實(shí)驗(yàn)十三微生物生理生化課件

1、實(shí)驗(yàn)十三微生物生理生化實(shí)實(shí) 驗(yàn)驗(yàn) 十三十三 微生物生理生化反應(yīng)微生物生理生化反應(yīng)IMViC試驗(yàn)試驗(yàn)實(shí)驗(yàn)十三微生物生理生化 微生物生理生化反應(yīng)（微生物生理生化反應(yīng)（IMViC） 目的要求目的要求 基本原理基本原理 實(shí)驗(yàn)材料實(shí)驗(yàn)材料 實(shí)驗(yàn)步驟實(shí)驗(yàn)步驟 實(shí)驗(yàn)報(bào)告實(shí)驗(yàn)報(bào)告實(shí)驗(yàn)十三微生物生理生化目的要求目的要求 了解微生物生理生化反應(yīng)的類型及意義；了解微生物生理生化反應(yīng)的類型及意義； 掌握掌握IMViC反應(yīng)的原理及其在腸道菌鑒反應(yīng)的原理及其在腸道菌鑒定中的意義和方法。定中的意義和方法。實(shí)驗(yàn)十三微生物生理生化 基本原理 微生物體內(nèi)各種酶系統(tǒng)控制的復(fù)雜多樣的生化反應(yīng)完微生物體內(nèi)各種酶系統(tǒng)控制的復(fù)雜多樣的生化

2、反應(yīng)完成成 ；測定微生物某些酶類的有無、對底物作用與否、；測定微生物某些酶類的有無、對底物作用與否、反應(yīng)的條件、反應(yīng)的產(chǎn)物及代謝方式都屬于生理生化反應(yīng)的條件、反應(yīng)的產(chǎn)物及代謝方式都屬于生理生化實(shí)驗(yàn)內(nèi)容。實(shí)驗(yàn)內(nèi)容。 在培養(yǎng)基內(nèi)或在培養(yǎng)完成之后加入特定的指示劑就可在培養(yǎng)基內(nèi)或在培養(yǎng)完成之后加入特定的指示劑就可確定所發(fā)生的生理生化反應(yīng)類型。確定所發(fā)生的生理生化反應(yīng)類型。 常用的試驗(yàn)：糖代謝試驗(yàn)、氨基酸和蛋白質(zhì)代謝試驗(yàn)、常用的試驗(yàn)：糖代謝試驗(yàn)、氨基酸和蛋白質(zhì)代謝試驗(yàn)、氮源和碳源的利用試驗(yàn)及酶的試驗(yàn)等。氮源和碳源的利用試驗(yàn)及酶的試驗(yàn)等。實(shí)驗(yàn)十三微生物生理生化基本原理基本原理 IMViC是吲哚吲哚(ind

3、ol test)、甲基紅甲基紅(methy1 red test)、伏一普伏一普(Voges-Prokauer test)和檸檬酸鹽檸檬酸鹽(citrate test)四個(gè)試驗(yàn)的縮寫，I是在英文中為了發(fā)音方便而加上的。這四個(gè)試驗(yàn)主要是用來快速鑒別大腸桿菌和產(chǎn)氣腸桿菌(Enterobacteraerogenes)，多用于水的細(xì)菌學(xué)檢查。大腸桿菌雖非致病菌，但在飲用水中若超過一定數(shù)量，則表示受糞便污染。產(chǎn)氣腸桿菌也廣泛存在于自然界中，因此檢查水時(shí)要將兩者分開。實(shí)驗(yàn)十三微生物生理生化基本原理基本原理 吲哚試驗(yàn)吲哚試驗(yàn)是用來檢測吲哚的產(chǎn)生。有些細(xì)菌能產(chǎn)生色氨酸酶，分解蛋白胨中的色氨酸產(chǎn)生吲哚和丙酮酸。吲

4、哚與對二甲基氨基苯甲醛結(jié)合，形成紅色的玫瑰吲哚。但并非所有微生物都具有分解色氨酸產(chǎn)生吲哚的能力，因此吲哚試驗(yàn)可以作為一個(gè)生物化學(xué)檢測的指標(biāo)。色氨酸水解反應(yīng)：吲哚與對二甲基氨基苯甲醛反應(yīng)： 大腸桿菌吲哚反應(yīng)陽性，產(chǎn)氣腸桿菌為陰性。實(shí)驗(yàn)十三微生物生理生化基本原理基本原理 甲基紅試驗(yàn)甲基紅試驗(yàn)。某些細(xì)菌在糖代謝過程中，將培養(yǎng)基中的糖先分解為丙酮酸，丙酮酸再分解為甲酸、乙酸、乳酸等，因而使培養(yǎng)基變酸，用甲基紅指示劑pH42（紅色）-63（黃色），可使培養(yǎng)基由原來的桔黃色變?yōu)榧t色，即甲基紅陽性反應(yīng)。 大腸桿菌為陽性反應(yīng)，產(chǎn)氣腸桿菌為陰性反應(yīng)。 實(shí)驗(yàn)十三微生物生理生化基本原理基本原理 伏伏-普試驗(yàn)普試驗(yàn)。

5、某些細(xì)菌可利用葡萄糖產(chǎn)生丙酮。某些細(xì)菌可利用葡萄糖產(chǎn)生丙酮酸，丙酮酸進(jìn)行縮合，脫羧變成乙酰甲基甲醇，酸，丙酮酸進(jìn)行縮合，脫羧變成乙酰甲基甲醇，此物在堿性條件下能被空氣中的氧氣氧化成二此物在堿性條件下能被空氣中的氧氣氧化成二乙酰。二乙酰與蛋白胨中精氨酸的胍基作用，乙酰。二乙酰與蛋白胨中精氨酸的胍基作用，生成紅色化合物，即伏生成紅色化合物，即伏-普反應(yīng)陽性，沒有紅普反應(yīng)陽性，沒有紅色化合物產(chǎn)生則為陰性。其反應(yīng)過程如下：色化合物產(chǎn)生則為陰性。其反應(yīng)過程如下： 產(chǎn)氣腸桿菌伏產(chǎn)氣腸桿菌伏-普反應(yīng)陽性，大腸桿菌伏普反應(yīng)陽性，大腸桿菌伏-普反應(yīng)陰性。普反應(yīng)陰性。實(shí)驗(yàn)十三微生物生理生化基本原理基本原理 檸檬酸

6、鹽試驗(yàn)檸檬酸鹽試驗(yàn)。有些細(xì)菌能利用檸檬酸鈉作為碳源，例如大腸桿菌；而另一些細(xì)菌不能利用檸檬酸鈉，例如產(chǎn)氣腸桿菌。細(xì)菌在分解檸檬酸鹽及培養(yǎng)基中的磷酸銨后，產(chǎn)生堿性化合物，使培養(yǎng)基的pH升高，在有1%溴麝香草酚藍(lán)指示劑的情況下，培養(yǎng)基由綠色變?yōu)樯钏{(lán)色。溴麝香草酚藍(lán)的指示范圍為：pH小于60時(shí)呈黃色，pH在60-76時(shí)為綠色，pH大于76時(shí)呈藍(lán)色。 實(shí)驗(yàn)十三微生物生理生化實(shí)驗(yàn)材料實(shí)驗(yàn)材料 菌種菌種：大腸桿菌，產(chǎn)氣腸桿菌；：大腸桿菌，產(chǎn)氣腸桿菌； 培養(yǎng)基：培養(yǎng)基：蛋白胨水培養(yǎng)基，葡萄糖蛋白胨蛋白胨水培養(yǎng)基，葡萄糖蛋白胨水培養(yǎng)基，檸檬酸鹽斜面培養(yǎng)基水培養(yǎng)基，檸檬酸鹽斜面培養(yǎng)基 。 試劑：試劑：甲基紅試劑

7、，甲基紅試劑，40KOH，5-萘萘酚，乙醚，吲哚試劑等酚，乙醚，吲哚試劑等 。實(shí)驗(yàn)十三微生物生理生化實(shí)驗(yàn)步驟實(shí)驗(yàn)步驟 1.接種與培養(yǎng)接種與培養(yǎng) 將上述二菌分別接種于2支蛋白胨水培養(yǎng)基中（做吲哚試驗(yàn)吲哚試驗(yàn)），4支葡萄糖蛋白胨水培養(yǎng)基中（做甲基紅試驗(yàn)與伏甲基紅試驗(yàn)與伏-普普試驗(yàn)試驗(yàn)），2支檸檬酸鹽斜面培養(yǎng)基中。置37溫室培養(yǎng)48 h以上。實(shí)驗(yàn)十三微生物生理生化實(shí)驗(yàn)步驟實(shí)驗(yàn)步驟 2.結(jié)果觀察結(jié)果觀察 (1)吲哚試驗(yàn)：培養(yǎng)后取出，先加入乙醚約1ml（使呈現(xiàn)明顯的乙醚層），充分震蕩后，沿試管壁緩緩滴加吲哚試劑5-10滴，觀察有無紅色環(huán)出現(xiàn)。注意：加入吲哚試劑后不可再動搖不可再動搖!有紅色環(huán)出現(xiàn)者為陽性，反之為陰性 。(2)甲基紅試驗(yàn)：將葡萄糖蛋白胨水培養(yǎng)物加甲基紅試劑 2滴，培養(yǎng)基變紅色者為陽性，變黃色者為陰性。(3)伏-普試驗(yàn)：培養(yǎng)物中加入等量的VP試劑，用力振蕩，再放入37溫箱中保溫15-30 min，以加快反應(yīng)速度。若培養(yǎng)物呈現(xiàn)紅色者為伏-普反應(yīng)陽性。(4)檸檬酸鹽試驗(yàn)：觀察檸檬酸鹽培養(yǎng)基上有無細(xì)菌生長和是否變色。藍(lán)色為陽性，綠色為陰性。實(shí)驗(yàn)十三微生物生理生化實(shí)驗(yàn)報(bào)告實(shí)驗(yàn)報(bào)告 1.結(jié)果結(jié)果 將實(shí)驗(yàn)結(jié)果填入下表。將實(shí)驗(yàn)結(jié)果填入下表。“ +”表示陽性反應(yīng)；表示陽性反應(yīng)；“-”表示陰性反應(yīng)。表示陰性反應(yīng)。 菌 名IMViC試驗(yàn)吲哚試驗(yàn)甲基紅試驗(yàn)伏-普試驗(yàn)檸檬酸試驗(yàn)大腸桿菌產(chǎn)氣腸桿菌實(shí)驗(yàn)