Zeiss激光掃描共聚焦顯微鏡操作手冊(cè)

1、Zeiss激光掃描共聚焦顯微鏡操作手冊(cè)目錄：1系統(tǒng)得組成系統(tǒng)組成及光路示意圖實(shí)物照片說(shuō)明2系統(tǒng)得使用2、1開(kāi)機(jī)順序2、2軟件得快速使用說(shuō)明2、3顯微鏡得觸摸屏控制2、4關(guān)機(jī)順序3系統(tǒng)得維護(hù) 1系統(tǒng)得組成激光掃描共聚焦顯微鏡系統(tǒng)主要由:電動(dòng)熒光顯微鏡、掃描檢測(cè)單元、激光器、電腦工作站 及各相關(guān)附件組成。系統(tǒng)組成及光路示意圖：電腦工作站激光器電動(dòng)熒光顯微鏡掃描檢測(cè)單元實(shí)物照片說(shuō)明：電動(dòng)熒光顯微鏡掃描檢測(cè)單元C02培養(yǎng)系統(tǒng)控制器激光器電腦工作站2系統(tǒng)得使用2、1開(kāi)機(jī)順序(1) 打開(kāi)穩(wěn)壓電源(綠色按鈕)等待2分鐘(電壓穩(wěn)泄)后,再開(kāi)英它開(kāi)關(guān)(2) 主開(kāi)關(guān)MAIN SWITCH ''0N

2、"電腦系統(tǒng)SYSTEMS/PC ''0N"掃描硬件系統(tǒng)PONENTS ''0N"(3) 打開(kāi)電動(dòng)顯微鏡開(kāi)關(guān)打開(kāi)熒光燈開(kāi)關(guān)(注:具有5檔光強(qiáng)調(diào)節(jié)旋鈕)(4) Ar離子激光器主開(kāi)關(guān)"ON"順時(shí)針旋轉(zhuǎn)鑰匙至、'一"預(yù)熱等待約15分鐘，將激光器扳鈕由''Standby"扳至''Laser run"狀態(tài),即可正常使用(5) 打開(kāi)電腦開(kāi)關(guān),進(jìn)入操作系統(tǒng)注:鍵盤上也具有電腦開(kāi)關(guān)2、2軟件得快速使用說(shuō)明(1) 電腦開(kāi)機(jī)進(jìn)入操作系統(tǒng)界而后,雙擊桌而共聚焦軟件ZE

3、N圖標(biāo)(2) 進(jìn)入ZEN界而,彈出對(duì)話框：''Start System"初始化整個(gè)系統(tǒng),用于激光掃描取圖、分析等。''Image Processing"不啟動(dòng)共聚焦掃描硬件,用于已存圖像數(shù)據(jù)得處理、分析。(3) 軟件界而：1功能界面切換:掃描取圖(Acquisition)、圖像處理(Processing),維護(hù)(Maintain)(注:Maintain僅供Zeiss專業(yè)工程師使用)2動(dòng)作按鈕;3工具組(多維掃描控制);4工具詳細(xì)界而;5狀態(tài)欄;6視窗切換按鈕；7圖像切換按鈕;8圖像瀏覽/預(yù)掃描窗口;9文檔瀏覽/處理區(qū)域;10視窗中圖像處理模塊

4、動(dòng)作按鈕：Single d描單張圖片、并在圖像預(yù)覽窗口顯示。Start開(kāi)始掃描單張圖片或一個(gè)實(shí)驗(yàn)流程(1組圖片，如XYZ、XYT等)。 Stop 暫停/結(jié)束掃描。New 建立一個(gè)新圖像掃描窗口 /文檔。激光連接狀況檢查 眼睛觀察/相機(jī)/共聚焦LSM光路切換(ZEN軟件界而右上角)：Ocular通過(guò)觀察筒用眼睛觀察。(激光安全保護(hù)裝置自動(dòng)阻斷激光、保護(hù)眼睹。) Camera光路切換至相機(jī)。LSM 共聚焦掃描成像光路。顯微鏡設(shè)置：“Ocular"''Light Path"一點(diǎn)擊物鏡圖標(biāo)，選擇物鏡一一樣品聚焦。透射光控制(Transmitted Light Con

5、trol)反射光光閘控$0(Reflected Light Shutter)熒光激發(fā)塊選擇(Reflector)共聚焦LSM掃描設(shè)置點(diǎn)擊、'LSM"(ZEN軟件界而右上角)，系統(tǒng)切換至共聚焦掃描光路：光路設(shè)置：Smart Setup 自動(dòng)預(yù)設(shè)光路選取''熒光探針"、''顏色"、掃描方法， 應(yīng)用 ''Apply"。(注:Fastest為最快速掃描，多條激光譜線同時(shí)掃描。Best signal為最佳信號(hào)掃描，多條激光譜線順序掃描。Best promise為兼顧速度與信號(hào)得折中式掃描。)掃描圖像參數(shù)設(shè)置：

6、每個(gè)通道得精細(xì)調(diào)肖：包括：(l) Pinhole得調(diào)侃一般設(shè)為1AU.該值越大，則信號(hào)越強(qiáng)，但共聚焦圖像效果會(huì)降低。原則上， 在保證圖像質(zhì)量得前提下,該值越接近于1AU越好)；Master Gain得調(diào)肖(增大則信號(hào)與噪音都增強(qiáng),減小則信號(hào)與噪音均減小。原則上準(zhǔn)保證 圖像質(zhì)量得前提下,Gain值越小越好)；Digital Offset得調(diào)肖(可扣除背景噪音,但標(biāo)本信號(hào)也有一左程度得扣除。原則上，在保證 圖像質(zhì)量得前提下Digital Offset值越接近于0越好)；(4) Digital Gain得調(diào)節(jié)(增大則信號(hào)與噪音都增強(qiáng)，減小則信號(hào)與噪音均減小。原則上，在保證 圖像質(zhì)量得前提下,Gain

7、值越接近于1、01、2越好)；(5) 另外,對(duì)于每個(gè)通道，需要靈活調(diào)節(jié)激光得強(qiáng)度(激光強(qiáng)度越髙，則信號(hào)越強(qiáng)，但噪音也相應(yīng) 增強(qiáng)，同時(shí)標(biāo)本更容易被漂白或淬火。原則上，在保證圖像質(zhì)量得前提下，激光強(qiáng)度越低越好。) 選擇可連續(xù)掃描、一邊預(yù)覽圖像效果、一邊精細(xì)調(diào)節(jié)個(gè)通道得掃描參數(shù)。如果預(yù)覽圖像得效果可以，則先"Stop"，再點(diǎn)擊''Single"或''Start"即可完成圖像得掃描。圖像得保存：三種方法：(1) ''File"菜單下Save"或者''Save AS"。(

8、2) 點(diǎn)擊右下角按鈕。(3) 點(diǎn)擊工具欄按鈕。(如圖所示)列外，通過(guò)''File"菜單下得''Export：也可將圖像以英它格式輸岀。2、3顯微鏡得觸摸屏控制顯微鏡可由TFT液晶觸摸屏進(jìn)行控制：由觸摸屏''Home/主頁(yè)"進(jìn)入''Control/顯微鏡控制"界而，觸摸屏常用控制界面：TFT觸摸屏控制直觀、便捷。Objectives物鏡控制TL透射光光閘RL反射光光閘Reflector熒光激發(fā)塊控制熒光觀察時(shí)，需要選擇相應(yīng)得熒光激發(fā)塊(或者激發(fā)波長(zhǎng)、發(fā)射波長(zhǎng)相近得熒光激發(fā)塊)Light path光路設(shè)苣

9、觸摸控制,可將光路切換至"Eyepiece"目鏡觀察簡(jiǎn),或者將光路切換至左側(cè)共聚焦光路''Sideport L：或者將光路切換至 前側(cè)''Frontport"相機(jī)。2、4關(guān)機(jī)順序：關(guān)閉軟件:主菜單''File">''Exit：退出共聚焦軟件ZEN。(2) 關(guān)閉主電腦操作系統(tǒng)、顯示器電源。(3) 關(guān)閉熒光燈電源。(4) 關(guān)閉電動(dòng)顯微鏡電源。(5) 關(guān)閉A激光器：先將扳鈕從''Laser run"扳到''Standby"狀態(tài)；再將鑰匙逆時(shí)

10、針從"旋轉(zhuǎn)到、'0"狀態(tài)；等待約8-10分鐘、激光器風(fēng)扇停止轉(zhuǎn)動(dòng)后(切記！)，將主開(kāi)關(guān)按鈕按到''OFF"。(6) 掃描硬件系統(tǒng)PONENTS ''OFF"電腦系統(tǒng)SYSTEMS/PC ''OFF"主開(kāi)關(guān)MAIN SWITCHOFF"(7) 等燈箱充分冷卻后,再放防塵罩。(8) 如果系統(tǒng)長(zhǎng)時(shí)間(超過(guò)5個(gè)小時(shí))不使用，則關(guān)閉穩(wěn)壓電源。3系統(tǒng)得維護(hù)主要注意事項(xiàng)如下：(1) 打開(kāi)穩(wěn)壓電源時(shí),應(yīng)等待2分鐘(電壓穩(wěn)左)后，再開(kāi)其它開(kāi)關(guān)。(2) 嚴(yán)格遵守激光器得開(kāi)、關(guān)流程(詳見(jiàn)''2、1、2、4開(kāi)/關(guān)機(jī)順序如果使用過(guò)汕鏡咸者物鏡表面較臟,則需用擦鏡紙擦F凈物鏡得前表 而(淸潔液使用無(wú)水乙醇與無(wú)水乙毬得混合液,混合比例:無(wú)水乙醇30%、 無(wú)水乙庭70%).(4) 不使用熒光時(shí)，不打開(kāi)熒光燈。避免頻繁開(kāi)/關(guān)熒光燈。(5) 必須等燈箱充分冷卻后,再小心地蓋上防塵罩。(6) 顯微鏡可由TFT觸摸屏控制,使用觸摸屏?xí)r注意： 手指保持淸潔、干燥狀態(tài)，并且為了保證她人使用安全,觸摸時(shí)嚴(yán)禁配 戴有可能接觸污染物或危險(xiǎn)樣品得手套； 觸摸屏已足夠靈敏，不要大力按壓觸摸屏； 不要旋轉(zhuǎn)、插拔觸摸屏。(7) 刻錄圖像數(shù)據(jù)資料: