蔡司LSM7DUO激光掃描共聚焦顯微鏡的配置

1、司lsm 7du0激光掃描共聚焦顯微鏡的配摘要：蔡司lsm 7du0是目前蔡司公司開發(fā)的普通 單光子激光掃描共聚焦顯微鏡中配置最高的型號之一。它是 一款雙共聚焦系統(tǒng)，包括蔡司lsm 780和lsm 7live,雙共 聚焦成像系統(tǒng)高度整合，可各自獨立成像，也可同時工作， 尤其lsm 7live是截止目前華南地區(qū)購置的唯臺高速掃 描共聚焦系統(tǒng)，掃描速度可達120幅/秒。文章主要介紹蔡 司lsm 7du0雙共聚焦系統(tǒng)的具體配置和技術(shù)參數(shù)，希望有 需要的科研者能夠更多的了解蔡司lsm 7duo并且有更好的 使用。關(guān)鍵詞：激光掃描共聚焦顯微鏡；蔡司lsm 780；蔡司 lsm 7live引言作為近代最先

2、進的細胞生物醫(yī)學(xué)分析儀器之一，激光掃 描共聚焦顯微鏡(confocal laser scanning microscope, clsm)區(qū)別于普通顯微鏡之處就在于針孔(pinhole)的添 加，激發(fā)光通過透鏡聚焦到被觀測樣品上，如果樣品恰在焦 平面上，那么反射光通過原透鏡應(yīng)當(dāng)匯聚回到光源，共聚焦 顯微鏡在反射光的光路中加上了一塊半反半透鏡，將已經(jīng)通 過透鏡的反射光折向其它方向，在其焦點處放置一個針孔， 收集來自焦點處的發(fā)射熒光，這也就是共聚焦的原理1-2 o 針孔限制儀器在樣品表面的聚焦深度，阻擋非焦平面光線， 并有效防止雜質(zhì)信號產(chǎn)生的背景噪音干擾3-4,因此激光 掃描共聚焦顯微鏡具有較高的分

3、辨力，大約是普通光學(xué)顯微 鏡三倍。近年來隨著各種熒光染料、熒光蛋白，精密光學(xué)技 術(shù)和元件的出現(xiàn)，激光掃描共聚焦顯微鏡在分子細胞生物學(xué) 及其醫(yī)學(xué)領(lǐng)域的應(yīng)用越來越廣泛4-8,蔡司公司也在不斷 適應(yīng)市場和科研的需求，十幾年間不斷推出zeiss lsm 510、 510 meta、700、3 通道的 710、34 通道的 710、780、7live 等逐步完善的激光共聚焦型號，華南農(nóng)業(yè)大學(xué)亞熱帶農(nóng)業(yè)生 物資源保護與利用國家重點實驗室在2013年5月購置了一 臺zeiss lsm 7 duo雙共聚焦系統(tǒng),它整合了 zeiss lsm 780 和7live,是目前華南地區(qū)配置最高的單光子激光共聚焦系 統(tǒng)。

4、zeiss lscm 7duo 的配置：zeiss lsm 7 duo是一款雙共聚焦系統(tǒng)，包括zeiss lsm 780和zeiss lsm 7 live兩套掃描系統(tǒng)。雙系統(tǒng)共用一臺 計算機和顯微鏡，但每套系統(tǒng)包含各自的專用激光器，掃描 振鏡單元、共聚焦成像檢測器、共聚焦針孔及共聚焦光路等, 兩套共聚焦成像系統(tǒng)高度整合，可各自獨立成像，也可同時 工作。雙系統(tǒng)共用一臺計算機和顯微鏡。zeiss lsm 7 duo雙 系統(tǒng)共用全自動研究級倒置顯微鏡，電控物鏡轉(zhuǎn)換、物鏡升 降、自動對焦、熒光濾片轉(zhuǎn)換、光路切換；電動聚光鏡，電 動照明光軸，電動dic起偏、檢偏、物鏡同步轉(zhuǎn)換，電動調(diào) 節(jié)透射光和熒光的孔

5、徑光闌和視場光纜；電控前面、底面分 光口和前分光出口，三級分光模式，可同時安裝六個m27物 鏡轉(zhuǎn)盤及六塊熒光濾片裝盤；提供明場、dic、相差、熒光 觀察；所有硬件可以通過三種方式控制，tft觸摸屏，軟件 操作系統(tǒng)和手動控制；目前物鏡配置有5x、10x、20x、 40x空氣鏡，63x水鏡、100x油鏡；熒光濾片配置有：dapi(ex 365； em 445/50)、cfp (ex 436/20； em 480450)、gfp (ex 470/40 ； em 525/50 )、rhodamin (ex 546/12； em 575-640)、cy5 (ex 575-625； em 660-710)

6、；另外配置有活 細胞培養(yǎng)裝置，提供合適的溫度，濕度二氧化碳控制，為長 時間監(jiān)測活細胞的生理動態(tài)變化提供保證。zeiss lscm 780是一款超高靈敏度共聚焦系統(tǒng)，檢測器 物理通道數(shù)三十五個，其中透射光檢測通道一個，光譜型熒 光共聚焦檢測通道三十四個，包括三十二個陣列式磷神化銖 超高靈敏度gaasp探測器，兩個大靶面pmto光譜掃描范圍 370-760nm,可一次性進行全光譜檢測，最高可同時檢測十 種熒光探針，實現(xiàn)實時光譜解串?dāng)_；點掃描，掃描頻率可達 4000線/秒，掃描速度512*51228h,每個通道的掃描圖像 均可同時達到26144*6144的掃描分辨率；目前此多通道光 譜掃描頭配有：偏

7、紫外二極管固體激光器405nm,功率 230mw,藍激光多線氟激光器ar laser 458/488/514nm,功 率$25mw, hene激光器543 nm,功率21mw, hene激光器 594nm,功率22mw, hene 激光器，633nm；功率25mw。zeiss lscm 7live是一套高速激光共聚焦系統(tǒng)。7live 通過內(nèi)置的激光光束變形器將激光器發(fā)射出來的激光光束 由原來的圓柱形變形為橫線形，以橫線形激光掃描標本，線 形代替點形無疑極大提高掃描速度，另外配置的兩個高速共 聚焦監(jiān)測通道可同時使用，線掃描速度可達60000線/秒， 面掃描速度可達120幅/秒（512?鄢512）

8、,毫秒兩級的圖像 掃描可實現(xiàn)活細胞在秒量級的動態(tài)監(jiān)測，有效捕捉目前較多 使用的高分辨率激光掃描共聚焦顯微鏡無法捕捉到的生理 動態(tài)；圖像分辨率可達1536*1536,高速z軸移動步進馬達, 運行范圍250微米，z軸精度10nm；目前此高速掃描頭配有: 偏紫外二極管固體激光器405nm,功率250mw,藍線二極管 固體激光器488nm,功率loomw,綠線二極管固體激光器 532nm,功率$75mw,紅激光固體激光器635nm,功率230mw。參考文獻1 袁蘭激光掃描共聚焦顯微鏡技術(shù)教程m.北京：北 京大學(xué)醫(yī)學(xué)出版社，2004.2 李楠，尹嶺，蘇振倫.激光掃描共聚焦顯微術(shù)m.北京：人民軍醫(yī)出版社，

9、1997.3 王春梅，黃曉峰，楊家驥，等激光掃描共聚焦顯微 鏡技術(shù)m.西安：第四軍醫(yī)大學(xué)出版社，2004.4 任小則，送峰激光掃描共聚焦顯微鏡的使用及其在 醫(yī)學(xué)研究領(lǐng)域中的應(yīng)用j.中國科技信息，2009, 11： 237-238.5 wilson t, and sheppard cjr theory and practice of scanning optical microscopym, new york： academic press, 1984.6 鄭東熒光共振能量轉(zhuǎn)移及其新進展j.進技術(shù)應(yīng) 用,2003, 9 (1)： 43-46.7 tsien ry. the green fluorescent protein jarmu. rev. biochem. ,1998, 67: 509-544.8