試驗九食品中維生素C含量的測定

1、6&6二氟酣璉酬 （紅色）還1®型£0-二氟礎f靛商（無色）CHaOH 脫氮抗壞血醱實驗九食品中維生素C含量的測定1. 實驗目的學習并掌握用2,6-二氯酚靛酚滴定法測定食品材料中維生素C含量的原理和方法。2. 實驗原理維生素C是人類營養(yǎng)中最重要的維生素之一，它與體內其它還原劑共同維持細胞正常的氧化還原電勢和有關酶系統的活性。維生素C能促進細胞間質的合成，如果人體缺乏維生素C時則會出現壞血病，因而維生素 C又稱為抗壞血酸。水果和蔬菜是人體抗壞血酸的主要來 源。不同栽培條件、不同成熟度和不同的加工貯藏方法，都可以影響水果、 蔬菜的抗壞血酸 含量。測定抗壞血酸含量是了解果

2、蔬品質高 低及其加工工藝成效的重要指標。維生素C具有很強的還原性。 它可分為 還原性和脫氫型。金屬銅和酶（抗壞血酸氧 化酶）可以催化維生素C氧化為脫氫型。2,6- 二氯酚靛酚（DCPIP）是一種染料，在堿性 溶液中呈藍色，在酸性溶液中呈紅色。 抗壞 血酸具有強還原性，能使2,6-二氯酚靛酚還 原褪色，其反應如圖：當用2,6-二氯酚靛酚滴定含有抗壞血 酸的酸性溶液時，滴下的2,6-二氯酚靛酚被 還原成無色；當溶液中的抗壞血酸全部被氧 化成脫氫抗壞血酸時，滴入的2,6-二氯酚靛 酚立即使溶液呈現紅色。因此用這種染料滴 定抗壞血酸至溶液呈淡紅色即為滴定終點， 根據染料消耗量即可計算出樣品中還原型 抗

3、壞血酸的含量。3. 儀器及材料3.1儀器容量瓶、錐形瓶、微量滴定管、洗耳球3.2試劑（1）1%草酸溶液：草酸1g溶于100ml蒸餾水；2%草酸溶液：草酸 2g溶于100ml蒸餾水。（2） 維生素C標準儲備液：準確稱取20mg維生素C溶于19草酸溶液中，移入 100ml 容量瓶中，用1%草酸溶液定容，混勻，冰箱中保存。（3） 維生素C標準使用液（0.02648mg/ml ）:吸取維生素 C貯備液5ml，用1%草酸溶 液稀釋至50ml。標定：準確吸取上述維生素C標準使用液25.0mL于50mL錐形瓶中，加入 0.5mL 60g/L碘化鉀溶液，35滴淀粉指示劑（10g/L），混勻后用0.0010mo

4、l/L標準碘酸鉀溶液滴定至 淡藍色（極淡藍色）為終點。重復操作三次，取平均值計算L-抗壞血酸的濃度。V2式中：c維生素C的濃度，mg/ mL;V1滴定時消耗1.67 X 10-4mol/L碘酸鉀標準溶液的體積，mL;V2吸取維生素C標準使用液的體積，mL;0.088 I.OOmL碘酸鉀標準溶液 (1.67 X 10-4mol/L) 相當的維生素 C的量，m®(4) 2,6-二氯酚靛酚液：稱取2,6-二氯酚靛酚50mg溶解并定容至250ml (棕色瓶)， 冷藏。標定：吸取已知濃度的維生素C標準使用溶液5.00mL于50mL錐形瓶中，加5mL10g/L草酸溶液，用 2.6 二氯靛酚溶液滴

5、定至呈粉紅色，且15s不褪色即為終點。同時，另取5mL10g/L草酸溶液做空白試驗。重復操作三次，取平均值計算L-抗壞血酸的濃度。c XVT =V -V2式中：T 每mL 2 , 6二氯靛酚溶液相當于維生素C的毫克數；C 維生素C標準使用液的濃度，mg/mL ;V 標定時吸取維生素 C標準使用液的體積，mL;VI 滴定抗壞血酸溶液消耗2, 6二氯靛酚的溶液的體積，mL。V2滴定空白所用2, 6二氯靛酚溶液的體積，mL。(5) 碘酸鉀溶液(0.000167mol/L ):精確稱取碘酸鉀 0.3567g，定容至100ml，吸取 1ml，稀釋至 100ml。(6) 1%淀粉溶液(7) 6%碘化鉀溶液

6、3.3材料橘子4. 實驗過程4.1實驗步驟(1) 水洗干凈整個新鮮水果，用紗布或吸水紙吸干表面水分。每一樣品稱取2.00-5.00g ,放入研缽中，加入 2%草酸一起研磨成勻漿，提取液通過2層紗布過濾到100ml容量瓶中，然后用2% HCl沖洗研缽及紗布 3 4次，最后用1%草酸稀釋定容至刻度線。(2) 如果提取液含有色素，則倒入錐形瓶內加入1匙活性碳，充分振蕩 5分鐘，濾紙 過濾，活性碳吸附生物樣品中的色素，有利于終點的觀察。(3) 取三角錐形瓶3個，各加脫色的提取液10或20ml，用2,6 二氯酚靛酚溶液滴定，直至出現微紅色 30秒不退色為終點。記錄兩次滴定的毫升數，取平均值。滴定必須迅速

7、不 要超過2分鐘，因為在實驗條件下，一些非Vc的還原物質其還原作用較遲緩，快速滴定可以避免或減少它們的影響。平行 3次，空白3次。4.2注意事項(1) 樣品中某些雜質也能還原2, 6-二氯酚靛酚，但速率均較抗壞血酸慢，故終點以 淡色存在30s為準。(2) 維生素C還可以用2%草酸溶液來提取，2%草酸和偏磷酸同樣具有抑制抗壞血酸氧 化酶的功效。(3) 若樣品中含有大量 Fe2+,可以還原2, 6-二氯酚靛酚，用草酸為提取液，則Fe2+不會很快與染料起作用。5. 實驗結果及分析5.1數據記錄表實驗組別滴定起點/ml滴定過程滴定終點/ml滴定體積/ml試樣體積/ml12.304.121.8210.0

8、0樣品24.126.041.9210.0036.047.961,9210.0011.801.900.1010.00空白21.902.000.1010.0032.002.150.1510.00實驗樣品總質量：4.6862g5.2標定（1）維生素 C標準液濃度為 0.02648mg/ml（2）2,6-二氯靛酚溶液標定：吸取維生素 C標準液5ml,消耗2,6-二氯靛酚溶液1.85ml。5.3計算維生素C的含量（mg/100g）按下式計算：維生素C的含量(v, - v2)* T * 100m式中v1 樣品用2, 6-二氯酚靛酚溶液的滴定體積，mLV2空白用2，6-二氯酚靛酚溶液的滴定體積，mLT1 m

9、L 2，6-二氯酚靛酚相當于維生素C的含量，mg/mLm測定時所取濾液中含有樣品的用量，g綜上所述，將重復試驗所得數據取平均值：V =(1.82+1.82+1.92)/3=1.85(ml)V2=(0.10+0.10+0.15)/3=0.12(ml)T=0.02648*5.00/1.85=0.07157mg/mlm=4.6862*10/100=0.46862g維生素 C的含量二85 一°.12)*°.°7157 * 100 二 26.42mg/10 0g0. 46862此實驗樣品的維生素 C含量為26.42mg/100g。5.4誤差分析(1) 色素：若提取液中色素很

10、多時，滴定不易看出顏色變化，可用白陶土脫色，或加 1mL氯仿，到達終點時，氯仿層呈現淡紅色。(2) Fe2+： Fe2+可還原二氯酚靛酚。對含有大量Fe2+的樣品可用8%乙酸溶液代替 草酸溶液提取，此時 Fe2 +不會很快與染料起作用。(3) 樣品中可能有其它雜質還原二氯酚靛酚，但反應速度均較抗壞血酸慢，因而滴定開始時，染料要迅速加入，而后盡可能一點一點地加入，并要不斷地搖動三角瓶直至呈粉紅 色，于15s內不消退為終點。(4) 若試樣中含有 Fe2+、Cu2+、Sn2+、亞硫酸鹽等還原性雜質，會使結果偏高。可通過以下方法來校正：取10mL提取液兩份，各加入10g/L硫酸銅溶液1mL在110C加

11、熱10min，冷卻后用染料滴定。有銅存在時，抗壞血酸完全被破壞，從樣品滴定值中扣除校正 值，即得抗壞血酸含量。6. 討論與心得6.1思考題6.1.1測定食品中維生素 C的方法還有什么？答：目前維生素 C測定方法的報道較多，有關維生素 C的測定方法如熒光法、 2, 6-二 氯靛酚滴定法、2, 4-二硝基苯肼法、光度分析法、化學發(fā)光法、電化學分析法及色譜法等，各種方法對實際樣品的測定均有滿意的效果。6.1.2樣品采集后為什么用 2%草酸浸泡研磨而非1%草酸？答：用2%鹽酸制備樣品提取液，可有效地抑制抗壞血酸氧化酶，以免抗壞血酸為氧化 型而無法滴定。如果樣品中有較多亞鐵離子(Fe2 + )時，亦會使染料還原而影響測定，這時應改為8%乙酸制備樣品提取液。6.2心得體會這是第五次進行食品分析與檢驗實驗課程。實驗內容是食品中維生素C含量的測定。其中我主要學會了用 2,6-二氯酚靛酚滴定法測量維生素C含量的基本操作技術，掌握了相關實驗測定條件的選擇， 這在以后的食品分析與檢驗試驗中是很有用的。在實驗過程中我組成員各有分工，尤其注意了精確滴定讀數等一系列基本操作。實驗全程我們嚴格按照規(guī)范操作，取得了較好的實驗結果。這門課程作為專業(yè)課程的配套實驗，這是提高我們實驗技術，掌握基本的試驗方法的基本。我們會更加認真完成課程。同時感謝老師和助教的講解， 使得我對實驗的各項