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1、武漢生物工程學(xué)院天然藥物化學(xué)實(shí)驗(yàn)課程教案課程基本信息授課時(shí)間 2015年3月8日-2015年7月3日 教案編寫時(shí)間 2015年2月28日課程名稱天然藥物化學(xué)實(shí)驗(yàn)課程代碼總學(xué)時(shí) 32 講課: 學(xué)時(shí)實(shí)驗(yàn):32 學(xué)時(shí)實(shí)習(xí): 周學(xué)分2課程性質(zhì)必修課() 選修課( )理論課( ) 實(shí)驗(yàn)課()任課教師職稱授課對(duì)象專業(yè): 制藥工程 年級(jí): 2012級(jí) 班級(jí): 2012本科 教材及主要參考資料教材:自編參考資料: 天然藥物化學(xué)實(shí)驗(yàn) 中國(guó)醫(yī)藥科技出版社 楊月 主編(2010)天然藥物化學(xué)實(shí)驗(yàn)與指導(dǎo) 中國(guó)醫(yī)藥科技出版社 梁敬鈺 主編(2011)天然藥物化學(xué)實(shí)驗(yàn) 中國(guó)醫(yī)藥科技出版社李嘉蓉 主編(2010)教學(xué)目的和
2、教學(xué)要求1、重點(diǎn)掌握中藥中各類成分的提取分離、化學(xué)鑒定和薄層檢視的基本理論和基本方法。2、熟悉中藥所含有效成分的結(jié)構(gòu)鑒定方法。3、進(jìn)一步掌握理論所學(xué)到的知識(shí)。教學(xué)重點(diǎn)和難點(diǎn)1、各種有效成分結(jié)構(gòu)類型、理化性質(zhì)。2、提取分離、鑒定的方法。3、各類成分提取時(shí)的注意事項(xiàng)。章節(jié)備課實(shí)驗(yàn)內(nèi)容不分先后蒽醌類成分的提取分離與鑒別一、教學(xué)目的和要求學(xué)習(xí)羥基蒽醌類化合物的提取分離和檢識(shí),通過(guò)實(shí)驗(yàn)要求:1掌握從大黃中提取和分離游離蒽醌的方法。2掌握用pH梯度萃取法分離不同酸性的羥基蒽醌類化合物。3掌握蒽醌類化合物的主要檢識(shí)方法。4熟悉蒽醌類化合物的色譜檢識(shí)方法。二、教學(xué)重點(diǎn)和難點(diǎn)重點(diǎn):蒽醌類物質(zhì)的基本性質(zhì)難點(diǎn):pH
3、梯度萃取法的原理和適用性三、實(shí)驗(yàn)方法和原理本實(shí)驗(yàn)是根據(jù)大黃中的羥基蒽醌苷經(jīng)酸水解成游離羥基蒽醌,而游離羥基蒽醌不溶于水,可溶于氯仿、乙醚等親脂性有機(jī)溶劑的性質(zhì),用氯仿從水解液中將游離羥基蒽醌提取出來(lái),再利用各游離羥基蒽醌的酸性不同,采用pH梯度萃取法將其分離。其中大黃酚和大黃素甲醚的酸性十分近似,用pH梯度萃取法難以分離,可利用兩者的極性不同,采用硅膠柱色譜法進(jìn)行分離。大黃為蓼科植物掌葉大黃Rheum palmatum L.、唐古特大黃Rheum tanguticum Maxim. ex Reg.和藥用大黃Rheum officinale Baill.的干燥根及根莖。大黃中含有大黃酸、大黃酚、
4、蘆薈大黃素、大黃素、大黃素甲醚及其苷,總含量約35。1大黃酸(rhein) 分子式C15H8O6,分子量284.21。黃色針狀結(jié)晶(升華法),mp.321322,330分解。能溶于堿水、吡啶,略溶于乙醇、苯、氯仿、乙醚和石油醚,幾不溶于水。2大黃素(emodin) 分子式C15H10O5,分子量270.23。橙色針狀結(jié)晶(乙醇),mp.256257,能升華。易溶于乙醇、堿水,微溶于乙醚、氯仿,幾不溶于水。3蘆薈大黃素(aloe-emodin) 分子式C16H10O5,分子量270.23。橙色針狀結(jié)晶(甲苯),mp.223224。易溶于熱乙醇,可溶于乙醚和苯,并呈黃色;溶于堿液呈紅色;氨水及硫酸
5、中呈緋紅色。4大黃酚(chrysophanol) 分子式C15H10O4,分子量254.23。橙黃色六方形或單斜結(jié)晶(乙醇或苯),mp.196197,能升華。易溶于沸乙醇,可溶于丙酮、氯仿、苯、乙醚和冰醋酸,極微溶于石油醚、冷乙醇,幾不溶于水。大黃酚 R1=CH3 R2=H大黃素 R1=CH3 R2=OH大黃酸 R1=COOH R2=H大黃素甲醚 R1=CH3 R2=OCH3蘆薈大黃素 R1=CH2OH R2=H5大黃素甲醚(physcion) 分子式C16H12O5,分子量284.26。磚紅色單斜針狀結(jié)晶,mp.203207,溶于苯、氯仿、吡啶及甲苯,微溶于醋酸及醋酸乙酯,不溶于甲醇、乙醇、
6、乙醚和丙酮。四、實(shí)驗(yàn)儀器和材料儀器:燒杯,研缽,玻棒,濾紙,棉花,紗布,布氏漏斗,分液漏斗,燒瓶,冷凝管,鐵架臺(tái),鐵圈,雙緊絲,燒瓶夾,顯色劑噴瓶,薄層層析缸,硅膠GF254薄層板,電爐,水浴鍋,循環(huán)水真空泵,紫外燈等。材料:大黃,硫酸,二氯甲烷,鹽酸,緩沖液(pH8、pH10),碳酸氫鈉,氫氧化鉀,醋酸鎂,石油醚,乙酸乙酯,硅膠GF254,CMC-Na,大黃酸標(biāo)準(zhǔn)品,大黃素標(biāo)準(zhǔn)品,蘆薈大黃素標(biāo)準(zhǔn)品,大黃素甲醚標(biāo)準(zhǔn)品,大黃酚標(biāo)準(zhǔn)品等。五、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容(一)大黃中游離蒽醌的提?。?)水解:稱取大黃粗粉50g,置于500mL圓底燒瓶中加20%硫酸溶液100ml直火回流40min,冷卻后減壓濾過(guò),棄去濾
7、液。(2)萃?。簩V渣于60低溫干燥30min,置于干燥500mL圓底燒瓶中加入二氯甲烷200mL,40水浴回流40min,放冷,用干燥濾器減壓濾過(guò)。(二)PH梯度萃取法分離游離蒽醌1大黃酸的分離 將氯仿提取液置500ml分液漏斗中,加pH8緩沖液200ml充分振搖,靜置至徹底分層,分出堿水層置250ml錐形瓶中,在攪拌下加20%鹽酸調(diào)pH2,放置沉淀完全,抽濾得大黃酸(A)沉淀。2大黃素的分離 將分離出大黃酸的氯仿層用pH10緩沖液300ml振搖萃取兩次,靜置分層,分出堿水層,用20%鹽酸調(diào)pH2,放置析出大黃素(B)沉淀。3蘆薈大黃素的分離 將分離出大黃素的氯仿層加5%碳酸鈉-5%氫氧化鈉
8、(9:1)堿水液200ml萃取兩次,靜置分層,分出堿水層,用20%鹽酸調(diào)pH23,放置析出蘆薈大黃素(C)。4大黃素甲醚和大黃酚的分離 將分離出蘆薈大黃素的氯仿層用1%的氫氧化鈉200ml萃取兩次,靜置分層,分出堿水層,用20%鹽酸調(diào)pH23,放置析出大黃素甲醚和大黃酚的混合物(D)。(三)大黃中蒽醌類化合物的鑒定1化學(xué)檢識(shí):分別取大黃素、大黃酚等少許,用乙醇溶解,做如下反應(yīng):A堿液試驗(yàn):取試液1ml,加20%NaOH數(shù)滴,觀察顏色。B醋酸鎂反應(yīng):取試樣1ml,加醋酸鎂試劑數(shù)滴,觀察現(xiàn)象。2薄層鑒定:吸附劑:硅膠GCMC-Na板展開劑:石油醚(3060)乙酸乙酯=(15:5)上層溶液。顯色劑:
9、 5%KOH噴霧。記錄:繪出薄層層析圖譜,并計(jì)算Rf值。六、實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析1繪制薄層色譜圖2通過(guò)薄層色譜圖判斷大黃中游離蒽醌類物質(zhì)極性的大小。七、思考題1大黃中5種羥基蒽醌化合物的酸性和極性大小應(yīng)如何排列?為什么?2pH梯度萃取法的原理是什么?適用于哪些中藥成分的分離?3蒽醌類化合物及其苷的薄層色譜用什么作吸附劑、展開劑和顯色劑?黃酮類成分的提取分離與鑒別一、教學(xué)目的和要求學(xué)習(xí)黃酮類化合物的提取、分離和檢識(shí),通過(guò)實(shí)驗(yàn)要求:1通過(guò)蕓香苷提取與精制,掌握堿溶酸沉法提取黃酮類化合物的原理和操作。2掌握黃酮類化合物的主要性質(zhì)及黃酮苷、苷元和糖部分的檢識(shí)方法。3掌握由蕓香苷水解制取槲皮素的方法。二、教學(xué)
10、重點(diǎn)和難點(diǎn)重點(diǎn):堿溶酸沉法原理和操作,黃酮類化合物的主要性質(zhì),結(jié)晶法的操作。難點(diǎn):蕓香苷和槲皮素上3,5羥基的鑒別。三、實(shí)驗(yàn)方法和原理由槐花米中提取蕓香苷的方法很多,本實(shí)驗(yàn)是根據(jù)蕓香苷在冷水和熱水中的溶解度差異的特性進(jìn)行提取和精制,或根據(jù)蕓香苷分子中具有酚羥基,顯弱酸性,能與堿成鹽而增大溶解度,以堿水為溶劑煮沸提取,其提取液加酸酸化后則蕓香苷游離析出?;被诪槎箍浦参锘盨ophora japonica L.的干燥花蕾,主要含蕓香苷(蘆?。?,含量高達(dá)1220,水解生成槲皮素、葡萄糖及鼠李糖;槐花亦含蕓香苷,但含量較槐米為少。蕓香苷(rutoside):又稱蘆丁,分子式C27H30O16,分子量6
11、10.51。淡黃色針狀結(jié)晶,mp.177178,難溶于冷水(18000),略溶于熱水(1200),溶于熱甲醇(17)、冷甲醇(1100)、熱乙醇(130)、冷乙醇(1650),難溶于醋酸乙酯、丙酮,不溶于苯、氯仿、乙醚、石油醚等,易溶于吡啶及稀堿液中。槲皮素(quercetin):又稱槲皮黃素,分子式C15H10O7,分子量302.23。黃色結(jié)晶,mp.314(分解)。溶于熱乙醇(123)、冷乙醇(1300),可溶于甲醇、丙酮、醋酸乙酯、冰醋酸、吡啶等溶劑,不溶于石油醚、苯、乙醚、氯仿中,幾不溶于水。蕓香苷 R=葡萄糖鼠李糖槲皮素 R=H四、實(shí)驗(yàn)儀器和材料儀器:燒杯,研缽,玻棒,濾紙,棉花,紗
12、布,布氏漏斗,搪瓷杯,燒瓶,冷凝管,鐵架臺(tái),鐵圈,雙緊絲,燒瓶夾,顯色劑噴瓶,薄層層析缸,硅膠GF254薄層板,電爐,水浴鍋,循環(huán)水真空泵,紫外燈等。材料:槐花米,硼砂,氫氧化鈣,鹽酸,鎂粉,二氯氧化鋯,檸檬酸,-萘酚,硫酸,正丁醇,醋酸,苯胺,鄰苯二甲酸,葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)品,鼠李糖標(biāo)準(zhǔn)品等。五、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容(一)槐花米中蕓香苷的提取與精制1提?。逯蠓ǎ?稱取槐米30g,研碎,置1000mL的搪瓷杯中,加入硼砂2g和300mL飽和石灰水加熱煮沸30分鐘,趁熱減壓濾過(guò)(棉花),殘?jiān)儆?00mL飽和石灰水煮沸30分鐘。趁熱減壓濾過(guò),合并兩次濾液加濃鹽酸(邊加邊攪拌)調(diào)PH34,放置過(guò)夜。次日,傾出上清液
13、,抽濾沉淀,蒸餾水洗至PH56,70干燥,得粗蕓香苷。注意事項(xiàng):(1)本實(shí)驗(yàn)用堿溶酸沉法提取,加入石灰乳可以達(dá)到堿性溶解的目的,又可除去槐花米中所含的大量粘液質(zhì),但應(yīng)嚴(yán)格控制其堿性pH89,不可超過(guò)pH10。如pH值過(guò)高,加熱提取過(guò)程中蕓香苷可被水解破壞,降低收得率。加酸沉淀時(shí),控制pH34,不宜過(guò)低,否則蕓香苷可生成烊鹽而溶于水,也降低收得率。(2)在提取過(guò)程中,加入硼砂的目的是使其與蕓香苷分子中的鄰二酚羥基發(fā)生絡(luò)合,既保護(hù)了鄰二酚羥基不被氧化破壞,又避免了鄰二酚羥基與鈣離子絡(luò)合(蕓香苷的鈣絡(luò)合物不溶于水),使蕓香苷不受損失,提高收得率。2精制結(jié)晶法(熱溶冷析)取值得蕓香苷粗品,加蒸餾水30
14、0mL,煮沸至蕓香苷全部溶解(熱溶),趁熱立即減壓濾過(guò),冷卻后即可析出結(jié)晶(冷析),減壓濾過(guò),6080烘干,得蕓香苷精制品。取25%精制品作為蕓香苷樣品(A)。注意事項(xiàng):熱溶后進(jìn)行趁熱濾過(guò)時(shí),速度要快,所有濾器必須先行預(yù)熱,避免濾過(guò)過(guò)程中蕓香苷析出。(二)蕓香苷水解(槲皮素的制備)取取75%精制蕓香苷置500ml圓底燒瓶中加2H2SO4100ml直火回流30分鐘,(加熱約數(shù)分鐘后,溶液完全澄清,20分鐘后又逐漸析出黃色針狀結(jié)晶)減壓濾過(guò),即得槲皮素(B)。濾液作為糖鑒定樣品(C)(三)蕓香苷及槲皮素鑒定取蕓香苷(A)、槲皮素(B)少許,分別用適量乙醇溶解,制成試樣溶液,及樣品C(葡萄糖,鼠李糖
15、混合液)按下列方法進(jìn)行實(shí)驗(yàn),比較苷元、苷和糖的反應(yīng)情況。(1)Molish反應(yīng):取各試樣溶液各2ml,分置于兩支試管中,加10-萘酚乙醇溶液1ml,振搖后傾斜試管45°,沿管壁滴加1ml濃硫酸,靜置,觀察并記錄兩液面交界處顏色變化。(2)鹽酸-鎂粉反應(yīng):取各試樣溶液各2ml,分別置于兩支試管中,各加入鎂粉少許,再加入鹽酸數(shù)滴,觀察并記錄顏色變化。(3)鋯鹽-檸檬酸反應(yīng):取試樣A、B溶液各2ml,分別置于兩支試管中,各加2二氯氧鋯甲醇溶液34滴,觀察顏色,然后加入2檸檬酸甲醇溶液34滴,觀察并記錄顏色變化。(4)糖的紙色譜檢識(shí)取糖的供試液(C)和已知葡萄糖、鼠李糖標(biāo)準(zhǔn)液進(jìn)行層析。支持劑
16、:新華層析濾紙?jiān)?樣:糖的供試液對(duì)照品:1葡萄糖對(duì)照品水溶液、1鼠李糖對(duì)照品水溶液展開劑:正丁醇-醋酸-水(415上層)顯色劑:噴霧苯胺-鄰苯二甲酸試劑,于105加熱10分鐘顯棕色或棕紅色斑點(diǎn)。六、實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析1繪制紙層析結(jié)果圖。2將鑒定1-3號(hào)實(shí)驗(yàn)結(jié)果填于標(biāo) 實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目樣品 Molish反應(yīng)鹽酸-鎂粉反應(yīng)鋯鹽-檸檬酸反應(yīng)ABC七、思考題1本實(shí)驗(yàn)所采用的提取方法是什么,適用于哪些物質(zhì)的提取。2如何確定蕓香苷的苷鍵鏈接在3號(hào)位上3紙色譜的基本原理是什么,其固定相和流動(dòng)線分別是什么。4結(jié)晶發(fā)的主要操作是什么,操作過(guò)程中可以除去的雜質(zhì)有哪些(在操作步驟中指出)。 揮發(fā)性成分的提取分離與鑒別一、教學(xué)目
17、的和要求學(xué)習(xí)揮發(fā)油的提取和各類組成成分的檢識(shí),通過(guò)實(shí)驗(yàn)要求:1掌握揮發(fā)油的水蒸氣蒸餾提取法。2學(xué)習(xí)揮發(fā)油的一般檢識(shí)方法。3掌握揮發(fā)油中化學(xué)成分的薄層點(diǎn)滴定性檢識(shí)。二、教學(xué)重點(diǎn)和難點(diǎn)重點(diǎn):揮發(fā)油中化學(xué)成分的薄層點(diǎn)滴定性檢識(shí)難點(diǎn):水蒸氣蒸餾提取法三、實(shí)驗(yàn)方法和原理本實(shí)驗(yàn)是水蒸氣蒸餾法提取揮發(fā)油的通法。揮發(fā)油的組成成分較復(fù)雜,常含有烷烴、烯烴、醇、酚、醛、酮、酸、醚等官能團(tuán)。因此可以用一些檢出試劑在薄層板上進(jìn)行點(diǎn)滴試驗(yàn),從而了解組成揮發(fā)油的成分類型。揮發(fā)油中各類成分的極性互不相同,一般不含氧的烴類和萜類化合物極性較小,在薄層色譜板上可被石油醚較好的展開;而含氧的烴類和萜類化合物極性較大,不易被石油醚
18、展開,但可被石油醚與醋酸乙酯的混合溶劑較好的展開。為了使揮發(fā)油中各成分能在一塊薄層色譜板上進(jìn)行分離,常采用單向二次色譜法展開。四、實(shí)驗(yàn)儀器和材料儀器:燒杯,研缽,剪刀,玻棒,燒瓶,冷凝管,鐵架臺(tái),鐵圈,雙緊絲,燒瓶夾,顯色劑噴瓶,薄層層析缸,揮發(fā)油測(cè)定器,硅膠GF254薄層板,電爐,水浴鍋,紫外燈等。材料:鮮活材料(薄荷、橙子、八角等),乙醇,石油醚,乙酸乙酯,香草醛,硫酸等。五、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容(薄荷)(一)薄荷揮發(fā)油的提取取薄荷40g,裝入1000ml圓底燒瓶?jī)?nèi),加水350ml,搖勻,按圖1(揮發(fā)油測(cè)定裝置操作,直熱提取1小時(shí),放置30分鐘讀數(shù),并記算提取率(V/W)。附:揮發(fā)油測(cè)定法 測(cè)定用的供
19、試品,除另有規(guī)定外須粉碎使能通過(guò)二至三號(hào)篩并混合均勻。 儀器裝置如圖,A為1000ml的硬質(zhì)圓底燒瓶,上接揮發(fā)油測(cè)定器B,B的上端連接冷疑管C。以上各部均用玻璃磨口連接。測(cè)定器B應(yīng)具有0.1ml的刻度。全部?jī)x器應(yīng)充分洗凈,并檢查接合部分是否嚴(yán)密,以防油分逸出。(注:裝置中揮發(fā)油測(cè)定器的支管分岔處應(yīng)與基準(zhǔn)線平行)。(二)薄荷揮發(fā)油分析取薄荷油少許,以石油醚溶解(備用),取于105活化1小時(shí)的硅膠G-CMC板,取上述薄荷油石油醚溶液點(diǎn)樣,以石油醚-乙酸乙醋(18:2)展開,至前沿達(dá)12cm,取出揮干,噴5香草醛溶液,120加熱5分鐘,觀察顯出斑點(diǎn),記錄并繪圖。六、實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析繪制TLC色譜圖。七
20、、思考題1簡(jiǎn)述揮發(fā)油的組成. 2實(shí)驗(yàn)如何操作能得到更多斑點(diǎn)?生物堿類成分的提取分離與鑒別一、教學(xué)目的和要求學(xué)習(xí)提取精制和檢識(shí)黃連中的小檗堿,通過(guò)實(shí)驗(yàn)要求:1掌握生物堿的的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)和理化性質(zhì)。2熟悉滲漉法、鹽析法、結(jié)晶法的基本操作過(guò)程及注意事項(xiàng)。3解生物堿的的檢識(shí)方法。二、教學(xué)重點(diǎn)和難點(diǎn)重點(diǎn):生物堿的基本性質(zhì)難點(diǎn):滲漉法、鹽析法的基本操作三、實(shí)驗(yàn)方法和原理小檗堿(berberine):分子式(C20H18NO4),分子量336.37。系季銨生物堿。游離小檗堿為黃色針狀結(jié)晶(乙醚),mp.145,能緩緩溶于冷水(120),可溶于冷乙醇(1100),易溶于熱水或熱乙醇,難溶于丙酮、氯仿、苯,幾乎不溶
21、于石油醚。鹽酸小檗堿(C20H17NO4·HCl·2H2O),為黃色結(jié)晶,微溶于冷水(1500),易溶于沸水,幾乎不溶于冷乙醇、氯仿和乙醚。硫酸小檗堿( (C20H18NO4)2·SO4·3H2O),溶于水(130),溶于乙醇。重硫酸小檗堿(C20H18NO4·HSO4)為黃色結(jié)晶或粉末,溶于水(1150),微溶于乙醚。 小檗堿 木蘭堿根據(jù)上述性質(zhì),鹽酸鹽在水中溶解度小,而小檗堿的硫酸鹽水中溶解度較大。因此,從植物原料中提取小檗堿時(shí)常用稀硫酸水溶液浸泡或滲漉,然后向提取液中加入10的食鹽,在鹽析的同時(shí),也提供了氯離子,使其硫酸鹽轉(zhuǎn)變?yōu)槁然¢迚A
22、(即鹽酸小檗堿)而析出。防己中主要含有粉防己堿和防己諾林堿。粉防己堿又稱粉防己甲素,在防己中的含量約為1,易溶于甲醇、乙醇、丙酮、氯仿,溶于乙醚、苯等有機(jī)溶劑,幾乎不溶于水和石油醚。防己諾林堿又稱粉防己乙素,在防己中的含量約為0.5。溶解度與粉防己堿相似,因多一個(gè)酚羥基,故極性較粉防己堿稍大,可利用此性質(zhì)相互分離。四、實(shí)驗(yàn)儀器和材料儀器:燒杯,研缽,玻棒,濾紙,棉花,紗布,布氏漏斗,試管,搪瓷杯,滲漉筒,鐵架臺(tái),鐵圈,雙緊絲,燒瓶夾,顯色劑噴瓶,薄層層析缸,硅膠GF254薄層板,電爐,水浴鍋,循環(huán)水真空泵,紫外燈等。材料:黃連,防己,氫氧化鈣,鹽酸,二氯甲烷,硫酸,碘化鉍鉀等。五、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容(一)季銨型生物堿的提取分離與精制1鹽酸小檗堿的提取、精制。取黃柏粗粉30g置于燒杯中,加入適量石灰乳濕潤(rùn)藥粉15min,裝入滲漉筒中(壓緊),再加入8倍量水浸漬30min,以5ml/min流速滲漉。收集滲漉液300ml,加濃鹽酸調(diào)pH23,再加入滲漉液總體積10%(w/v)的氯化鈉,攪拌溶解后放置過(guò)夜,抽濾,得鹽酸小檗堿粗品。取鹽酸小檗堿粗品放入適宜燒杯中,加入50倍量蒸餾水,加熱溶解,趁熱抽濾,加濃鹽酸調(diào)pH23 ,靜置1個(gè)小時(shí),過(guò)濾得鹽酸小檗堿。注意事項(xiàng):(1)浸泡黃連粗粉的硫酸水溶液,一般為0.20.3為宜。若硫酸水溶液濃度過(guò)高,小檗
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