基于代謝組學(xué)的不同基源柴胡功效比較研究

1、基于代謝組學(xué)的不同基源柴胡功效比較研究【摘要】：選題依據(jù)：柴胡的功效主要為解表退熱、疏肝解郁、升舉陽氣三方面,臨床配伍靈活多樣,以其為主藥的經(jīng)典名方有十余首,如小柴胡湯、大柴胡湯、逍遙散、柴胡疏肝散、柴葛解肌湯、正柴胡飲等,廣泛用于內(nèi)科、婦科、兒科及五官科中。已有研究表明：紅柴胡在針對發(fā)熱疾病的療效上優(yōu)于北柴胡,而北柴胡在治療肝病方面則優(yōu)于紅柴胡；而從單味藥的藥理作用到化學(xué)成分、基因的遺傳多樣性等方面研究也證實(shí)以上兩種柴胡有著明顯差異。然而,(1)中醫(yī)以復(fù)方用藥為特征,以不同的柴胡入藥功效是否會有差異?(2)由于北柴胡價廉,紅、北柴胡的臨床應(yīng)用并不加以區(qū)別。那么分別以不同基源的柴胡配伍的方劑在

2、整體功效上是否有差異,并不十分清楚。為此,系統(tǒng)、全面地闡明紅柴胡與北柴胡在功效上的差異本質(zhì),對提高柴胡的臨床用藥準(zhǔn)確性,保證柴胡的臨床療效十分必要。此外,代謝組學(xué)作為繼基因組學(xué)、蛋白組學(xué)之后又一大組學(xué)技術(shù),具有系統(tǒng)、客觀、靈敏等特點(diǎn),且與中醫(yī)藥的整體觀、辨證施治的思想非常吻合,為疑難疾病的發(fā)病機(jī)理研究以及成分復(fù)雜的中藥復(fù)方的作用機(jī)制研究提供了新的思路與方法。本課題選用以柴胡為君藥的兩個經(jīng)典中藥復(fù)方小柴胡湯和柴葛解肌湯為研究對象,運(yùn)用代謝組學(xué)技術(shù),研究由不同基源柴胡組成的上述中藥復(fù)方的功效,從而達(dá)到既能從臨床用藥的角度比較紅、北柴胡的功效,又可為多基源中藥材的功效評價提供新的途徑。目的：通過比較

3、傳統(tǒng)指標(biāo)及體液、組織代謝物的差異,探明紅、北柴胡單味藥及其所配伍而成的柴葛解肌湯、小柴胡湯在解熱作用、保肝作用效果上的差異,并找到柴胡單味藥及其所配伍的不同中藥復(fù)方在解熱和保肝方面的差異標(biāo)志物,從而在體內(nèi)代謝物的水平上初步探討柴胡的藥理機(jī)制。方法：摸索干酵母發(fā)熱模型,探索紅、北柴胡單味藥及由其所配伍而成的柴葛解肌湯和小柴胡湯的解熱作用,并運(yùn)用GC-MS代謝組學(xué)技術(shù)在血漿代謝物水平上比較紅、北柴胡在解熱作用上的差異；摸索四氯化碳(CC14)急性肝損傷模型,評價由紅、北柴胡配伍而成的小柴胡湯在保肝作用上的差異,通過生化指標(biāo)(血清中ALT、AST水平)以及運(yùn)用NMR代謝組學(xué)技術(shù)從血清和肝臟代謝物水平

4、上探討紅、北柴胡在小柴胡湯的保肝作用方面所表現(xiàn)出的差異性。結(jié)果：(1)從降低體溫的角度看,紅柴胡不論是單味藥還是配伍成復(fù)方(柴葛解肌湯),解熱作用均優(yōu)于北柴胡；從血漿代謝組學(xué)角度看,發(fā)熱模型組的大鼠血漿中部分代謝物發(fā)生明顯紊亂,而紅、北柴胡均可回調(diào)發(fā)生紊亂的血漿代謝物,且紅柴胡的回調(diào)作用略優(yōu)于北柴胡組；(2)北柴胡單味藥從體溫結(jié)果看并沒有很好的解熱作用,但從代謝輪廓的分析及對解熱標(biāo)志物的調(diào)節(jié)上看,北柴胡對發(fā)熱大鼠血漿代謝物也有較好的回調(diào)作用,說明代謝組學(xué)技術(shù)比傳統(tǒng)藥效評價指標(biāo)更為靈敏；(3)紅、北柴胡所配伍的小柴胡湯對酵母致熱大鼠未見明顯的降溫作用,可能由于酵母致熱模型不適于評價小柴胡湯的解熱

5、機(jī)制有關(guān)；(4)紅、北柴胡所配伍的小柴胡湯均可降低CC14致急性肝損傷模型大鼠血清中轉(zhuǎn)氨酶的含量,從傳統(tǒng)生化指標(biāo)看都有很好的保肝作用,但是二者在保肝作用上沒有顯著性差異；從血清及肝臟代謝組學(xué)角度看,CC14使大鼠機(jī)體代謝發(fā)生了很大紊亂,其中能量代謝、糖代謝及脂代謝等發(fā)生了明顯的變化；而小柴胡湯及陽性藥聯(lián)苯雙酯對模型組大鼠血清中HDL有顯著的回調(diào)作用,說明小柴胡湯及聯(lián)苯雙酯均可改善CC14致機(jī)體受損后的脂類代謝異常；同時,小柴胡湯還可對肝臟中丙酮酸有顯著的回調(diào)作用,表明小柴胡湯可改善大鼠機(jī)體的能量代謝；小柴胡湯及聯(lián)苯雙酯可回調(diào)血液與肝臟組織中的膽堿和磷酸膽堿的含量,說明小柴胡湯及聯(lián)苯雙酯還有保護(hù)

6、肝臟細(xì)胞膜的作用,通過該機(jī)制而最終降低了血清中ALT、AST的含量。結(jié)論：(1)在解熱作用上,紅柴胡優(yōu)于北柴胡；(2)在保肝作用上,紅、北柴胡沒有顯著性差異；(3)代謝組學(xué)技術(shù)是評價由不同基源中藥所組成中藥復(fù)方功效的有效手段,還能從新的角度闡釋藥物作用機(jī)制。【關(guān)鍵詞】：柴胡解熱保肝柴葛解肌湯小柴胡湯代謝組學(xué)【學(xué)位授予單位】：山西大學(xué)【學(xué)位級別】：碩士【學(xué)位授予年份】：2013【分類號】：R289.1【目錄】：中文摘要11-13ABSTRACT13-16第一章引言16-201.1立題背景及意義16-171.2研究內(nèi)容、技術(shù)流程圖及創(chuàng)新點(diǎn)17-20第二章文獻(xiàn)綜述20-302.1紅、北柴胡比較研究進(jìn)

7、展202.1.1有效成分及藥理作用比較研究202.1.2資源狀況比較研究202.2柴葛解肌湯應(yīng)用研究進(jìn)展20-232.2.1在外感發(fā)熱上的臨床運(yùn)用21-222.2.2其他臨床運(yùn)用22-232.2.3小結(jié)232.3小柴胡湯應(yīng)用研究進(jìn)展23-272.3.1在解熱方面的應(yīng)用23-242.3.2在肝病方面的應(yīng)用24-262.3.3對免疫系統(tǒng)的作用262.3.4其他26-272.4代謝組學(xué)概述及其在中藥復(fù)方中的應(yīng)用27-292.4.1代謝組學(xué)的概念及其優(yōu)勢272.4.2代謝組學(xué)的分析技術(shù)平臺27-282.4.3代謝組學(xué)的一般操作流程282.4.4代謝組學(xué)技術(shù)在中藥復(fù)方藥效學(xué)及其作用機(jī)制中的應(yīng)用28-29

8、2.5結(jié)語29-30第三章紅、北柴胡解熱作用的比較研究30-493.1引言303.2實(shí)驗(yàn)材料30-313.2.1藥物與試劑30-313.2.2儀器與設(shè)備313.2.3實(shí)驗(yàn)動物313.3發(fā)熱模型的摸索31-343.3.1實(shí)驗(yàn)方法31-323.3.2實(shí)驗(yàn)結(jié)果32-333.3.3實(shí)驗(yàn)小結(jié)33-343.4紅、北柴胡對干酵母致發(fā)熱大鼠的解熱作用比較實(shí)驗(yàn)34-463.4.1實(shí)驗(yàn)方法34-363.4.2實(shí)驗(yàn)結(jié)果36-463.5本章小結(jié)及討論46-49第四章紅、北柴胡配伍的柴葛解肌湯解熱作用的比較研究49-554.1引言494.2實(shí)驗(yàn)材料494.2.1藥物和試劑494.2.2儀器與設(shè)備494.2.3實(shí)驗(yàn)動物4

9、94.3實(shí)驗(yàn)方法49-514.3.1藥液的制備49-504.3.2造模及給藥504.3.3樣品的采集504.3.4血漿小分子代謝物GC-MS分析504.3.5數(shù)據(jù)處理及統(tǒng)計學(xué)分析50-514.4實(shí)驗(yàn)結(jié)果51-534.4.1紅、北柴胡配伍的柴葛解肌湯對發(fā)熱大鼠體溫的影響514.4.2紅、北柴胡配伍的柴葛解肌湯對發(fā)熱大鼠血漿代謝物的影響51-534.5本章小結(jié)53-55第五章紅、北柴胡配伍的小柴胡湯解熱作用的比較研究55-615.1引言555.2實(shí)驗(yàn)材料555.2.1藥物和試劑555.2.2儀器與設(shè)備555.2.3實(shí)驗(yàn)動物555.3實(shí)驗(yàn)方法55-585.3.1藥物的制備55-565.3.2小柴胡湯

10、解熱作用摸索56-585.4實(shí)驗(yàn)結(jié)果585.5本章小結(jié)58-61第六章小柴胡湯的保肝作用預(yù)實(shí)驗(yàn)61-696.1引言616.2實(shí)驗(yàn)材料61-626.2.1藥物和試劑616.2.2儀器與設(shè)備616.2.3實(shí)驗(yàn)動物61-626.3實(shí)驗(yàn)方法62-656.3.1藥物的制備626.3.2CCl_4急性肝損傷模型的摸索62-646.3.3小柴胡湯保肝劑量的摸索64-656.3.4統(tǒng)計學(xué)分析656.4實(shí)驗(yàn)結(jié)果65-666.4.1生化指標(biāo)結(jié)果65-666.4.2肝臟組織切片結(jié)果666.5本章小結(jié)66-69第七章紅、北柴胡配伍的小柴胡湯保肝作用的比較研究69-857.1引言697.2實(shí)驗(yàn)材料69-707.2.1藥物和試劑697.2.2儀器與設(shè)備69-707.2.3實(shí)驗(yàn)動物707.3實(shí)驗(yàn)方法70-717.3.1藥物的制備707.3.2CCl_4急性肝損傷模型的復(fù)制及給藥707.3.3NMR測試條件70-717.3.4統(tǒng)計學(xué)分析717.4實(shí)驗(yàn)結(jié)果71-827.4.1生化指標(biāo)結(jié)果72-737.4.2紅、北柴胡配伍的小柴胡湯對CCl_4急性肝損傷大鼠血清代謝物的影響73-787.4.3紅、北柴胡配伍的小柴胡湯對CCl_4致急性肝損傷大鼠肝臟代謝物的影響78-827.5本章小結(jié)82