實(shí)驗(yàn)十三硫代巴比妥酸比色法測定山梨酸

1、班級：分析 09310 姓名：陳濤 學(xué)號： 14實(shí)驗(yàn)十三 硫代巴比妥酸比色法測定山梨 酸及山梨酸鉀1原理 利用自樣品中提取出來的山梨酸及其鹽 類，在硫酸及重鉻酸鉀的氧化作用下產(chǎn)生丙二 醛，丙二醛與硫代巴比妥酸作用產(chǎn)生紅色化合 物，其紅色深淺與丙二醛濃度成正比，并于波 長 530nm 處有最大吸收，符合比爾定律，故可 用比色法測定，反應(yīng)如下： （略）2試劑。（ 1）硫代巴比妥酸溶液：準(zhǔn)確稱取0.5g硫代巴比妥酸于 100ml 容量瓶中， 加 20ml 蒸 餾 水 ， 然 后 再 加 入 10ml 氫 氧 化 鈉 溶 液 （1mol/l ），充分搖勻。 使之完全溶解后再加入 11ml 鹽酸（ 1m

2、ol/l ），用水稀釋至刻度。此溶 液要在使用時(shí)新配制， 最好在配制后不超過 6h 內(nèi)使用。（ 2）重鉻酸鉀 -硫酸混合液：以 0.1mol/l 重鉻酸鉀和 0.15mol/l 硫酸以 1：1 的比例混合均勻配制備用。（ 3）山梨酸鉀標(biāo)準(zhǔn)溶液： 準(zhǔn)確稱取 250mg 山梨酸鉀于 250ml 容量瓶中， 用蒸餾水溶解并 稀釋至刻度，使之成為 1mg/ml 的山梨酸鉀標(biāo) 準(zhǔn)溶液。（ 4）山梨酸鉀標(biāo)準(zhǔn)使用溶液： 準(zhǔn)確移取山 梨酸鉀標(biāo)準(zhǔn)溶液 25ml 于 250ml 容量瓶中， 稀 釋至刻度，充分搖勻，使之成為 0.1mg/ml 的 山梨酸鉀標(biāo)準(zhǔn)使用溶液。3儀器。（1）721 型分光光度計(jì)。（2）組織

3、搗碎機(jī)。（3）10ml 比色管。4分析步驟。（ 1）樣品的處理：稱取 100g 樣品，加蒸 餾水 200ml ，于組織搗碎機(jī)中搗成勻漿。稱取 此勻漿100g,加蒸餾水200ml繼續(xù)搗碎1min , 稱取 10g 于 250ml 容量并中定容搖勻， 過濾備 用。（2）山梨酸鉀標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制： 分別吸取 0.0、2.0、4.0、6.0、8.0、10.0ml 山梨酸鉀標(biāo) 準(zhǔn)使用溶液于 200ml 容量瓶中, 以蒸餾水定容（分別相當(dāng)于 0.0、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0（g/ml 的山梨酸鉀）。再分別吸取 2.0ml于相應(yīng)的 10ml比色管中，加2.0ml重鉻酸鉀-硫酸溶液， 于100 &

4、#176;c水浴中加熱7min，立即加入2.0ml硫 代巴比妥酸溶液，繼續(xù)加熱10min，立即取出迅速用冷水冷卻，在分光光度計(jì)上以530nm測 定吸光度，并繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。（3 ）樣品的測定：吸取樣品處理液2ml于10ml比色管中，按標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制的操作程 序，自“加2.0ml重鉻酸鉀-硫酸溶液”開始依 次操作，在分光光計(jì) 530nm處測定吸光度，從 標(biāo)準(zhǔn)曲線中查出相應(yīng)濃度。5實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)：c0.00000.00000.00000.00000.00000.000000204060801a0.0000.0120.0180.0210.0230.02800.035度光吸530nn測定吸光度標(biāo)準(zhǔn)曲線0.030.0250.020.0150.010.005+ a線性（a）0.000 0.000 0.000 0.000 0.000 0.000 0.000000 002004006 008010012濃度(g/ml)試樣吸光度為1.285 濃度 c=5.09*10*g/ml5 結(jié)果計(jì)算x1a 250m 2x2x11.34式中：x1樣品中山梨酸鉀的含量，g/kg ;x2-樣品中山梨酸的含量，g/kg ；a-試樣液中含山梨酸鉀的濃度，mg/ml ；m稱取勻漿相當(dāng)于試樣的質(zhì)量，g;2用于比色時(shí)試樣溶液的體積，ml ；250樣品處理液總體積，ml竺工竺=0.