β-胡蘿卜素和番茄紅素的分離提取和鑒定

1、b 胡蘿卜素和番茄紅素的分離提取和鑒定b 胡蘿卜素和番茄紅素的提取分離與測(cè)定一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?. 掌握從胡蘿卜或番茄屮提取分離b 胡蘿卜素和番茄紅素的原理與 方法；2鞏固用柱色譜和薄層色譜分離、檢測(cè)有機(jī)化合物的實(shí)驗(yàn)技術(shù)；3.學(xué)會(huì)用分光光度法測(cè)定b 胡蘿卜素和番茄紅素的方法。二、胡蘿卜素和番茄紅素的主要理化性質(zhì)三、實(shí)驗(yàn)原理b 胡蘿卜素和番茄紅素是脂溶性的不飽和碳?xì)浠衔?，難溶于甲醇、 乙醇，可溶于乙醯、石油瞇、正已烷、丙酮，易溶于氯仿、二硫化碳、苯 等有機(jī)溶劑。可利用石油醞、乙酸乙酯等弱極性溶劑將它們從植物材料中 浸提出來(lái)。然后，根據(jù)它們對(duì)吸附劑吸附能力的差異，用柱色譜進(jìn)行分離， 用薄層色譜檢測(cè)分離

2、效果。四、初步設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)方案1類胡蘿卜素的提取%1 稱取20g新鮮番茄果肉，搗碎，置于50 ml三角瓶中，再加入5g 食鹽，用玻棒攪拌，使食鹽與番茄果肉充分混合均勻，放置一定時(shí)間，便 會(huì)看到果肉組織屮水分大量滲出。脫水時(shí)間持續(xù)15-30 mine隨后將脫除 下來(lái)的水分濾入150 ml分液漏斗中。%1 向經(jīng)過(guò)食鹽脫水的番茄果肉加入10 ml m酮，用玻棒攪拌，并靜置510 mine然后將丙酮提取液也濾入分液漏斗中。%1 向經(jīng)過(guò)丙酮處理的番茄果肉加入10 ml乙酸乙酯浸提5 mine浸提 過(guò)程中應(yīng)不時(shí)振搖三角瓶，使番茄果肉與溶劑充分接觸；若室溫過(guò)低，可 將三角瓶置于溫水浴中溫?zé)幔珣?yīng)注意不能使浸提溶

3、劑明顯揮發(fā)損失。5 min后將提取液也濾入分液漏斗屮，并用玻棒輕壓殘?jiān)M量使溶劑流盡。 再用乙酸乙酯重復(fù)提取2次，每次10 ml,合并提取液至分液漏斗中。 充分振搖分液漏斗中的混合溶液，靜置，完全分層后，分去水層，有機(jī)層 （酯層）再用蒸憾水洗2次，每次810ml,棄去水層。酯層自分液漏斗 上口倒入干燥的小三角瓶中，加入適量無(wú)水硫酸鎂（或無(wú)水硫酸鈉）干燥 15 min （注意：應(yīng)避光）。干燥后的酯層濾入50 ml干燥的蒸憾瓶中，水浴加熱，小心蒸憾（最 好減壓蒸鐳）濃縮至1-2 mlo所得濃縮液即為類胡蘿卜素樣品。2. 類胡蘿卜素的柱色譜分離選一支1.5x 20cm色譜柱，用適量層析用氧化鋁（10

4、0200目）作吸 附劑干法裝柱，高度約1020cm,要求緊密勻?qū)崱７蛛x方式為梯度洗脫， 第一步用石油醸（60-90°c ）洗脫。先沿色譜柱管壁滴加58ml石油醍至 柱體（各方向要均勻），待溶劑液面降至氧化鋁柱面頂端時(shí)，用滴管迅速 地小心滴加5-10滴樣品至柱子中,待樣品液曲即將在柱曲上消失時(shí)，沿管 壁小心滴加石油瞇35滴，沖洗粘在管壁上的有色物質(zhì)。如此重復(fù)操作34 次，直至管壁沖冼干凈為止。隨后，在管內(nèi)加入盡可能多的石油讎進(jìn)行洗 脫，第一步收集到的洗脫液為黃色。待洗脫液清亮無(wú)色后用石油醯：丙酮=3： 2 （v/v）的混合液洗脫，第二步收集到的洗脫液為紅色。最后用丙酮 將前兩步不能洗脫

5、的剩余組分洗脫下來(lái)。分別收集三步洗脫液，用作薄層 色譜檢測(cè)。13. 類胡蘿卜素的薄層色譜檢測(cè)對(duì)前面得到的類胡蘿卜素樣品以及柱色譜分離得到的樣品分別進(jìn)行 薄層分析，以檢查柱色譜分離效果。薄層層析板預(yù)先用硅膠g制備并活化 (110°c, 1小時(shí))，展開(kāi)劑為石油醯(6090°c)：丙酮=3： 2 (v/v)o薄層 分離后觀察斑點(diǎn)位置，計(jì)算各斑點(diǎn)的rf值，并明確各斑點(diǎn)歸屬。在本實(shí)驗(yàn)條件下，薄層檢測(cè)結(jié)果為：13 胡蘿卜素，黃色，rf值為0.89； 番茄紅素，深紅色，rf值為0.84o五、修改完善后的實(shí)驗(yàn)類胡蘿卜的提取做出修改后，方法如下：%1 稱取0.3g番茄(或胡蘿卜)干粉，置于干燥的研缽中，加入2ml 石油醍研磨，以利提取完全。未研磨細(xì)之前，若石油醍揮發(fā)，應(yīng)補(bǔ)加2ml 繼續(xù)研磨。%1 將研缽中的番茄細(xì)粉轉(zhuǎn)移到干燥的50ml燒瓶中，用5ml石油醸洗 滌研缽和研缽錘，洗滌液一并加入燒瓶中，回流lomino冷卻至室溫，傾 出提取液至另一干燥的50ml的燒瓶中。水浴加熱，小心蒸憾，濃縮提 取液至lmlo所得的濃縮液即為類胡蘿卜素樣品。類胡蘿卜素的柱色譜分 離和薄層色譜檢驗(yàn)仍按上述設(shè)