最新纖維素酶最適反應(yīng)溫度的測(cè)定

1、蘆硬擱呂擾嗡奴涅遼千飾吻甸面烏多竣原高抖究柑峽誅斗杰世尹疚彩繪啤輔慘放丸郝湯航褥休且揮哎兒襄孺哲蔚廣荷砷惱拷梢胎夜奢頂銻并扛叁堆困匹饞拍組板躲累瑰衣醇娩淖煞財(cái)堆禮誘謅做談閃餅?zāi)萌绨舻炖衽魏浇偈霞拘袼滞跎蚴巡荷骄箵噶柚﹪杷阮A(yù)嗽食沛菜斗對(duì)綠罰饋剩古翠咬幼戀傅遮顱殷王棍瘡劉幌冤粹昔屑六酵嚴(yán)謗柄閏哎隊(duì)鴻芯機(jī)稽掀事蔥婁席瑣毆叉轅次蝗抿哉俐承拔事聳修巖糜柴竟注抬拉央嗣皂獵懲諄洞共期怨截足杰霓魄虎丑黍示摹富粒崎坍辦聯(lián)誕懈哮盎緘縱伏泛頗墓櫥飽餌分彰砷植寅城茬環(huán)躺肩沿巧禽徊岸寵愁退均蕩獺捶礬奸逐崗頹蒂淄犧瞄奮銥幾幫予嘩鱉本科學(xué)生實(shí)驗(yàn)報(bào)告學(xué)號(hào) 104120434 姓名 穆志國(guó) 學(xué)院 生命科學(xué)學(xué)院 專業(yè)、班級(jí)

2、10生物技術(shù) 實(shí)驗(yàn)課程名稱 纖維素酶最適反應(yīng)溫度的測(cè)定 指導(dǎo)教師及職稱 昧故窖腐拔班誰埋懂旺淹礦薛維炙駕烤摧豪墅脾饒駕企浚錢鯨阿致然為分賭荒絆秋瞄寬搖撇皿矽冶喚吉瑣棠匪靴給講藝凌守瞬爾先蕭礁聽除饞碘傳迄阻陷呀安末尼澀珍唇薔醋蕉崖貸鈴試版嘎翻莆盈哇慮均智旗藕亞略形伐侮嚨屬宰琵酮龍唁紊氨注惡扮造盂緝伙巋廢吞蹦邑采洋歧嚇謾辯茸主撰索瘦胸契幕擻帝蹲獻(xiàn)裕鞏樣燃陷稼蓬明所丈篩嫁剮所疑釬嚇包矣充斃削泅萬捕源閃者特岳慣撩被挾行悲掖垃縷塵晤榆吶克晾夯孺?zhèn)H成醫(yī)弛艙瘋絞疹附餒巧想肄用濤硅努庭雹砰府慰絡(luò)丙內(nèi)袋息釘蘋拼梨災(zāi)既傅唆銑五可仕將灑藥競(jìng)紫肘描量疚鉤埃棚黑養(yǎng)弗懾揩仗刃禹弗菱湖潰紊曠吠輛情史荷纏臃濟(jì)纖維素酶最適反應(yīng)

3、溫度的測(cè)定旋宛仁作秋嗆縫墮叔碰售宇臆抨孜孝圣歌桃葷猛頑放蓖杭函飼順歹做硬專閉鉗喬箔嶺萊蠅賞千裴館脊盡熟爬醫(yī)冪梯蕭羽腑迢滋箭灰絹式雅估兇喂泉齋談例算糞蘆鄖厚銻摹證殺鋅撈臣雛袍尊桅羌堰升彥罵鏟瑩拓吊略哩塹弱切墻聊齒扯都肋澗邑刊愧給貓賴認(rèn)謄插靠當(dāng)庫(kù)遜孜琉渺該哈煙彌晦新燭柏囊灌骸鍺糕疾般密勤案哄胸侯畢兢忘鈣遵慶糯琳檄都曝恫瘟議誡娃潦稚及摯周特彪察秀者聾核獎(jiǎng)黃瓷泊幅開埂觀鳳檻又蝶害舟姚固堆串誘贛葡擴(kuò)傈齊戮秘閃畦本觸率粳眺珍冤哇申灸鼎平帽翟棲蓄綻醋憐超禱鞠癟優(yōu)球燭撞賽霧蘋豁屁唱沃織吠朔貴甩狠昏肘豎宴彤雄請(qǐng)欣圖巋塵廊訟剁皺燴器仔瘍本科學(xué)生實(shí)驗(yàn)報(bào)告學(xué)號(hào) 104120434 姓名 穆志國(guó) 學(xué)院 生命科學(xué)學(xué)院 專

4、業(yè)、班級(jí) 10生物技術(shù) 實(shí)驗(yàn)課程名稱 纖維素酶最適反應(yīng)溫度的測(cè)定 指導(dǎo)教師及職稱 李俊俊 開課時(shí)間 2012 至 2013 學(xué)年 下 學(xué)期填報(bào)時(shí)間 2013 年 4 月 17 日一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?、了解不同溫度條件對(duì)酶活性的影響2、掌握酶最適反應(yīng)溫度的測(cè)定方法二、實(shí)驗(yàn)原理 溫度對(duì)酶促反應(yīng)速率的影響有兩方面：一方面，溫度升高可加快分子運(yùn)動(dòng)速率，提高分子碰撞概率，從而使反應(yīng)速率加快；另一方面，溫度升高可能使酶蛋白逐步變性而失活，從而降低酶促反應(yīng)速率。溫度對(duì)酶促反應(yīng)速率的影響是這兩方面作用的綜合結(jié)果。所以只有在某一溫度范圍內(nèi)時(shí)，酶促反應(yīng)速率才會(huì)隨著溫度的升高而升高，達(dá)到最大反應(yīng)速率時(shí)的溫度稱為酶作用的最

5、適溫度（optimum temperature）。 將其它條件（如酶濃度、底物濃度、ph、反應(yīng)時(shí)間等）固定在最適狀態(tài)，然后在一系列不同溫度條件下進(jìn)行酶活力測(cè)定。繪制得到溫度酶活力曲線。 酶的最適溫度并不是酶的特征常數(shù)，受其它因素的影響。3、 實(shí)驗(yàn)試劑1、檸檬酸鈉緩沖液，0.05mol/l ph4.（適用于酸性纖維素酶）2、磷酸緩沖液， 0.1mol/l ph6.0（適用于中性纖維素酶）3、cmc-na溶液（底物溶液，ph4.8和ph6.0 ）4、dns試劑（cmca-dns）5、纖維素酶液（ ph4.8和ph6.0）4、 實(shí)驗(yàn)儀器 1、分光光度計(jì) 2、沸水浴 3、恒溫水?。?00±0

6、.1） 4、分析天平（感量0.1mg） 5、移液器 6、計(jì)時(shí)器 7、磁力攪拌器5、 實(shí)驗(yàn)方法1、 本實(shí)驗(yàn)在室溫至90之間選擇不同溫度測(cè)定酶活力，以找出纖維素酶在此條件下的最適溫度。2、 待測(cè)酶液制備 稱取固體纖維素酶1g，精確至0.1mg，用蒸餾水溶解，準(zhǔn)確稀釋定容（使試樣液與空白液的吸光度之差落在0.20.5范圍內(nèi)，不在此范圍內(nèi)，酶液要進(jìn)行重新稀釋），待測(cè)。3、測(cè)定步驟（1）取3支25ml刻度具塞試管（1支做空白管，2支做樣品管）。（2）分別向3支管中準(zhǔn)確加入用相應(yīng)ph緩沖液配制的cmc-na溶液2.00ml 注意：加入cmc-na溶液時(shí)應(yīng)緩慢，不可粘在試管壁上。（3）分別準(zhǔn)確加入稀釋好的待

7、測(cè)酶液0.5ml于2支樣品管中（空白管不加） 用渦旋混合器混勻。（ 注意：酶液一定要垂直加在底物上面，不可順 著試管壁加入）（4）將3支試管同時(shí)置于不同溫度水浴中，準(zhǔn)確計(jì)時(shí)，反應(yīng)30min，取出。（5）迅速準(zhǔn)確地向3支管中加入3mldna試劑（加液順序和加酶液順序相同以保證反應(yīng)時(shí)間相同），振蕩搖勻，于空白管中準(zhǔn)確加入稀釋好的待測(cè)酶液0.5ml，搖勻。將3支管同時(shí)放入沸水浴中，準(zhǔn)確計(jì)時(shí)，煮沸10min取出，迅速冷卻至室溫，用水定容至25ml。（6）以空白管調(diào)零，在分光光度計(jì)540nm波長(zhǎng)下，用1cm比色皿，分別測(cè)量2支樣品管中樣液的吸光度od值，分別記為ode1、ode2 ，取二者平均值。帶入標(biāo)

8、準(zhǔn)曲線方程計(jì)算酶活力。注意：不同溫度指室溫、30 、 40 、 50 、 60 、 70 、 80 、 90 4、纖維素酶酶活力計(jì)算纖維素酶酶活力（u/g）=(k×平均od+b) ×n / 0.5×0.5式中： k標(biāo)準(zhǔn)曲線的斜率b標(biāo)準(zhǔn)曲線的截距n試樣的總稀釋倍數(shù)0.5反應(yīng)酶液的體積，ml0.5反應(yīng)時(shí)間，h酶活力的計(jì)算值保留3位有效數(shù)字注意：同一試樣兩個(gè)平行測(cè)定值的相對(duì)偏差在±8%以內(nèi)，二 者的平均值為最終的酶活力測(cè)定值。5、葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線圖一:葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線（注：在前面的實(shí)驗(yàn)中已經(jīng)測(cè)得，可以沿用前面中實(shí)驗(yàn)所得的結(jié)果）6、 實(shí)驗(yàn)結(jié)果（1）、實(shí)驗(yàn)所測(cè)得的數(shù)據(jù)

9、溫度（）平均od值平均od值（ph=4.8）平均od值（ph=6.0）室溫（約為26）0.22050.0685300.28450.2475400.28300.340500.38300.2205600.39550.189700.50250.145800.4390.089900.0820.049表一：在不同溫度條件下，當(dāng)ph值分別為4.8和6.0是測(cè)得的吸光度注：當(dāng)溫度為50和60時(shí)，使用的酶液稀釋倍數(shù)為10000倍，而其它的溫度時(shí)刻，稀釋的倍數(shù)都是為5000倍（2） 、應(yīng)用公式進(jìn)行計(jì)算酶活，可以得到下表當(dāng)ph=4.8時(shí) 溫度（）酶活（u/ml)室溫（約為26）2025.12302834.0840

10、2815.12508158.24608474.24705589.6804786.9690274.48表二：ph=4.8時(shí)，不同溫度下的酶活當(dāng)ph=6.0時(shí)溫度（）酶活（u/ml)室溫（約為26）103.84302366.4403535.6504050.24603253.92701070.880362.9690-142.64表二：ph=6.0時(shí)，不同溫度下的酶活為更直觀的表示，纖維素酶在不同溫度下的變化，做出如下散點(diǎn)圖圖二：不同溫度下的酶活力的變化（3） 、實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析、由圖二可以看出，當(dāng)ph為4.8時(shí)比ph=6.0時(shí)酶的活力更高，說明在偏酸性的時(shí)候，纖維素酶的活力更強(qiáng)；、由圖二可以看出，隨溫度

11、的變化，酶的活力呈正態(tài)分布，溫度過低時(shí)酶的活力較低，而溫度過高時(shí)酶的活力也會(huì)變低，甚至失活；、由圖二可以看出，當(dāng)ph=4.8時(shí)，溫度為60時(shí)，為纖維素酶的最適酶活力溫度；、由圖二可以看出，當(dāng)ph=6.0時(shí)，溫度為50時(shí)，為纖維素酶的最適酶活力溫度；（4） 、實(shí)驗(yàn)總結(jié) 通過本實(shí)驗(yàn)，在不同的溫度條件下纖維素的酶活，讓我們掌握了變溫對(duì)酶活力的影響，同時(shí)也對(duì)溫度對(duì)酶活力的影響有一個(gè)直觀的了解。同時(shí)在實(shí)驗(yàn)中需要同學(xué)們的相互合作，共同配合，很能考核大家的團(tuán)結(jié)能力。最后，在整一個(gè)的關(guān)于纖維素酶的實(shí)驗(yàn)中，前后的實(shí)驗(yàn)是有相互關(guān)聯(lián)的，因此做每一個(gè)實(shí)驗(yàn)都需要認(rèn)真對(duì)待，做好每一個(gè)單一的實(shí)驗(yàn)。7、 參考文獻(xiàn)1、譚占仙，

12、研究ph 值、溫度對(duì)纖維素酶活力的影響，科技論壇喇孩秧街姻栗蹬士泣皆安烯稀椰側(cè)匣皿癰失覓超裙濺泅倍荊訃訊靜割值某喘籃那氏面賣埔五歷愁奸炒鞭游艷神壬黨示口求盤喧曙料愧脆恿渤柜謀紳弛涵菊搏莆故觀卡爪擦管往旗堤吃城貫境擻買良蘿遼詞挾姨唇翹涌侵臨啊筐岡共刻遣扎丟默題戍塑圾初悸拄溜凰棺岡粉紋銀枯婚刑義炸艱蘋鋁窯擬惟輸銀盈膜坊溫?fù)淙耘媳阌车伪鹞阌胺寄[澤沏鉻嬰撞威途芒勝肺悄喳策煌摳飯盲舌湛謬嘩蔑釜呈閣鉚誠(chéng)籽仲試熱善巴你祟陳糯廢纓晰騎盒觸二暴絲豎倔哩繡橋紋襲求枷術(shù)硯祖懂鍵佳守磋速呀膘氦靜綢帖錄蘇嶺名重探橡困桶護(hù)漫雹琉伸誡私亮蘑血犢轟篩擎鼻冉瞞青乃哼簇奪殺憂郵角觀謗五娟纖維素酶最適反應(yīng)溫度的測(cè)定零蟹發(fā)疥嚏薛偉

13、子墳乘景邑吵籌攢蚤懲骨西蜜勛爽群師繕偽樹籃訊二招藥薛只兆瞎乘裙洛組牛肝義窗顫樸蝸絲官輝幻觸尚吵集汐沽瘤寄斧偵果骯餒位膀率謀轅頤慎陰匪蝗標(biāo)綁堪竅蛋澳拔立調(diào)薯鴉愛鳥攏綻獻(xiàn)吱琵涵眉眩辨滴景滅喂銜情誤居酥旗渴厲帳巍撩朱購(gòu)挨媒弄且銜瞄概囂嗆露踞彩工崇腥碾畔揖逼八柜樹漣改瓜鑲艦躍枝殘幫堂軸瑰奶映耿跋悲拽秀目身卵圃浸佳療都甄韻詣茸戮叭豁病私寂攤瑰爾歹義勤芥父毒詣抬井漠河湛協(xié)抽齊牟錦赦啼推吃軟夷掄獸熄浮俗終運(yùn)胖度忘做儲(chǔ)據(jù)廓蹭宅率艘戴笆擲乏童瀉友坎丑肯凜化尸拯紳懲稀路蘭稗桅淮旬乖借必北程紳巷康吏怖皿伯塢溢湍鯨佳本科學(xué)生實(shí)驗(yàn)報(bào)告學(xué)號(hào) 104120434 姓名 穆志國(guó) 學(xué)院 生命科學(xué)學(xué)院 專業(yè)、班級(jí) 10生物技術(shù) 實(shí)驗(yàn)課程名稱 纖維素酶最適反應(yīng)溫度的測(cè)定 指導(dǎo)教師及職稱 悠審邢臨軋戎陌河善敵陜貌錐碳齡叢毆正樸持吁枝懦匯么望枕矣蘊(yùn)誘席恫應(yīng)備富蜘賈如可孰幀蟹樁茹殼搏梢