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1、細(xì)菌染色體細(xì)菌染色體型裂解途徑型裂解途徑P1型裂解途徑型裂解途徑 這些這些sus突變型之所以在帶有相應(yīng)的抑制基因宿主突變型之所以在帶有相應(yīng)的抑制基因宿主中可產(chǎn)生后代,是由于翻譯過程中,在終止密碼子處中可產(chǎn)生后代,是由于翻譯過程中,在終止密碼子處插入一個(gè)特定的氨基酸,防止在終止密碼子位置上提插入一個(gè)特定的氨基酸,防止在終止密碼子位置上提早終止。早終止。 在 B 菌 株 中 在 K 菌 株 ( ) 的 噬 菌 斑 中 的 噬 菌 斑 r- (大 ,邊 緣 清 晰 ) r+ (小 ,邊 緣 模 糊 ) (小 ,邊 緣 模 糊 ) RF (2 r+ 噬 菌 體 ) 噬 菌 體 總 數(shù) 100 2 K
2、菌 株 平 板 上 的 噬 菌 斑 數(shù) B 菌 株 平 板 上 的 噬 菌 斑 數(shù) 100T4 rII 突變型和野生型噬菌體突變型和野生型噬菌體在在E.coli B菌株中的噬菌斑菌株中的噬菌斑三、重組檢驗(yàn)與基因精細(xì)構(gòu)造分析recombination test P 杏眼X 白眼 Wa + + W Wa + Y F1 杏眼 X 杏眼 Wa + Wa + Y + W F2 杏眼 杏眼 杏眼 白眼 Wa + + W Wa + W + Wa + Wa + Y Y 基因內(nèi)重組基因內(nèi)重組 + + Wa W 配子配子 + + + + Wa W Wa + + + + Wa W Wa W W Wa + Wa +
3、或或 Y Y 或或 Wa + Y Wa + Y紅眼紅眼比較:比較:F1 F1 杏眼杏眼 基因型基因型 紅眼紅眼 基因型基因型 Wa + Wa + 反式反式 Wa W Wa W 順順式式 + W + + + W + + 1 噬菌體雜交實(shí)驗(yàn)噬菌體雜交實(shí)驗(yàn) r47r+ X r+r104 B B K()親組合:親組合:r47r+、r+r104, r+r+ 重組合:重組合:r+r+、r47r104,2 2 重組值的計(jì)算重組值的計(jì)算 重組值重組噬菌斑數(shù)重組值重組噬菌斑數(shù) 100 100 總噬菌斑數(shù)總噬菌斑數(shù)在在K(K( ) )上生長的噬菌斑數(shù)上生長的噬菌斑數(shù)2 2100100 在在B B上生長的噬菌斑數(shù)上
4、生長的噬菌斑數(shù)親本型親本型重組型重組型 重組率重組率RfRf 24 24噬菌斑總數(shù)噬菌斑總數(shù)h+r+半小h-r+透小h-r- 透大h+r-半大xx重組型重組型 用不同的用不同的rII突變型成對(duì)組合同時(shí)去感染大腸桿突變型成對(duì)組合同時(shí)去感染大腸桿菌菌K( )一互補(bǔ)檢驗(yàn)的原理和方法 3 判別方法判別方法: 順式順式 反式反式 分析結(jié)論:兩突變分析結(jié)論:兩突變 + +/- - + -/- + 表現(xiàn)型表現(xiàn)型 野生型野生型 野生型野生型 屬于兩個(gè)順反子屬于兩個(gè)順反子 表現(xiàn)型表現(xiàn)型 野生型野生型 突變型突變型 屬于同一順反子屬于同一順反子 順式測驗(yàn) 反式測驗(yàn) 突 變 位 點(diǎn)在 同 一 順反子內(nèi) A B + A B 突 變 位 點(diǎn)在 不 同 的順反子內(nèi) + A B + A B 圖5-20 順反測驗(yàn)結(jié)果的圖解。當(dāng)順式有功能,而反式?jīng)]有功能時(shí),突變 位點(diǎn)突變位點(diǎn)在同一順反子內(nèi);當(dāng)順式有功能,而反式也有功能時(shí),突變 位點(diǎn)突變位點(diǎn)在不同順反子內(nèi)。 當(dāng)順式有功能,反式無功能時(shí),兩突變位點(diǎn)在當(dāng)順式有功能,反式無功能時(shí),兩突變位點(diǎn)在同一順反子內(nèi)同一順反子內(nèi)當(dāng)順式有功能,反式也有功能時(shí),兩突變位點(diǎn)當(dāng)順式有功能,反式也有功能時(shí),兩突變位點(diǎn)在不同順反子內(nèi)在不同順反子內(nèi)野生型蛋白質(zhì)野生型蛋白質(zhì)活性位點(diǎn)活性位點(diǎn)突變影響突變影響86位氨基酸位氨基酸突變影響突變影響37位
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