脫毒苗培育PPT課件

1、2021/7/241脫毒苗培育2021/7/242一、病毒病對作物的危害一、病毒病對作物的危害 無性繁殖作物一旦感染病毒，代代相傳，體內(nèi)不斷積累，嚴(yán)重影響植株生育。病毒病不能采用殺菌劑和抗生素防治，生產(chǎn)上尚無法根治。 蕙蘭嵌紋病毒病Cymbidium Mosaic Virus一串紅病毒病 蘋果花葉病毒Apple mosaic virus 2021/7/243 脫毒苗指通過物理、化學(xué)、生物技術(shù)等方法去除已知某些特定通過物理、化學(xué)、生物技術(shù)等方法去除已知某些特定病毒的苗木病毒的苗木。 （1）脫毒苗只是相對而言脫毒苗只是相對而言，許多植株含有多種已知病毒及尚未鑒定的未知病毒，通過莖尖培養(yǎng)的幼苗，經(jīng)過

2、鑒定只能說出去了已知的主要病毒，因此稱之為“無特定病毒苗”更為合理。 （2）脫毒苗并不具有病毒病抗性脫毒苗并不具有病毒病抗性，在今后種苗繁育過程中有可能重新感染病毒病。馬鈴薯脫毒苗2021/7/244二、脫毒苗培育方法二、脫毒苗培育方法（一）熱處理脫毒（一）熱處理脫毒 1. 原理：病毒受熱以后不穩(wěn)定性，使病毒鈍化，失去活性，高溫可以延緩病毒擴散速度和抑制其增殖。 2. 方法：熱水浸泡-接穗在50熱水中浸泡數(shù)分鐘或數(shù)小時。 高溫空氣處理-旺盛生長植物在3340條件下生長發(fā)育，熱處理之后立即把莖尖切下來嫁接到無病砧木上。 3. 局限性：只對球狀、線狀病毒有效，對桿狀病毒不起作用。2021/7/24

3、5（二）莖尖培養(yǎng)脫毒（二）莖尖培養(yǎng)脫毒1. 原理u 病毒在植物體內(nèi)的分布是不均勻的。老葉片及成熟的組織和器官病毒含量較高，而幼嫩的及未成熟的組織或器官病毒含量較低，生長點（0.11.0 mm區(qū)域）則幾乎不含或含病毒很少。u 在植物體內(nèi)，病毒易于通過維管系統(tǒng)而移動，但在分生組織中不存在維管系統(tǒng)，病毒在細(xì)胞間移動的另一途徑是通過胞間連絲，但是速度很慢，難以追趕上活躍生長的莖尖。u 在旺盛分裂的分生細(xì)胞中，代謝活性很高，使病毒無法進(jìn)行復(fù)制。u 在分生組織中病毒鈍化系統(tǒng)比其它區(qū)域都具有更高的活性，因而分生組織不受侵染。u 在莖尖中存在高水平的內(nèi)源生長素，可以抑制病毒的增殖。 2021/7/2462.

4、方法（1）材料的準(zhǔn)備 一般說來，帶有葉原基的莖尖易于培養(yǎng)，成苗快，培養(yǎng)時間短，要獲得無病毒植株，理論上莖尖越小越好，實際應(yīng)用時，根據(jù)病毒種類不同切取0.11mm大小的生長點，即可獲得無病毒植株，外植體越小，培養(yǎng)難度越大，或者時間越長。2021/7/247（2）材料消毒 流水沖洗5 min-洗滌劑-流水沖洗30min-70%酒精35min-升汞810min-無菌水沖洗34次（3）莖尖分生組織分離 如果進(jìn)行普通莖尖培養(yǎng)，外植體形大些為好，一般切取0.51cm長的莖尖或整個芽；若進(jìn)行莖尖分生組織脫毒培養(yǎng)，外植體應(yīng)該盡量小些，通常在解剖鏡下剝掉細(xì)葉及葉原基，將生長點暴露，然后切取0.11mm長的部分作

5、為培養(yǎng)材料。2021/7/2483. 接種與培養(yǎng) 以MS培養(yǎng)基為基本培養(yǎng)基，White、B5、Morel等培養(yǎng)基也常用于莖尖培養(yǎng)，蔗糖濃度一般為3%，過高或過低會抑制生長，應(yīng)提高K+與NH4+含量，促進(jìn)莖尖生長。 細(xì)胞分裂素可促進(jìn)細(xì)胞分裂和分化，誘導(dǎo)不定芽形成，有助于解除頂端優(yōu)勢，促進(jìn)腋芽萌發(fā)。常用的有BA、KT，前者用于油菜、豌豆、菜心等蔬菜快繁，后者多用于萵苣。2021/7/249 生長素類物質(zhì)如IAA、IBA、NAA、2，4-D等具有促進(jìn)新梢生長的顯著作用，并可誘導(dǎo)外植體產(chǎn)生愈傷組織和生根。往往低濃度的生長素與細(xì)胞分裂素配合可以達(dá)到促進(jìn)芽增殖，提高繁殖效果的作用。 百合 MS+BA 0.

6、51.0mg/L+NAA 0.5mg/L 蘋果 MS+BA 0.51.0mg/L+GA3 0.10.5mg/L +IBA 0.20.5mg/L2021/7/2410（三）熱處理結(jié)合莖尖培養(yǎng)脫毒（三）熱處理結(jié)合莖尖培養(yǎng)脫毒（四）微體嫁接脫毒（四）微體嫁接脫毒 微體嫁接是組織培養(yǎng)與嫁接方法相結(jié)合來獲得無病毒苗木的一種技術(shù)。它是將0.10.2mm的莖尖作為接穗，嫁接到由試管中培養(yǎng)出來的無菌室生砧木上，繼續(xù)進(jìn)行試管培養(yǎng)，愈合成為完整的植株。（五）愈傷組織培養(yǎng)脫毒（五）愈傷組織培養(yǎng)脫毒（六）抗病毒藥劑脫毒（六）抗病毒藥劑脫毒-抗病毒醚抗病毒醚2021/7/2411三、脫毒苗鑒定方法三、脫毒苗鑒定方法（一

7、）指示植物法（一）指示植物法 利用病毒在其他植物上出現(xiàn)的癥狀特征，作為鑒定病毒種類的標(biāo)準(zhǔn)，這種專用于產(chǎn)生癥狀的寄主植物稱為指示植物。 指示植物分類：（1）接種后產(chǎn)生系統(tǒng)癥狀，并擴展到非接種部位；（2）只在接種部位產(chǎn)生局部病斑、壞死或褪綠環(huán)狀病斑。 指示植物要求：常年栽培，較長時間內(nèi)保持對病毒敏感性，易于接種。 常見的指示植物有莧色藜、千日紅和多種煙草。千日紅 Gomphrena globosa 煙草 Nicotiana tabacum2021/7/2412 方法：從待測植株上取13g幼葉，加入少量pH7.0的0.1mol/L磷酸緩沖液，研成勻漿，吸取少量涂抹在500600目金剛砂擦傷表皮的指示植物葉片上，5min后用清水沖洗葉面，將接種植物放在防蟲罩內(nèi)，2025條件下培養(yǎng)數(shù)天至數(shù)周后觀察癥狀。2021/7/2413（二）電鏡顯微檢測法（二）電鏡顯微檢測法 直接觀察病毒微粒的存在與否，以及病毒的大小、形態(tài)結(jié)構(gòu)和種類，可以顯示細(xì)胞與組織中病毒的精確定位。TMV桿狀病毒桿狀病毒2021/7/2414（三）抗血清鑒定法（三）抗血清鑒定法 植物病毒也是一種抗原，能引起動物產(chǎn)生抗體，由于不同病毒產(chǎn)生的抗血清（含有抗體的血清）都具有特異性，用特定病毒的抗血清拉鑒定病毒具有高度的專一性，但是制備抗原和免疫過程比較復(fù)雜。2021/7/2415（四）