HCV抗體檢測(cè)方法與檢測(cè)策略

1、HCV抗體檢測(cè)方法與檢測(cè)策略亳州市疾病預(yù)防控制中心 單三毛概述 結(jié)合丙型肝炎病毒實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)技術(shù)規(guī)范（試行）相關(guān)內(nèi)容介紹丙型肝炎病毒抗體檢測(cè)方法與檢測(cè)策略 丙型肝炎病毒抗體檢測(cè)的實(shí)驗(yàn)室內(nèi)質(zhì)量控制丙型肝炎病毒實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)技術(shù)規(guī)范（試行）抗體檢測(cè)相關(guān)部分解讀丙型肝炎病毒實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)技術(shù)規(guī)范5丙型肝炎病毒實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)技術(shù)規(guī)范 規(guī)范共分9章，首次依據(jù)不同檢測(cè)目的制定了不同的檢測(cè)策略： 1疫情監(jiān)測(cè)相關(guān)的檢測(cè)策略 2臨床診斷相關(guān)的檢測(cè)策略 3血液篩查相關(guān)的檢測(cè)策略6丙型肝炎病毒實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)技術(shù)規(guī)范 規(guī)范首次在臨床診斷中規(guī)定了HCV抗體篩查陽(yáng)性反應(yīng)后必須進(jìn)行補(bǔ)充實(shí)驗(yàn)（免疫印跡或NAT）。 規(guī)范首次在丙肝臨床診斷中引入

2、S/CO比值的使用。 規(guī)范首次在血液篩查策略中規(guī)定了核酸檢測(cè)（含pooling PCR）。 規(guī)范首次明確丙肝檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制。免疫診斷的免疫診斷的特異性特異性： NS3 core NS4 NS5HCVHCV免疫診斷抗原的策略免疫診斷抗原的策略 NS3+core NS3+core+NS4 NS3+core+NS4+NS5HCV抗體檢測(cè)方法 篩查試驗(yàn) 補(bǔ)充試驗(yàn)：蛋白印跡試驗(yàn) 酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn) 化學(xué)發(fā)光試驗(yàn) 膠體金法快速試驗(yàn) 化學(xué)發(fā)光免疫分析（CLIA） 化學(xué)發(fā)光酶免疫分析（CLEIA）:HRP標(biāo)記、ELEIA、ALP標(biāo)記 免疫滲濾試驗(yàn) 免疫層析試驗(yàn)檢測(cè)模式的改進(jìn)檢測(cè)模式的改進(jìn)間接法間接法夾心法夾

3、心法競(jìng)爭(zhēng)法競(jìng)爭(zhēng)法靈敏度較低重現(xiàn)性不佳不適合定量靈敏度提高重現(xiàn)性提高可用于定量靈敏度/特異性更佳特異性更高適合定量雅培Axysm羅氏Elecsys雅培Architect10增加了核心區(qū)（C22-3）和NS3（ C33C）區(qū)抗原，檢測(cè)的敏感性和特異性較第一代RIBA有所提高。所用抗原由核心區(qū)的C22、NS3區(qū)的C33C、NS4區(qū)的5-1-1和C100及NS5抗原組成，較之第二代試劑增加了NS5。 1990年Chiron/Ortho公司聯(lián)合研制了第一代RIBA試劑 ，兩種HCV抗原即C100-3和5-1-1分別固定在硝酸纖維素膜上 。第一代第二代第三代 HCV確證試劑的發(fā)展確證試劑的發(fā)展Chiron

4、 RIBA HCV 3.0 SIAChiron RIBA HCV 3.0 SIA 高低兩個(gè)水平的人lgG內(nèi)部質(zhì)控，必須清晰可見(jiàn)，且21。 陽(yáng)性對(duì)照條膜上雖有HCV帶必須是2+或更強(qiáng)，hSOD條帶必須明顯的比人lgG內(nèi)部質(zhì)控水平1淺（-or+/-）。 陰性對(duì)照條膜必須能夠見(jiàn)到每個(gè)HCV和hSOD條帶，且比人lgG內(nèi)部質(zhì)控水平淺。14HCV Blot 3.0（MP）3+質(zhì)控帶 (血清加樣）核抗原帶NS3-1NS3-2NS4NS51+質(zhì)控帶(試劑加樣)GST質(zhì)控帶HCV蛋白確證試劑包含HCV蛋白血清質(zhì)控帶血清轉(zhuǎn)換期樣本注：1，2，3為陽(yáng)性樣本4為陰性樣本15HCV BLOT 3.0(MP)結(jié)果分析膜

5、條呈現(xiàn)膜條呈現(xiàn)結(jié)果分析結(jié)果分析所有條帶出現(xiàn)所有條帶出現(xiàn)1+反應(yīng)度，或核抗原帶反應(yīng)度，或核抗原帶呈呈2+反應(yīng)度反應(yīng)度 陽(yáng)性陽(yáng)性僅一條僅一條HCV條條帶呈帶呈1+以上反應(yīng)度，以上反應(yīng)度，或抗原條帶呈或抗原條帶呈1+以上，但以上，但2+2+以下反應(yīng)度以下反應(yīng)度不確定不確定* * 僅有僅有GSTGST帶反應(yīng)可判為陰性帶反應(yīng)可判為陰性 GST GST 質(zhì)控帶反應(yīng)度為質(zhì)控帶反應(yīng)度為1+1+或以上，加上或以上，加上1 1條或更多條或更多HCVHCV條帶呈條帶呈1+1+反反應(yīng)度可讀成不確定。應(yīng)度可讀成不確定。3+質(zhì)控帶(血清加樣)核抗原帶NS3-1NS3-2NS4NS51+質(zhì)控帶(試劑加樣) 萬(wàn)泰HCV 抗體

6、確證試劑 本試劑應(yīng)用重組免疫印跡法本試劑應(yīng)用重組免疫印跡法原理，在硝酸纖維素膜條上預(yù)包原理，在硝酸纖維素膜條上預(yù)包被被HCV合成抗原、重組抗原合成抗原、重組抗原（Core，NS3，NS4，NS5）及）及對(duì)照線蛋白。將硝酸纖維素膜條對(duì)照線蛋白。將硝酸纖維素膜條浸泡在稀釋的血清或血漿樣品中浸泡在稀釋的血清或血漿樣品中反應(yīng)后，加入反應(yīng)后，加入酶標(biāo)記的抗人酶標(biāo)記的抗人IgG抗體溫育，如樣品中含有抗體溫育，如樣品中含有HCV特異性抗體，則會(huì)形成特異性抗體，則會(huì)形成“包被抗包被抗原原-抗體抗體-酶標(biāo)二抗酶標(biāo)二抗”復(fù)合物，加復(fù)合物，加入底物液顯色終止后，根據(jù)出現(xiàn)入底物液顯色終止后，根據(jù)出現(xiàn)的不同條帶情況判斷

7、結(jié)果。的不同條帶情況判斷結(jié)果。 Chiron萬(wàn)泰萬(wàn)泰顯示條帶顯示條帶分析結(jié)果分析結(jié)果未出現(xiàn)未出現(xiàn)HCV抗體特異條帶強(qiáng)度抗體特異條帶強(qiáng)度1+及以上及以上HCV抗體陰性抗體陰性（N）至少出現(xiàn)兩種至少出現(xiàn)兩種HCV抗體特異條帶（抗體特異條帶（Core，NS3，NS4和和NS5）強(qiáng)度）強(qiáng)度1+及以上及以上HCV抗體陽(yáng)性抗體陽(yáng)性（P）僅出現(xiàn)一種僅出現(xiàn)一種HCV抗體特異條帶（抗體特異條帶（Core，NS3，NS4和和NS5）強(qiáng)度）強(qiáng)度1+及以上及以上 HCV抗體不確抗體不確定（定（IND）條帶強(qiáng)度條帶強(qiáng)度分值分值空白空白-小于對(duì)照線小于對(duì)照線-1的強(qiáng)度的強(qiáng)度+/-等于對(duì)照線等于對(duì)照線-1的強(qiáng)度的強(qiáng)度1+大

8、于對(duì)照線大于對(duì)照線-1的強(qiáng)度的強(qiáng)度2+ 每條實(shí)驗(yàn)結(jié)果中，對(duì)照線-2必須出現(xiàn)，如果對(duì)照線-2不出現(xiàn)，則此條的檢測(cè)結(jié)果無(wú)效。 萬(wàn)泰HCV 抗體確證試劑丙型肝炎病毒丙型肝炎病毒TRANSFUSION Volume 40, February 2000丙型肝炎病毒抗體檢測(cè)策略丙型肝炎病毒抗體檢測(cè)策略HCV感染疫情報(bào)告的檢測(cè)流程感染疫情報(bào)告的檢測(cè)流程HCV血液篩查的檢測(cè)流程血液篩查的檢測(cè)流程HCV核酸定性檢測(cè)用于血液篩查策略及結(jié)果報(bào)告核酸定性檢測(cè)用于血液篩查策略及結(jié)果報(bào)告HCV臨床診斷篩查的檢測(cè)流程臨床診斷篩查的檢測(cè)流程HCV臨床診斷補(bǔ)充試驗(yàn)檢測(cè)流程（臨床診斷補(bǔ)充試驗(yàn)檢測(cè)流程（1）HCV臨床診斷補(bǔ)充試驗(yàn)檢

9、測(cè)流程（臨床診斷補(bǔ)充試驗(yàn)檢測(cè)流程（2）HCV核酸定性檢測(cè)用于臨床診斷策略及結(jié)果報(bào)告核酸定性檢測(cè)用于臨床診斷策略及結(jié)果報(bào)告3檢測(cè)結(jié)果的解釋檢測(cè)結(jié)果的解釋檢測(cè)結(jié)果的解釋檢測(cè)結(jié)果的解釋HCV檢測(cè)試劑使用要求檢測(cè)試劑使用要求 必須使用經(jīng)國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局注冊(cè)批準(zhǔn)的快速試劑詳細(xì)信息可登錄國(guó)家藥品食品管理局網(wǎng)站（http:/ 試劑必須在有效期內(nèi)使用。 推薦使用臨床評(píng)估質(zhì)量好的試劑中國(guó)疾病預(yù)防控制中心網(wǎng)站（http:/）。2011年HCV抗體診斷試劑質(zhì)量評(píng)估結(jié)果方法生產(chǎn)廠商酶聯(lián)免疫法(ELIsA) 27（國(guó)外3家）家化學(xué)發(fā)光方法美國(guó)強(qiáng)生公司、德國(guó)羅氏診斷公司、美國(guó)雅培公司；國(guó)內(nèi)已注冊(cè)的生產(chǎn)廠家有蘇州新波

10、公司、科美東雅公司等4家。蛋白芯片技術(shù)深圳益生堂膠體金技術(shù)國(guó)產(chǎn)的7家；進(jìn)口注冊(cè)只有韓國(guó)一家。重組免疫印跡法（RIBA）凱榮、MP、廈大與萬(wàn)泰合作的。HCVHCV免疫學(xué)檢測(cè)試劑免疫學(xué)檢測(cè)試劑l 檢測(cè)目的檢測(cè)目的l 檢測(cè)方法檢測(cè)方法l 檢測(cè)策略及檢測(cè)策略及 結(jié)果報(bào)告結(jié)果報(bào)告l 檢測(cè)的意義檢測(cè)的意義HCV抗原抗原檢測(cè)檢測(cè)HCV抗原抗原檢測(cè)檢測(cè)l 檢測(cè)目的檢測(cè)目的a.HCV感染的早期診斷：窗口期，感染的早期診斷：窗口期，HCV（+）母親所生的嬰兒；）母親所生的嬰兒；b. 免疫受損或缺陷；免疫受損或缺陷；c. 抗抗-HCV陽(yáng)性患者的病毒血癥分析；陽(yáng)性患者的病毒血癥分析；d. 以流行病監(jiān)測(cè)為目的的檢測(cè)是為

11、了解不同人群以流行病監(jiān)測(cè)為目的的檢測(cè)是為了解不同人群HCV感染率及其感染率及其變化趨勢(shì)。變化趨勢(shì)。HCV抗原抗原檢測(cè)的方法發(fā)展：一檢測(cè)的方法發(fā)展：一HCV抗原抗原檢測(cè)原理示意圖檢測(cè)原理示意圖l 檢測(cè)策略及檢測(cè)策略及 結(jié)果報(bào)告結(jié)果報(bào)告HCV抗原抗原檢測(cè)結(jié)果解釋檢測(cè)結(jié)果解釋a. HCV抗原檢測(cè)抗原檢測(cè)陰性陰性：HCV(-)b. HCV抗原抗原初次檢測(cè)（初次檢測(cè)（+），），需雙孔復(fù)檢：需雙孔復(fù)檢： 若均為（若均為（-）則報(bào)告為則報(bào)告為HCV（-）； 若雙孔有一孔為（若雙孔有一孔為（+），），則報(bào)告為則報(bào)告為HCV（+）HCV抗原抗原檢測(cè)的意義檢測(cè)的意義丙型肝炎病毒抗原檢測(cè)丙型肝炎病毒抗原檢測(cè)丙型肝炎

12、病毒抗原檢測(cè)結(jié)果解釋丙型肝炎病毒抗原檢測(cè)結(jié)果解釋HCVHCV抗原檢測(cè)試劑抗原檢測(cè)試劑試劑名稱生產(chǎn)廠商丙型肝炎病毒抗原測(cè)定試劑盒（化學(xué)發(fā)光微粒子免疫檢測(cè)法）雅培Murex Ag/Ab combination assay(Abbott）雅培*Monolisa HCVBio-Rad（伯樂(lè)）丙型肝炎病毒核心抗原診斷試劑盒（酶聯(lián)免疫法）山東萊博生物丙型肝炎病毒抗原檢測(cè)試劑盒（酶聯(lián)免疫法）中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院醫(yī)學(xué)生物學(xué)研究所質(zhì)量保證體系循環(huán)質(zhì)量保證體系循環(huán)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)及實(shí)驗(yàn)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)及實(shí)驗(yàn)室的管理室的管理安全性安全性客服客服患者/客戶準(zhǔn)備采集樣本樣品的接收與登記樣本的遞送質(zhì)量控制檢驗(yàn)結(jié)果的保存報(bào)告結(jié)果對(duì)工作人員檢測(cè)能

13、力的資格評(píng)估檢測(cè)質(zhì)控用材料的選擇質(zhì)控用材料的選擇-校準(zhǔn)品校準(zhǔn)品 用于對(duì)設(shè)備、試劑盒以及檢測(cè)系統(tǒng)做出校準(zhǔn)，以便于測(cè)定過(guò)程的標(biāo)準(zhǔn)化 盡管這些物質(zhì)不是真正的標(biāo)準(zhǔn)品，但有時(shí)也稱其為標(biāo)準(zhǔn)品質(zhì)控用材料的選擇質(zhì)控用材料的選擇-質(zhì)控品質(zhì)控品 已知濃度的被分析物 兩或三個(gè)濃度 檢測(cè)時(shí)加入到病例樣本中 用于驗(yàn)證檢測(cè)體系的可靠性質(zhì)控用材料質(zhì)控用材料重要特征重要特征 其值應(yīng)覆蓋臨床高、中、低值 與檢測(cè)樣本（基質(zhì)）相似 可大量獲取 小量分裝貯存 最好能至少持續(xù)使用1年 通常為生物材料，應(yīng)充分考慮到其生物危害性對(duì)質(zhì)控用材料的管理對(duì)質(zhì)控用材料的管理 需儲(chǔ)備足量的同一批號(hào)的質(zhì)控用材料或至少夠一年使用 可凍存、凍干或采用化學(xué)方

14、法進(jìn)行保存 應(yīng)保證其復(fù)原的準(zhǔn)確性 應(yīng)按照生產(chǎn)商推薦的方法進(jìn)行貯存質(zhì)控樣本的來(lái)源 適宜的診斷用樣本（患者樣本） 來(lái)自下述途徑： 另一個(gè)實(shí)驗(yàn)室 PT/EQA 提供者 市售產(chǎn)品質(zhì)控用材料的類型質(zhì)控用材料的類型 定值 相關(guān)數(shù)值由生產(chǎn)商提供 實(shí)驗(yàn)室必須對(duì)其進(jìn)行驗(yàn)證 非定值 相對(duì)較便宜 需進(jìn)行數(shù)據(jù)分析 “自制產(chǎn)品” 或 “內(nèi)部產(chǎn)品” 實(shí)驗(yàn)室自行采集的血清庫(kù) 予以標(biāo)明 小量分裝保存，便于每日使用Levey-Jennings 表 -對(duì)質(zhì)控值進(jìn)行記錄和評(píng)價(jià)平均值天+1SD+2SD+3SD-1SD-2SD-3SDWestgard 規(guī)則 “多規(guī)則質(zhì)量控制方法” 聯(lián)合使用判定標(biāo)準(zhǔn)或質(zhì)控規(guī)則 可對(duì)某種檢測(cè)分析“是否”符

15、合質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)做出判斷Westgard 規(guī)則規(guī)則 (通常情況下適用于在一次檢測(cè)中同時(shí)采通常情況下適用于在一次檢測(cè)中同時(shí)采用兩個(gè)濃度的質(zhì)控材料的情況用兩個(gè)濃度的質(zhì)控材料的情況) 12S 規(guī)則 13S規(guī)則 22S規(guī)則 R4S規(guī)則 41S規(guī)則 10X規(guī)則Westgard 12S 規(guī)則規(guī)則 “警告規(guī)則” 兩個(gè)濃度的質(zhì)控材料中有一個(gè)濃度的結(jié)果在2SD以外 對(duì)可能存在的問(wèn)題提出警報(bào) 不能構(gòu)成拒絕檢測(cè)的原因 必須再以13S 規(guī)則對(duì)其進(jìn)行評(píng)價(jià)12S Rule = 一種能夠引發(fā)對(duì)質(zhì)控?cái)?shù)據(jù)進(jìn)行仔細(xì)核查的警報(bào)規(guī)則平均值天+1SD+2SD+3SD-1SD-2SD-3SD不符合12S 規(guī)則Westgard 13S 規(guī)則規(guī)則

16、 如果兩個(gè)質(zhì)控?cái)?shù)據(jù)中有任意一個(gè)落在3SD范圍以外，則表示該次檢測(cè)不符合Westgard規(guī)則 應(yīng)拒絕該次檢測(cè) 如果該檢測(cè)沒(méi)有破壞 13S規(guī)則，則應(yīng)對(duì)其進(jìn)行22S 規(guī)則評(píng)價(jià)13S 規(guī)則 = 如果任意一項(xiàng)質(zhì)控?cái)?shù)據(jù)超出+3SD 或-3SD的控制范圍，則應(yīng)拒絕該次檢測(cè) 平均值天+1SD+2SD+3SD-1SD-2SD-3SD不符合13S 規(guī)則Westgard 22S 規(guī)則規(guī)則 如果同濃度檢測(cè)材料的兩相鄰值在同方向上超出2SD 范圍，或 同次檢測(cè)的兩個(gè)質(zhì)控?cái)?shù)值均超過(guò) 2SD 不得對(duì)該患者的檢測(cè)結(jié)果出具報(bào)告 應(yīng)采取修正措施22S 規(guī)則 = 如果連續(xù)的兩次質(zhì)控測(cè)量值在同方向上均超過(guò)+2SD 或 -2SD的限度

17、范圍，則應(yīng)拒絕該次檢測(cè) 平均值天+1SD+2SD+3SD-1SD-2SD-3SD不符合22S 規(guī)則Westgard R4S 規(guī)則規(guī)則 一個(gè)質(zhì)控?cái)?shù)據(jù)超過(guò)平均值的2SD，另一個(gè)質(zhì)控?cái)?shù)據(jù)超過(guò)平均值的+2SD 這兩次結(jié)果的偏差范圍將超過(guò)4 SD 產(chǎn)生隨機(jī)誤差，必須拒絕該次檢測(cè)R4S 規(guī)則 = 當(dāng)一質(zhì)控測(cè)量值超過(guò)+2SD 而另一質(zhì)控值超過(guò)-2SD 的限度范圍時(shí)，應(yīng)拒絕該次檢測(cè)平均值天+1SD+2SD+3SD-1SD-2SD-3SD不符合R4S 規(guī)則Westgard 41S 規(guī)則規(guī)則 需要提供以前檢測(cè)的質(zhì)控?cái)?shù)據(jù) 當(dāng)某一濃度下有四次連續(xù)的質(zhì)控?cái)?shù)據(jù)超過(guò)1SD范圍，或 兩個(gè)濃度下的質(zhì)控?cái)?shù)據(jù)均出現(xiàn)連續(xù)的檢測(cè)結(jié)果超出1SD 范圍的現(xiàn)象Westgard 10X 規(guī)則規(guī)則 需要提供以往檢測(cè)的質(zhì)控資料 某一濃度下有十次連續(xù)的質(zhì)控檢測(cè)結(jié)果在平均值的同一側(cè)，或 兩個(gè)濃度下的質(zhì)控?cái)?shù)據(jù)均有五次連續(xù)的檢測(cè)結(jié)果在平均值的同一側(cè)10 x 規(guī)則 = 當(dāng)10次連續(xù)的質(zhì)控檢測(cè)結(jié)果在平均