神經(jīng)干細胞移植治療顱腦損傷后遺癥：最佳時機選擇

1、www.CRTER.org婁永利，等. 神經(jīng)干細胞移植治療顱腦損傷后遺癥：最佳時機選擇神經(jīng)干細胞移植治療顱腦損傷后遺癥：最佳時機選擇婁永利，陳 萍，姜 羽，張 輝，閔有會(鄭州大學附屬鄭州中心醫(yī)院神經(jīng)外科，河南省鄭州市 450007)引用本文：婁永利，陳萍，姜羽，張輝，閔有會. 神經(jīng)干細胞移植治療顱腦損傷后遺癥：最佳時機選擇J.中國組織工程研究，2016，20(10):1474-1480.DOI: 10.3969/j.issn.2095-4344.2016.10.015 ORCID: 0000-0002-6818-274X (婁永利)文章快速閱讀：神經(jīng)干細胞移植治療顱腦損傷后遺癥：最佳時機選擇

2、婁永利，男，1978年生，2012年新鄉(xiāng)醫(yī)學院畢業(yè)，碩士，主治醫(yī)師，主要從事神經(jīng)外科基礎與臨床方面的研究。通訊作者：閔有會，主任醫(yī)師，鄭州大學附屬鄭州中心醫(yī)院神經(jīng)外科，河南省鄭州市 450007中圖分類號:R394.2文獻標識碼:B文章編號:2095-4344(2016)10-01474-07稿件接受：2016-01-25http:/WWW.移植時機：損傷后6個月以內(nèi)、損傷后6-12個月、損傷后12個月以上顱腦損傷后遺癥患者胚胎神經(jīng)干細胞培養(yǎng)根據(jù)臨床癥狀、功能獨立性評定量評分、不良反應發(fā)生率認為損傷后6個月以內(nèi)移植是最佳治療時機在立體定引導下移植胚胎神經(jīng)干細胞 文題釋義：神經(jīng)

3、干細胞移植治療顱腦損傷：顱腦損傷根本原因是神經(jīng)元功能的喪失，而體內(nèi)神經(jīng)干細胞不足以產(chǎn)生充足的神經(jīng)元修復替代缺失的神經(jīng)元建立新的突觸聯(lián)系，只能由膠質(zhì)細胞填充，導致中樞神經(jīng)系統(tǒng)損傷功能難以恢復，此時補充外源性神經(jīng)干細胞分化后產(chǎn)生的神經(jīng)元和膠質(zhì)細胞可以分泌多種神經(jīng)營養(yǎng)因子，改善內(nèi)環(huán)境，促使損傷或病變后殘存的功能下降或處于休眠狀態(tài)的受體細胞發(fā)揮功能，起到代償作用，并啟動再生相關基因的表達，促使受體神經(jīng)纖維再生，補充缺失的神經(jīng)元。功能獨立性評價量表：是目前國際上運用較多的一種功能評價量表，目前已證實它有較好的可信度，并能作為預測康復治療效果的指標之一。目前在美國已建立了一個全國康復醫(yī)學統(tǒng)一數(shù)據(jù)系統(tǒng)，這個

4、系統(tǒng)匯總了美國主要康復醫(yī)療單位運用功能獨立性評價量表評價康復治療患者出院和隨訪的資料。該量表主要根據(jù)患者完成某一規(guī)定動作或項目所需要的幫助程度進行評分。這些項目包括6個方面：自我照顧能力、括約肌控制能力、轉(zhuǎn)移能力、運動能力、語言交流能力及社會認知能力，得分越高，表明患者的功能獨立性越好。摘要背景：神經(jīng)干細胞移植為治療顱腦損傷后遺癥提供了重要思路，但是在治療時機選擇方面，尚無明確的定論。目的：探討神經(jīng)干細胞移植治療顱腦損傷后遺癥的臨床效果及其最佳治療時機。方法：選擇178例顱腦損傷后遺癥患者，均接受神經(jīng)干細胞移植治療，按照治療時機分為損傷后6個月以內(nèi)組(60例)、損傷后6-12個月組(59例)、

5、損傷后12個月以上組(59例)，分別在損傷后6個月以內(nèi)、損傷后6-12個月、損傷后12個月以上進行神經(jīng)干細胞移植治療。記錄3組患者的臨床癥狀改善情況和功能獨立性評定量表評分。結(jié)果與結(jié)論：損傷后6個月以內(nèi)組的治療總有效率顯著高于損傷后6-12個月組和損傷后12個月以上組，差異有顯著性意義(P < 0.05)。與移植前比較，3組患者的功能獨立性評定量表評分顯著提高(P < 0.05)；第4次移植后3個月，損傷后6個月以內(nèi)組功能獨立性評定量表評分顯著高于其他兩組。神經(jīng)干細胞移植治療后，損傷后6個月以內(nèi)組不良反應發(fā)生率顯著低于其他兩組(P < 0.05)。結(jié)果表明不同時機移植神經(jīng)干細

6、胞均可以獲得一定的效果，其損傷后6個月以內(nèi)是臨床最佳治療時機。關鍵詞：干細胞；移植；顱腦損傷；后遺癥；神經(jīng)干細胞；干細胞移植；臨床效果；治療時機 主題詞：顱腦損傷；神經(jīng)干細胞；治療結(jié)果；組織工程3 P.O.Box 1200,Shenyang 110004 kf23385083Neural stem cell transplantation for sequela of traumatic brain injury: the best timing for treatmentLou Yong-li, Chen Ping, Jiang Yu, Zhang Hui, Min You-hui (Dep

7、artment of Neurosurgery, Zhengzhou Central Hospital of Zhengzhou University, Zhengzhou 450007, Henan Province, China)AbstractBACKGROUND: Neural stem cell transplantation provides an important way to treat sequela of traumatic brain injury, but the timing for treatment is inconclusive.OBJECTIVE: To e

8、xplore the clinical effect of neural stem cell transplantation in the treatment of sequela of traumatic brain injury and the choice of the best treatment time.METHODS: Totally 178 patients with sequela of traumatic brain injury who underwent neural stem cell transplantation were divided into three g

9、roups as per the timing for neural stem cell transplantation: group A (with 6 months after injury, n=60), group B (6-12 months after injury, n=59), and group C (over 12 months after injury, n=59). Improvement in clinical symptoms and scores on function independent measure (FIM) were recorded and com

10、pared in the three groups. RESULTS AND CONCLUSION: The total effective rate of group A was significantly higher than that in groups B and C (P < 0.05). FIM scores were significantly improved in the three groups after cell transplantation (P < 0.05). At 3 months after the fourth transplantation

11、, the FIM score in the group A was significantly higher than that in the other two groups, and the incidence of adverse reactions in the group A was significantly lower than that in the other two groups (P < 0.05). These findings indicate that neural stem cell transplantation at different timing

12、can all harvest certain clinical effects, but the best timing for neural stem cell transplantation is within 6 months after injury. Subject headings: Craniocerebral Trauma; Neural Stem Cells; Treatment Outcome; Tissue EngineeringCite this article: Lou YL, Chen P, Jiang Y, Zhang H, Min YH. Neural ste

13、m cell transplantation for sequela of traumatic brain injury: the best timing for treatment. Zhongguo Zuzhi Gongcheng Yanjiu. 2016;20(10): 1474-1480.Lou Yong-li, Master, Attending physician, Department of Neurosurgery, Zhengzhou Central Hospital of Zhengzhou University, Zhengzhou 450007, Henan Provi

14、nce, ChinaCorresponding author: Min You-hui, Chief physician, Department of Neurosurgery, Zhengzhou Central Hospital of Zhengzhou University, Zhengzhou 450007, Henan Province, China1479ISSN 2095-4344 CN 21-1581/R CODEN: ZLKHAH0 引言 Introduction隨著社會的發(fā)展，腦損傷后遺癥的發(fā)病率越來越多，嚴重影響到患者的康復和日常生活1，尤其是嚴重腦挫裂傷，會導致大腦神經(jīng)

15、細胞損毀，傷后患者出現(xiàn)難以恢復的偏癱、失語后遺癥，給家庭和社會帶來沉重負擔2。傳統(tǒng)的藥物治療、康復訓練進行顱腦損傷后遺癥治療存在較大的個體差異，無法獲得理想的治療效果3。干細胞移植技術近年來也被挖掘、開展參與此領域治療，干細胞是一類具有自我更新與增殖分化能力的細胞，它具有再生為各種組織、器官的潛能，醫(yī)學界稱為“萬用細胞”。王春亮等4對干細胞移植修復運動性顱腦損傷進行了回顧和總結(jié)，并指出干細胞尤其是神經(jīng)干細胞和骨髓間充質(zhì)干細胞對于運動性顱腦損傷的治療具有十分重要的作用。研究發(fā)現(xiàn)，神經(jīng)干細胞可以分泌大量神經(jīng)營養(yǎng)物質(zhì)和誘導因子，誘導、激活內(nèi)源性神經(jīng)干細胞，達到修復損傷神經(jīng)細胞、恢復功能的目的5。劉輝

16、等6報道神經(jīng)干細胞移植治療顱腦損傷大鼠的神經(jīng)保護作用與減輕腦組織炎癥反應有一定關系，移植到腦內(nèi)的神經(jīng)干細胞可以直接代替腦內(nèi)已經(jīng)死亡的神經(jīng)細胞。但是，目前在神經(jīng)干細胞移植治療顱腦損傷后遺癥的治療時機選擇方面，尚無明確的定論7。為此，試驗分別在損傷后6個月以內(nèi)、損傷后6-12個月、損傷后12個月以上對顱腦損傷后遺癥患者進行干細胞移植治療，以研究最佳治療時機。1 對象和方法 Subjects and methods1.1 設計 回顧性病例分析。1.2 時間及地點 于2014年6月至2015年8月在鄭州大學附屬鄭州中心醫(yī)院完成。1.3 對象 納入顱腦損傷后遺癥患者178例進行研究，男90例，女88例，

17、年齡17-61歲，平均年齡(39.25±10.15)歲?；颊呔嬖诓煌潭鹊募∪鉄o力、肌肉萎縮現(xiàn)象，55例合并有不同程度的構音障礙和吞咽困難、頸部活動困難等。納入標準：具有確切顱腦外傷病史，經(jīng)臨床顱CT或MRI檢查，存在各種顱內(nèi)血腫和(或)腦挫裂傷現(xiàn)象。屬于非過敏體質(zhì)，不會對神經(jīng)干細胞懸液產(chǎn)生過敏現(xiàn)象。一般情況良好，神志精神狀態(tài)尚可，未合并嚴重心腎等疾病。了解神經(jīng)干細胞移植相關情況，對術中和術后可能會出現(xiàn)的不良反應等知情，并自愿簽署手術同意書。排除標準：屬于高度過敏體質(zhì)者，或者存在嚴重過敏史者。存在嚴重的出血、凝血功能障礙者。處于妊娠期或哺乳期的女性。存在全身性感染，或者存在頭皮感染

18、的患者。受到患者心理狀態(tài)或者精神因素以及其他原因的影響，無法配合檢查和治療者。剔除標準：不符合入選標準。治療依從性差，未按規(guī)定治療或擅自服用可能影響療效的藥物。出現(xiàn)嚴重不良反應?；颊咦孕型顺鲈囼?。入組患者均接受神經(jīng)干細胞移植治療，并按照治療時機分為損傷后6個月以內(nèi)組(60例)、損傷后6-12個月組(59例)、損傷后12個月以上組(59例)，分別在損傷后6個月以內(nèi)、損傷后6-12個月、損傷后12個月以上進行神經(jīng)干細胞移植治療。對3組患者的年齡構成等基線資料進行統(tǒng)計學比較，差異無顯著性意義(P > 0.05)。試驗相關內(nèi)容和要點均經(jīng)鄭州大學附屬鄭州中心醫(yī)院醫(yī)學倫理委員會審核，治療過程中的相關

19、操作均嚴格遵守衛(wèi)生部相關技術規(guī)定。1.4 治療方法1.4.1 胚胎神經(jīng)干細胞培養(yǎng) 從鄭州大學附屬鄭州中心醫(yī)院標本室獲得孕12-14周墮胎腦組織，孕婦健康狀況良好，無傳染性疾病和遺傳性疾病，征得孕婦同意，自愿將流產(chǎn)胎兒交由醫(yī)院進行科研。利用胰蛋白酶(上海普邁生物科技有限公司)對腦組織進行消化，DNAase液(杭州沃森生物技術有限公司)清洗3次，并進行機械吹打。接種在DMEM/F12培養(yǎng)基(上海源葉生物科技有限公司)中進行培養(yǎng)，接種濃度 2×58 L-1，進行常規(guī)原代和傳代培養(yǎng)。取傳代24 h人胚胎神經(jīng)干細胞，添加含有BrdU的DMEM/F12培養(yǎng)基進行培養(yǎng)，觀察細胞狀態(tài)，待大多數(shù)神經(jīng)球

20、均貼壁生長之后，利用BrdU抗體(上海國源生物技術有限公司)進行免疫組化檢測，并制備細胞懸液。1.4.2 移植前準備 神經(jīng)干細胞移植之前，做好相應的準備工作，指導患者完善各項檢查，包括常規(guī)肝、腎功能和凝血情況檢查以及經(jīng)血傳播性疾病檢查。了解患者的精神和心理狀態(tài)，如果患者出現(xiàn)過度緊張等情況，可酌情予以適當劑量鎮(zhèn)靜劑處理。對患者進行常規(guī)剃頭備皮、禁食、禁水，對術區(qū)皮膚進行檢查，確認無感染現(xiàn)象，并于術前0.5 h對患者應用抗生素予以預防感染。1.4.3 神經(jīng)干細胞移植 在患者頭部粘選取4個Mark 點標識，并實施頭顱CT或MRI檢查，計算機與立體定向儀(深圳市安科腦立體定向儀有限公司)連接成功后，將

21、頭顱CT或MRI影像傳輸入定向儀工作站。患者入手術室之后保持側(cè)臥位，對患者頭部予以妥善固定，立體定向儀機械臂定位針標記Mark點，使空間影像與CT或MRI影像相融合計算機工作站形成虛擬手術路徑，確定手術靶點。對患者進行常規(guī)局部麻醉，根據(jù)標記位置，在患者頭皮穿刺點切一長約5 mm切口，在顱骨處鉆直徑3 mm左右的小孔，在立體定向儀引導下將微電極置入靶點，達到靶點之后調(diào)整電阻，進行局部微毀損，退出微電極，改用2 mm帶芯穿刺針注入5 mg地塞米松注射液，利用微量泵緩慢注入0.6 mL神經(jīng)干細胞懸液。注射完畢退出穿刺針，檢查傷口確認無明顯出血之后予以縫合。每7 d移植1次，連續(xù)移植4次。移植后給予常

22、規(guī)抗感染以及改善微循環(huán)治療。1.5 主要觀察指標1.5.1 療效判定 目前關于顱腦損傷后遺癥無特效治療方法，且缺乏明確、統(tǒng)一的療效量化判定標準，主要以醫(yī)師的臨床查體情況為主要依據(jù)進行療效判定。觀察指標包括患者肌力和肌張力的改善情況，以及臨床構音障礙、頸部活動、吞咽困難等改善情況，如果上述癥狀經(jīng)觀察均得到明顯緩解，則視為有效。1.5.2 功能獨立性評定量表(functional independence measure，F(xiàn)IM)評分 在第1次移植前以及第4次移植后3個月，分別對3組患者進行FIM評分。主要內(nèi)容包括自我管理、排泄控制、行進、轉(zhuǎn)移、交流、社會認知6個部分，一共18個小項，每項1-7分

23、，總分126分。最終得分越高，表明患者的功能獨立性越好。1.5.3 不良反應發(fā)生情況 在移植過程中和移植后對3組患者的不良反應發(fā)生情況進行記錄，包括發(fā)熱、頭痛、惡心、切口感染和顱內(nèi)血腫以及切口不愈合、應激性消化道出血、重要臟器功能損害等。1.6 統(tǒng)計學分析 治療有效率和FIM評分、移植后不良反應發(fā)生率等實驗數(shù)據(jù)均利用SPSS 19.0軟件進行統(tǒng)計學分析，計量資料兩兩比較均予以t 檢驗，計數(shù)資料兩兩比較均予以2檢驗，P < 0.05為差異有顯著性意義。2 結(jié)果 Results 2.1 胚胎神經(jīng)干細胞形態(tài) 培養(yǎng)2 d后可見細胞形成懸浮團塊，倒置相差顯微鏡下可見細胞散在且胞體較小，呈圓形，折光

24、性較好(圖1A)。8-10 d后，細胞生長成為懸浮球形克隆，細胞數(shù)量達到數(shù)十個到數(shù)百個。經(jīng) Nestin蛋白免疫細胞化學鑒定，可以觀察到胞漿被染成褐色神經(jīng)球，Nestin呈陽性(圖1B)。2.2 患者隨訪情況分析 178例患者均完成12個月的隨訪，并進入最終的結(jié)果分析，隨訪率為100%。2.3 各組患者基線資料比較 經(jīng)統(tǒng)計學分析，3組基線資料具有可比性(P > 0.05)，見表1。表1 各組患者臨床資料分析 Table 1 Clinical analysis of patients in each group組別n性別(n)平均年齡(±s，歲)構音障礙(n)吞咽困難(n)構音障

25、礙(n)頸部活動困難(n)男 女損傷后6個月以內(nèi)組損傷后6-12個月組損傷后12個月以上組60595931293029302940.35±8.3439.15±12.1039.55±8.15343444454655BA圖1 胚胎神經(jīng)干細胞形態(tài)(×400)Figure 1 Morphology of embryonic stem cells (×400)圖注：圖中A為培養(yǎng)2 d后可見細胞散在且胞體較小，呈圓形，折光性較好；B為免疫細胞化學檢測觀察到胞漿被染成褐色神經(jīng)球，Nestin呈陽性表達。2.4 各組患者治療有效率分析 損傷后6個月以內(nèi)組的治療

26、總有效率顯著高于損傷后6-12個月組和損傷后12個月以上組，差異有顯著性意義(P < 0.05)；損傷后6-12個月組和損傷后12個月以上組之間經(jīng)比較差異無顯著性意義(P > 0.05，表2，圖2)。表2 各組患者治療有效率分析 Table 2 Therapeutic efficiency analysis in different groups組別n有效(n)有效率(%)損傷后6個月以內(nèi)組損傷后6-12個月組損傷后12個月以上組6059595547419280a69a表注：與損傷后6個月以內(nèi)組比較，aP < 0.05。100806040200治療總有效率(%)損傷后6-12

27、個月組損傷后6個月以內(nèi)組損傷后12個月以上組圖2 各組患者治療有效率分析Figure 2 Therapeutic efficiency analysis in different groups2.5 各組患者第1次移植前以及第4次移植后3個月FIM評分 在第1次移植前以及第4次移植后3個月，分別對3組患者進行FIM評分。結(jié)果顯示，與移植前比較，3組患者FIM評分顯著提高(P < 0.05)；第4次移植后3個月對3組評分進行比較，損傷后6個月以內(nèi)組評分顯著高于損傷后6-12個月組和損傷后12個月以上組，差異有顯著性意義(P < 0.05)；損傷后6-12個月組和損傷后12個月以上組之

28、間經(jīng)比較差異無顯著性意義(P > 0.05，表3，圖3)。表3 各組患者第1次移植前以及第4次移植后3個月FIM評分分析 Table 3 Function independent measure scores of patients in each group before first transplantation and 3 months after the fourth transplantation表注：與第1次移植前比較，aP < 0.05；與損傷后6個月以內(nèi)組比較，bP < 0.05。組別n第1次移植前第4次移植后3個月?lián)p傷后6個月以內(nèi)組損傷后6-12個月組損傷后

29、12個月以上組60595942.15±6.2340.25±71143.12±6.1098.25±8.11a80.23±5.26ab71.23±5.21ab120100806040200FIM評分損傷后6個月以內(nèi)組損傷后6-12個月組損傷后12個月以上組第1次移植前 第4次移植后3個月 圖3 各組患者第1次移植前以及第4次移植后3個月FIM評分情況Figure 3 Function independent measure scores of patients in each group before first transplantat

30、ion and 3 months after the fourth transplantation2.6 各組患者不良反應發(fā)生情況 神經(jīng)干細胞移植后，有6例出現(xiàn)惡心癥狀，未給予特殊處理，兩三天后癥狀逐漸消失；9例患者出現(xiàn)頭痛癥狀，給予平臥和鎮(zhèn)靜休息之后，癥狀得到有效緩解；19例患者出現(xiàn)發(fā)熱現(xiàn)象，體溫分布在37.5-38.6 之間，并伴有輕度的鼻塞、流涕等癥狀，給予解熱鎮(zhèn)痛藥治療，體溫明顯下降，并于3 d內(nèi)體溫恢復至正常水平，各項癥狀消失。所有患者均未出現(xiàn)切口感染和顱內(nèi)血腫以及切口不愈合、應激性消化道出血、重要臟器功能損害等嚴重不良反應。對3組患者的不良反應發(fā)生情況進行分析，損傷后6個月以內(nèi)組不

31、良反應發(fā)生率顯著高低于損傷后6-12個月組和損傷后12個月以上組，差異有顯著性意義(P < 0.05)；損傷后6-12個月組和損傷后12個月以上組之間經(jīng)比較差異無顯著性意義(P > 0.05，表4，圖4)。表4 各組患者移植后不良反應發(fā)生情況 Table 4 Adverse reactions in three groups post operation組別n發(fā)熱(n)頭痛(n)惡心(n)不良反應發(fā)生率(%)損傷后6個月以內(nèi)組損傷后6-12個月組損傷后12個月以上組6059594782341231220a25a表注：與損傷后6個月以內(nèi)組比較，aP < 0.05。3025201

32、51050不良反應發(fā)生率(%)損傷后6-12個月組損傷后6個月以內(nèi)組損傷后12個月以上組圖4 各組患者移植后不良反應發(fā)生情況Figure 4 Postoperative adverse reactions in different groups3 討論 Discussion隨著社會的快速發(fā)展，各種交通事故的發(fā)生率也呈現(xiàn)出不斷上升趨勢，導致顱腦損傷發(fā)生率不斷提高8。顱腦損傷容易產(chǎn)生各種后遺癥，嚴重影響到患者的日常生活。臨床采用常規(guī)神經(jīng)營養(yǎng)治療、高壓氧治療以及康復鍛煉等方式治療顱腦損傷后遺癥9-12，雖然可以從一定程度上改善患者的神經(jīng)功能，但往往無法獲得理想的效果。分析出現(xiàn)這一結(jié)果的原因，是因為哺

33、乳動物的中樞神經(jīng)系統(tǒng)損傷之后無法再生13。神經(jīng)干細胞相關理論及技術的發(fā)展，為顱腦損傷后遺癥治療提供了新的思路。神經(jīng)干細胞移植后在患者體內(nèi)分化成新的神經(jīng)元，它們通過突觸相互聯(lián)接，形成新的神經(jīng)環(huán)路，有效改善神經(jīng)功能，提高其生活質(zhì)量14-22。通過立體定向技術，將神經(jīng)干細胞準確的注射至病灶及其周邊神經(jīng)組織中23-25。該技術具有定位準、手術創(chuàng)傷小、操作時間短等優(yōu)點，可用于治療腦出血后遺癥、腦損傷后遺癥、小兒腦癱、局灶性腦梗死、帕金森病、阿爾茨海默病等。黎國雄等26在體外環(huán)境下對胚胎神經(jīng)干細胞進行培養(yǎng)，利用立體定向移植方式將神經(jīng)干細胞懸液注射至腦損傷大鼠病灶內(nèi)，可以顯著改善腦損傷。研究學者還發(fā)現(xiàn)，大鼠

34、腦組織切片中神經(jīng)元數(shù)量顯著增加，經(jīng)BrdU免疫組化檢測觀察到移植的神經(jīng)干細胞在大鼠顱內(nèi)損傷區(qū)發(fā)生了存活和分化、遷移。利用神經(jīng)干細胞移植治療顱腦損傷后遺癥時，選擇恰當?shù)闹委煏r機至關重要27。在顱腦損傷超早期階段，患者的腦組織出現(xiàn)壞死或者變性水腫等，相應的微環(huán)境不利于神經(jīng)干細胞的定居和生存，也不利于其修復作用的發(fā)揮28-30。神經(jīng)干細胞移植后能分泌神經(jīng)營養(yǎng)因子以及局部病灶微環(huán)境等因素的影響，可以發(fā)生定向遷移31-32。隨著時間的不斷推移，相應因子的分泌量逐步下降，移植細胞所發(fā)揮的替代和修復作用也會不斷下降33-35。為此，應選擇合適的治療時機，以保證移植神經(jīng)干細胞的存活和修復作用的發(fā)揮36。試驗對

35、入組患者分別在損傷后6個月以內(nèi)、損傷后6-12個月、損傷后12個月以上進行神經(jīng)干細胞移植治療。經(jīng)療效判定發(fā)現(xiàn)，損傷后6個月以內(nèi)組的治療總有效率顯著高于其他兩組，損傷后6-12個月組和損傷后12個月以上組之間經(jīng)比較差異無顯著性意義。經(jīng)FIM評分發(fā)現(xiàn)3組FIM評分均顯著提高，且第4次移植后3個月，損傷后6個月以內(nèi)組評分顯著高于其他兩組，損傷后6-12個月組和損傷后12個月以上組之間經(jīng)比較差異無顯著性意義。試驗結(jié)果提示，不同時機移植神經(jīng)干細胞均可以獲得一定的效果，其中損傷后6個月以內(nèi)是臨床最佳治療時機，移植治療的效果明顯優(yōu)于損傷后6-12個月、損傷后12個月。陳昱等37建立大鼠缺血性腦卒中后遺癥模型

36、，并通過立體定向移植方式，在不同時間(超早期、早期、晚期)注射神經(jīng)干細胞，移植后8周，接受超早期以及晚期移植大鼠的神經(jīng)損傷嚴重程度均顯著高于早期移植治療。由此認為，缺血性腦卒中后遺癥早期移植治療可以獲得最佳的治療效果，超早期或者晚期均不屬于理想的治療時機。Eriksson等38也認為，腦組織損傷的超早期不適合進行神經(jīng)干細胞移植，因為在這一階段，受到低氧等因素的影響，腦內(nèi)的微環(huán)境無法為神經(jīng)干細胞的存活提供良好的條件。在顱腦損傷超早期，局部會出現(xiàn)組織缺血、缺氧等內(nèi)環(huán)境失衡，并存在炎性反應以及氧化應激損傷等，不利于神經(jīng)干細胞的存活39。因此，在顱腦損傷后數(shù)月進行移植治療，腦組織的內(nèi)環(huán)境已經(jīng)趨于穩(wěn)定，

37、干細胞移植后更容易存活，可以獲得更好的治療效果40。作者貢獻：試驗設計為第一、二作者，試驗實施為第一、三作者，試驗評估為第一、五作者，資料收集為第一、四作者。利益沖突：所有作者共同認可文章內(nèi)容不涉及相關利益沖突。倫理問題：試驗方案經(jīng)鄭州大學附屬鄭州中心醫(yī)院倫理委員會批準，批準號為2014-203，試驗方案已經(jīng)患者/家屬知情同意。文章查重：文章出版前已經(jīng)過CNKI反剽竊文獻檢測系統(tǒng)進行3次查重。文章外審：本刊實行雙盲外審制度，文章經(jīng)國內(nèi)小同行外審專家審核，符合本刊發(fā)稿宗旨。作者聲明：文章第一作者對研究和撰寫的論文中出現(xiàn)的不端行為承擔責任。論文中涉及的原始圖片、數(shù)據(jù)(包括計算機數(shù)據(jù)庫)記錄及樣本已

38、按照有關規(guī)定保存、分享和銷毀，可接受核查。文章版權：文章出版前雜志已與全體作者授權人簽署了版權相關協(xié)議。4 參考文獻 References1 壽紀新,馬林,付旭東,等.不同時間移植神經(jīng)干細胞治療顱腦損傷的對比研究J.中國實用神經(jīng)疾病雜志,2010, 13(9):71-73.2 王東,張建軍,馬景鑑,等.神經(jīng)干細胞NgR基因沉默立體定向移植治療大鼠腦損傷J.中國組織工程研究與臨床康復,2010,14(14):2539-2544.3 李紅星,趙宗茂,金耀東,等.神經(jīng)節(jié)苷脂聯(lián)合神經(jīng)干細胞移植對顱腦損傷大鼠海馬的作用J.中國組織工程研究, 2012, 16(10):1846-1850.4 王春亮,劉瑞

39、蓮.干細胞移植與運動性顱腦損傷的修復J.中國組織工程研究與臨床康復,2010,14(40):7560-7563.5 王崇謙,丁鵬,牟臨杰,等.顱腦損傷后內(nèi)源性神經(jīng)干細胞增殖與遷移中的基質(zhì)細胞衍生因子1J.中國組織工程研究, 2012,16(6):998-1002.6 劉輝,楊樹源,張建寧,等.神經(jīng)干細胞移植對顱腦損傷大鼠腦皮層的神經(jīng)保護作用J.中國神經(jīng)精神疾病雜志,2010, 36(6):335-338.7 Wan JF, Zhang SJ, Wang L, et al. Implications for preserving neural stem cells in whole brain

40、radiotherapy and prophylactic cranial irradiation: a review of 2270 metastases in 488 patients. J Radiat Res. 2013;54(2):285-291.8 黎國雄,王傳湄,龔利平,等.神經(jīng)干細胞立體定向腦內(nèi)移植治療大鼠重型顱腦損傷J.中國臨床神經(jīng)外科雜志,2009, 14(5):288-290.9 劉輝,楊樹源,張建寧,等.神經(jīng)干細胞移植對顱腦外傷神經(jīng)組織的替代和修復作用J.中華神經(jīng)外科雜志,2002, 18(5): 282-285.10 李曉紅,陳翀,趙霞,等.亞低溫對大鼠顱腦創(chuàng)傷后內(nèi)源

41、性神經(jīng)干細胞增殖和分化的影響及其機制J.中華創(chuàng)傷雜志, 2014,30(6):500-503.11 Mondragon-Teran P, Baboo JZ, Mason C, et al. The full spectrum of physiological oxygen tensions and step-changes in oxygen tension affects the neural differentiation of mouse embryonic stem cells. Biotechnol Prog. 2011;27(6):1700-1708.12 鄭小敏,范薇,汪昕,等.

42、神經(jīng)干細胞移植技術在腦卒中和顱腦損傷治療中的應用J.中國組織工程研究與臨床康復, 2007,11(15):2964-2967.13 薛蓬,陳鎮(zhèn)洲,劉釗,等.骨髓源性神經(jīng)干細胞誘導分化及移植治療顱腦損傷J.中國組織工程研究與臨床康復,2007, 11(7):1271-1273,1404.14 Menendez L, Yatskievych TA, Antin PB, et al. Wnt signaling and a Smad pathway blockade direct the differentiation of human pluripotent stem cells to multi

43、potent neural crest cells. Proc Natl Acad Sci U S A. 2011;108(48):19240-19245.15 楊小鋒,虞軍,劉偉國,等.腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子和神經(jīng)干細胞聯(lián)合移植治療大鼠重度顱腦損傷的研究J.浙江醫(yī)學,2005,27(1):1-3,14.16 劉建新,王曉峰,張榮軍,等.經(jīng)枕大池移植神經(jīng)干細胞治療重型顱腦損傷大鼠的實驗研究J.臨床神經(jīng)外科雜志, 2012, 9(3):133-135.17 崔勇,陳靜,盧亦成,等.神經(jīng)干細胞移植治療創(chuàng)傷性顱腦損傷的研究進展J.中國綜合臨床,2011,27(2):220-222.18 羅江兵,趙鵬洲,

44、歐英雄,等.神經(jīng)干細胞在腦損傷模型中的遷移、成活和神經(jīng)生長因子表達J.中國微侵襲神經(jīng)外科雜志,2012,17(5):232-234.19 隋立森.大鼠顱腦損傷后神經(jīng)干細胞原位誘導、增殖分化及Notch信號通路調(diào)控機制的實驗研究D.廣州:南方醫(yī)科大學,2008.20 任維維,周志武.神經(jīng)干細胞移植治療顱腦損傷的研究進展J.中外醫(yī)學研究,2012,10(1):163-164.21 Ekici M, Hohl M, Schuit F, et al. Transcription of genes encoding synaptic vesicle proteins in human neural st

45、em cells: chromatin accessibility, histone methylation pattern, and the essential role of rest. J Biol Chem. 2008;283(14):9257-9268.22 Ostrakhovitch EA, Byers JC, O'Neil KD, et al. Directed differentiation of embryonic P19 cells and neural stem cells into neural lineage on conducting PEDOT-PEG a

46、nd ITO glass substrates.Arch Biochem Biophys. 2012; 528(1):21-31.23 李紅星,苑國富,金耀東,等.神經(jīng)干細胞移植聯(lián)用神經(jīng)節(jié)苷脂對腦損傷大鼠神經(jīng)學功能恢復的影響J.中國組織工程研究與臨床康復,2011,15(40):7505-7510.24 劉輝.神經(jīng)干細胞生物學特性、神經(jīng)干細胞移植治療顱腦損傷后神經(jīng)功能缺失及免疫基因治療大鼠膠質(zhì)瘤的研究D. 天津:天津醫(yī)科大學,2002.25 Bowman AN, van Amerongen R, Palmer TD, et al. Lineage tracing with Axin2 reveals distinct developmental and adult populations of Wnt/-catenin- r