小鼠呼腸孤病毒3型RV3試劑盒使用方法

1、小鼠呼腸孤病毒3型(RV3)試劑盒使用方法檢測(cè)范圍： 96T4ng/mL -120ng/mL使用目的：本試劑盒用于測(cè)定小鼠血清、血漿及相關(guān)液體樣本中呼腸孤病毒3型(RV3)表達(dá)。實(shí)驗(yàn)原理本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測(cè)定標(biāo)本中小鼠呼腸孤病毒3型(RV3)表達(dá)。用純化的小鼠呼腸孤病毒3型(RV3)抗體包被微孔板，制成固相抗體，可與樣品中呼腸孤病毒3型(RV3)相結(jié)合，經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的抗原和其他成分后再與HRP標(biāo)記的呼腸孤病毒3型(RV3)抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物，經(jīng)過徹底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。用酶標(biāo)儀在450nm波

2、長下測(cè)定吸光度（OD值），與CUTOFF值相比較，從而判定標(biāo)本中小鼠呼腸孤病毒3型(RV3)的存在與否。試劑盒組成 130倍濃縮洗滌液20ml×1瓶7終止液6ml×1瓶2酶標(biāo)試劑6ml×1瓶8陽性對(duì)照0.5ml×1瓶3酶標(biāo)包被板12孔×8條9陰性對(duì)照0.5ml×1瓶4樣品稀釋液6ml×1瓶10說明書1份5顯色劑A液6ml×1瓶11封板膜2張 6顯色劑B液6ml×1/瓶12密封袋1個(gè)標(biāo)本要求 1標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取，提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行，提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能馬上進(jìn)行試驗(yàn)，可將標(biāo)本放于-20保存，但應(yīng)

3、避免反復(fù)凍融2不能檢測(cè)含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。操作步驟1. 編號(hào)：將樣品對(duì)應(yīng)微孔按序編號(hào)，每板應(yīng)設(shè)陰性對(duì)照2孔、陽性對(duì)照2孔、空白對(duì)照1孔（空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同）2. 加樣：分別在陰、陽性對(duì)照孔中加入陰性對(duì)照、陽性對(duì)照50l。然后在待測(cè)樣品孔先加樣品稀釋液40l，然后再加待測(cè)樣品10l。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻，3. 溫育：用封板膜封板后置37溫育30分鐘。 4. 配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用5. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復(fù)

4、5次，拍干。6. 加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑50l，空白孔除外。 7. 溫育：操作同3。8. 洗滌：操作同5。9. 顯色：每孔先加入顯色劑A50l，再加入顯色劑B50l，輕輕震蕩混勻，37避光顯色15分鐘.10. 終止：每孔加終止液50l，終止反應(yīng)（此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）。11. 測(cè)定：以空白空調(diào)零，450nm波長依序測(cè)量各孔的吸光度（OD值）。 測(cè)定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。操作程序總結(jié)：計(jì)算和結(jié)果判定： 試驗(yàn)有效性：陽性對(duì)照孔平均值1.00; 陰性對(duì)照平均值0.10 臨界值（CUT OFF）計(jì)算：臨界值=陰性對(duì)照孔平均值+0.15 陰性判定：樣品OD值< 臨界值（CUT OFF）者為呼腸孤病毒3型(RV3)陰性 陽性判定：樣品OD值 臨界值（CUT OFF）者為呼腸孤病毒3型(RV3)陽性。 注意事項(xiàng)1操作嚴(yán)格按照說明書進(jìn)行，本試劑不同批號(hào)組分不得混用。2試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用，酶標(biāo)包被板開封后如未用完，板條應(yīng)裝入密封袋中保存。3濃洗滌液可能會(huì)有結(jié)晶析出，稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶，洗滌時(shí)不影響結(jié)果。4 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。5底物請(qǐng)避光保存。6試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn)，使用雙波長檢測(cè)時(shí)，參考波長為630nm7所有樣品，洗滌液和