肝炎項目檢測

1、 肝炎病毒檢測肝炎病毒檢測 童效云童效云 2011.1.13肝炎病毒及分子生物學簡介v肝炎病毒家族是一大類引起病毒性肝炎的病原體，根據(jù)其病毒特征并結合流行病學資料與臨床表現(xiàn)，可將肝炎病毒分為甲肝病毒、乙肝病毒、丙肝病毒、丁肝病毒、戊肝病毒及庚肝病毒。v病毒性肝炎的感染率和發(fā)病率都非常高，已稱為全球嚴重的公共衛(wèi)生問題，在我國歸為法定的乙類傳染病。v隨著醫(yī)學和分子生物學的發(fā)展，肝炎病毒的分子生物學診斷也飛速發(fā)展，新的肝炎分子生物學診斷可以根據(jù)患者自身感染病毒的不同，歷史用藥情況的不同，因人而異的開展肝炎病毒的診斷和治療方案的制定。v目前肝炎病毒的的分子生物學檢測對于肝炎的早期診斷，病毒的分型，治療

2、方案的制定，藥物療效的監(jiān)控，以及抗病毒藥物的敏感性判斷，臨床用藥指導方面都有著無可比擬的優(yōu)勢。乙肝點擊v 我國乙肝病毒攜帶者約1.2億人，大約10個人中就有1人攜帶乙肝病毒，其中慢性乙肝患者約有3000萬例，每年有35萬人死于慢性乙肝的相關疾病；v hbv dna持續(xù)陽性超過6個月的會轉為慢性肝炎。50以上抗hbe陽性慢性肝病病人，經平均4.5年發(fā)展為肝硬化，常與hbv dna持續(xù)陽性有關；v 拉米夫定等核苷類抗病毒藥，雖具有強烈的抑制hbv dna復制的作用，但長期服用可出現(xiàn)耐藥現(xiàn)象，經過研究證實其與乙肝病毒p區(qū)基因突變有關。公司情況v 艾迪康公司特檢中心利用自身的技術優(yōu)勢，開展了全面完整的

3、肝炎診斷項目，為臨床診斷和治療提供可靠、具體、客觀的全方位服務。v 環(huán)境pcr實驗室經國家衛(wèi)生部臨檢中心驗收并獲驗收合格證書；v 儀器美國abi公式生產的abi 7300熒光定量基因擴增儀及abi 3100全自動dna測序儀；v 質控參加衛(wèi)生部和當?shù)厥∈信R檢中心組織的室間質評，并取得優(yōu)異的成績；v 人員由經過衛(wèi)生部臨檢中心培訓并獲pcr上崗證的專業(yè)人員進行操作。艾迪康開展的項目v乙型肝炎 乙型肝炎病毒核酸檢測 乙型肝炎病毒基因分型檢測 乙型肝炎病毒錢c區(qū)/c區(qū)變異測序 乙型肝炎病毒p區(qū)耐藥基因測序 乙型肝炎病毒前s區(qū)/s區(qū)耐藥基因測序 乙型肝炎病毒細胞內cccdna檢測 乙型肝炎病毒ymdd突

4、變檢測 乙型肝炎病毒基因分型檢測 乙型肝炎病毒c區(qū)/c區(qū)1896、1762、1764位點變異v丙型肝炎 丙型肝炎病毒核酸檢測 丙型肝炎病毒基因分型檢測v其他型肝炎 甲型肝炎病毒核酸檢測 丁型肝炎病毒核酸檢測 戊型肝炎病毒核酸檢測標本類型及送檢要求檢測項目hbv-dna基因分型hbv p耐藥基因測序（包括ymdd突變位點檢測）hbv c區(qū)變異包括1896、1762、1764位點變異檢測）hbv s區(qū)變異高靈敏度乙肝病毒核酸檢測丙型肝炎病毒核酸檢測丙型肝炎病毒基因分型甲型肝炎病毒核酸檢測丁/庚型肝炎病毒核酸檢測標本要求血清1ml血清1ml血清1ml血清1ml血清1mledta抗凝全血edta抗凝血

5、漿1mledta抗凝血漿1ml血清1mlv血清、血漿可0-20保存，全血要4 保存，不可冷凍，；組織保存要求請聯(lián)系本公司。v0冰上運輸血液標本，2-4 保存不超過24小時，-20 保存不超過一周；v24小時內到達公司最好，最遲不能超過72小時；v標本禁忌反復凍融。采集及送檢和單據(jù)填寫注意事項v 用于采集標本的試管或容器需無菌，嚴禁使用肝素抗凝管；v 送檢標本含量應1000iu/ml;v 血清樣本：室溫血液自然凝固10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉/分），收集上清，如有沉沉行成，應再次離心；v 血漿樣本：edta抗凝，無菌采集，混合均勻后離心1020分鐘后收集上清，如有沉淀

6、，應再次離心；v 如果是組織或是其他特殊樣本，請?zhí)崆芭c中心聯(lián)系，以便確認正確的保存以及運送條件；v 血液標本采集是注意無菌操作，避免污染；v 溶血中、脂血標本影響定量、突變類檢測成功率，但是不影響檢出率，病毒含量越高，影響越小。v 單據(jù)使用專用申請單（正在印刷中，乙肝/丙肝分子診斷學綜合檢查申請單）單據(jù)上注明臨床用藥情況，服用時間，病程、病史、病毒含量。v 任何標本和原始申請單必須同時到達杭州特檢部。v 首次送檢的標本打印報告單時一定要將格式、內容跟杭州出具的報告單核對，備注內容是否齊全，（參考范圍、項目順序、箭頭指示等).報告時間計算v 起止時間自標本到達杭州特檢實驗室起算； 非浙江區(qū)域要加

7、上物流的路途時間 例如： 某項目報告時間是三個工作日 杭州1月3日接收標本 ，三個工作日 ，1月6日出報告； 安慶1月3日接收標本，3日晚到達合肥，4日托運至杭州，5日早上到達杭州特檢實驗室，三個工作日，8號出報告；v 工作日： 每周一到周六上班，周日和固定假日為非工作日；v 標本延遲原因 標本擴增失敗，復查； 交接延遲，項目不清； 病毒含量低； 交接臨床情況詢問：病程病史，用藥換藥情況；v 報告單打印格式v 有a4和a5兩種版式，醫(yī)院首次送檢的標本須保證查詢單據(jù)正確。 hbsag、hbeag全定量檢測v 意義 ：研究發(fā)現(xiàn)聯(lián)合定量檢測血清hbsag、hbeag的水平可識別活動性hbv攜帶者；v

8、 hbsag與hbeag的變化是乙肝治療的重要指標與停藥節(jié)點；v hbsag與hbeag的全定量指標的動態(tài)變化與變化趨勢是乙肝個性化治療的重要依據(jù)，可確定療程及治療終點；v 適用人群v 初診病人預后判斷及病情確定v 干擾素以及其他藥物療效預測v e s抗原全定量檢測需要進行動態(tài)分析，方能獲得最大意義。乙肝病毒p區(qū)耐藥檢測v 臨床意義： 耐藥變異株不僅抗藥性增加，而且可能加重肝損害，引起病情反復，甚至加重；v 耐藥病毒的出現(xiàn)使后續(xù)治療的藥物療效降低v 耐藥病毒的出現(xiàn)抵消了之前獲得的臨床益處v 使用核苷類似物治療的慢性乙肝患者，必須定期檢測耐壓情況；v 根據(jù)耐藥情況及時換藥加藥或更改治療方案，使病

9、人獲得更好的治療效果；v 適用人群v 治療發(fā)生原發(fā)性不應答的患者建議進行p區(qū)耐藥檢測v 治療過程中發(fā)生部分病毒學應答的患者建議進行p區(qū)耐藥檢測v 建議使用核苷類似物治療的患者均應每三個月檢測一次p區(qū)耐藥，從而及時調整對病人的用藥方案v 對于更改治療方案的病人（如加藥、換藥等），均應每三個月檢測p區(qū)耐藥情況，確認病毒是否發(fā)生新的變異。高靈敏度乙肝病毒核酸檢測v 臨床意義v 普通的hbv dna 靈敏度較低，無法監(jiān)控低載量病毒復制情況，高靈敏度hbv dna檢測靈敏度很高，檢測下限可以達到50-70copy/ml，對于乙肝治療終點以及停藥時間的確定有著非常重要的意義，并且可很好的對低載量病毒患者進

10、行病毒監(jiān)控。v 使用人群v 對慢性乙肝患者體內的病毒數(shù)量進行檢測；v 服用抗病毒藥物的慢性乙肝患者檢測藥物療效情況；v 長期服用抗病毒藥物療效較好的患者進行停藥時機的判斷；v 對已經停藥的患者進行體內病毒含量的檢測，確認再次開始治療的時機。乙肝病毒基因分型檢測v 臨床意義v 根據(jù)hbv全基因核苷酸序列異源性85或s基因區(qū)核苷酸序列異源性4 ，將不同的病毒株分為不同的基因型，迄今為止，hbv可以分為8個基因型，即a 、b 、c、 d 、e 、f、 g 、h 型，hbv基因型的分布有一定的地域性，我國是以b、 c 型為主。不同的基因型的病毒可能具有不同的毒力，hbv基因分型對乙肝臨床和分子流行病學

11、至關重要，不同的基因分型，臨床癥狀，病情轉歸，藥物治療效果等均不相同。v 適用人群v 判斷患者病情進展情況，建議檢測基因分型；v 對于治療方案適應干擾素的患者，必須檢測基因分型；v 預測病情，判斷病毒致病性，判斷病程及轉歸，建議檢測基因分型。乙肝病毒前c區(qū)/c區(qū)變異及1762、1764、1896位點變異檢測v 并非所有的hbeag陽轉陰的感染者病情都趨于好轉，相當部分的慢性肝炎患者都檢測到hbeag陰性，但是感染者的 hbv dna卻呈現(xiàn)高載量，這是由于這部分患者前c區(qū)或者c區(qū)發(fā)生變異，使得hbeag分泌減少或停止分泌。c區(qū)變異的病人使得病毒更容易逃逸機體的細胞免疫、體液免疫作用，造成肝細胞持

12、續(xù)損傷，炎癥反應加重。v 適用人群v hbeag含量降低但hbv dna高載量的病人，建議檢測c區(qū)變異，判明病因；v 臨床觀察發(fā)生血清學轉換的病人，檢驗檢測c區(qū)變異，避免誤診、漏診；v 長期使用核苷類藥物，但是病毒載量始終維持在103-106之間不能繼續(xù)下降的病人，建議檢測c區(qū)變異；v 重癥肝炎，炎癥反應劇烈，肝臟病情進展迅速的病人，檢驗檢測c區(qū)變異。乙肝病毒前s區(qū)和s區(qū)變異檢測v 臨床意義v 前s1基因突變可導致前s2蛋白缺失，前s區(qū)/s區(qū)變異可使疫苗或免疫球蛋白保護無效，使hbv逃避干擾素治療和宿主免疫清除，s區(qū)變異會導致hbsag表達受到影響，臨床表現(xiàn)為hbsag陰性而hbsab陽性、h

13、bv dna陽性的隱匿性肝炎，前s區(qū)/s區(qū)變異可使肝炎的癥狀進展更加迅速，與肝硬化、肝癌的發(fā)生有一定關系。v 適用人群v 乙肝兩對半定性結果全陰hbv dna 的患者v hbsag陰性而hbsab陽性、 hbv dna陽性確定是否隱匿性肝炎，防止誤診漏診；v 經免疫球蛋白治療后的孕婦，建議檢測s區(qū)變異觀察免疫球電白對病毒的阻斷作用。白介素28b基因多態(tài)性檢測v 臨床意義v 染色體19上的白介素28b（il-28b）基因多態(tài)性與患者對聚乙二醇化干擾素a（長效干擾素）與利巴韋林治療具有持續(xù)病毒學反應有關。v 適用人群v 適用于所有治療方案為干擾素+利巴韋林的病人判斷藥物應答和預后情況，以便在效果不佳時更改治療方案。丙型肝炎病毒基因分型檢測v 臨床意義v 不同基因型感染者的臨床表現(xiàn)有差異，血清抗體反應有差異，肝臟受損程度有差異；v 不同基因型感染者對干擾素的診療效果有差異；v 不同的基因型和基因亞型的hcv對肝臟的損害程度不同；v hcv基因型