UPLC_MSMS和HPLC_MSMS操作規(guī)程

1、AB SCIEX TRIPLE QUADTM 5500的PPG質(zhì)量準(zhǔn)確度校準(zhǔn)操作規(guī)程1、 前期準(zhǔn)備1、PPG稀釋溶液的準(zhǔn)備，對于5500系列采用的標(biāo)準(zhǔn)溶液：正離子模式：POS PPG 2E-7M；負(fù)離子模式：NEG PPG 3E-5M2、離子源的垂直旋鈕調(diào)至“5”位。3、用質(zhì)譜儀上的針泵式進(jìn)樣針吸取適量的PPG校準(zhǔn)液，檢查管路是否連接好。二、操作步驟 1、雙擊“Hardware Configuration”，激活“MS Only”。2、菜單欄切換到“Installation”項(xiàng)目。3、雙擊“Manual Turning”，打開手動(dòng)調(diào)諧界面。4、點(diǎn)擊“Open File”，選擇相對應(yīng)的采樣方法（

2、Q1 Pos PPGs .dam；Q3 Pos PPGs .dam；Q1 Neg PPGs.dam；Q3 Neg PPGs.dam），先正離子再負(fù)離子，先Q1調(diào)諧再Q(mào)3調(diào)諧，掃描速率依次為10、200、1000、2000Da/s，對應(yīng)MCA分別為 10、50、50、100 。5、點(diǎn)擊“Start Syringe Pump”，再點(diǎn)擊“Start”開始采集數(shù)據(jù)。6、將會(huì)在界面上出現(xiàn)采集到的質(zhì)譜圖，右鍵點(diǎn)擊右側(cè)質(zhì)譜圖區(qū)域，選擇“Open Date”。7、點(diǎn)擊工具欄中的“Calibration From Spectrum”。8、在彈出的菜單中選擇合適的校驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)，在“Standard”中選擇對應(yīng)的校準(zhǔn)溶

3、液，點(diǎn)擊“Start”開始校準(zhǔn)前的計(jì)算。9、第一個(gè)圖形代表的是此次校準(zhǔn)與理論值的質(zhì)量偏差，各點(diǎn)應(yīng)位于“0.1Da”線內(nèi)。若某質(zhì)量點(diǎn)超出了設(shè)定的范圍，則應(yīng)點(diǎn)擊“Update Mass Calibration”，更新那些偏離的質(zhì)量點(diǎn)的電場參數(shù)，使之落到“0.1Da”線內(nèi)。10、第二個(gè)圖形代表的是PPG校準(zhǔn)峰的半峰高寬度，各點(diǎn)應(yīng)位于“0.60.8”范圍內(nèi)。若某點(diǎn)質(zhì)譜峰半峰寬超出標(biāo)準(zhǔn)范圍，點(diǎn)擊界面上的“Advanced”按鈕，調(diào)節(jié)對應(yīng)的“Offset”電壓，使之合規(guī)。質(zhì)譜分辨率質(zhì)譜半峰寬（FHWM）Offset值增加提高減小Offset值降低降低增加11、第三個(gè)圖形代表的是此次校準(zhǔn)與上次校準(zhǔn)所有PPG

4、校準(zhǔn)點(diǎn)峰強(qiáng)度變化的百分比。14、待校準(zhǔn)完成后，點(diǎn)擊“Stop”停止進(jìn)樣，并滅活“Mass Only”。三、結(jié)束工作 針泵吸取50%甲醇水溶液，對管路進(jìn)行沖洗，23次即可。標(biāo)準(zhǔn)品質(zhì)譜條件調(diào)諧（Tune and Calibrate）操作規(guī)程一、前期準(zhǔn)備1、檢查離子源是否干凈，將垂直旋鈕跳到“5”位。2、用50%甲醇水溶液（乙腈水溶液也可）配置2050ng/mL的標(biāo)準(zhǔn)溶液（根據(jù)響應(yīng)值調(diào)節(jié)濃度，將目標(biāo)化合物母離子與周圍離子響應(yīng)值相差明顯即可）。 正離子化合物，可添加0.1%甲酸 負(fù)離子化合物，無需添加 2、 操作步驟1、創(chuàng)建project：打開Analyst軟件，在菜單欄中打開“Tools”，選擇“p

5、roject”下的“Create Project”，輸入“Project name”即可。2、雙擊“Hardware Configuration”，激活“MS Only”，雙擊“Manual Tuning”，打開調(diào)諧界面。3、 Q1 Scan：在當(dāng)前界面設(shè)置掃描模式為“Q1 MS（Q1）”，將掃描范圍設(shè)為100MW+30，掃描速率為200Da/s，Duration為5min，先點(diǎn)擊“Start Syringe Pump”，再點(diǎn)擊“Start”，找到目標(biāo)化合物母離子。待掃描完成后，選擇“Center/Width”，將目標(biāo)母離子的m/z輸入“Center（Da）”中，“Width（Da）” 設(shè)置為

6、3，“Scan rate”設(shè)置為10Da/s，選上“MCA”，“Cycles”設(shè)置為2050，點(diǎn)擊“Acquire”采集數(shù)據(jù)并保存。4、 Product ion Scan：掃描模式為“Product Ion（MS2）”，在“Product of”中輸入母離子的m/z，將CE值修改為5eV，掃描范圍為100MW+30，掃描速率約200Da/s，Duration為5min，點(diǎn)擊“Start”開始掃描，以5eV為步長手動(dòng)調(diào)節(jié)CE，找到合適的子離子（母離子的強(qiáng)度為基峰強(qiáng)度的1/3到1/4為宜），點(diǎn)擊“Stop”。選上“MCA”，“Cycles”設(shè)置為2050，點(diǎn)擊“Acquire”采集數(shù)據(jù)并保存二級質(zhì)

7、譜圖（若要獲得柱狀圖需在Advanced MS 中選擇Centroid）。5、 優(yōu)化化合物參數(shù)：根據(jù)前面選出的母、子離子，組建MRM離子對，輸入右側(cè)框中，每對離子對建議分析時(shí)間為100ms（若化合物比較多減小時(shí)間），并輸入ID。點(diǎn)擊“Edit Ramp.”，先后選擇CE和DP，點(diǎn)擊“Start”進(jìn)行優(yōu)化，將優(yōu)化好的CE和DP值添加到表格中。6、 保存質(zhì)譜方法，滅活“MS Only”。三、 結(jié)束工作 針泵吸取50%甲醇水溶液，對管路進(jìn)行沖洗，23次即可。ACQUITY UPLC串聯(lián)質(zhì)譜（UPLC-MS/MS）操作規(guī)程1、 前期準(zhǔn)備1、 檢查線路是否連接完好。2、最重要的是離子源的垂直旋鈕調(diào)至“2

8、”位。3、將流動(dòng)相準(zhǔn)備好，過0.45微米的濾膜并超聲脫氣。4、連接好進(jìn)樣采集觸發(fā)線。二、操作步驟1、打開UPLC的Sample Manage和Binary Solvent Manager電源，待其自檢完成后，打開質(zhì)譜分析軟件，左下角雙擊“ACQUITY Console”，點(diǎn)擊“Control”，分別進(jìn)行“Prime A/B solvents.”和“Prime seal wash”，用A、B流動(dòng)相沖洗5min。2、 激活“UPLC MS”。3、 安裝并用甲醇或乙腈活化新的色譜柱，一般活化30min即可。4、 點(diǎn)擊Analyst軟件菜單欄中的“Script”，選擇“Merge MRM”合并所需測的

9、多種目標(biāo)分析物的MRM通道（也可雙擊“Build Acquisition Method”建立方法手動(dòng)輸入），并存儲一個(gè)新的采樣離子通道的質(zhì)譜方法文件。5、 雙擊“Build Acquisition Method”，將同步模式選為“Lc Sync”，打開文件選擇需要的質(zhì)譜方法。點(diǎn)擊“Edit Parameters”，設(shè)置“CUR”：35；“IS”：+5500（正離子），-4500（負(fù)離子）；“TEM”：550；“GS1”：50；“GS2”：50；每一個(gè)的MRM的駐留時(shí)間（Dwell Time）要進(jìn)行優(yōu)化，盡可能使“Total Scan Time”控制在最窄峰的峰寬的1/12； “Duration

10、”與UPLC的樣品運(yùn)行時(shí)間設(shè)為一致，保存此質(zhì)譜方法。6、 雙擊左側(cè)欄“ACQUITY Method Editor”，通過“File”打開剛保存的質(zhì)譜方法。選擇進(jìn)樣方式、進(jìn)樣針的強(qiáng)洗和弱洗、色譜柱溫度及樣品室溫度、流動(dòng)相組成與梯度程序及運(yùn)行時(shí)間（與質(zhì)譜分析時(shí)間一致），保存此方法。7、 雙擊左側(cè)欄“Build Acquisition Batch”建立處理批次，選擇上述保存的方法，添加批次（SET1可修改為日期），添加樣品，設(shè)置樣品名稱、甁號（48vial 2mL holder）及“Date file”，保存此批次。8、 提交（submit）此樣品序列，點(diǎn)擊工具欄中“Equilibrate”按鈕，觀

11、察壓力變化，待 “Delta” 小于50時(shí)，點(diǎn)擊工具欄中“Ready”，準(zhǔn)備進(jìn)樣，在“View Queue”界面下可查看所提交的序列，準(zhǔn)確無誤后，點(diǎn)擊“start sample”開始進(jìn)樣。三、結(jié)束工作1、重新建立一個(gè)分析批次，選擇Penicillin項(xiàng)目下的“UPLC_MS_FLUSH”方法，放置空白樣品（水）于樣品盤中，提交并運(yùn)行，對液相及質(zhì)譜儀進(jìn)行沖洗。2、待機(jī)器沖洗完畢后，滅活“UPLC MS”系統(tǒng)，關(guān)閉質(zhì)譜軟件，關(guān)閉UPLC電源。Waters Alliance HPLC e2695串聯(lián)質(zhì)譜（HPLC-MS/MS）操作規(guī)程一、前期準(zhǔn)備1、檢查線路是否連接完好。2、離子源垂直旋鈕調(diào)至“2”

12、位。3、將流動(dòng)相準(zhǔn)備好，過0.45微米的濾膜并超聲脫氣。4、連接好進(jìn)樣采集觸發(fā)線。二、操作步驟1、打開Waters HPLC e2695的Separations Module主機(jī)電源，待自檢完成后(屏幕顯示Idle)，在控制屏點(diǎn)擊 “Menu/Status”，選擇“Direct Function”進(jìn)入沖洗選項(xiàng)界面，分別進(jìn)行“Dry Prime”、“Wet Prime”及“Purge Injector”，排除管道內(nèi)的氣泡。2、安裝并活化新的色譜柱，一般活化30min即可。3、打開桌面“Empower”軟件，輸入用戶名（system）及密碼（manager）。點(diǎn)擊“配置系統(tǒng)”，在配置管理器界面打開

13、“系統(tǒng)”，將“alliance_MS”改為在線模式。左欄點(diǎn)擊“項(xiàng)目”添加新項(xiàng)目并保存。4、在軟件初始界面，點(diǎn)擊“運(yùn)行樣品”，選擇所需項(xiàng)目及色譜系統(tǒng)。5、通過菜單欄“編輯”選擇“儀器方法”，新建液相方法，設(shè)置流動(dòng)相組分、洗脫程序、柱溫及樣品室溫度，保存當(dāng)前的儀器方法。6、通過菜單欄“編輯”選擇“新建方法組”，使用向?qū)Ｊ絼?chuàng)建新方法組，選擇上述方法，點(diǎn)擊“完成”。7、在主界面上編輯樣品運(yùn)行序列，選擇所需的“方法組/報(bào)告方法”，輸入“進(jìn)樣體積”、“樣品名稱”及“運(yùn)行時(shí)間”。8、將控制質(zhì)譜電腦上的Analyst軟件打開，激活“HPLC（2695）_MS”。9、點(diǎn)擊Analyst軟件菜單欄中的“Scri

14、pt”，選擇“Merge MRM”合并所需測的多種目標(biāo)分析物的MRM通道，并存儲一個(gè)新的采樣離子通道的質(zhì)譜方法文件（也可雙擊“Build Acquisition Method”建立方法手動(dòng)輸入）。10、雙擊“Build Acquisition Method”，將同步模式選為“Lc Sync”，打開文件選擇需要的質(zhì)譜方法。點(diǎn)擊“Edit Parameters”，設(shè)置“CUR”：35；“IS”：+5500（正離子），-4500（負(fù)離子）；“TEM”：550；“GS1”：50；“GS2”：50；每一個(gè)的MRM的駐留時(shí)間（Dwell Time）要進(jìn)行優(yōu)化，盡可能使“Total Scan Time”控制

15、在最窄峰的峰寬的1/12； “Duration”與HPLC的樣品運(yùn)行時(shí)間設(shè)為一致，保存此質(zhì)譜方法。11、編輯出與液相相同順序的樣品運(yùn)行序列。12、在Waters e2695 主機(jī)Separations Module界面上輸入儀器方法的初始流動(dòng)相比例進(jìn)行平衡色譜柱，監(jiān)測系統(tǒng)壓力，待Delta值降至50以下即可。13、在質(zhì)譜控制電腦上，點(diǎn)擊“Submit”進(jìn)行樣品提交，再點(diǎn)擊“Start sample”，待右下角四級桿圖譜變?yōu)椤癢ait”狀態(tài)，在液相端電腦上點(diǎn)擊運(yùn)行樣品即可進(jìn)行分析。三、結(jié)束工作1、在Empower操作界面，添加一個(gè)空白樣品（水），設(shè)置進(jìn)樣數(shù)為1，“方法組/報(bào)告方法”為“HPLCM

16、SFLUSH”。2、在Analyst軟件界面上，打開編輯一個(gè)空白樣品（水），選擇Penicillin項(xiàng)目下的“HPLCMSFLUSH”方法，并提交運(yùn)行樣品，同樣在Empower軟件中點(diǎn)擊運(yùn)行，完成沖洗工作。3、待沖洗完畢后，滅活“HPLC（2695）_MS”，關(guān)閉軟件。4、關(guān)閉HPLC的電源。Waters Alliance HPLC e2695操作規(guī)程一、前期準(zhǔn)備1、檢查線路是否連接完好。2、將流動(dòng)相準(zhǔn)備好，過0.45微米的濾膜并超聲脫氣。二、操作步驟1、打開Waters HPLC e2695主機(jī)的Separations Module主機(jī)電源，待自檢完成后(屏幕顯示Idle)，在控制屏點(diǎn)擊 “

17、Menu/Status”，選擇“Direct Function”進(jìn)入沖洗選項(xiàng)界面，分別進(jìn)行“Dry Prime”、“Wet Prime”及“Purge Injector”，排除管道內(nèi)的氣泡。2、安裝并活化新的色譜柱，一般活化30min即可。3、打開桌面“Empower”軟件，輸入用戶名（system）及密碼（manager）。點(diǎn)擊“配置系統(tǒng)”，在配置管理器界面打開“系統(tǒng)”，將“alliance_PDA/ELSD/DAD”改為在線模式。左欄點(diǎn)擊“項(xiàng)目”添加新項(xiàng)目并保存。4、在軟件初始界面，點(diǎn)擊“運(yùn)行樣品”，選擇所需項(xiàng)目及色譜系統(tǒng)。5、通過菜單欄“編輯”選擇“儀器方法”，新建液相方法，設(shè)置流動(dòng)相組

18、分、洗脫程序、柱溫、樣品室溫度及檢測器參數(shù)，保存當(dāng)前的儀器方法。6、通過菜單欄“編輯”選擇“新建方法組”，使用向?qū)Ｊ絼?chuàng)建新方法組，選擇上述方法，點(diǎn)擊“完成”。7、在主界面上編輯樣品運(yùn)行序列，選擇所需的“方法組/報(bào)告方法”，輸入“進(jìn)樣體積”、“樣品名稱”及“運(yùn)行時(shí)間”。8、在Waters e2695主機(jī)的 Separations Module界面上輸入儀器方法的初始流動(dòng)相比例進(jìn)行平衡色譜柱，監(jiān)測系統(tǒng)壓力，待Delta值降至50以下即可。打開檢測器電源待其自檢完成，若出現(xiàn)連接失敗，右擊監(jiān)測器窗口點(diǎn)擊重設(shè)，打開檢測器燈。9、點(diǎn)擊工具欄中“運(yùn)行”，進(jìn)樣分析。三、結(jié)束工作1、在Empower操作界面，添加一個(gè)空白樣品（水），設(shè)置進(jìn)樣數(shù)為1，“方法組/報(bào)告方法”為“HPLCMSFLUSH”，點(diǎn)擊工具欄“運(yùn)行”，進(jìn)行沖洗。此外，所有管路最終都要用有機(jī)試劑進(jìn)行灌注清洗。2、待沖洗完畢后，將檢測器燈關(guān)閉，再關(guān)閉檢測器電源，關(guān)閉HPLC的電源。ACQUITY UPLC操作規(guī)程一、前期準(zhǔn)備1、檢查線路是否連接完好。2、將流動(dòng)相準(zhǔn)備好，過0.45微米的濾膜并超聲脫氣。二、操作步驟1、打開桌面“Empower”軟件，輸入用戶名（system）及密碼（manager）。點(diǎn)擊“配置