小鼠免疫組織及免疫細(xì)胞的觀察

1、_小鼠免疫組織及免疫細(xì)胞的觀察【實(shí)驗(yàn)原理】免疫器官、組織及細(xì)胞是機(jī)體免疫系統(tǒng)的重要組成部分。中樞免疫器官包括胸腺和骨髓，是T 淋巴細(xì)胞及其他各類免疫細(xì)胞發(fā)生、發(fā)育和分化的場(chǎng)所，外周免疫器官包括脾脹、 淋巴結(jié)和粘膜相關(guān)淋巴組織是免疫應(yīng)答的場(chǎng)所。各類免疫細(xì)胞直接參與免疫系統(tǒng)對(duì)抗原類物質(zhì)的免疫應(yīng)答，完善的免疫器官組織結(jié)構(gòu)和正常的免疫細(xì)胞種類和數(shù)量是機(jī)體免疫功能發(fā)揮正常的基本條件?！驹噭┖推鞑摹啃∈蟆⒚藓?、解剖臺(tái)、平皿、大頭針、手術(shù)剪子、手術(shù)鑷子、載玻片、瑞士染液、細(xì)胞篩【操作方法】1.取一只小鼠，采用頸部脫臼法處死，將小鼠放到解剖臺(tái)上，沿腹中線剪開皮膚且不破壞腹膜和胸膜， 剪開腹膜，打開腹腔和胸腔，

2、觀察胸腺所在的位置和形狀。2.分離脾細(xì)胞：取出脾脹，去除其周圍的脂肪組織，用剪子剪碎脾臟，放入細(xì)胞篩中，用載玻片清研脾脹，滴加生理鹽水，使脾細(xì)胞分散成細(xì)胞懸液。3.脾細(xì)胞染色觀察：取少量細(xì)胞懸液置于載玻片上，與室溫晾干，加瑞士染色液甲染色 1min ，甩掉染液，用瑞士染色液乙染色5min ，用自來(lái)水沖洗，讓染液漂走，置于光學(xué)顯微鏡下觀察染色脾細(xì)胞?！窘Y(jié)果觀察】小鼠脾細(xì)胞瑞士染色鏡下觀察精品資料_【注意事項(xiàng)】1.正確抓取小鼠，防止被鼠咬傷。2.脾臟分離完整，清研輕柔。3.染色時(shí)間不宜過(guò)長(zhǎng)或過(guò)短。.【討論】脾臟具有多種重要的生理功能, 參與并調(diào)節(jié)血液、 免疫、內(nèi)分泌系統(tǒng)的運(yùn)轉(zhuǎn) ,絕非可有可無(wú) ;脾

3、臟功能在疾病的不同階段扮演不同的角色,有時(shí)甚至完全相反 ,即具有雙向性、時(shí)向性的特點(diǎn)。1.脾切除術(shù)后暴發(fā)性感染全脾切除術(shù)后OPSI的發(fā)生率約為1 % 2.4 %。雖然OPSI 的發(fā)生率不是很高 ,但脾臟切除后 ,在由肺炎球菌導(dǎo)致的感染中毒性休克中 , 50 %患者的病情迅速進(jìn)展 , 并最終導(dǎo)致死亡。脾臟為全身最大的淋巴器官 , 血循環(huán)相當(dāng)豐富 , 且脾臟具有延緩微循環(huán)的作用, 有利于清除和吞噬多種抗原 , 減輕機(jī)體感染的發(fā)生。 同時(shí)脾臟擁有大量重要的免疫細(xì)胞及免疫因子 , 如 T 細(xì)胞、 B 細(xì)胞、 K 細(xì)胞、單核巨噬細(xì)胞、自然殺傷細(xì)胞、殺傷細(xì)胞、淋巴因子活化殺傷細(xì)胞 (LAK 細(xì)胞 )、樹突

4、狀細(xì)胞。免疫因子包括 tufstin 因子、精品資料_備解素即 P 因子、纖維結(jié)合蛋白免疫核糖核酸環(huán)磷酸鳥苷內(nèi)源性細(xì)胞毒因子、調(diào)理素和補(bǔ)體等。而脾切除后,脾臟所產(chǎn)生的免疫因子及免疫細(xì)胞消失,血漿中免疫球蛋白 IgM 、 IgG 下降 ,巨噬細(xì)胞活性下降 ,補(bǔ)體旁路活性下降及自身抗體活性增強(qiáng) , 使免疫系統(tǒng)失衡 ,導(dǎo)致機(jī)體易感性增加 ,甚發(fā)生 OPSI 。2.關(guān)于 tufstin 是主要由脾臟產(chǎn)生的促吞噬激素, N ajjar 于 1970 年首先發(fā)現(xiàn)。是 IgG 分子 Fc 段的一種四肽 (T hrLy s -P ro -A rg),通過(guò)激活中性粒細(xì)胞發(fā)揮吞噬功能。需要在白細(xì)胞激肽酶及內(nèi)羧基肽

5、酶的共同作用下釋放。脾切除、鐮狀紅細(xì)胞貧血、特發(fā)性血小板減少性紫癜、A IDS 及一些腹部疾病可使其水平下降 , 脾移植后可使tufstin 的水平升高。 雖然已發(fā)現(xiàn)其在免疫系統(tǒng)中的重要作用 , 但具體機(jī)制仍不十分明了。理論上講上述情況tufstin 活性減低的原因包括低球蛋白血癥、脾臟內(nèi)中性粒細(xì)胞釋放減少、白細(xì)胞激肽酶活性改變及tufstin 分子異常。3.脾臟的抗腫瘤功能機(jī)體發(fā)生腫瘤的主要原因?yàn)槊庖呦到y(tǒng)監(jiān)控失調(diào), 而脾臟作為人體免疫系統(tǒng)的重要組成部分, 無(wú)疑與腫瘤的發(fā)生密切相關(guān)。臨床觀察發(fā)現(xiàn) , 脾臟不僅自身很少發(fā)生原發(fā)惡性腫瘤且少有轉(zhuǎn)移瘤出現(xiàn), 這也表明脾臟具有抗腫瘤的作用。 目前大家較公認(rèn)的觀點(diǎn)為脾臟在腫瘤免疫中具有雙向性、時(shí)向性的特點(diǎn)。表現(xiàn)為在腫瘤早期脾臟具有抗腫瘤作用, 而在晚期則表現(xiàn)為免疫抑制,促進(jìn)腫瘤生長(zhǎng)。其抗腫瘤作用主要表現(xiàn)在:可增強(qiáng)巨噬細(xì)胞的吞噬功能?？稍鰪?qiáng)巨噬細(xì)胞溶解瘤細(xì)胞及其過(guò)氧化酶作用。 通過(guò)增強(qiáng)NK 細(xì)胞活性發(fā)揮抗腫瘤作用。Chu 認(rèn)為 , tufstin的抗腫瘤機(jī)制不僅通過(guò)增加巨噬細(xì)胞的腫瘤趨向性、吞噬能力和分泌能力 , 更重要的是增加巨噬細(xì)胞產(chǎn)生氧自由基超氧陰離子的能力 , 對(duì)殺傷腫瘤細(xì)胞具有