膿汁和糞便標(biāo)本中病原菌的檢測6PPT課件

1、藥敏試驗(yàn)結(jié)果用尺子量抑菌圈直徑（單位毫米）用尺子量抑菌圈直徑（單位毫米）第1頁/共33頁常用藥敏試驗(yàn)紙片判斷標(biāo)準(zhǔn)P P2121抗菌藥物 紙片含藥量 抑菌圈直徑(mm) 耐藥 中度敏感 敏感青霉素G(葡萄球菌) 10單位 28 - 29先鋒霉素 30微克 14 1517 18慶大霉素 10微克 12 1314 15鏈霉素 10微克 11 1214 15四環(huán)素 30微克 14 1518 19氯霉素 30微克 12 1317 18磺胺 300微克 12 1316 17第2頁/共33頁藥敏試驗(yàn)結(jié)果分析（錄入）藥敏試驗(yàn)結(jié)果分析（錄入）青霉素先鋒霉素慶大霉素金黃細(xì)菌白色細(xì)菌紫黑細(xì)菌粉紅細(xì)菌 注：耐藥，中度

2、敏感，敏感。第3頁/共33頁抗菌素藥敏試驗(yàn)紙片法結(jié)果G+球菌對青霉素和先鋒霉素敏感。 G-桿菌對青霉素耐藥，對先鋒霉素 敏感。G+球菌和G-桿菌對廣譜抗菌素慶大霉素都敏感。第4頁/共33頁糖發(fā)酵、動(dòng)力試驗(yàn)結(jié)果判斷反應(yīng)現(xiàn)象結(jié)果描述符號(hào)培養(yǎng)基變黃色無氣泡分解糖產(chǎn)酸不產(chǎn)氣+培養(yǎng)基變黃色有氣泡分解糖產(chǎn)酸又產(chǎn)氣培養(yǎng)基不變色不分解糖-細(xì)菌擴(kuò)散生長,培基混濁細(xì)菌有鞭毛+沿接種線生長,培基清澈透明細(xì)菌無鞭毛-第5頁/共33頁糖發(fā)酵試驗(yàn)結(jié)果微量發(fā)酵管水平放置，觀察結(jié)果。第6頁/共33頁半固體穿刺培養(yǎng)結(jié)果半固體并列，對光上下移動(dòng)上下移動(dòng)至合適觀察位置，觀察結(jié)果。第7頁/共33頁腸道桿菌科各菌屬生化反應(yīng)鑒別表 葡萄

3、糖 乳糖 麥芽糖 甘露醇 蔗糖 半固體埃希菌屬 +志賀菌屬 + +/- -/+ -沙門菌屬 /+ - - + 霍亂弧菌 + - + + + +變形桿菌屬 - - +注： + 產(chǎn)酸或陽性， 產(chǎn)酸產(chǎn)氣，- 陰性， +/- 多數(shù)陽性， -/+ 多數(shù)陰性 不確定。第8頁/共33頁常見腸道感染細(xì)菌主要生化反應(yīng)特征 葡萄糖 乳糖 半固體（動(dòng)力） 大腸埃希菌 + 福氏志賀菌 + - - 傷寒沙門菌 + - + 霍亂弧菌 + - + 幽門螺桿菌 不分解糖類 + 變形桿菌 - +產(chǎn)酸能迅速殺死該菌。 第9頁/共33頁細(xì)菌生化反應(yīng)結(jié)果分析細(xì)菌生化反應(yīng)結(jié)果分析( (結(jié)果錄入）結(jié)果錄入） 甲、乙紫黑 丙、丁粉紅組號(hào)葡

4、萄糖 乳糖半固體葡萄糖乳糖半固體12345678910結(jié)果第10頁/共33頁細(xì)菌生化反應(yīng)結(jié)果分析細(xì)菌生化反應(yīng)結(jié)果分析( (婦幼、病理）婦幼、病理） 甲、乙紫黑 丙、丁粉紅組號(hào)葡萄糖 乳糖半固體葡萄糖乳糖半固體1+-2+-+3+-4+-5+-6+-7+-8+-9+-10-+結(jié)果第11頁/共33頁細(xì)菌生化反應(yīng)結(jié)果分析細(xì)菌生化反應(yīng)結(jié)果分析( (預(yù)防預(yù)防-2-2） 甲、乙紫黑 丙、丁粉紅組號(hào)葡萄糖 乳糖半固體葡萄糖乳糖半固體1+-2+-3+-6+-7+-8+-結(jié)果第12頁/共33頁實(shí)驗(yàn)結(jié)果錯(cuò)誤的分析 純培養(yǎng)時(shí)，菌落挑錯(cuò)了、不是單菌落、CFU。 無菌操作不嚴(yán)格，污染雜菌。 接種時(shí)未協(xié)調(diào)好，接種錯(cuò)誤。第1

5、3頁/共33頁玻片凝集試驗(yàn) Slide Agglutination Slide Agglutination TestTest 在適量電解質(zhì)存在的情況下，顆粒性抗原(細(xì)菌)與特異性抗體結(jié)合，如果比例合適，則出現(xiàn)肉眼可見的凝集塊，稱為凝集反應(yīng)。 取潔凈的載玻片一張，將磨面近端設(shè)為對照區(qū)，滴加生理鹽水15ul。遠(yuǎn)端設(shè)為試驗(yàn)區(qū)，滴加福氏志賀菌診斷血清15ul， 用接種環(huán)分別取粉紅色菌苔，約12個(gè)小菌落的菌量，研磨于鹽水或血清內(nèi)，混合均勻。載玻片來回傾側(cè)，讓菌液充分混 勻，凝集速度更快、結(jié)果更清楚。菌液凝集者記為陽性，菌液均勻混濁記為陰性。研磨成直徑810mm的一層薄菌膜。第14頁/共33頁玻片凝集結(jié)果

6、判定玻片來回傾側(cè)玻片來回傾側(cè)數(shù)次，肉眼觀數(shù)次，肉眼觀察；察；23分鐘分鐘內(nèi)仍不出現(xiàn)凝內(nèi)仍不出現(xiàn)凝集者集者,可認(rèn)為可認(rèn)為陰性陰性()。;菌液混菌液混濁，少量絮濁，少量絮狀狀,25%凝集凝集,陽性陽性()。;菌液輕菌液輕度混濁度混濁,絮狀絮狀凝集塊較小凝集塊較小,陽性陽性()。;菌液澄菌液澄清清,有明顯絮有明顯絮片片,75%凝集凝集,陽性陽性()。第15頁/共33頁生物安全警告 本次實(shí)驗(yàn)操作，可產(chǎn)生幾十個(gè)微生物氣溶膠顆粒。 氣溶膠粒徑100um沉降很快,50um在0.4s內(nèi)擴(kuò)散開,5um通過呼吸道直接到達(dá)肺泡。 Pike博士對實(shí)驗(yàn)室感染統(tǒng)計(jì)分析結(jié)果發(fā)現(xiàn)，不明原因的感染高達(dá)82%，大多數(shù)是氣溶膠在空

7、氣中擴(kuò)散引起的。 實(shí)驗(yàn)時(shí)應(yīng)坐著，在火焰周圍1020厘米內(nèi)操作，保持安靜、有序，盡量少說話、少走動(dòng)，以免感染病原菌。第16頁/共33頁滅菌 藥敏試驗(yàn)平板、動(dòng)力試驗(yàn)半固體瓊脂、微量糖發(fā)酵管高壓蒸汽滅菌 ! 器材收攤?cè)牍袂?，接種環(huán)，接種針必須再次燒灼滅菌！第17頁/共33頁綜合性實(shí)驗(yàn)一 實(shí)驗(yàn)總結(jié) 采用平板劃線分離法，從濃汁標(biāo)本中分離出金黃色和白色兩種菌落。顯微鏡下，這兩株細(xì)菌均為G+球菌，排列不規(guī)則，呈葡萄串狀，是典型的葡萄球菌；結(jié)合菌落或菌苔顏色，這兩株葡萄球菌分別是金黃色葡萄球菌和白色葡萄球菌。通過血漿凝固酶試驗(yàn)鑒別，金黃色葡萄球菌是致病菌。第18頁/共33頁 用伊紅美藍(lán)平板，從糞便標(biāo)本中分離出

8、紫黑色具有金屬光澤和粉紅色半透明菌落。紫黑色菌落是能分解乳糖的大腸埃希菌。粉紅色菌落是不能分解乳糖的致病菌。顯微鏡下，它們都是G-桿菌，散在排列，從形態(tài)上不能鑒別是什么細(xì)菌。經(jīng)糖發(fā)酵試驗(yàn)，半固體動(dòng)力試驗(yàn)，血清學(xué)試驗(yàn)結(jié)果鑒定，它們分別是大腸埃希菌和福氏志賀菌。第19頁/共33頁膿汁和糞便標(biāo)本細(xì)菌檢測結(jié)果膿汁和糞便標(biāo)本細(xì)菌檢測結(jié)果標(biāo)本標(biāo)本菌落菌落形態(tài)形態(tài)血漿血漿凝固酶凝固酶葡葡 乳乳 半半福痢福痢血清血清青青 鏈鏈慶慶結(jié)論結(jié)論金黃G+球 +金黃色葡萄球菌膿汁白色G+球-+白色葡萄球菌紫黑 G桿 +-+大腸埃希菌糞便粉紅 G桿+-+-+福氏志賀菌第20頁/共33頁細(xì)菌鑒定的原則及基本方法 必須用純的

9、細(xì)菌培養(yǎng)物作鑒定。因?yàn)椴煌募?xì)菌生化反應(yīng)結(jié)果相差較大，而反應(yīng)結(jié)果是以陽性或陰性表示的，一旦用混合菌做生化反應(yīng)，結(jié)果不可分析。 鑒定試驗(yàn)的選擇：測定細(xì)菌的實(shí)驗(yàn)方法很多，根據(jù)鑒定目的選擇適當(dāng)?shù)脑囼?yàn)項(xiàng)目，既能完成鑒定，項(xiàng)目又盡可能少。一般考慮以下幾個(gè)問題。 選擇有價(jià)值的試驗(yàn)：鑒別兩種細(xì)菌選擇的試驗(yàn)應(yīng)該其一為陽性，另一為陰性，且陽性和陰性的概率大于90%。否則，試驗(yàn)無鑒別價(jià)值。 選擇快速簡便的試驗(yàn)。因?yàn)槭浅Ｒ?guī)實(shí)驗(yàn)室，選擇的方法應(yīng)快速方便，如鞭毛染色、氧化酶、凝固酶等應(yīng)為首選方法。鑒定一種細(xì)菌如果有幾種特異方法,只選一兩種,多選無價(jià)值。 測定細(xì)菌的一種生物特性可能有幾種不同方法。應(yīng)該了解所用方法的敏感性

10、，否則會(huì)導(dǎo)致錯(cuò)誤的鑒定。第21頁/共33頁思考題如果細(xì)菌生化反應(yīng)結(jié)果不佳，原因何在?報(bào)告紙片法藥敏試驗(yàn)結(jié)果，是否符合你所鑒定的細(xì)菌的藥敏特性?玻片凝集試驗(yàn)觀察完畢，應(yīng)將載玻片立即放入消毒缸內(nèi)，為什么?怎么設(shè)計(jì)一個(gè)實(shí)驗(yàn)，對傷寒沙門菌進(jìn)行分離和鑒定? 第22頁/共33頁染色鏡檢生化反應(yīng)血清學(xué)鑒定雙糖鐵培養(yǎng)基增菌培養(yǎng)血、骨髓挑取可疑菌落SS瓊脂、EMB平板分離培養(yǎng)糞便常見腸道致病菌的檢查程序常見腸道致病菌的檢查程序P48P48第23頁/共33頁 傷寒沙門菌的分離培養(yǎng) 標(biāo)本的采集與病程的關(guān)系：第1周取外周血，第1-3周取骨髓液，第2周以后取糞便和尿液。 血液和骨髓液：先增菌培養(yǎng)，然后再用血瓊脂平板、巧

11、克力瓊脂平板、SS瓊脂、EMB平板分離單菌落。 糞便：可直接接種于選擇鑒別培養(yǎng)基，如SS瓊脂、EMB平板分離單菌落。 取血量：一般以肉湯培養(yǎng)基的1/10為宜。常規(guī)方法為用培養(yǎng)基50ml,取血510ml,注入培養(yǎng)瓶中。骨髓為12ml。 細(xì)菌的純培養(yǎng) 必須用純的細(xì)菌培養(yǎng)物作鑒定第24頁/共33頁 形態(tài)與染色：革蘭陰性桿菌，有周鞭毛。 動(dòng)力學(xué)試驗(yàn)：細(xì)菌自接種部位向四周移動(dòng)、擴(kuò)散生長，培養(yǎng)基呈云霧狀混濁狀態(tài)。 生化反應(yīng)：分解葡萄糖只產(chǎn)酸不產(chǎn)氣 ，不發(fā)酵乳糖。第25頁/共33頁 血清學(xué)反應(yīng)：主要有O和H兩種抗原。傷寒沙門菌還有Vi抗原。對沙門菌屬的型和亞型鑒定有重要意義。 玻片凝集試驗(yàn)：定性鑒定細(xì)菌純培

12、養(yǎng)物。 肥達(dá)反應(yīng)：用已知傷寒沙門菌菌體（O）抗原、鞭毛（H）抗原和甲、乙型副傷寒菌H抗原與患者血清作試管凝集試驗(yàn)（定量），檢測有無相應(yīng)抗體及其效價(jià)，以輔助診斷傷寒或副傷寒。 正常值：一般是傷寒沙門菌O抗體的凝集效價(jià)1：80，H抗體凝集效價(jià)1：160，副傷寒沙門菌H抗體凝集效價(jià)1：80才有診斷價(jià)值。 動(dòng)態(tài)觀察：若效價(jià)逐次遞增或恢復(fù)期效價(jià)比初期4倍者更有意義。第26頁/共33頁實(shí)驗(yàn)報(bào)告 電子版 題目 年級(jí)專業(yè)，學(xué)號(hào)，姓名 實(shí)驗(yàn)?zāi)康?實(shí)驗(yàn)器材 方法與步驟 結(jié)果與討論 以多數(shù)人的實(shí)驗(yàn)結(jié)果為基礎(chǔ)。 從2種標(biāo)本獲得4種菌的實(shí)驗(yàn)結(jié)果（綜合性實(shí)驗(yàn)一） 。 討論是對實(shí)驗(yàn)結(jié)果的分析，應(yīng)客觀、嚴(yán)謹(jǐn)，圍繞主題，突出重

13、點(diǎn)。 結(jié)論應(yīng)該明確。 備注：請課代表將實(shí)驗(yàn)報(bào)告按實(shí)驗(yàn)室（授課老師）打包，直接發(fā)送發(fā)給授課老師或 。第27頁/共33頁如何撰寫科研論文 不論人們是否完全贊成“要么發(fā)表、要么銷毀”的格言，但毫無疑問，科學(xué)研究的目的就是要把研究成果發(fā)表出來。一般來說，評(píng)價(jià)科學(xué)工作者的工作，主要不是看他們在實(shí)驗(yàn)室內(nèi)靈巧的操作，也不是看他們在廣闊或狹窄的科學(xué)領(lǐng)域內(nèi)掌握知識(shí)的多少，也不是看他們的智能或魅力，而主要是根據(jù)他們所發(fā)表的文章來估量。他們可能由此而成名，或仍然默默無聞。因此，寫出能充分展示自己工作、引起同行注意的論文是一個(gè)科研工作者必備的素質(zhì)。 第28頁/共33頁 一項(xiàng)科學(xué)實(shí)驗(yàn)，不論它的結(jié)果多么驚人，只有到它發(fā)表出來時(shí)才算完成。因此對科學(xué)工作者來說，他不僅必須“研究”科學(xué)，而且必須把科研成果“寫”出來。要寫好一篇科學(xué)論文，作者必須準(zhǔn)確地知道他要寫的是什么以及為什么要這么寫。 科學(xué)論文是敘述原始研究結(jié)果而寫成并發(fā)表的報(bào)告。具體地說，一篇公認(rèn)的原始科學(xué)論文，必須是首次公布的，它應(yīng)提供足夠的資料，以使同行們能夠： (1)評(píng)價(jià)觀察到的結(jié)果； (2)重復(fù)實(shí)驗(yàn)； (3)評(píng)價(jià)推理過程，而且原始科學(xué)論文還必須能為人們所接受，基本上可供科學(xué)界永久地、不受限制地利用，要有嚴(yán)密的思維特性、邏輯性、清晰性和準(zhǔn)確性。 第29頁/