NO.6 —— 對仿制藥研發(fā)“兩座大山”的深入(有關(guān)物質(zhì)部分)

1、謝沐風謝沐風 上海市食品藥品檢驗所上海市食品藥品檢驗所質(zhì)量標準中制訂有關(guān)物質(zhì)檢查項的原則質(zhì)量標準中制訂有關(guān)物質(zhì)檢查項的原則 闡述原料藥質(zhì)量標準中必須擬定有關(guān)物質(zhì)的原理闡述原料藥質(zhì)量標準中必須擬定有關(guān)物質(zhì)的原理 闡述制劑質(zhì)量標準中可不擬定有關(guān)物質(zhì)的情形闡述制劑質(zhì)量標準中可不擬定有關(guān)物質(zhì)的情形 當原料藥當原料藥 0天制劑天制劑 至效期，有關(guān)物質(zhì)皆未變化，至效期，有關(guān)物質(zhì)皆未變化，則可不擬定。則可不擬定。 但注射劑必須擬定。（因前幾年的但注射劑必須擬定。（因前幾年的“藥害事件藥害事件”）。）。六類仿制藥的研發(fā)六類仿制藥的研發(fā) “解讀解讀” 既有質(zhì)量標準既有質(zhì)量標準(1) 查詢所有制劑與原料藥的質(zhì)量標

2、準。（著重看制劑查詢所有制劑與原料藥的質(zhì)量標準。（著重看制劑質(zhì)量標準，原料藥質(zhì)量標準僅是參考）質(zhì)量標準，原料藥質(zhì)量標準僅是參考）(2) 進口質(zhì)量標準雜質(zhì)現(xiàn)今皆為代號；不要想獲得雜質(zhì)進口質(zhì)量標準雜質(zhì)現(xiàn)今皆為代號；不要想獲得雜質(zhì)對照品、且無需獲得。對照品、且無需獲得。(3) 根據(jù)剖析結(jié)果購買雜質(zhì)對照品。絕非將國外藥典中根據(jù)剖析結(jié)果購買雜質(zhì)對照品。絕非將國外藥典中的所有雜質(zhì)對照品皆購買來，此乃的所有雜質(zhì)對照品皆購買來，此乃“勞民傷財勞民傷財”之舉之舉!(4) 也絕非將自我仿制做到皆也絕非將自我仿制做到皆0.10%以下。此乃以下。此乃“自斷自斷后路后路”!對原研制劑有關(guān)物質(zhì)的對原研制劑有關(guān)物質(zhì)的“剖析

3、剖析” 立項后即刻派人購買原研品，至少購買來不同時間段立項后即刻派人購買原研品，至少購買來不同時間段的的3個批號。（勿需獲得個批號。（勿需獲得“原研原料藥原研原料藥”） 綜合分析既有質(zhì)量標準，色譜條件可酌情改變，如：綜合分析既有質(zhì)量標準，色譜條件可酌情改變，如：(1) 盡可能使用盡可能使用25cm長色譜柱。長色譜柱。(2) 適當減少有機相比例。適當減少有機相比例。(3) 主成分出峰時間至少主成分出峰時間至少12min以后（流速以后（流速1.0ml/min時）時） (4) 梯度洗脫可適當延長時間或增大比例。梯度洗脫可適當延長時間或增大比例。最終酌情確定色譜條件最終酌情確定色譜條件（該條件應(yīng)可分離

4、測定出自身原料藥仿制時的中間體）（該條件應(yīng)可分離測定出自身原料藥仿制時的中間體）“解解 讀讀” 原原 研研 制制 劑劑(1) 分別測定原研制劑有關(guān)物質(zhì)情況（核心：積分限度分別測定原研制劑有關(guān)物質(zhì)情況（核心：積分限度0.05%，引申至原料藥積分，引申至原料藥積分0.03%。小數(shù)點保留小數(shù)點保留2位即位即可，切不可過多，如可，切不可過多，如0.25%、0.08%）(2) 取原研制劑的最新批號，分別進行長期試驗和加速取原研制劑的最新批號，分別進行長期試驗和加速試驗試驗6個月。（個月。（3個月時便可初見端倪）個月時便可初見端倪）(3) 測定技巧：最終一并進行（樣品置于冰箱冷藏）。測定技巧：最終一并進行

5、（樣品置于冰箱冷藏）。(4) 獲得原研制劑獲得原研制劑“雜質(zhì)譜雜質(zhì)譜”。(5) 順便采用順便采用DAD檢測器測定一下主成分純度。檢測器測定一下主成分純度。原研制劑原研制劑“雜質(zhì)譜雜質(zhì)譜”測定結(jié)果測定結(jié)果ABCD 雜質(zhì)雜質(zhì)A不斷增加：不斷增加：0.15% 0.50% （限度（限度0.7%） 雜質(zhì)雜質(zhì)B不斷增加：不斷增加：0.20% 0.68% （限度（限度1.0%） 雜質(zhì)雜質(zhì)C不增加：始終保持在不增加：始終保持在0.23% 0.25% 雜質(zhì)雜質(zhì)D不增加：始終保持在不增加：始終保持在0.06% 0.07%對仿制制劑與仿制原料藥的要求對仿制制劑與仿制原料藥的要求 針對原研制劑中不增加的未知雜質(zhì)針對原

6、研制劑中不增加的未知雜質(zhì) (1) 該雜質(zhì)含量在該雜質(zhì)含量在0.1%以上，以上，如雜質(zhì)如雜質(zhì)C 仿制品仿制品中該雜質(zhì)可以存在，含量不超出原研制劑即中該雜質(zhì)可以存在，含量不超出原研制劑即可，且可，且 6個月考核結(jié)果該雜質(zhì)量無變化個月考核結(jié)果該雜質(zhì)量無變化/不增加。不增加。結(jié)論：結(jié)論：質(zhì)量標準中無需單獨控制，籠統(tǒng)要求即可。質(zhì)量標準中無需單獨控制，籠統(tǒng)要求即可。 引申至原料藥質(zhì)量控制：引申至原料藥質(zhì)量控制：穩(wěn)定性考核無增加、含量無穩(wěn)定性考核無增加、含量無變化。變化。對仿制制劑與仿制原料藥的要求對仿制制劑與仿制原料藥的要求 針對原研制劑中不增加的未知雜質(zhì)針對原研制劑中不增加的未知雜質(zhì) (2) 該雜質(zhì)量在

7、該雜質(zhì)量在0.05%0.10%間，間，如雜質(zhì)如雜質(zhì)D 仿制品可超出原研品仿制品可超出原研品（如雜質(zhì)（如雜質(zhì)D含量為含量為0.07%0.08%），），但只要小于但只要小于 0.10%即可。且即可。且 6個月個月考核結(jié)果，該雜質(zhì)量無變化考核結(jié)果，該雜質(zhì)量無變化/不增加。不增加。 結(jié)論：結(jié)論：質(zhì)量標準中無需單獨控制，籠統(tǒng)要求即可。質(zhì)量標準中無需單獨控制，籠統(tǒng)要求即可。 對仿制制劑與仿制原料藥的要求對仿制制劑與仿制原料藥的要求 針對原研制劑中不存在的雜質(zhì)針對原研制劑中不存在的雜質(zhì) 仿制品存在的特有雜質(zhì)仿制品存在的特有雜質(zhì)（如雜質(zhì)（如雜質(zhì)F），），必須在必須在0.10%0.20%以下，且應(yīng)在以下，且應(yīng)在

8、14號穩(wěn)定性考核中不增加。號穩(wěn)定性考核中不增加。 強烈不建議：因雜質(zhì)量大于上述限度，去進行雜質(zhì)強烈不建議：因雜質(zhì)量大于上述限度，去進行雜質(zhì)的藥理毒理研究，推算出其限度，證明自身產(chǎn)品雜質(zhì)的藥理毒理研究，推算出其限度，證明自身產(chǎn)品雜質(zhì)量小于該限度的量小于該限度的“鉆牛角尖鉆牛角尖”作法！作法！ 解決辦法：解決辦法：從原料藥合成路徑和制劑工藝入手；或從原料藥合成路徑和制劑工藝入手；或提取原料藥等手段。提取原料藥等手段。對仿制制劑與仿制原料藥的要求對仿制制劑與仿制原料藥的要求 針對原研制劑中不斷增加的雜質(zhì)針對原研制劑中不斷增加的雜質(zhì)（如雜質(zhì)（如雜質(zhì)A和和B）(1) 質(zhì)量標準中肯定規(guī)定了其限度質(zhì)量標準中

9、肯定規(guī)定了其限度（因是已知雜質(zhì)）（因是已知雜質(zhì)）。(2) 通過液質(zhì)聯(lián)用探明結(jié)構(gòu)式，購買來對照品通過液質(zhì)聯(lián)用探明結(jié)構(gòu)式，購買來對照品/或自我合成或自我合成（此時需驗證結(jié)構(gòu)式），驗證校正因子。（此時需驗證結(jié)構(gòu)式），驗證校正因子。(3) 只要仿制制劑沒有超出質(zhì)量標準中所規(guī)定的限度值，即只要仿制制劑沒有超出質(zhì)量標準中所規(guī)定的限度值，即便超出原研制劑量亦可。便超出原研制劑量亦可。 （通過有效期（通過有效期“調(diào)節(jié)調(diào)節(jié)”、引申至效期設(shè)定原則與意義）、引申至效期設(shè)定原則與意義）質(zhì)量標準擬定法質(zhì)量標準擬定法 雖雜質(zhì)對照品法最為準確，但對照品的獲得與驗證令人雖雜質(zhì)對照品法最為準確，但對照品的獲得與驗證令人發(fā)憷?。?/p>

10、自行酌情定奪發(fā)憷?。ㄗ孕凶们槎▕Z） 樂于采用樂于采用“相對保留時間相對保留時間 - 校正因子結(jié)合法校正因子結(jié)合法” 。(1) 雜質(zhì)對照品僅用于研究時驗證校正因子（如何驗證）和雜質(zhì)對照品僅用于研究時驗證校正因子（如何驗證）和系統(tǒng)適用性試驗用（講述如何配制該溶液）。系統(tǒng)適用性試驗用（講述如何配制該溶液）。(2) 為確保相對保留時間的準確性，質(zhì)量標準中必須指明色為確保相對保留時間的準確性，質(zhì)量標準中必須指明色譜柱型號與具體參數(shù)。（絕不要認為這樣不好、恰相反?。┳V柱型號與具體參數(shù)。（絕不要認為這樣不好、恰相反?。?3) 質(zhì)量標準中應(yīng)盡可能擬定系統(tǒng)適用性試驗。既可用雜質(zhì)質(zhì)量標準中應(yīng)盡可能擬定系統(tǒng)適用性試

11、驗。既可用雜質(zhì)對照品、對照品、又可用強破壞試驗法又可用強破壞試驗法。(4) 質(zhì)量標準中應(yīng)既有已知雜質(zhì)的針對性測定，也有未知雜質(zhì)量標準中應(yīng)既有已知雜質(zhì)的針對性測定，也有未知雜質(zhì)的籠統(tǒng)性測定。質(zhì)的籠統(tǒng)性測定。質(zhì)量標準中采用強破壞試驗法驗證系統(tǒng)適用性的典型圖譜質(zhì)量標準中采用強破壞試驗法驗證系統(tǒng)適用性的典型圖譜min0510152025303540mAU 0246 VWD1 A, Wavelength=280 nm (XMF05112203.D) 15.753min0510152025303540mAU 0246 VWD1 A, Wavelength=280 nm (XMF05112204.D) 14

12、.812 15.928min0510152025303540mAU 0246 VWD1 A, Wavelength=280 nm (XMF05112205.D)舉例：鹽酸普拉克索片的仿制舉例：鹽酸普拉克索片的仿制 進口質(zhì)量標準：梯度洗脫、進口質(zhì)量標準：梯度洗脫、3個波長、個波長、13個代號雜質(zhì)（且分別個代號雜質(zhì)（且分別有校正因子、相對保留時間等）。有校正因子、相對保留時間等）。第一步：第一步：勿更改梯度洗脫、仍為勿更改梯度洗脫、仍為3個波長。個波長。第二步：第二步：測定原研品，設(shè)定最小峰面積為測定原研品，設(shè)定最小峰面積為0.05%。結(jié)果僅檢出。結(jié)果僅檢出1個不斷增加雜質(zhì)（加速試驗和長期試驗結(jié)果

13、也證實）和個不斷增加雜質(zhì)（加速試驗和長期試驗結(jié)果也證實）和2個大于個大于0.10%雜質(zhì)，其他雜質(zhì)均未檢出。雜質(zhì)，其他雜質(zhì)均未檢出。第三步：第三步：液質(zhì)聯(lián)用測定出增加雜質(zhì)結(jié)構(gòu)式，推算出降解途徑；合液質(zhì)聯(lián)用測定出增加雜質(zhì)結(jié)構(gòu)式，推算出降解途徑；合成并獲得該雜質(zhì)對照品，質(zhì)量標準中既可擬定采用雜質(zhì)對照品測成并獲得該雜質(zhì)對照品，質(zhì)量標準中既可擬定采用雜質(zhì)對照品測定該目標雜質(zhì)、定該目標雜質(zhì)、也可擬定采用也可擬定采用“相對保留時間相對保留時間-校正因子結(jié)合校正因子結(jié)合法法”。第四步：第四步：對于另對于另2個大于個大于0.10%、但不增加雜質(zhì)，仿制制劑也應(yīng)、但不增加雜質(zhì)，仿制制劑也應(yīng)不增加，且含量未超出原研制

14、劑，即可。質(zhì)量標準中采用籠統(tǒng)法不增加，且含量未超出原研制劑，即可。質(zhì)量標準中采用籠統(tǒng)法測定即可。測定即可。舉例：復方制劑有關(guān)物質(zhì)研究思路舉例：復方制劑有關(guān)物質(zhì)研究思路第一步：第一步：查詢每一個主成分單方制劑國內(nèi)外質(zhì)量標準，觀查詢每一個主成分單方制劑國內(nèi)外質(zhì)量標準，觀測是否有目標降解雜質(zhì)。（應(yīng)可尋找到測是否有目標降解雜質(zhì)。（應(yīng)可尋找到）第二步：第二步：通過雜質(zhì)譜比較，對未變化通過雜質(zhì)譜比較，對未變化/增加的雜質(zhì)，質(zhì)量標增加的雜質(zhì)，質(zhì)量標準中不予擬定（原研制劑一定要平行做穩(wěn)定性考核試驗）。準中不予擬定（原研制劑一定要平行做穩(wěn)定性考核試驗）。第三步：第三步：質(zhì)量標準中僅擬定降解雜質(zhì)，既可擬定采用雜質(zhì)

15、質(zhì)量標準中僅擬定降解雜質(zhì)，既可擬定采用雜質(zhì)對照品法、也可擬定采用對照品法、也可擬定采用“相對保留時間相對保留時間-校正因子結(jié)合法校正因子結(jié)合法”（推薦前者）（推薦前者）。第四步：第四步：不建議采用籠統(tǒng)法測定未知雜質(zhì)。不建議采用籠統(tǒng)法測定未知雜質(zhì)。三類仿制藥的研發(fā)三類仿制藥的研發(fā) 無既有質(zhì)量標準無既有質(zhì)量標準(1) 查詢文獻，建立色譜條件；同時采用原料藥合成的查詢文獻，建立色譜條件；同時采用原料藥合成的中間體驗證色譜條件的系統(tǒng)適用性。中間體驗證色譜條件的系統(tǒng)適用性。(2) 購買購買1批原研制劑批原研制劑（如購買不來、休眠?。ㄈ缳徺I不來、休眠！） (3) 進行原研品進行原研品6個月的加速試驗和長

16、期試驗。個月的加速試驗和長期試驗。(4) 解讀原研品，獲得解讀原研品，獲得“雜質(zhì)譜雜質(zhì)譜”。(5) 回到上述思路：其中回到上述思路：其中 自我合成獲得不斷增加雜質(zhì)，自我合成獲得不斷增加雜質(zhì)， 進行雜質(zhì)的進行雜質(zhì)的“藥理毒理研究藥理毒理研究”，科學擬定雜質(zhì)限度。，科學擬定雜質(zhì)限度。強破壞試驗的深度剖析強破壞試驗的深度剖析 對該理念產(chǎn)生的歷史背景對該理念產(chǎn)生的歷史背景 試驗結(jié)論：基本上沒有推翻既有色譜條件，實際是試驗結(jié)論：基本上沒有推翻既有色譜條件，實際是 破壞方法：沒有統(tǒng)一規(guī)定、自己看著辦破壞方法：沒有統(tǒng)一規(guī)定、自己看著辦 一定要賦予二極管陣列檢測器檢測主峰純度的測定一定要賦予二極管陣列檢測器檢

17、測主峰純度的測定 如何應(yīng)答藥審中心老師提出的如何應(yīng)答藥審中心老師提出的“質(zhì)量守恒質(zhì)量守恒”要求。要求。該試該試驗理念與驗理念與14號資料穩(wěn)定性考核中的號資料穩(wěn)定性考核中的“含量與有關(guān)物質(zhì)變化含量與有關(guān)物質(zhì)變化應(yīng)相輔相成應(yīng)相輔相成”理念是不一致的，所以不應(yīng)追求！理念是不一致的，所以不應(yīng)追求！試驗中的細節(jié)與技巧試驗中的細節(jié)與技巧 “有關(guān)物質(zhì)皆未變化有關(guān)物質(zhì)皆未變化”的具體含義的具體含義 14號資料穩(wěn)定性考核數(shù)據(jù)中，單個雜質(zhì)量和總雜質(zhì)號資料穩(wěn)定性考核數(shù)據(jù)中，單個雜質(zhì)量和總雜質(zhì)量測定數(shù)據(jù)波動范圍均在量測定數(shù)據(jù)波動范圍均在0.02%以內(nèi)。（著重詮釋以內(nèi)。（著重詮釋） 引申至自身對照法與歸一化法的引申至自

18、身對照法與歸一化法的“互換妙用互換妙用”。 引申至穩(wěn)定性考核數(shù)據(jù)間的引申至穩(wěn)定性考核數(shù)據(jù)間的“相輔相成性相輔相成性”。 (1) 有關(guān)物質(zhì)與含量間。（有關(guān)物質(zhì)間見上）有關(guān)物質(zhì)與含量間。（有關(guān)物質(zhì)間見上） (2) 各時間點含量間。（無變化必須在各時間點含量間。（無變化必須在2.0%以內(nèi)波動）以內(nèi)波動） (3) 列舉令人哭笑不得的案例。（資料中色譜圖的注釋）列舉令人哭笑不得的案例。（資料中色譜圖的注釋）雜質(zhì)量控制在雜質(zhì)量控制在0.02%范圍內(nèi)波動的試驗技巧范圍內(nèi)波動的試驗技巧 從首張液相圖譜開始，最小峰面積便設(shè)定為原料藥從首張液相圖譜開始，最小峰面積便設(shè)定為原料藥/0.03%或制劑或制劑/0.05%

19、。（。（闡述原理和眾多案例闡述原理和眾多案例） 。 液相使用技巧液相使用技巧 (1) 必須保證空白溶劑色譜圖測定理想！必須保證空白溶劑色譜圖測定理想！ (2) 梯度洗脫注意事項（流動相組成與洗脫設(shè)定）。梯度洗脫注意事項（流動相組成與洗脫設(shè)定）。 (3) 安裝色譜柱的技巧與清洗色譜柱法則。安裝色譜柱的技巧與清洗色譜柱法則。 (4) 最低檢出限的最低檢出限的“畫龍點睛之筆畫龍點睛之筆”（相當于（相當于）試驗中的細節(jié)與技巧試驗中的細節(jié)與技巧溶液穩(wěn)定性試驗的判定溶液穩(wěn)定性試驗的判定l不能單從主成分入手！不能單從主成分入手！l還要注意所有組分的百分比變化，還要注意所有組分的百分比變化，絕對值變化！絕對值

20、變化！m in024681 01 21 41 61 82 02 22 4m AU6 07 08 09 01 0 01 1 01 2 01 3 01 4 01 5 01 6 0m AU6 07 08 09 01 0 01 1 01 2 01 3 01 4 01 5 01 6 091708 5. 923 0. 8610432888 8. 410 98. 1659185 14. 626 0. 5645002 22. 729 0. 422 : 2 1 0 n m , 8 n m傾 乕 僥 僗 僱 乕 僩昗 弨 梟 塼傾 乕 僥 僗 僱 乕 僩昗 弨 梟 塼 0 2 - R e p 4柺 愊曐 帩 帪 娫柺 愊 %雜質(zhì)雜質(zhì)-1（為已知雜質(zhì)）（為已知雜質(zhì)）青青 蒿蒿