3P5制劑的質(zhì)量控制(一)

1、目錄3.2. P.5制劑的質(zhì)量控制 33.2. P.5.1質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)33.2. P.5.2分析方法43.2. P.5.2.1 性狀43.2. P.5.2.2 鑒另U 43.2. P.5.2.3 檢查43.2. P.5.2.4 含量測定103.2. P.5.3分析方法的驗(yàn)證113.2. P.5.3.1分析方法學(xué)驗(yàn)證用樣品 113.2. P.5.3.2有關(guān)物質(zhì)方法學(xué)驗(yàn)證 113.2. P.5.3.3吡啶-3-磺酸方法學(xué)驗(yàn)證 213.2. P.5.3.4含量測定方法學(xué)驗(yàn)證 283.2. P.5.3.5溶出度測定方法學(xué)驗(yàn)證 333.2. P.5.3.6微生物限度檢查方法學(xué)驗(yàn)證 463.2. P.5.4批

2、檢驗(yàn)報告463.2. P.5.5 雜質(zhì)463.2. P.5.5.1雜質(zhì)情況分析463.2. P.5.5.2雜質(zhì)制定依據(jù)473.2 .P .5.6質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)制定依據(jù) 483.2. P.5.6.1 質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)483.2. P.5.6.2質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)制定依據(jù)及產(chǎn)品檢測結(jié)果 523.2. P.5制劑的質(zhì)量控制3.2. P.5.1質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)檢驗(yàn)項(xiàng)目方法放行標(biāo)準(zhǔn)限度貨架期標(biāo)準(zhǔn)限度性狀感觀本品為溥膜衣片，除去包衣 后顯白色或類白色本品為溥膜衣片，除去包衣 后顯白色或類白色鑒別HPLC法（中國藥典 2010 年版二部附錄V D）供試品溶液中沃諾拉贊峰 保留時間應(yīng)與對照品溶液 中沃諾拉贊峰保留時間一 致供試品溶液中沃諾拉

3、贊峰 保留時間應(yīng)與對照品溶液 中沃諾拉贊峰保留時間一 致有關(guān)物質(zhì)HPLC法（中國藥典 2010 年版二部附錄V D）雜質(zhì)I :不得過0.4%、 雜質(zhì)n :不得過0.4%、 雜質(zhì)川：不得過0.4%、 雜質(zhì)IV :不得過0.4%、 雜質(zhì)V :不得過0.4%、 雜質(zhì)W :不得過0.4%、 其他單雜：不得過 0.4%、 其他總雜：不得過1.5%雜質(zhì)I :不得過0.5%、 雜質(zhì)n :不得過0.5%、 雜質(zhì)川：不得過0.5%、 雜質(zhì)V :不得過0.5%、 雜質(zhì)V :不得過0.5%、 雜質(zhì)W :不得過0.5%、 其他單雜：不得過 0.5%、 其他總雜：不得過 2.0%吡啶-3-磺酸HPLC法（中國藥典 20

4、10 年版二部附錄V D）不得過0.4%不得過0.5%含量均勻度含量均勻度檢查法（中國藥 典2010年版二部附錄X E）應(yīng)符合規(guī)定應(yīng)符合規(guī)定溶出度溶出度測定法（中國藥典2010年版二部附錄X C第 二法）為0%初5%微生物限度微生物限度檢查法（中國藥 典2010年版二部附錄幻 J）細(xì)菌數(shù)不得過1000cfu/g ; 霉菌和酵母菌數(shù)不得過 100cfu/g ;大腸埃希菌不得 檢出/g細(xì)菌數(shù)不得過 1000cfu/g ; 霉菌和酵母菌數(shù)不得過 100cfu/g ;大腸埃希菌不得 檢出/g含量HPLC法（中國藥典 2010 年版二部附錄V D）含(C17H16FN3SO2)應(yīng)為標(biāo)示量的 93.0%1

5、07.0%含(C17H16FN3SO2)應(yīng)為標(biāo)示量的 90.0%110.0%3.2.P.5.2分析方法3.2. P.5.2.1 性狀檢查方法：感觀具體試驗(yàn)操作：取本品，觀察其外觀性狀。限度：本品應(yīng)為薄膜衣片，除去包衣后顯白色或類白色。3.2. P.5.2.2 鑒別檢查方法：高效液相色譜法（中國藥典2010年版二部附錄V D）儀器與用具：高效液相色譜儀、十八烷基鍵合硅膠柱（5卩m 250m/ 4.6mm）、電子 分析天平、容量瓶、移液管、燒杯，PH計。試藥與試劑：磷酸二氫鉀、三乙胺、甲醇、水。色譜條件：流動相：0.05mol/l磷酸二氫鉀溶液（三乙胺調(diào) pH值至7.2）-甲醇（52:48）流速：

6、1.0ml/min溶劑：流動相檢測器：紫外檢測器波長：230nm色譜柱：十八烷基鍵合硅膠柱（5卩m 250mrX 4.6mm）具體試驗(yàn)操作：在含量測定項(xiàng)下記錄的色譜圖中，比較供試品溶液中沃諾拉贊峰與 對照品溶液中沃諾拉贊峰的保留時間。限度：供試品溶液中沃諾拉贊峰與對照品溶液中沃諾拉贊峰保留時間應(yīng)一致。3.2. P.5.2.3 檢查3.2. P.5.2.3.1 有關(guān)物質(zhì)檢查方法：高效液相色譜法（中國藥典 2010年版二部附錄V D）儀器與用具：高效液相色譜儀、十八烷基鍵合硅膠柱（5卩m 250m/ 4.6mm）、電子 分析天平、容量瓶、移液管、燒杯，PH計。試液與試藥：磷酸二氫鉀、三乙胺、甲醇、

7、水。試驗(yàn)條件：十八烷基鍵合硅膠柱（5卩m 250m/ 4.6mm）;紫外檢測器（檢測波長為230nm）;流動相：0.05mol/L的磷酸二氫鉀緩沖液（用三乙胺調(diào)節(jié) pH值至7.2 ）-甲醇（52： 48）為流動相A，甲醇為流動相B，按下表梯度進(jìn)行洗脫；溶劑：流動相A ；流速：1.0ml/min。梯度如下表：時間（分鐘）流動相A （ %）流動相B （ %）01000231000452080501000601000具體試驗(yàn)操作：取本品細(xì)粉適量（約相當(dāng)于沃諾拉贊25mg）,精密稱定，置50ml量瓶中，加流動相A適量，振搖，使充分溶解，加流動相 A稀釋至刻度，搖勻，濾過， 取續(xù)濾液作為供試品溶液；精密

8、量取適量，加流動相A定量稀釋制成每1ml中約含沃諾 拉贊2.5 的溶液，作為對照溶液。分別取雜質(zhì)I、U、M、W、V、切工作對照品各 適量，精密稱定，加流動相 A溶解并稀釋制成每1ml中含各雜質(zhì)均約為2.5 g的溶液， 作為雜質(zhì)對照品溶液。取富馬酸沃諾拉贊工作對照品及雜質(zhì)工作對照品各適量，加流動 相A溶解并稀釋制成每1ml中約含沃諾拉贊0.5mg及各雜質(zhì)均為2.5測的混合溶液，作 為系統(tǒng)適用性溶液。照高效液相色譜法（中國藥典2010年版二部附錄V D）試驗(yàn)，用十八烷基鍵合硅膠為填充劑，以 0.05mol/L的磷酸二氫鉀緩沖液（用三乙胺調(diào)節(jié) pH值 至7.2）-甲醇（52： 48）為流動相A，甲醇

9、為流動相B,按上表梯度進(jìn)行洗脫，檢測波 長為230nm。取系統(tǒng)適用性溶液201注入液相色譜儀，記錄色譜圖，雜質(zhì)川、I、沃 諾拉贊、U、W、V、W依次出峰，理論板數(shù)按沃諾拉贊峰計算應(yīng)不低于5000,且沃諾拉贊峰與相鄰雜質(zhì)峰的分離度應(yīng)符合要求。精密量取供試品溶液、對照溶液與雜質(zhì)對照 品溶液各20卩，分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖計算公式：已知雜質(zhì)I、U、M、已知雜質(zhì)Ax漢Wx汽Px漢V漢平均片重% x x x 100 %As漢W漢Vx漢標(biāo)示量（Ax為供試品溶液中已知雜質(zhì)的峰面積， As為對照品溶液中已知雜質(zhì)的峰面積，Wx為已知雜質(zhì)工作對照品的稱樣量，Px為已知雜質(zhì)工作對照品含量， V為已知雜質(zhì)對照

10、品溶液的稀釋體積，V為供試品溶液的稀釋體積， W為供試品的稱樣量）其他單藐二厶 0.5%At（Ai為供試品溶液中其他單個未知雜質(zhì)的峰面積，At為對照溶液主峰面積）其他總雜八總- A丁 0.5%（A總為供試品溶液中所有峰的峰面積和,A主為供試品溶液中沃諾拉贊的峰面積,a Ax為供試品溶液中已知雜質(zhì)的峰面積之和,At為對照溶液中沃諾拉贊的峰面積）限度：供試品溶液色譜圖中如顯雜質(zhì)峰（溶劑峰及富馬酸峰除外），雜質(zhì)I、U、按外標(biāo)法以峰面積計算，不得大于標(biāo)示量的0.5%;其他單個未知雜質(zhì)峰面積不得大于對照溶液的主峰面積（0.5%）;其他雜質(zhì)峰面積的和不得大于對照溶液 的主峰面積的4倍（2.0%）。3.2.

11、 P.5.2.3.2 吡啶-3-磺酸檢查方法：高效液相色譜法（中國藥典 2010年版二部附錄V D）儀器與用具：高效液相色譜儀、十八烷基鍵合硅膠柱（5卩m 250mr 4.6mm）、電子 分析天平、容量瓶、移液管、燒杯，PH計。試液與試藥：磷酸二氫鉀、磷酸、甲醇、水。試驗(yàn)條件：十八烷基鍵合硅膠柱（5卩m 250mrH 4.6mm）;紫外檢測器（檢測波長為261 nm）;流動相：0.01mol/L的磷酸二氫鉀溶液（用磷酸調(diào)節(jié)pH值至3.0）為流動 相A，甲醇為流動相B，按下表梯度進(jìn)行洗脫；溶劑：流動相A;流速：1.0ml/min。梯度如下表:時間（分鐘）流動相A （ %）流動相B （%）0100

12、0710007.11090910909.11000201000具體試驗(yàn)操作：取本品細(xì)粉適量（約相當(dāng)于沃諾拉贊25mg），精密稱定，置50ml量瓶中，加流動相A適量，振搖，使充分溶解，加流動相 A稀釋至刻度，搖勻，濾過， 取續(xù)濾液作為供試品溶液。另取雜質(zhì)工作對照品適量，精密稱定，加流動相A溶解并 稀釋制成每1ml中約含吡啶-3-磺酸2.5 的溶液，作為對照品溶液。照高效液相色譜法（中國藥典2010年版二部附錄V D）試驗(yàn)，用十八烷基鍵合硅膠為填充劑，以0.05mol/L 的磷酸二氫鉀溶液（用磷酸調(diào)節(jié) pH值至3.0）為流動相A，甲醇為流動相B,按上表梯 度進(jìn)行洗脫，檢測波長為261 nm。取對照

13、品溶液、供試品溶液各 20注入液相色譜儀， 記錄色譜圖，計算公式：“亠”寸厶A 匯W P 小心平均片重吡啶 -3 -磺酸 = W匕 V 均 100 %As漢W漢Vx漢標(biāo)示量（Ax為供試品溶液中吡啶-3-磺酸的峰面積，As為對照品溶液中吡啶-3-磺酸的峰面積, Wx為雜質(zhì)工作對照品的稱樣量，Px為雜質(zhì)工作對照品含量，Vx為吡啶-3-磺酸對照 品溶液的稀釋體積，V為供試品溶液的稀釋體積， W為供試品的稱樣量）限度：供試品溶液色譜圖中如顯與對照品溶液相對應(yīng)的雜質(zhì)峰，按外標(biāo)法以峰面積 計算不得大于標(biāo)示量的0.5%。3.2. P.5.2.3.3 溶出度檢查方法：溶出度測定法（中國藥典 2010年版二部附

14、錄X C第二法）高效液相色譜法（中國藥典2010年版二部附錄V D）儀器與用具：溶出儀、溫度計、高效液相色譜儀、電子分析天平、十八烷基鍵合硅膠柱（5 m 250mrH 4.6mm）、容量瓶、移液管、燒杯， PH計。試液與試藥：鹽酸、磷酸二氫鉀、三乙胺、甲醇、水。試驗(yàn)條件：十八烷基鍵合硅膠柱（5 m 250mrH4.6mm）;紫外檢測器（檢測波長為230nm）; 流動相：0.05mol/l磷酸二氫鉀溶液（三乙胺調(diào)pH值至7.2）-甲醇（52:48）;溶劑：pH1.0鹽酸溶液；流速：1.0ml/min。具體試驗(yàn)操作：取本品，照溶出度測定法（中國藥典 2010年版二部附錄X C第二 法），以pH1.

15、0鹽酸溶液900ml為溶出介質(zhì)，轉(zhuǎn)速為每分鐘50轉(zhuǎn)，依法操作，經(jīng)30分 鐘時，取溶液適量濾過，精密量取續(xù)濾液適量，用溶出介質(zhì)定量稀釋成每 1ml中約含沃諾拉贊11的溶液，作為供試品溶液；另取富馬酸沃諾拉贊工作對照品適量，用溶出 介質(zhì)溶解并定量稀釋制成每1ml中約含沃諾拉贊11舊的溶液，作為對照品溶液，精密 量取供試品溶液與對照品溶液各 20卩，照含量測定項(xiàng)下的色譜條件測定， 計算每片的溶出量計算公式：溶出量共M對丁對.7485血100%A寸匯V對漢X（A供為供試品溶液的主峰面積；A對為對照品溶液主峰面積；M對為對照品的稱樣 量，mg； T對為對照品的含量；V對為對照品溶液的稀釋體積；V供為供試

16、品溶液的稀釋 體積；X為標(biāo)示量，10mg或20mg）限度：不得低于標(biāo)示量的85%。3.2. P.5.2.3.4含量均勻度檢查方法：含量均勻度檢查法（中國藥典 2010年版二部附錄X E） 高效液相色譜法（中國藥典2010年版二部附錄V D）儀器與用具：高效液相色譜儀、電子分析天平、十八烷基鍵合硅膠柱（5卩m250mm 4.6mm）、容量瓶、移液管、燒杯， PH計。試液與試藥：磷酸二氫鉀、三乙胺、甲醇、水。試驗(yàn)條件：十八烷基鍵合硅膠柱（5卩m 250m 4.6mm）； 紫外檢測器（檢測波長為230nm）;流動相：0.05mol/l磷酸二氫鉀溶液（三乙胺調(diào)pH值至7.2）-甲醇（52:48）；溶劑

17、：流動相；流速：1.0ml/min。具體試驗(yàn)操作:供試品溶液：取本品1片，置100ml量瓶（10mg規(guī)格）或200ml量瓶（20mg規(guī)格）中, 加流動相適量，振搖，使充分溶解，用流動相稀釋至刻度，搖勻，濾過，精密量取續(xù)濾 液5ml，置50ml量瓶中，用流動相稀釋至刻度，搖勻，即得。對照品溶液：取富馬酸沃諾拉贊工作對照品適量（約相當(dāng)于沃諾拉贊 10mg），精密 稱定，置100ml量瓶中，加流動相溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密量取 5ml，置50ml量瓶 中，用流動相稀釋至刻度，搖勻，即得。精密量取供試品溶液和對照品溶液各 20卩，分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖。按10片中沃諾拉贊的含量外標(biāo)法以峰面

18、積分別計算每片中沃諾拉贊的含量。依法測定計算公式：含量（%）=W對 P寸0.7485 A樣V樣A對V對標(biāo)示量100%（W對分別為對照品的稱樣量，mg； P對為對照品的含量；A樣、A對分別為供試品、 對照品溶液中沃諾拉贊的峰面積；V樣、V對分別為供試品溶液、對照品溶液的稀釋體積）分別測定每片以標(biāo)示量為100的相對含量X，求其均值X和標(biāo)準(zhǔn)差S以及標(biāo)示量與均值之差的絕對值A(chǔ) :如A 1.80115.0，則供試品的含量均勻度符合規(guī)定；若A S 15.0，則不符合規(guī)定；若A 1.80S 15.0，且A 115.0，則應(yīng)另取20支復(fù)試，根據(jù)初、復(fù)試結(jié)果，計算30支的均值X、標(biāo)準(zhǔn)差S和標(biāo)示量與均值之差的絕對

19、值 A :如A 1.45115.0，則供試品的含量均勻度符合規(guī)定；若 A 1.45S 15.0，貝U不符合規(guī)定其中: X -Xn -1，A=100-X限度：應(yīng)符合規(guī)定。3.2. P.5.2.3.5微生物限度1. 試液及培養(yǎng)基：營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基、營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基、玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基、膽鹽乳糖培養(yǎng)基、MUG培養(yǎng)基、pH7.0氯化鈉-蛋白胨緩沖液、0.9%氯化鈉溶液。2. 儀器與用具：智能生化培養(yǎng)箱、霉菌培養(yǎng)箱、電動吸引器、薄膜過濾器等。3. 具體試驗(yàn)操作：用平皿法，依法檢查（中國藥典2010年版二部附錄幻J）o（1）細(xì)菌、霉菌及酵母菌：供試品配制：按中國藥典（2010年版二部）微生物限度檢查法（附錄X

20、I J）的規(guī)定, 稱取供試品10g，加pH 7.0的無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液至100ml，混勻，靜置10min， 取上部澄清液體作為1： 10供試液，備用。直接接種法：取1:10供試品每皿1.0ml，分別加入1ml約含50100cfu/m15株試驗(yàn) 菌。立即傾注瓊脂培養(yǎng)基1520ml，每株菌平行制備2個平皿，待凝固后置規(guī)定溫度 培養(yǎng)35天觀察結(jié)果，測定其菌數(shù)。菌液組測定試驗(yàn)所加入試驗(yàn)菌的菌數(shù)。供試品對照組：取1:10供試液1ml，按試驗(yàn)組供試液制備方法和菌落計數(shù)方法測定其菌數(shù)。（2）控制菌的檢查法大腸埃希菌：試驗(yàn)組取1： 10供試液10ml，分別加入100ml、200ml的膽鹽乳糖培 養(yǎng)基中，

21、加入10100cfu/ml試驗(yàn)菌，35-37E培養(yǎng)18-24h;取培養(yǎng)液0.2ml，接種至 5mlMUG培養(yǎng)管內(nèi)，培養(yǎng)5h與24h時，置紫外燈366nm處觀察，然后沿培養(yǎng)基管壁加 入數(shù)滴靛基質(zhì)試液。陰性菌對照組：取1: 10供試液10ml，分別加入100ml、200ml的膽鹽乳糖培養(yǎng)基 中，加入10100cfu/ml的金黃色葡萄球菌，同試驗(yàn)組方法進(jìn)行試驗(yàn)。于5、24h在366nm紫外光下觀察，同時用未接種的 MUG培養(yǎng)基作本底對照。在 紫外光下若管內(nèi)培養(yǎng)物呈現(xiàn)藍(lán)白色熒光，為MUG陽性；不呈現(xiàn)熒光，為MUG陰性。觀察后，沿培養(yǎng)管的管壁加人數(shù)滴靛基質(zhì)試液，液面呈玫瑰紅色，為靛基質(zhì)陽性；呈 試劑本色

22、，為靛基質(zhì)陰性。本底對照的 MUG和靛基質(zhì)試驗(yàn)應(yīng)為陰性。如 MUG陽性、 靛基質(zhì)陽性，判檢出大腸埃希菌；如 MUG陰性、靛基質(zhì)陰性，判未檢出大腸埃希菌。限度：細(xì)菌數(shù)不得過1000cfu/g ;霉菌和酵母菌數(shù)不得過100cfu/g;大腸埃希菌不 得檢出/g3.2. P.5.2.4含量測定檢查方法：高效液相色譜法（中國藥典2010年版二部附錄V D）儀器與用具：高效液相色譜儀、電子分析天平、十八烷基鍵合硅膠柱（5卩m250mm 4.6mm）、容量瓶、移液管、燒杯、 PH計。試藥與試劑：磷酸二氫鉀、三乙胺、甲醇、水。色譜條件：流動相：0.05mol/l磷酸二氫鉀溶液（三乙胺調(diào) pH值至7.2）-甲醇

23、（52:48）流速：1.0ml/min檢測器：紫外檢測器波長：230nm 溶劑：流動相色譜柱：十八烷基鍵合硅膠柱（5卩m 250m 4.6mm）具體試驗(yàn)操作：取本品20片，精密稱定，研細(xì)，精密稱取適量（約相當(dāng)于沃諾拉 贊10mg），置100ml量瓶中，加流動相適量，振搖，使充分溶解，用流動相稀釋至刻 度，搖勻，濾過，精密量取續(xù)濾液 5ml，置50ml量瓶中，用流動相稀釋至刻度，搖勻， 作為供試品溶液。精密量取20H注入液相色譜儀，記錄色譜圖；另取富馬酸沃諾拉贊 工作對照品適量，同法測定，按外標(biāo)法以峰面積計算，即得。計算公式：含量（）=A樣 M對 T對 0.7485 V樣 M100%（A樣為供試

24、品溶液中主峰的面積；A對為對照品溶液中主峰的面積；M對為對照品 的稱樣量，mg； M樣為供試品的稱樣量，mg； T對為對照品的含量；V對為對照品溶液的 稀釋體積；V樣為供試品溶液的稀釋體積；M為平均片重，mg； X為標(biāo)示量，10或20mg） 限度：應(yīng)為標(biāo)示量的90%110%。3.2. P.5.3分析方法的驗(yàn)證按照化學(xué)藥物質(zhì)量控制分析方法驗(yàn)證技術(shù)指導(dǎo)原則、化學(xué)藥物質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)建立 的規(guī)范化過程技術(shù)指導(dǎo)原則、化學(xué)藥物雜質(zhì)研究技術(shù)指導(dǎo)原則等以及中國藥典 2010年版二部附錄中有關(guān)的指導(dǎo)原則提供以下方法學(xué)驗(yàn)證資料。3.2. P.5.3.1分析方法學(xué)驗(yàn)證用樣品批號規(guī)格批量（片）試制日期試制地點(diǎn)XA00910

25、mg1552015.1.30山東富創(chuàng)醫(yī)藥科技有限公司XS15030110mg36402015.3.72015030110mg364802015.3.14 2015.3.152015030210mg361602015.3.16 2015.3.172015030310mg368402015.3.17 2015.3.18XB00120mg1452015.2.28XS15030220mg18002015.3.8 2015.3.92015030420mg184602015.3.18 2015.3.192015030520mg185202015.3.19 2015.3.202015030620mg1856

26、02015.3.20 2015.3.213.2. P.5.3.2有關(guān)物質(zhì)方法學(xué)驗(yàn)證3.2. P.5.3.2.1有關(guān)物質(zhì)檢查方法學(xué)驗(yàn)證總結(jié)試驗(yàn)項(xiàng)目驗(yàn)證結(jié)果條件選擇C18柱，以0.05mol/L的磷酸二氫鉀緩沖液 （用三乙胺調(diào)節(jié) pH值至7.2）-甲醇（52:48） 為流動相A，甲醇為流動相 B，進(jìn)行梯度洗脫；紫外檢測器，檢測波長為230nm。系統(tǒng)適用性主峰及各已知雜質(zhì)與相鄰雜質(zhì)分離良好，理論板數(shù)符合要求。專屬性酸、堿、高溫、氧化、光照降解雜質(zhì)均與主峰分離良好，各已知雜質(zhì)與相鄰峰分離良 好，主峰及各已知雜質(zhì)峰純度均合格；輔料及其降解產(chǎn)物和梯度峰不干擾本品有關(guān)物 質(zhì)的測定。檢測限沃諾拉贊檢測限為 0

27、.18ng ;雜質(zhì)I的檢測限為 0.18ng ;雜質(zhì)n的檢測限為 0.18ng ； 雜質(zhì)川的檢測限為 0.17ng ;雜質(zhì)W的檢測限為 0.18ng ;雜質(zhì)V的檢測限為 0.17ng ； 雜質(zhì)W的檢測限為 60ng。定量限沃諾拉贊定量限為0.60ng ;雜質(zhì)I的定量限為0.59ng ;雜質(zhì)n的定量限為 0.59ng ；雜質(zhì)川的定量限為 0.57ng ;雜質(zhì)W的定量限為0.61 ng ;雜質(zhì)V的定量限為 0.55ng ;雜質(zhì)W的定量限為 2.00 ng。線性富馬酸沃諾拉贊在 0.0992.962用/ml線性良好，相關(guān)系數(shù)R2=0.9999雜質(zhì)I在0.0992.962 馮/ml線性良好，相關(guān)系數(shù)R

28、2=0.9995雜質(zhì)H在0.0982.943 馮/ml線性良好，相關(guān)系數(shù)R2=0.9999雜質(zhì)川在0.0942.831 馮/ml線性良好，相關(guān)系數(shù)R2=0.9999雜質(zhì)在0.1023.061 馮/ml線性良好，相關(guān)系數(shù)R2=0.9999雜質(zhì)V在0.0922.752 馮/ml線性良好，相關(guān)系數(shù)R2=0.9994雜質(zhì)W在0.13.0（g/ml線性良好，相關(guān)系數(shù)R2=0.9997準(zhǔn)確度雜質(zhì)I回收率在 98.16%100.46%范圍內(nèi)，準(zhǔn)確度良好，RSD=0.72%雜質(zhì)H回收率在 98.46%100.69%范圍內(nèi)，準(zhǔn)確度良好，RSD=0.73%雜質(zhì)川回收率在 98.22%99.62%范圍內(nèi)，準(zhǔn)確度良好

29、，RSD=0.44%雜質(zhì)回收率在 98.49%100.98%范圍內(nèi)，準(zhǔn)確度良好，RSD=0.82%雜質(zhì)V回收率在 98.26%100.17%范圍內(nèi)，準(zhǔn)確度良好，RSD=0.70%雜質(zhì)W回收率在 98.07%100.24%范圍內(nèi)，準(zhǔn)確度良好，RSD=0.79%精密度重復(fù)性試驗(yàn)：測得雜質(zhì)I含量RSD-1.74%，雜質(zhì)H含量 RSD-2.08%，雜質(zhì)川含量 RSD-1.91%，雜質(zhì)W含量 RSD-1.86%，測得雜質(zhì)V含量 RSD=2.19%，雜質(zhì)W含量 RSD=1.61%，其他單雜含量 RSD=5.83%，其他總雜含量 RSD=5.19%。 中間精密度試驗(yàn)：測得雜質(zhì)I含量RSD-1.42%，雜質(zhì)H

30、含量 RSD-1.49%，雜質(zhì)川含量 RSD-2.23%，雜質(zhì)W含量 RSD-1.40%，測得雜質(zhì)V含量 RSD=1.63%， 雜質(zhì)W含量 RSD=1.32%，其他單雜含量 RSD=5.18%，其他總雜含量 RSD=5.40%。溶液穩(wěn)定性供試品溶液、對照溶液、雜質(zhì)對照品溶液室溫放置12小時內(nèi)溶液穩(wěn)定性良好。耐用性采用不冋色譜柱，不冋的流動相比例、pH、鹽濃度等檢查本品的有關(guān)物質(zhì)，各已知雜質(zhì)的分離度均符合要求。各已知雜質(zhì)測的含量的RSD均小于10%。3.2.P.5.3.2.2有關(guān)物質(zhì)檢查方法學(xué)驗(yàn)證內(nèi)容1儀器設(shè)備島津LC-20AT高效液相色譜儀、島津 SPD-M20A二極管陣列檢測器島津LC-20

31、AT高效液相色譜儀、島津 SPD-M20A紫外檢測器2、色譜條件選擇及溶液配制2.1色譜條件選擇 同原料藥采用十八烷基鍵合硅膠為填充劑， 以0.05mol/L的磷酸 二氫鉀溶液（用三乙胺調(diào)節(jié)pH值至7.2）-甲醇（52:48）為流動相A，甲醇為流動相B， 進(jìn)行梯度洗脫；紫外檢測器，檢測波長為 230nm；流速為1.0ml/min。梯度表如下：時間（分鐘）流動相A （%）流動相B （%）010002310004520805010006010002.2溶液配制供試品溶液：取本品細(xì)粉適量（約相當(dāng)于沃諾拉贊25mg）,精密稱定，置 50ml量瓶中，加流動相A適量，振搖，使充分溶解，加流動相 A稀釋至刻

32、度，搖勻，濾過， 取續(xù)濾液作為供試品溶液。對照溶液：精密量取供試品溶液適量，加流動相A定量稀釋制成每1ml中約含沃諾 拉贊2.5 yg勺溶液，作為對照溶液。分別取雜質(zhì)I、U、M、W、V、切工作對照品各適量，精密稱定，加流動相A溶解并稀釋制成每1ml中含各雜質(zhì)均約為2.5卩宙勺溶液，作為雜質(zhì)對照品溶液。系統(tǒng)適用性溶液：取富馬酸沃諾拉贊工作對照品及雜質(zhì)工作對照品各適量，加流動 相A溶解并稀釋制成每1ml中約含沃諾拉贊0.5mg及各雜質(zhì)均為2.5卩的混合溶液，作 為系統(tǒng)適用性溶液。3、破壞性試驗(yàn)破壞試驗(yàn)溶液的配制與處理:溶液稀釋步驟處理方法溶劑輔料空白輔料 101.23mg 20ml無降解處理未破壞

33、原料 13.43mg+輔料 103.61mg 20ml無降解處理高溫破壞原料 13.51mg+輔料 101.77mg 20ml水浴100C加熱13小時高溫空白輔料 101.82mg 20ml水浴100C加熱13小時光照破壞原料 13.44mg+輔料 105.01mg 20ml光照箱4500LX照射45小時光照空白輔料 103.66mg 20ml光照箱4500LX照射45小時酸破壞原料 13.39mg+輔料 102.57mg 20ml1mol/L鹽酸2ml，室溫放置42小時酸空白輔料 100.94mg 20ml1mol/L鹽酸2ml，室溫放置42小時堿破壞原料 13.42mg+輔料 100.85

34、mg 20ml1mol/L氫氧化鈉溶液1ml，室溫放置42小時堿空白輔料 104.05mg 20ml1mol/L氫氧化鈉溶液1ml，室溫放置42小時氧化破壞原料 13.25mg+輔料 104.44mg 20ml高氯酸1ml，室溫放置17小時氧化空白輔料 103.38mg 20ml高氯酸1ml，室溫放置17小時取上述溶液各20分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖，結(jié)果見表3.2.P.5.3.2-1（圖3.2.P.5.3.2-113,制劑的質(zhì)量控制一第 6577頁）表3.2.P.5.3.2-1富馬酸沃諾拉贊片有關(guān)物質(zhì)檢查破壞試驗(yàn)結(jié)果名稱沃諾拉贊總峰面積主峰面積/%物料平衡/%分離度峰純度未破壞4.770

35、合格2246747099.924100高溫破壞1.652合格2234047196.52098.85光照破壞1.678合格2234663197.64699.39酸破壞2.189合格2161695791.01296.50堿破壞2.236合格2119482394.78794.41氧化破壞4.642合格2164593189.30997.65計算公式：物料平衡%=（破壞后總峰面積/濃度）/ （破壞前總峰面積/濃度）結(jié)論：溶劑及輔料均不干擾本品的測定，各破壞條件下主峰與相鄰雜質(zhì)峰的分離度 符合要求，主峰未檢出不純物，樣品破壞前后物料守恒，故該方法測定本品有關(guān)物質(zhì)的 專屬性良好。4、定量限試驗(yàn) 同原料藥，詳

36、見3.2.S.4.32表3.2.P.5.3.2-2富馬酸沃諾拉贊及已知相關(guān)雜質(zhì)定量限試驗(yàn)結(jié)果名稱峰面積平均RSD%定量限/ng123456雜質(zhì)川15901462154616621653179016176.940.57雜質(zhì)I24262707269527072996235926488.660.59沃諾拉贊30593252310030473340320331673.710.60雜質(zhì)n4510510851094607468256914951.178.950.59雜質(zhì)W2579284424362198258523442497.678.980.61雜質(zhì)V40124711440943074079446043

37、29.675.960.55雜質(zhì)w6520646367526003668764966486.834.062.00結(jié)論：此法靈敏度較高，在限度范圍內(nèi)可用于富馬酸沃諾拉贊及已知雜質(zhì)定量檢查。5、檢測限試驗(yàn) 同原料藥，詳見3.2.S.4.32表3.2.P.5.3.2-3富馬酸沃諾拉贊及已知相關(guān)雜質(zhì)檢測限試驗(yàn)結(jié)果名稱雜質(zhì)川雜質(zhì)I沃諾拉贊雜質(zhì)n雜質(zhì)W雜質(zhì)V雜質(zhì)WC檢測限ng/ml8.498.898.958.839.188.2630.00檢測限/ng0.170.180.180.180.180.170.60結(jié)論：此法靈敏度較高，可有效檢出富馬酸沃諾拉贊及已知雜質(zhì)6、線性關(guān)系試驗(yàn)同原料藥，詳見3.2.S.4.3

38、2表3.2.P.5.3.2-4富馬酸沃諾拉贊及已知相關(guān)雜質(zhì)線性試驗(yàn)結(jié)果名稱濃度范圍（pg/ml）線性方程R2沃諾拉贊0.099 2.962A=93720C-842.280.9999雜質(zhì)I0.099 2.962A=94476C-11530.9995雜質(zhì)n0.098 2.943A=115542C-2715.90.9999雜質(zhì)川0.094 2.831A=63504C-14470.9999雜質(zhì)W0.102 3.061A=90488C-1954.70.9999雜質(zhì)V0.092 2.752A=70947C-3387.40.9994雜質(zhì)W0.1 3.0A=100700C-5469.80.99977、精密度試

39、驗(yàn)7.1重復(fù)性試驗(yàn)取本品（批號：XS150301,規(guī)格：10mg） 100片，精密稱定其重量，求得平均片重為115.23mg。將上述100片樣品置于研缽中研細(xì)，混勻，作為供試品粉末。分別取雜質(zhì)I、U、M、W、V、切工作對照品各適量，精密稱定，加流動相A溶解并稀釋制成每1ml中含各雜質(zhì)均約為2.5yg的溶液，作為雜質(zhì)對照品溶液。取供試品粉末約11.5g，取雜質(zhì)I、U工作對照品各約 7.0mg，雜質(zhì)川工作對照品 約8.0mg,雜質(zhì)W工作對照品各約 5.0mg，雜質(zhì)V工作對照品各約 5.3mg，雜質(zhì)切工作 對照品約6.0mg，混合均勻，作為供試品。取供試品適量，加流動相A充分溶解，再加流動相A稀釋制

40、成每1ml中約含沃諾拉贊0.5mg的溶液，濾過，取續(xù)濾液作為供試 品溶液；精密量取供試品溶液適量，加流動相A稀釋制成每1ml中約含沃諾拉贊2.5yg 的溶液，作為對照溶液。分別精密量取 20卩，注入液相色譜儀，記錄色譜圖。按外標(biāo)法 計算各已知雜質(zhì)的含量；未知單雜以自身對照法計算其含量。重復(fù)測定6次，考察精密度。試驗(yàn)結(jié)果見表3.2.P.5.3.2-5 （圖3.2.P.5.3.2-14-31,制劑的質(zhì)量控制一第 7895頁）表3.2.P.5.3.2-5富馬酸沃諾拉贊片有關(guān)物質(zhì)檢查重復(fù)性試驗(yàn)結(jié)果序號123456平均值RSD%雜質(zhì)1( %)0.5010.5060.507P 0.4960.511 10.

41、4870.5011.74雜質(zhì)n（ %）0.5060.4960.4910.5060.5160.4890.5012.08雜質(zhì)川（%）0.5070.5040.5190.5110.5140.4910.5081.91雜質(zhì)w（ %）:0.5080.4990.498P 0.4900.4870.4830.494r 1.86雜質(zhì)V( %)0.5070.4950.4890.4880.5160.5020.5002.19雜質(zhì)W（ %）0.5030.5060.490P 0.4850.497 10.5000.497r 1.61其他單雜（%）0.0200.0200.0220.0220.0200.0190.0215.83其他

42、總雜（%）0.0280.0280.0310.0300.0270.0280.0295.19結(jié)論：試驗(yàn)結(jié)果表明，此法重復(fù)性良好。7.2中間精密度試驗(yàn)取重復(fù)性項(xiàng)下供試品，由不同試驗(yàn)人員分別在不同日期、不同儀器檢查其有關(guān)物質(zhì)，試驗(yàn)結(jié)果見表3.2.P.5.3.2-6 （圖3.2.P.5.3.2-3249制劑的質(zhì)量控制一第96113頁）表3.2.P.5.3.2-6富馬酸沃諾拉贊片有關(guān)物質(zhì)檢查中間精密度試驗(yàn)結(jié)果序號123456平均值RSD%雜質(zhì)1( %)0.50廠0.5060.507P 0.496 :0.5110.4870.5011.420.4910.5040.5080.5030.4980.502雜質(zhì)n（

43、%）0.5060.4960.4910.5060.5160.4890.5031.490.5030.5070.5050.5020.5080.503雜質(zhì)川（%）0.5070.5040.5190.5110.5140.4910.5002.230.484 :0.4940.493P 0.4890.5060.493雜質(zhì)w（ %）0.5080.4990.4980.4900.4870.4830.4951.400.490 :0.4970.490P 0.499 10.5000.498雜質(zhì)v（ %）0.5070.4950.4890.4880.5160.5020.5001.630.5020.4930.496P 0.496

44、 10.5050.505雜質(zhì)w（ %）0.5030.5060.4900.4850.4970.5000.4961.320.4880.5020.4960.4910.5010.496其他單雜（%）0.0200.0200.0220.0220.0200.0190.0215.180.0200.0210.0200.0220.0190.021其他總雜（%）0.0280.0280.0310.0300.0270.0280.0295.400.0260.0290.0280.0310.0270.029結(jié)論：此法檢查本品的有關(guān)物質(zhì)中間精密度良好。8、溶液穩(wěn)定性試驗(yàn)供試品溶液：取本品適量（約相當(dāng)于沃諾拉贊25mg），精密稱

45、定，置50ml量瓶中， 加流動相A適量，振搖，使充分溶解，加流動相 A稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾 液作為供試品溶液。對照溶液：精密量取供試品溶液適量，加流動相A定量稀釋制成每1ml中約含沃諾 拉贊2.5 yg勺溶液，作為對照溶液。分別取雜質(zhì)I、U、M、W、V、切工作對照品各適量，精密稱定，加流動相A溶解并稀釋制成每1ml中含各雜質(zhì)均約為2.5yg的溶液，作為雜質(zhì)對照品溶液。將上述各溶液于室溫下放置12小時，分別于0、3、& 9、12小時，精密量取20 yl 注入液相色譜儀，記錄色譜圖，以峰面積考察溶液穩(wěn)定性，結(jié)果見表3.2.P.5.3.2-79。（圖3.2.P.5.3.2-5064制劑的質(zhì)

46、量控制一第 114128頁）表3.2.P.532-7富馬酸沃諾拉贊片有關(guān)物質(zhì)檢查溶液穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果（供試品溶液）名稱/時間0h3h6h9h12h平均值RSD%未知雜質(zhì)14059370138863998428239855.39雜質(zhì)I100409532987895141047598884.03沃諾拉贊:4354665143546049434730264344392443434101434887500.13雜質(zhì)n2144421347218122210223923221264.74未知雜質(zhì)28351823676549349957886349.34表3.2.P.5.3.2-8富馬酸沃諾拉贊片有關(guān)物質(zhì)檢查

47、溶液穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果（對照溶液）名稱/時間0h3h6h9h12h平均值RSD%沃諾拉贊2235192245612241462242572242102241390.17表3.2.P.5.3.2-9富馬酸沃諾拉贊片有關(guān)物質(zhì)檢查溶液穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果（雜質(zhì)對照品溶液）峰面積/時間0h3h6h9h12h平均值RSD%雜質(zhì)I2323312324032327992325382300542320250.48雜質(zhì)n2505242507642511062512642501232507560.18雜質(zhì)川1546791543441533191536441542831540540.36雜質(zhì)w :222815 :222039

48、224030223597P 222471222990 10.37 :雜質(zhì)V1943491906411885701852351807211879032.77雜質(zhì)W2448022465392502332468582375312451931.92結(jié)論：供試品溶液、對照溶液、雜質(zhì)對照品溶液12h內(nèi)穩(wěn)定性良好。9、準(zhǔn)確性試驗(yàn)雜質(zhì)對照品溶液：分別取雜質(zhì)1（含量 73.14%）、U（含量72.46%）、川（含量 62.67%）、W（含量99.44%）、V （含量94.37%）、切（含量84.59%）工作對照品各 適量，精密稱定，加溶劑溶解并稀釋制成每 1ml中含各雜質(zhì)均約為2.5 yg勺溶液，作為 雜質(zhì)對照

49、品溶液。供試品溶液：取20140701批原料適量（約相當(dāng)于沃諾拉贊 25mg），精密稱定，置50ml量瓶中，加流動相A適量，使充分溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液;按外標(biāo)法計算各已知雜質(zhì)的百分含量表3.2.P.5.3.2-10富馬酸沃諾拉贊各已知雜質(zhì)的測定結(jié)果名稱雜質(zhì)I雜質(zhì)n雜質(zhì)川雜質(zhì)W雜質(zhì)V雜質(zhì)W測得含量%0.0150.031未檢出未檢出未檢出未檢出回收率溶液:1）取雜質(zhì)I、U工作對照品各約 11.0mg,雜質(zhì)川工作對照品約12.8mg,雜質(zhì)W工 作對照品各約8.0mg，雜質(zhì)V工作對照品各約8.5mg，雜質(zhì)切工作對照品約9.5mg，精 密稱定，置200ml量瓶中，加流動相A溶解并稀釋至

50、刻度，搖勻；精密量取 1ml，置 20ml量瓶中，取原料約13.36mg,精密稱定，置同一 20ml量瓶中，按處方比例加入輔 料，加流動相A溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為回收率（80%濃度）溶液。同法配制3 份。2）取雜質(zhì)I、U工作對照品各約 13.7mg,雜質(zhì)川工作對照品約16.0mg,雜質(zhì)W工 作對照品各約10.0mg,雜質(zhì)V工作對照品各約10.6mg,雜質(zhì)切工作對照品約11.8mg, 精密稱定，置200ml量瓶中，加流動相A溶解并稀釋至刻度，搖勻；精密量取 1ml，置 20ml量瓶中，取原料約13.36mg,精密稱定，置同一 20ml量瓶中，按處方比例加入輔 料，加流動相A溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為回收率（100%濃度）溶液。同法配制 3份。3）取雜質(zhì)I、U工作對照品各約 16.5mg,雜質(zhì)川工作對照品約19.1mg,雜質(zhì)W工 作對照品各約12.0mg，雜質(zhì)V工作對照品各約12.7mg,雜質(zhì)切工作對照品約14.2mg, 精密稱定，置200ml量瓶中，加流動相