢棄物等,都要收集在適當(dāng)?shù)娜萜鲀?nèi),加以儲存再處理,不能倒在水槽內(nèi)或處處亂扔；7. 儀器損壞時,應(yīng)照實(shí)向教員報告,并填寫損壞儀器登記表,然后補(bǔ)領(lǐng)；8. 試驗(yàn)室內(nèi)一切物品,未經(jīng)本室負(fù)責(zé)教員批準(zhǔn),嚴(yán)禁攜出室外,借物必需辦理登記手續(xù)；9. 每次試驗(yàn)課由班長負(fù)責(zé)支配值日生；值日生的職責(zé)為負(fù)責(zé)當(dāng)天試驗(yàn)室的衛(wèi)生.安全和一切服務(wù)性的工作及填寫試驗(yàn)情形登記卡和試驗(yàn)記錄；二.試驗(yàn)報告要求及格式試驗(yàn)終止后,應(yīng)準(zhǔn)時整理和總結(jié)試驗(yàn)結(jié)果,寫出試驗(yàn)報告；試驗(yàn)報告用統(tǒng)一的試驗(yàn)報告紙寫,在第一行寫明姓名,學(xué)號,組別及班級

4、；依據(jù)試驗(yàn)內(nèi)容可分為定性和定量試驗(yàn)兩大類,下面簡潔介紹試驗(yàn)報告的格式；（試驗(yàn)名稱）姓名學(xué)號日期目的和要求原理試劑配制及儀器操作方法 試驗(yàn)結(jié)果 爭論與分析通常每次試驗(yàn)課只做一個定量試驗(yàn),在試驗(yàn)報告中, 目的和要求. 原理以及操作方法部分應(yīng)精品學(xué)習(xí)資料精選學(xué)習(xí)資料 - - - 歡迎下載學(xué)習(xí)必備歡迎下載簡潔扼要的表達(dá),但為對于試驗(yàn)條件（試劑配制及儀器）和操作的關(guān)鍵環(huán)節(jié)必需寫清晰；對于試驗(yàn)結(jié)果部分,應(yīng)依據(jù)試驗(yàn)課的要求將肯定試驗(yàn)條件下獲得的試驗(yàn)結(jié)果和數(shù)據(jù)進(jìn)行整理.歸納. 分析和對比, 并盡量總結(jié)成各種圖表, 如原始試驗(yàn)數(shù)據(jù)及其處理的表格.標(biāo)準(zhǔn)曲線圖以及比較試驗(yàn)組與對比組試驗(yàn)結(jié)果的圖表等； 另外, 仍應(yīng)針

5、對試驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行必要的說明和分析；爭論部分可以包括：關(guān)于試驗(yàn)方法（或操作技術(shù)）和有關(guān)試驗(yàn)的一些問題,照試驗(yàn)的正常結(jié)果和反?，F(xiàn)象以及摸索題,進(jìn)行探討；對于試驗(yàn)設(shè)計的熟識.體會和建議；對試驗(yàn)課的改進(jìn)看法等；三.生物化學(xué)技術(shù)的爭論手段.方法.內(nèi)容手段：包括各種天平.各種分光光度計.各種離心機(jī).各種層析設(shè)備.各種電泳裝置.冰凍干燥機(jī).酸度計.電導(dǎo)率儀.搖床等等；方法：透析技術(shù).電泳技術(shù).層析技術(shù).離心技術(shù).分光光度計技術(shù).免疫化學(xué)技術(shù)內(nèi)容：糖類.脂類.核酸.蛋白質(zhì)的分子結(jié)構(gòu).提取.分別.純化及其定性.定量鑒定.分析爭論；手段：包括各種天平.各種分光光度計.各種離心機(jī).各種層析設(shè)備.各種電泳裝置.冰凍干燥

6、機(jī).酸度計.電導(dǎo)率儀.搖床等等；方法：透析技術(shù).電泳技術(shù).層析技術(shù).離心技術(shù).分光光度計技術(shù).免疫化學(xué)技術(shù)內(nèi)容：糖類.脂類.核酸.蛋白質(zhì)的分子結(jié)構(gòu).提取.分別.純化及其定性.定量鑒定.分析爭論；（一 ）紫外 - 可見分光光度分析法基于物質(zhì)光化學(xué)性質(zhì)而建立起來的分析方法稱之為光化學(xué)分析法；分為 : 光譜分析法和非光譜分析法；光譜分析法為指在光（或其它能量）的作用下, 通過測量物質(zhì)產(chǎn)生的發(fā)射光.吸取光或散射光的波長和強(qiáng)度來進(jìn)行分析的方法；（ 二）層析法（ chromatography ）層析法的基本原理層析法為利用混合物中各組分物理化學(xué)性質(zhì)的差異（如吸附力. 分子外形及大小.分子親和力.安排系數(shù)等

7、） ,使各組分在兩相（一相為固定的,稱為固定相；另一相流過固定相,稱為流淌相）中的分布程度不同,從而使各組分以不同的速度移動而達(dá)到分別的目的；.固定相：固定相為層析的一個基質(zhì)；它可以為固體物質(zhì)（如吸附劑,凝膠,離子交換劑等）,也可以為液體物質(zhì)（如固定在硅膠或纖維素上的溶液）,這些基質(zhì)能與待分別的化合物進(jìn)行可逆的吸附,溶解,交換等作用；.流淌相：在層析過程中,推動固定相上待分別的物質(zhì)朝著一個方向移動的液體.氣體等,都稱為流淌相；柱層析中一般稱為洗脫劑,薄層層析時稱為展層劑；按操作形式不同分類：柱層析：將固定相裝于柱內(nèi),使樣品沿一個方向移動而達(dá)到分別；紙層析：用濾紙做液體的載體,點(diǎn)樣后,用流淌相綻

8、開,以達(dá)到分別鑒定的目的；薄層層析：將適當(dāng)粒度的吸附劑鋪成薄層,以紙層析類似的方法進(jìn)行物質(zhì)的分別和鑒定；紙層析和薄層層析主要適用于小分子物質(zhì)的快速檢測分析和少量分別制備,通常為一次性精品學(xué)習(xí)資料精選學(xué)習(xí)資料 - - - 歡迎下載學(xué)習(xí)必備歡迎下載使用,而柱層析為常用的層析形式,適用于樣品分析.分別；生物化學(xué)中常用的凝膠層析.離子交換層析.親和層析.高效液相色譜等都通常采納柱層析形式；（三）電泳技術(shù).電 泳 的 概 念 ： 帶 電 物 質(zhì) 在 電 場 中 向 相 反 電 極 移 動 的 現(xiàn) 象 稱 為 電 泳（electrophoresis）；.電泳現(xiàn)象早在十九世紀(jì)初就已發(fā)覺（ 1808 年俄國物

9、理學(xué)家re.ss 進(jìn)行了世界上第一次電泳試驗(yàn)） ；但電泳技術(shù)的廣泛應(yīng)用,就為在1937 年用濾紙作為支持介質(zhì)勝利地進(jìn)行紙電泳以后,特殊為近幾十年以來,電泳技術(shù)進(jìn)展很快,各種類型的電泳技術(shù)相繼產(chǎn)生,在生物化學(xué).醫(yī)學(xué).免疫學(xué)等領(lǐng)域得到了廣泛應(yīng)用；電泳的分類原就上按電泳的原理來分,可分為二類：.自由界面電泳：又稱移動界面電泳,為指在沒有支持介質(zhì)的溶液中進(jìn)行的電泳；其裝置復(fù)雜,價格昂貴,費(fèi)時費(fèi)勁,不便于推廣應(yīng)用；.區(qū)帶電泳：為指有支持介質(zhì)的電泳,待分別物質(zhì)在支持介質(zhì)上分別成如干區(qū)帶；支持介質(zhì)的作用主要為防止電泳過程中的對流和擴(kuò)散,以使被分別的成分得到最大辨論率的分別；區(qū)帶電泳由于采納的介質(zhì)不同以及技術(shù)

10、上的差異,又可分為不同的類型.按支持介質(zhì)種類的不同,區(qū)帶電泳可分為：紙電泳：用濾紙作為支持介質(zhì),多用于核苷酸的定性定量分析；醋酸纖維素薄膜電泳：醫(yī)學(xué)上,常用于分析血清蛋白.胎盤球蛋白,其優(yōu)點(diǎn)為簡便快速,便于儲存照相,比紙電泳辨論率高；以上二種類型的電泳,由于介質(zhì)的孔徑度大,沒有分子篩效應(yīng),主要靠被分別物的電荷多少進(jìn)行分別；淀粉凝膠電泳：多用于同工酶分析,凝膠鋪厚些,可一層一層剝層分析（一板多測） ；自然淀粉經(jīng)加工處理即可使用, 但孔徑度可調(diào)性差, 并且由于其批號之間的質(zhì)量相差很大, 很難得到重復(fù)的電泳結(jié)果,加之電泳時間長,操作麻煩,辨論率低,試驗(yàn)室中已很少使用；瓊脂糖凝膠電泳：一般用于核酸的分

11、別分析；瓊脂糖凝膠孔徑度較大,對大部分蛋白質(zhì)只有很小的分子篩效應(yīng)；聚丙烯酰胺凝膠電泳：可用于核酸和蛋白質(zhì)的分別.純化及檢測；其辨論率較高；a. 聚丙烯酰胺和瓊脂糖為目前試驗(yàn)室最常用的支持介質(zhì)b. 另外依據(jù)支持介質(zhì)外形不同,區(qū)帶電泳可分為：薄層電泳.板電泳.柱電泳；c. 據(jù)用途不同,可分為：分析電泳.制備電泳.定量.免疫電泳；（四）生物大分子的制備在自然科學(xué),特殊為生命科學(xué)高度進(jìn)展的今日,蛋白質(zhì).酶和核酸等生物大分子的結(jié)構(gòu)與功能的爭論為探求生命秘密的中心課題,而生物大分子結(jié)構(gòu)與功能的爭論,必需第一解決生物大分子的制備問題,有能夠達(dá)到足夠純度的生物大分子的制備工作為前 題,結(jié)構(gòu)與功能的爭論就無從談

12、起；然而生物大分子的分別純化與制備為一件特別細(xì)致而困難的工作；精品學(xué)習(xí)資料精選學(xué)習(xí)資料 - - - 歡迎下載學(xué)習(xí)必備歡迎下載與化學(xué)產(chǎn)品的分別制備相比較,生物大分子的制備有以下主要特點(diǎn)：生物材料的組成極其復(fù)雜,經(jīng)常包含有數(shù)百種乃至幾千種化合物；很多生物大分子在生物材料中的含量極微,分別純化的步驟繁多,流程長；很多生物大分子一旦離開了生物體內(nèi)的環(huán)境時就極易失活,因此分別過程中如何防止其失活,就為生物大分子提取制備最困難之處；生物大分子的制備幾乎都為在溶液中進(jìn)行的,溫度.ph 值.離子強(qiáng)度等各種參數(shù)對溶液中各種組成的綜合影響,很難精確估量和判定；生物大分子的制備通常可按以下步驟進(jìn)行：確定要制備的生物

13、大分子的目的和要求,為進(jìn)行科研.開發(fā)仍為要發(fā)覺新的物質(zhì)；建立相應(yīng)的牢靠的分析測定方法,這為制備生物大分子的關(guān)鍵；通過文獻(xiàn)調(diào)研和預(yù)備性試驗(yàn),把握生物大分子目的產(chǎn)物的物理化學(xué)性質(zhì)；生物材料的破裂和預(yù)處理；分別純化方案的挑選和探究,這為最困難的過程；生物大分子制備物的均一性（即純度）的鑒定,要求達(dá)到一維電泳一條帶,二維電泳一個點(diǎn),或 hplc和毛細(xì)管電泳都為一個峰；產(chǎn)物的濃縮,干燥和儲存；其次部分試驗(yàn)室操作試驗(yàn)試驗(yàn)二粗脂肪的提取和定量測定索氏提取法一.目的和要求1. 學(xué)習(xí)和把握粗脂肪的定量測定法索氏提取法；2. 學(xué)習(xí)和把握用重量分析法對粗脂肪進(jìn)行定量測定；3將理論能用于實(shí)踐當(dāng)中: 比較不同材料中所含

14、粗脂肪的含量；二.原理脂肪為丙三醇 甘油 和脂肪酸結(jié)合成的脂類化合物、能溶于脂溶性有機(jī)溶劑；本試驗(yàn)用重量法,利用脂肪能溶于脂溶性溶劑這一特性,用脂溶性溶劑將脂肪提取出來,借蒸發(fā)除去溶劑后稱量；整個提取過程均在索氏提取器中進(jìn)行；通常使用的脂溶性溶劑為乙醚或沸點(diǎn)為30oc-60oc 的石油醚；用此法提取的脂溶性物質(zhì)除脂肪外,仍含有游離脂肪酸.磷酸.固醇.芳香油及某些色素等,故稱為“粗脂肪”；四.儀器設(shè)備及試劑1.脫脂棉2.鑷子3 .分析天平4.電熱恒溫水浴鍋5 .恒溫烘箱6.索氏脂肪提取器7.索氏脂肪提取儀8.濾紙9.干燥器10無水乙醚五.步驟精品學(xué)習(xí)資料精選學(xué)習(xí)資料 - - - 歡迎下載學(xué)習(xí)必備

15、歡迎下載1. 抽提瓶在105± 2烘箱中烘至恒重,材料干燥至恒重；2. 稱取干燥后的材料1-2g、 放入研缽中研磨 越細(xì)越好 將研磨好的材料用脫脂濾紙包住、 用 少許脫脂棉擦拭研缽壁上粘的材料及油脂、 也一并放入濾紙包.用棉線拴住濾紙包、 將濾紙包放入抽提管, 在抽提瓶中加入2/3 體積的無水乙醚在70-75 的水浴上加熱, 使乙醚回流,掌握乙醚回流次數(shù)為每小時約10 次,共回流約50 次,或檢查抽提管流出的乙醚揮發(fā)后不留 下油跡為抽提終點(diǎn)；3 取出試樣, 仍用原提取器回收乙醚直至抽提瓶全部吸完,擦凈瓶外壁, 將抽提瓶放入105±2烘箱中烘干至恒重；六. 運(yùn)算w1 w0粗脂

16、肪 %=× 100w式中： w樣品重（ g） w0提取瓶重（g） w1提取瓶和脂肪重（g）七.留意事項(xiàng)1向?yàn)V紙筒內(nèi)填裝樣品及回流提取過程中都不應(yīng)外漏,否就重做；2應(yīng)用無水乙醚,并在通風(fēng)柜中進(jìn)行蒸干,試驗(yàn)室內(nèi)禁止明火與吸煙；3提取瓶中加入的乙醚不能少于1/2、 也不能余外2/3 ；試驗(yàn)三.蛋白質(zhì)的含量測定目前常用的有四種古老的經(jīng)典方法: 凱式定氮法, 、 雙縮脲法 biuret法, folin - 酚試劑法 lowry法 和紫外吸取法. 另外仍有一種近十年才普遍使用起來的新測定方法、 考馬斯亮藍(lán)法 bradford法. 其中bradford法和 lowry法靈敏度高,比紫外吸取法高 1

17、0-20 倍 、 比 biuret法高 100 倍以上 . 凱氏定氮法比較復(fù)雜、 但較精確 、 往往以定氮法測定的蛋白質(zhì)作為其他方法的標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)精品學(xué)習(xí)資料精選學(xué)習(xí)資料 - - - 歡迎下載一 試驗(yàn)?zāi)康暮鸵? .凱氏定氮法精品學(xué)習(xí)資料精選學(xué)習(xí)資料 - - - 歡迎下載(1) 把握利用凱式定氮法測定生物材料中氮的含量和蛋白質(zhì)的含量的方法(2) 理論用于實(shí)踐中: 比較不同的材料中蛋白質(zhì)的含量二 原理樣品與濃硫酸共熱、 含氮有機(jī)物即分解產(chǎn)生氨、 氨又與硫酸作用變成硫氨. 經(jīng)強(qiáng)堿堿化使之分解放出氨、 借蒸汽將氨蒸至酸液中、 依據(jù)此酸液被中和的程度可運(yùn)算得樣品氮的含量. 以甘氨酸為例 :1. 有機(jī)物中

18、的氮在強(qiáng)熱和cuso4,濃 h2so4 作用下,消化生成（nh4） 2so4反應(yīng)式為：h2so4=so2+h2o+or. ch.cooh+o=r.co.cooh+nh3 nh3r.co.cooh+o=nco2+mh2o2nh3+h2so4=nh42so42. 在凱氏定氮器中與堿作用,通過蒸餾釋放出nh3 ,收集于h3bo3 溶液中；精品學(xué)習(xí)資料精選學(xué)習(xí)資料 - - - 歡迎下載學(xué)習(xí)必備歡迎下載反應(yīng)式為 :2nh4+oh-=nh3+h2onh3+h3bo3=nh4+h2bo3-3. 再用已知濃度的hci 標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定,依據(jù)hci 消耗的量運(yùn)算出氮的含量,然后乘以相應(yīng)的換算因子,既得蛋白質(zhì)的含量；

19、三 試驗(yàn)試劑hci 標(biāo)準(zhǔn)溶液（ 0.01 mol.l-1）h3bo3溶液 2%h2so4濃 naoh溶液 30% k2so4固體 cuso4.5h2o固體 甲基紅溴甲酚綠混合指示劑四 試驗(yàn)儀器 :凱氏燒瓶（ 100ml） :1個50ml容量瓶凱氏定氮裝置烘箱移液管 10ml: 1 支酸式滴定管 10ml: 1 分析天平支電爐五 試驗(yàn)步驟一.消化液的制取精確稱取干燥樣品0.5g ,置于凱氏燒瓶內(nèi), 加入 0.2gk2so4、cuso4.5h2o 混合物及 15ml濃 h2so4,加數(shù)粒玻璃珠,緩慢加熱,當(dāng)硫酸分解開頭放出二氧化硫白煙后,即加大火力至溶液澄清,再連續(xù)加熱約1h,冷卻至室溫；沿瓶壁加

20、入50ml 純水,溶解鹽類,冷卻,轉(zhuǎn)入100ml 容量瓶中,以純水沖洗燒瓶數(shù)次,洗液并入容量瓶中,加水至刻度,搖勻；二. nh3的固定1.按圖裝好凱氏定氮裝置；向蒸汽發(fā)生器中的水中加數(shù)滴甲基紅指示劑.幾滴h2so4 及數(shù)粒沸石在整個蒸餾過程中需保持此液為橙紅色,否就補(bǔ)加h2so4；接收液為20ml 2%的 h3bo4溶液,其中加 2 滴混合指示劑, 接收時使裝置的冷凝管下口浸入吸取液的液面之下先用蒸汽洗滌整個裝置、 約 15 分鐘 、 用含指示劑的硼酸溶液檢測裝置為否洗潔凈；假如不變色才說明洗凈了.2.蒸餾 : 移取 10.0ml樣品消化液,經(jīng)進(jìn)樣口注入反應(yīng)室內(nèi),用少量水沖洗進(jìn)樣口,然后加入

21、10ml 30%naoh溶液于反應(yīng)室內(nèi),塞好玻璃塞,防止氨的逸出；從開頭回流記時,自變色起再蒸餾4min ,移動冷凝管下口使其離開接收液面；再蒸餾,用純水洗冷凝管下口,洗液流入吸取液內(nèi)；三. nh3的標(biāo)定用 0.01mol.l-1hcl標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定至暗紅色為終點(diǎn)；四）運(yùn)算精品學(xué)習(xí)資料精選學(xué)習(xí)資料 - - - 歡迎下載樣品的總氮 含量克氮%（ a bc0.0100141000100精品學(xué)習(xí)資料精選學(xué)習(xí)資料 - - - 歡迎下載如測定的樣品含氮量部分只為蛋白性,（如血清）就：精品學(xué)習(xí)資料精選學(xué)習(xí)資料 - - - 歡迎下載樣品的總蛋白含量（克蛋白%） = ab0.0100146.25100精品學(xué)習(xí)資

22、料精選學(xué)習(xí)資料 - - - 歡迎下載c1000精品學(xué)習(xí)資料精選學(xué)習(xí)資料 - - - 歡迎下載學(xué)習(xí)必備歡迎下載式中： a 為滴定樣品用去的鹽酸平均毫升數(shù)；b 為滴定空白用去的鹽酸平均毫升數(shù)；c 為稱量樣品的克數(shù)：0.0100為鹽酸的當(dāng)量濃度（實(shí)際上,此項(xiàng)應(yīng)按試驗(yàn)中使用鹽酸的實(shí)際濃度填寫）； 14 為氮的原子量；6.25 為常數(shù)（ 1 毫升 0.1n 鹽酸相當(dāng)于0.14 毫克氮）；如樣品中除有蛋白外,尚有其他含氮物質(zhì),就樣品蛋白質(zhì)含量的測定要更復(fù)雜一些；第一需向樣品中加入三氯乙酸,使其最終濃度為5%,然后測定未加三氯乙酸的樣品及加入三氯乙酸后的樣品的上清液中的含氮量,從而運(yùn)算出蛋白氮,再進(jìn)一步算出

23、蛋白質(zhì)的含量；蛋白氮 =總氮非蛋白氮蛋白質(zhì)含量（克/%） =蛋白氮× 6.252. 考馬斯亮藍(lán)染色法1976 年由 bradford建立的考馬斯亮藍(lán)法、 為依據(jù)蛋白質(zhì)與染料相結(jié)合的原理設(shè)計的；這種方法為目前靈敏度最高的蛋白質(zhì)測定方法之一.考馬斯亮藍(lán)g-20 染料 、 在酸性溶液中與蛋白質(zhì)結(jié)合、 使染料最大吸取峰位置、 由 465nm變?yōu)?95nm、 溶液的顏色也由棕黑色變?yōu)樘m色. 染料主要為與蛋白質(zhì)中堿性氨基酸和芳香氨基酸殘基結(jié)合 .在 595nm下測定的吸光度a595、 與蛋白質(zhì)濃度成正比.試驗(yàn)四.酪蛋白的制備一.目的1.學(xué)習(xí)從牛奶中制備酪蛋白的原理和方法；2.把握等電點(diǎn)沉淀法提取

24、蛋白質(zhì)的方法；二.原理牛乳中的主要的蛋白質(zhì)為酪蛋白,含量約為35g/l ；酪蛋白為一些含磷蛋白質(zhì)的混合物,等電點(diǎn)為4.7 ；利用等電點(diǎn)時溶解度最低的原理,將牛乳的ph 調(diào)至 4.7時,酪蛋白就沉淀出來；用乙醇洗滌沉淀物,除去脂類雜質(zhì)后便可得到純酪蛋白；三.材料.試劑與器具（一）材料新奇牛奶（一）試劑1.95%乙醇1 200ml2.無水乙醚1 200ml3.0.2mol/l ph4.7醋酸醋酸鈉緩沖液300ml先配 a 液與 b 液a 液： 0.2mol/l醋酸鈉溶液稱 naac· 3h2o 54.44g,定容至2000ml；b 液： 0.2mol/l醋酸溶液,稱優(yōu)純醋酸（含量大于99

25、.8%） 12.0g 定容至 1000ml ；取 a 液 1770ml ,b 液 1230ml 混合即得ph4.7 的醋酸醋酸鈉緩沖液3000ml；4.乙醇乙醚混合液精品學(xué)習(xí)資料精選學(xué)習(xí)資料 - - - 歡迎下載（二）器具乙醇：乙醚 =1 ： 1（v/v）精品學(xué)習(xí)資料精選學(xué)習(xí)資料 - - - 歡迎下載1.離心機(jī)2.抽濾裝置精品學(xué)習(xí)資料精選學(xué)習(xí)資料 - - - 歡迎下載學(xué)習(xí)必備歡迎下載3.精密 ph 試紙或酸度計4. 電 爐5.燒杯6.溫度計四.操作步驟（一）酪蛋白的粗提100ml牛奶加熱至40；在攪拌下漸漸加入預(yù)熱至40. ph4.7 的醋酸緩沖液100ml.用精密 ph試紙或酸度計調(diào)ph 至

26、 4.7 ；將上述懸浮液冷卻至室溫；離心15 分鐘（ 3000 r /min ）；棄去清液,得酪蛋白粗制品；（二）酪蛋白的純化1.用水洗滌沉淀3 次,離心10 分鐘（ 3 000r/min）,棄去上清液；2.在沉淀中加入30ml 乙醇,攪拌片刻, 將全部懸濁液轉(zhuǎn)移至布氏漏斗中抽濾；用乙醇乙醚混合液洗沉淀2 次；最終用乙醚洗沉淀2 次,抽干； 3.將沉淀攤開在表面上,風(fēng)干；得酪蛋白純品；（三）精確稱重,運(yùn)算含量和得率；含量：酪蛋白g/100 ml 牛乳（ g%）式中理論含量為3.5g/100ml 牛乳；五.留意事項(xiàng)1.由于本法為應(yīng)用等電點(diǎn)沉淀法來制備蛋白質(zhì),故調(diào)劑牛奶液的等電點(diǎn)肯定要精確；最好用

27、酸度計測定；2.精制過程用乙醚為揮發(fā)性.有毒的有機(jī)溶劑,最好在通風(fēng)櫥內(nèi)操作；3.目前市面上出售的牛奶為經(jīng)加工的奶制品,不為純潔牛奶,所以運(yùn)算時應(yīng)按產(chǎn)品的相應(yīng)指標(biāo)運(yùn)算；六.試驗(yàn)報告1.依據(jù)實(shí)際操作,以流程圖形式總結(jié)酪蛋的制備方法；2.合理分析試驗(yàn)所得率七.摸索題1.制備高產(chǎn)率純酪蛋白的關(guān)鍵為什么？2.試設(shè)計另一種提取酪蛋白的方法？精品學(xué)習(xí)資料精選學(xué)習(xí)資料 - - - 歡迎下載一 目的要求試驗(yàn)五.植物基因組 dna提取及含量測定1. dna的提取精品學(xué)習(xí)資料精選學(xué)習(xí)資料 - - - 歡迎下載1. 學(xué)習(xí)植物dna分別的原理2. 把握植物基因組dna提取的方法及含量的測定方法 二 試驗(yàn)原理利用液氮對植

28、物組織進(jìn)行研磨、 從而破裂細(xì)胞 . 細(xì)胞提取液中含有的sds溶解膜蛋白而破壞細(xì)胞膜 、 使蛋白質(zhì)變性而沉淀下來.edta抑制 dna酶的活性 . 再用酚氯仿抽提的方法去去除蛋白 、 得到的 dna溶液經(jīng)乙醇沉淀. 得到的 dna溶解進(jìn)行定量測定： 利用紫外分光光度法或定磷法進(jìn)行測定；教學(xué)內(nèi)容1. 材料的挑選2. 介紹細(xì)胞破裂的不同方法3.dna 的提取精品學(xué)習(xí)資料精選學(xué)習(xí)資料 - - - 歡迎下載學(xué)習(xí)必備歡迎下載4. dna 定量測定三 試驗(yàn)材料儀器和藥品低溫離心機(jī)、恒溫水浴鍋 、臺式離心機(jī)、瓊脂糖凝膠電泳系統(tǒng)tris、edta 、 nacl、 巰基乙醇 、 等1. 細(xì) 胞 提 取 液 : 1

29、00mmol/l tris.hcl ph8.0 5mmol/l edta ph8.0 500mmol/l nacl1.25% sds1mol/l 巰基乙醇5mol/l kcl四 試驗(yàn)步驟1. 取 4g 新奇葉片 、 在液氮中研磨成粉末狀.2. 轉(zhuǎn)移至 50ml 離心管中 、 加入 16ml 細(xì)胞提取液 、 充分混勻 .65 水浴保溫 20min.3. 從水浴中取出離心管、 加入 5ml 5mol/l kcl溶液 、 混勻 、 水浴 20min. 4.4000r/min離心 20min.5. 將上清液轉(zhuǎn)移到另一50ml 離心管中 .6. 加等體積酚 / 氯仿混勻 、12000r/min離心 5m

30、in、取上清 .7. 加等體積氯仿 、 混勻 、12000r/min離心 5min、取上清 .8. 加入 0.61 倍體積的異丙醇、 混勻 .9. 離心獲得沉淀 、70%乙醇洗 3 次. 風(fēng)干沉淀 .10. 加入 500ul te緩沖液 、 溶解 dna.11. 進(jìn)行定量測定 .精品學(xué)習(xí)資料精選學(xué)習(xí)資料 - - - 歡迎下載一.目的和要求2. dna的定量測定：二苯胺法精品學(xué)習(xí)資料精選學(xué)習(xí)資料 - - - 歡迎下載1.學(xué)習(xí)和明白核酸的定量測定的常用方法；2.把握用二苯胺法測定dna 的操作方法；二.原理核酸含量的測定方法包括紫外吸取法.定磷法和分別針對dna和 rna的顏色反應(yīng)方法；本試驗(yàn)采納

31、針對dna的二苯胺法測dna的含量；在酸性溶液中,dna與二苯胺共熱生成藍(lán)色化合物,該物質(zhì)在595nm有最大吸取,在40 400ug/ml 范疇內(nèi)其峰值與dna含量成正比；dna分子中的脫氧核糖基,在酸性溶液中變成 羥基 酮基戊醛, 與二苯胺試劑作用生成藍(lán)色化合物（max=595）；在 dna濃度為 20 200g/ml范疇內(nèi),吸光度與dna濃度成正比,可用比色法測定；在反應(yīng)液中加入少量乙醛,可以提高反應(yīng)靈敏度；除dna外,脫氧木糖,阿拉伯糖也有同樣的反應(yīng)；其他多數(shù)糖類,包括核糖在內(nèi),一般無此反應(yīng)；1. 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作取 12 只試管分成6 組,按下表操作；取2 管的平均值,以dna濃 度為橫

32、坐標(biāo),光密度為縱坐標(biāo),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線；試1234精品學(xué)習(xí)資料精選學(xué)習(xí)資料 - - - 歡迎下載學(xué)習(xí)必備歡迎下載管精品學(xué)習(xí)資料精選學(xué)習(xí)資料 - - - 歡迎下載標(biāo)準(zhǔn) dna/ml蒸餾水 /ml0.4.81.6.2011.2.6.0100.8.4精品學(xué)習(xí)資料精選學(xué)習(xí)資料 - - - 歡迎下載精品學(xué)習(xí)資料精選學(xué)習(xí)資料 - - - 歡迎下載二苯胺試劑 /ml4444精品學(xué)習(xí)資料精選學(xué)習(xí)資料 - - - 歡迎下載60恒溫水浴中保溫1h,冷卻,在595nm波特長比色光密度值2. 樣品的測定取待測樣品2ml ,加入二苯胺溶液4ml ,搖勻, 60保溫 1h,然后在 595nm 波長出測定光密度值；依據(jù)測得的光

33、密度值,從標(biāo)準(zhǔn)曲線上查得相應(yīng)的dna的 ug數(shù),按下式運(yùn)算待測樣品的dna的含量；待測樣品中測得的dna 的 ug 數(shù)精品學(xué)習(xí)資料精選學(xué)習(xí)資料 - - - 歡迎下載dna%待測樣品液中樣品的ug 數(shù)x 100精品學(xué)習(xí)資料精選學(xué)習(xí)資料 - - - 歡迎下載3.dna 的定量測定：紫外分光光度法原理 :利用 dna在 260nm有最大的吸取峰的特性進(jìn)行測定1.制標(biāo)準(zhǔn)曲線2測定所提取的dna的含量試驗(yàn)六.酵母 rna的提取及組份鑒定目的要求（1）明白并把握稀堿法提取rna的原理和方法；（2）明白核酸的組分并把握其鑒定方法；試驗(yàn)原理由于 rna的來源和種類很多,因而提取制備方法也很各異；一般有苯酚法.

34、 去污劑法和鹽酸胍法；其中苯酚法又為試驗(yàn)為最常用的；組織勻漿用苯酚處理并離心后,rna即溶于上層被酚飽和的水相中,dna和蛋白質(zhì)就留在酚層中；向水層加入乙醇后,rna即以白色絮狀沉淀析出, 此法能較好的除去dna和蛋白質(zhì)； 上述方法提取的rna具有生物活性； 工業(yè)上常用稀堿法和濃鹽法提取rna,用這兩種方法所提取的核酸均為變性的rna,主要用作制備核苷酸的原料,其工藝比較簡潔；濃鹽法使用10%左右氯化鈉溶液,90提取 3-4h ,快速冷卻,提取液經(jīng)離心后 、上清液用乙醇沉淀rna；稀堿法使用稀堿使酵母細(xì)胞裂解,然后用酸中和, 除去蛋白質(zhì)和菌體后的上清液用乙醇沉淀rna或調(diào) ph2.5 利用等電

35、點(diǎn)沉淀；酵母含 rna達(dá) 2.67-10.0% ,而 dna含量僅為0.03-0.516% ,為此,提取 rna多以酵母為原料；精品學(xué)習(xí)資料精選學(xué)習(xí)資料 - - - 歡迎下載學(xué)習(xí)必備歡迎下載rna含有核糖.嘌呤堿.嘧啶堿和磷酸各組分；加硫酸煮可使rna水解,從水解液中可用定糖,定磷和加銀沉淀等方法測出上述組份的存在；試劑和器材一.試劑0.04m naoh溶液； 95%乙醇； 1.5m 硫酸；濃氨水；0.1m 硝酸銀；酸性乙醇溶液：30ml乙醇加 0.3ml hcl ；三氯化鐵濃鹽溶液：將2ml 10三氯化鐵（ fecl3· 6h2o）溶液加入400ml 濃 hcl；苔黑酚 3、5-二

36、羥基甲苯 乙醇溶液：稱取6g 苔黑酚溶于95乙醇 100ml；定磷試劑：17硫酸：將17ml濃硫酸（比重1084）漸漸傾入83ml水中；2.5 鉬酸銨： 2.5g 鉬酸銨溶于100ml 水中；10抗壞血酸溶液：10g 抗壞血酸溶于100ml 水,棕色并儲存溶液；臨用時將三種溶液和水按以下比例混合：17硫酸： 2.5 鉬酸銨： 10抗壞血酸：水1： 1： 1： 2（ v/v）；二.材料干酵母粉；三.器材移液管 0.2ml（× 1） 、2.0ml （× 1） 、 1ml （× 4） ;量筒 10 ml（× 1） 、 50ml （× 1） ;滴管；水

37、浴鍋；離心機(jī)；操作方法一.酵母rna提取稱 5g 干酵母粉懸浮于30ml 0.04m naoh溶液中并在研缽中研磨勻稱；懸浮液轉(zhuǎn)入三角燒瓶,沸水浴加熱30min ,冷卻, 轉(zhuǎn)入離心管； 3000 轉(zhuǎn)/ 分, 離心 15 分鐘后, 將上清漸漸傾入10ml 酸性乙醇,邊加邊攪動；加畢,靜置,待rna沉淀完全后, 3000r/min離心 3min；棄去上清液；用 95乙醇洗滌沉淀兩次；再用乙醚洗滌沉淀一次后,用乙醚將沉淀轉(zhuǎn)移至布氏漏斗抽濾,沉淀在空氣中干燥；稱量所得rna粗品的重量,運(yùn)算：二. rna組份鑒定取 2g 提取的核酸,加入1.5m 硫酸 10ml、 沸水浴加熱10 分鐘制成水解液,然后進(jìn)

38、行組份鑒定；1嘌呤堿：取水解液1ml 加入過量濃氨水；然后加入1ml 0.1m 硝酸銀溶液,觀看有無嘌呤堿銀化合物沉淀；2核糖：取水解液1ml,三氯化鐵濃鹽酸溶液2ml和苔黑酚乙醇溶液0.2ml；放沸水浴中10min；留意觀看核糖為否變成綠色；3磷酸：取水解液1ml,加定磷試劑1ml；在水浴中加熱觀看溶液為否變成藍(lán)色；摸索題1為什么用稀堿溶液可以使酵母細(xì)胞裂解？2如何從酵母中提取到較純的rna.精品學(xué)習(xí)資料精選學(xué)習(xí)資料 - - - 歡迎下載學(xué)習(xí)必備歡迎下載試驗(yàn)七.底物濃度對酶促反應(yīng)速度的影響米氏常數(shù)的測定一.目的1明白底物濃度對酶促反應(yīng)速度的影響；2學(xué)習(xí)測定米氏常數(shù)（ km）的原理和方法；二.

39、原理早在 1913 年,michaelis和 menten 第一提出了酶促反應(yīng)速度和底物濃度的關(guān)系式；即米氏方程式：式中： v 為反應(yīng)初速度； v 為最大反應(yīng)速度；s 為底物濃度；km為米氏常數(shù),其單位為摩爾濃度； km值為酶的一個特點(diǎn)性常數(shù),一般說來,km可以近似地表示酶與底物的親和力；測定km值為酶學(xué)爭論中的一個重要方法；lineweaver-burk作圖法為用試驗(yàn)方法測定km 值的最常用的比較便利的方法；lineweaver 和 burk 將米氏方程改寫成倒數(shù)形式：精品學(xué)習(xí)資料精選學(xué)習(xí)資料 - - - 歡迎下載學(xué)習(xí)必備歡迎下載本試驗(yàn)以胰蛋白酶消化酪蛋白為例,采納lineweaver- b

40、urk雙倒數(shù)作圖法測定 km值；胰蛋白酶為胰液中的一個酶, 它催化蛋白質(zhì)中堿性氨基酸 （l- 精氨酸和 l- 賴氨酸）的羧基所形成的肽鍵水解；水解時生成自由氨基,因此可以用甲醛滴定法判定自由氨基增加的數(shù)量來追蹤反應(yīng)；三.器材150 ml 及 150 ml 錐形瓶225 ml 堿滴定管.滴定臺.蝴蝶夾310 ml 及 5 ml 吸管4100 ml 量筒5恒溫水浴 四.試劑和材料140 g l 酪蛋白溶液（ ph8.5） 10 000 ml40 g 酪蛋白溶解在大約 900 ml 水中,再加 20 ml1moll naoh,連續(xù)振蕩此懸浮液,微熱直至溶解,最終用 1mollhcl 或 1mol l

41、 naoh 調(diào)到 ph8.5,并用水稀釋至 1l；2胰蛋白酶溶液（ 40 g l） 2000 ml可用由胰臟制備的粗胰蛋白酶制劑配制,并放入冰箱內(nèi)儲存；五.操作精品學(xué)習(xí)資料精選學(xué)習(xí)資料 - - - 歡迎下載學(xué)習(xí)必備歡迎下載分別向 6 個小錐形瓶中加入5 ml甲醛溶液和 1 滴酚酞,并滴加 0.1mol l 標(biāo)準(zhǔn)氫氧化鈉溶液,直至混合物呈微粉紅色；全部錐形瓶中的顏色應(yīng)當(dāng)一樣；取 100ml酪蛋白溶液,加入另一錐形瓶中,在37 水 浴中保溫 10分鐘；將胰蛋白酶液也在37水浴中保溫 10 分鐘；然后精確地量取10 ml酶液加到酪蛋白溶液中（同時記時）；充分混合后,立刻取出10ml反應(yīng)混合物（作為零

42、時的樣品）吹至一含甲醛的錐形瓶中；向所取的反應(yīng) 混合物中加入酚酞（每 ml混合物加入 1 滴酚酞）,用 0.1mol lnaoh滴定直至呈柔弱但連續(xù)的粉紅色, 在接近到達(dá)終點(diǎn)之前, 再加入指示劑（每ml氫氧化鈉溶液加入1 滴酚酞）；然后,連續(xù)滴至終點(diǎn), 登記所用 0.1mol l 氫氧化鈉溶液的ml數(shù)；在 2.4.6.8 和 10 分鐘時,分別取出 10ml消化樣品,精確地照上法操作；在每個樣品中滴定終點(diǎn)的顏色應(yīng)當(dāng)為一樣的； 用增加的滴定度對時間作圖,測定初速度；配制不同濃度的酪蛋白溶液（7.5 .10.15.20.30 gl）測定不同底物濃度時的活力；摸索題1如何正確測定酶促反應(yīng)速度？2用試

43、驗(yàn)所得的反應(yīng)速度數(shù)據(jù),對相應(yīng)的底物濃度作圖； 由所得 曲線可以看出底物濃度對酶反應(yīng)的影響有何特殊規(guī)律？試驗(yàn)八.胰凝乳蛋白酶的提取制備及活力測定一 試驗(yàn)?zāi)康暮鸵?. 學(xué)習(xí)和把握胰凝乳蛋白酶的提取原理和方法2 學(xué)習(xí)對粗提的胰凝乳蛋白酶進(jìn)行初步純化的方法和活力測定的方法二試驗(yàn)原理(1) 胰凝乳蛋白酶為以無活力的酶原存在于動物的胰臟中 、 酶原可以被腸激酶 鈣離子活化或自我活化成為有活力的酶 .、 制備結(jié)晶的胰蛋白酶的基本方法為用硫酸銨分級鹽析的方法 、 比活力為指單位重量的蛋白質(zhì)樣品中所含酶活力的單位數(shù)；本試驗(yàn)從豬胰臟中提取.分別.純化胰凝乳蛋白酶；采納酶活力單位數(shù) /mg 蛋白質(zhì)樣品表示酶的比活

44、力；用福林酚試劑法測定樣品中的蛋白質(zhì)含量；把在 ph7.4,溫度 25 攝氏度時, 保溫 10 分鐘能使底物酪蛋白水解出 10 4mmol酪氨酸的胰凝乳蛋白酶規(guī)定為 1 個單位；酪氨酸與酚試劑作用產(chǎn)生藍(lán)色, 其深淺與酪氨酸量成正比, 故用胰凝乳蛋白酶催化酪蛋白水解精品學(xué)習(xí)資料精選學(xué)習(xí)資料 - - - 歡迎下載學(xué)習(xí)必備歡迎下載所得產(chǎn)物酪氨酸的多少來判定樣品中胰凝乳蛋白酶的活力單位數(shù)；三試驗(yàn)器材和藥品高速組織攪碎機(jī) 、 組織勻漿機(jī) 離心機(jī) 分光光度計 水浴鍋 透析袋 大燒杯 抽濾泵抽濾瓶 硫酸 乙酸 硫酸銨 胰蛋白酶 酪蛋白溶液 磷酸鹽緩沖液 堿性銅溶液酚試劑四試驗(yàn)方法1.豬胰凝乳蛋白酶的提純（

45、1）取新奇豬胰臟,放在盛有冰冷0.125mol/l硫酸的溶液中,儲存在冰箱中備用；剝?nèi)?脂肪和結(jié)締組織后稱重；剪碎后裝入組織搗碎機(jī)內(nèi),懸浮于2 倍體積的冰冷0.5mol/l硫酸溶液中, 方在冰箱中過夜；將上述混懸液離心10 分鐘, 上層液經(jīng)過2 層紗布過濾至燒杯中,將沉淀再混懸于等體積0.125mol/l硫酸溶液中, 再離心, 將 2 次上層液合并, 即為提取液；留樣測定蛋白質(zhì)和酶活力；（ 2）分別使用不同飽和度的硫酸銨溶液分別鹽析分別蛋白質(zhì),用透析法出去鹽離子；（ 3）結(jié)晶取分別所得的胰凝乳蛋白酶溶于3 倍體積水中, 取 0.5ml留樣測定蛋白質(zhì)和酶活力；然后加硫酸氨（1.14g/10ml0

46、至胰凝乳蛋白酶溶液達(dá)0.25 飽和度,用0.1mol/l氫氧化鈉調(diào)劑ph 至 6.0 ,在室溫（ 25 攝氏度）放置12 小時即可顯現(xiàn)結(jié)晶；2.胰凝乳蛋白酶比活力的測定（ 1） 樣 品 蛋 白 質(zhì) 含 量 的 測 定a 蛋白質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備精確取肯定量的人血清活牛血清清蛋白,用凱式定氮法測定蛋白質(zhì)含量；另精確取10mg的血清蛋白,用蒸餾水溶解,定容到10ml ；再連續(xù)按下法配制蛋白質(zhì)稀釋液；提取液 10ml加固體硫酸氨1.14g ,達(dá) 0.2 飽和度, 放置 10 分鐘,離心（ 3000r/min ） 10 分鐘棄去沉淀保留上層液取 7ml ,加固體硫酸氨1.323g ,達(dá) 0.5 飽和度,放

47、置 10 分鐘,離心（ 3000r/min ） 10 分鐘棄去上層液保留沉淀溶解于 3 倍體積的水中, 裝入半透膜透析袋,對 ph5.0 ,0.01mol/l 醋酸緩沖液透析兩天（用 1氯化鋇檢查已無白色沉淀產(chǎn)生） 、 離心 5 分鐘（ 3000r/min ）10 分鐘；棄去沉淀保留清夜（變性的酶蛋白）加固體硫酸氨3.9g/10ml,達(dá)0.6飽和度,放置10 分鐘,離心10精品學(xué)習(xí)資料精選學(xué)習(xí)資料 - - - 歡迎下載學(xué)習(xí)必備棄去清夜蛋白質(zhì)原液（歡迎下載ml）分鐘（ 3000r/min ） 10 分鐘；保留沉淀（即為胰凝乳蛋白酶）蒸餾水（ ml）（1）0.49.620.59.5（3）0.69.

48、4（4）0.89.2（5）1.09.0取 6 支試管,編號,按下表操作；編號123456標(biāo)準(zhǔn)樣品（ ml）1液2.02液2.03液2.04液2.05液2.06 液2.0蒸餾水（ ml）2.0堿 性 銅 溶 液2.02.02.02.02.02.0（ml ）混勻后于室溫中放置20 分鐘酚試劑（ ml）0.20.20.20.20.20.2混勻各管, 30 分鐘后,以第6 管為空白管（光莖0.5cm）,在 a680nm處讀取吸光值； 按凱式定氮法測定的蛋白質(zhì)含量,算出各管的蛋白質(zhì)濃度,以此為橫坐標(biāo), 各管的光吸取值為縱坐標(biāo)作圖,得標(biāo)準(zhǔn)曲線；（ 2）測定樣品蛋白質(zhì)含量將胰凝乳蛋白酶提取液a.0.6 飽和

49、度硫酸氨制得的胰凝乳蛋白酶 b.胰凝乳蛋白酶溶液c,分別用ph7.4 , 0.1mol/l磷酸鹽緩沖液稀釋適當(dāng)倍數(shù)；取 4 支試管,編號,按下表操作；管號abc對比樣品（ ml）2.02.02.02.0蒸餾水（ ml）堿性銅溶液 （ ml）2.02.02.02.0混勻后于室溫中放置20 分鐘酚試劑（ ml）0.20.20.20.2立刻混勻, 放置 30 分鐘, 測定 a680nm的光吸取值； 用 a/b/c 各管的光吸取值分別減去對比的光吸取值, 然后查蛋白質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)曲線,得出每 ml 稀釋樣品的蛋白質(zhì)含量,再運(yùn)算處a.b. c3 種制劑每ml 中蛋白質(zhì)的含量；（ 2）樣品中胰凝乳蛋白酶活力的測定

50、 a 制備標(biāo)準(zhǔn)曲線,按下表加液；管號12345對比酪氨酸標(biāo)準(zhǔn)液 2.0 2.0 2.02.0 2.0水 2.00.1mpl/lnaoh2.02.02.02.02.02.0堿性銅溶液2.02.02.02.02.02.0酚試劑0.20.20.20.20.20.2混勻,放置30 分鐘,測定a680nm的光吸取值；以光吸取值為縱坐標(biāo),酶活性單位為橫坐 標(biāo),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線；精品學(xué)習(xí)資料精選學(xué)習(xí)資料 - - - 歡迎下載學(xué)習(xí)必備歡迎下載b 樣品中胰凝乳蛋白酶活力的測定將上述 3 種制劑分別ph7.4 , 0.1mol/l磷酸鹽緩沖液稀釋適當(dāng)倍數(shù)；取 4 支試管,編號,按下表操作；管號abc對比1酪蛋白液（ml）1.01.01.0ph7.4 , 0.1mol/l磷酸鹽緩沖液（ml）1.01.01.02.0搖勻,放入25水浴中10min樣品（ ml）1.01.01.01.0搖勻,連續(xù)保溫10 分鐘 10三氯