環(huán)境科學(xué)與工程-三氯卡班對錦鯽的環(huán)境健康風(fēng)險(xiǎn)評價(jià)論文

1、摘 要三氯卡班是一種新型的抗菌劑，因有連續(xù)、溫和、穩(wěn)定的殺菌特點(diǎn)，被廣泛應(yīng)用于日常生活中。因其具有生物累積性而在環(huán)境中長期存在,本實(shí)驗(yàn)選擇三氯卡班（Chemical class card，簡稱TCC)和錦鯽作為實(shí)驗(yàn)材料，在室內(nèi)模擬條件下進(jìn)行半靜態(tài)染毒實(shí)驗(yàn)，研究低濃度10 mg/kg、高濃度100 mg/kg的三氯卡班對錦鯽肝臟抗氧化防御系統(tǒng)的影響。實(shí)驗(yàn)結(jié)果：在KP 10mg/kg時，錦鯽的SOD酶活性先抑制后誘導(dǎo)上升，CAT酶活性先抑制后誘導(dǎo)再抑制下降，這說明錦鯽的抗氧化防御系統(tǒng)損傷并不明顯；在KP100mg/kg時，錦鯽SOD酶活性均受到誘導(dǎo)上升，CAT酶活性均受到抑制下降，這說明錦鯽的抗氧

2、化損傷受到傷害。這說明更高濃度的KP或者更長的暴露時間才會對錦鯽的SOD、CAT酶活性起到顯著的誘導(dǎo)和抑制作用，但這些體內(nèi)表征的變化都說明了三氯卡班能導(dǎo)致錦鯽肝臟的氧化損傷。關(guān)鍵詞: 錦鯽；三氯卡班；抗氧化防御系統(tǒng)；SOD；CATAbstractTrichlorocarban is a new antibacterial agent, which is widely used in daily life because of its continuous, mild and stable sterilization characteristics. Because of its bioaccu

3、mulation and long-term existence in the environment, the chemical class card (TCC) and Carassius auratus (Carassius auratus) were selected as experimental materials in this experiment. Under the indoor simulation conditions, the semi-static toxicity experiment was carried out to study the effects of

4、 low concentration of 10 mg / kg and high concentration of 100 mg / kg of triclosan on the antioxidant defense system of Carassius auratus liver. Results: at KP 10mg / kg, the SOD activity of Carassius auratus was inhibited first and then induced to rise, while the cat activity was inhibited first a

5、nd then induced to fall, which indicated that the damage of antioxidant defense system of Carassius auratus was not obvious; at KP 100mg / kg, the SOD activity of Carassius auratus was induced to rise, and the cat activity was inhibited to fall, which indicated that the antioxidant damage of Carassi

6、us auratus was damaged. This indicated that higher concentration of KP or longer exposure time could significantly induce and inhibit SOD and cat enzyme activities of Carassius auratus, but the changes of these in vivo characterization indicated that Trichlorocarban could cause oxidative damage of C

7、arassius auratus liver.Key words:Carassius auratus; Trichlorocarban; antioxidant defense system; SOD; CAT;目 錄1 引言11.1 三氯卡班的理化性質(zhì)11.2 三氯卡班在環(huán)境中的分布21.3 三氯卡班的毒性作用21.4 三氯卡班的研究進(jìn)展31.5 錦鯽的抗氧化防御系統(tǒng)31.5.1 生物體的抗氧化防御系統(tǒng)31.5.2 抗氧化防御的機(jī)理41.6 本文研究的目的和意義42 實(shí)驗(yàn)部分52.1 實(shí)驗(yàn)儀器及試劑52.1.1 實(shí)驗(yàn)儀器52.1.2 實(shí)驗(yàn)試劑52.2 實(shí)驗(yàn)過程52.2.1 采樣和樣品預(yù)處理5

8、2.2.2 暴露實(shí)驗(yàn)52.2.3 總蛋白的測定62.2.4 SOD 酶活性的測定62.2.5 CAT酶活性的測定62.2.6 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析63 實(shí)驗(yàn)結(jié)果73.1 蛋白質(zhì)濃度的變化情況73.2 SOD酶活性的變化情況83.3 CAT酶活性的變化情況83.4 討論104 結(jié)論115 展望11參考文獻(xiàn)12致謝14三氯卡班對錦鯽的環(huán)境健康風(fēng)險(xiǎn)評價(jià)1 引 言由于居民生活質(zhì)量的不斷提高和工業(yè)的快速發(fā)展，環(huán)境中出現(xiàn)了越來越多的人工化學(xué)合成品。近幾年來，個人護(hù)理用品（Pharmaceuticals and Personal Care Products，簡稱PPCPs）作為一種新型的外來化學(xué)物質(zhì)帶來的環(huán)境問題日

9、益突出。PPCPs中的主要成分是三氯卡班，因此，人們逐漸深入對三氯卡班的環(huán)境問題研究。三氯卡班是一種新型的抗菌劑，因有連續(xù)、溫和、穩(wěn)定的殺菌特點(diǎn)，被廣泛應(yīng)用于日常生活中，如紡織品、洗衣粉、除臭劑、皮膚護(hù)理品、牙膏和傷口消毒劑等類產(chǎn)品中。三氯卡班與傳統(tǒng)的殺菌劑相比，其穩(wěn)定性和相容性極好，沒有異味，化學(xué)性質(zhì)穩(wěn)定。因其具有生物累積性而在環(huán)境中長期存在,本實(shí)驗(yàn)選擇三氯卡班（Chemical class card，簡稱TCC)和錦鯽作為實(shí)驗(yàn)材料，在室內(nèi)模擬條件下進(jìn)行半靜態(tài)染毒實(shí)驗(yàn)，研究低濃度10 mg/kg、高濃度100 mg/kg的三氯卡班對錦鯽肝臟抗氧化防御系統(tǒng)的影響。1.1 三氯卡班的理化性質(zhì)三氯

10、卡班（Chemical class card，簡稱TCC）又名N-(4-氯苯基)-N-(3,4-二氯苯基)脲，分子式為C13H9Cl3N2O，分子量為315.58，熔點(diǎn)為254-256，密度約為1530 KG/m，大部分呈白色微細(xì)粉末，無臭味，幾乎不溶于水。圖1-1三氯卡班化學(xué)結(jié)構(gòu)式1.2 三氯卡班在環(huán)境中的分布 隨著生活質(zhì)量的不斷提高，化學(xué)合成品的使用量也越來越大，在城市排水系統(tǒng)和剩余污泥中人們檢測到了三氯卡班。研究發(fā)現(xiàn)，在城市污水處理系統(tǒng)中，只有21%的三氯卡班被降解，76%吸附于污泥中，3%則保留在出水中。由于三氯卡班的強(qiáng)親脂性使得附著在底泥或固體等顆粒物中，其濃度可以達(dá)到mg/kg的級

11、別。環(huán)境中的三氯卡班主要來源是城市污水處理廠中的排水和剩余污泥的排放。除此之外，還有未經(jīng)過任何污水處理的商業(yè)用水和居民用水，直接排入河流，最終匯入至海洋。1.3三氯卡班的毒性作用三氯卡班已污染環(huán)境長久，但人們一直沒有引起重視，其主要原因是人們一直認(rèn)為三氯卡班是有效的殺菌劑并且不會對生命造成危害，但是三氯卡班的化學(xué)結(jié)構(gòu)同非甾體雌激素(如DES,雙酚A等)相類似因此，人們才開始研究該類殺菌劑對環(huán)境造成的影響。經(jīng)研究發(fā)現(xiàn)，三氯卡班的毒性會影響哺乳動物的生殖繁衍和幼體動物的發(fā)育。研究結(jié)果表示，三氯卡班會干擾細(xì)胞中睪酮的基因表達(dá)，容易造成前列腺異常增大、癌癥、生殖功能障礙和發(fā)育異常等疾病。水生生物同樣也

12、受到三氯卡班的毒性影響。研究三氯卡班對裸藻的形態(tài)及繁殖狀況的實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)低濃度下的三氯卡班時，裸藻的細(xì)胞形狀沒有直接受到影響，但是其葉綠體形態(tài)發(fā)生了改變；而當(dāng)三氯卡班的濃度升高時，就會直接影響裸藻結(jié)合孢子的數(shù)量，影響其有性生殖。將魚群模擬在室內(nèi)條件下進(jìn)行半靜態(tài)染毒實(shí)驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)在低濃度的三氯卡班下，魚群的表征性特征發(fā)生了變化，魚群的鰭長發(fā)生了改變但并沒有改變魚群的雌雄比例，說明了三氯卡班對魚類的內(nèi)分泌產(chǎn)生了一定的干擾。三氯卡班的毒性研究從哺乳動物到水生生物，逐漸深入研究。三氯卡班不僅可以干擾基因表達(dá)、干擾內(nèi)分泌系統(tǒng)，還有可能還會引發(fā)癌癥、生殖功能障礙和發(fā)育異常等病癥，成為重大的環(huán)境衛(wèi)生問題。因此本論

13、文對三氯卡班對錦鯉的毒性作用及機(jī)制展開系列研究。 1.4 三氯卡班的研究進(jìn)展研究人員通過對雄性老鼠喂食三氯卡班實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，三氯卡班會控制細(xì)胞中睪酮的基因表達(dá)，造成前列腺異常增大等缺陷。研究人員表示，內(nèi)分泌干擾物普遍都是遏制或削減激素活動，但是三氯卡班會增加激素活動。達(dá)潔靈消毒劑中含三氯卡班和十烷基二甲基甜菜堿，提取了適量懸液做定量殺菌實(shí)驗(yàn)、穩(wěn)定性檢測與部分毒性試驗(yàn)。結(jié)果表明：三氯卡班有較好殺菌效果，穩(wěn)定性好，基本無毒、與皮膚有較好的相容性。研究三氯卡班對土壤微生物酶活性的影響實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)，隨著三氯卡班的濃度增大，土壤中細(xì)菌的酶活性有先誘導(dǎo)后抑制的作用，而且作用的時間較長。對于真菌，隨著三氯卡班的濃

14、度升高，均表現(xiàn)為誘導(dǎo)作用，但隨時間的推移，逐漸表現(xiàn)為先抑制后誘導(dǎo)的作用。對于土壤中蛋白酶和多酚氧化酶活性的研究發(fā)現(xiàn)，任何濃度的三氯卡班對其均有抑制作用，但對過氧化氫酶活性有先抑制后誘導(dǎo)的作用。1.5錦鯽的抗氧化防御系統(tǒng)1.5.1 生物體的抗氧化防御系統(tǒng)生物體體內(nèi)本身就存在一套完整的抗氧化防御系統(tǒng)，當(dāng)外部污染物進(jìn)入生物體內(nèi)時，他們會經(jīng)歷一系列的生物化學(xué)變化，并在相關(guān)酶的催化作用下，外部污染物被轉(zhuǎn)化成其衍生物，這一過程稱為生物轉(zhuǎn)化，所產(chǎn)生的衍生物又稱代謝物。生物在對體內(nèi)的外源污染物進(jìn)行生物轉(zhuǎn)化時，會形成的中間代謝物，而中間代謝物往往伴隨有大量的活性氧如O2-、H2O2和ROOH存在。在正常生理?xiàng)l件

15、下，抗氧化防御系統(tǒng)能調(diào)節(jié)相關(guān)酶的分泌，通過相關(guān)酶催化作用有效的清除生物體內(nèi)產(chǎn)生的活性氧。如果抗氧化防御系統(tǒng)的清除能力跟不上生物體內(nèi)活性氧的生成速率，大量活性氧在生物體內(nèi)累計(jì)，當(dāng)活性氧達(dá)到一定量后將引起生物體產(chǎn)生氧化應(yīng)激，對機(jī)體造成氧化脅迫，從而對機(jī)體造成不可恢復(fù)性氧化損傷，使生物體產(chǎn)生中毒反應(yīng)?？寡趸烙到y(tǒng)的第一道防線是抗氧化酶中的SOD、CAT，主要是去除體內(nèi)自由基和增強(qiáng)身體抵抗力的作用；抗氧化防御系統(tǒng)的第二階段是解毒酶GST、GSH-px，其除了能和SOD催化生成的過氧化氫反應(yīng)，還能除去活性氧與脂質(zhì)反應(yīng)得到的脂質(zhì)過氧化物，將其還原成無毒的醇類和水。而非酶物質(zhì)，在抗氧化防御系統(tǒng)中通過抗氧化

16、酶的催化與外源污染物代謝的物質(zhì)結(jié)合，從而降低污染物的生物毒性。1.5.2 抗氧化防御的機(jī)理抗氧化防御系統(tǒng)分為三步進(jìn)行抗氧防御：第一步抗氧化防御是防止生物體體內(nèi)生物轉(zhuǎn)化時產(chǎn)生活性氧自由基，第二步抗氧化防御是依靠抗氧化性的酶類化學(xué)物質(zhì)以及抗氧小分子對已產(chǎn)成的自由基進(jìn)行清除，第三步抗氧化抗氧化防御是對已氧化損傷的分子進(jìn)行修復(fù)或清除。生物體代謝產(chǎn)生大量活性氧自由基引起氧化應(yīng)激時，SOD酶和CAT酶共同發(fā)揮作用可有效清除體內(nèi)產(chǎn)生的自由基，維持機(jī)體正常的生理平衡。SOD、CAT是抗氧化防御系統(tǒng)的重要防線。其中SOD是水生生物抗氧化防御系統(tǒng)中抗氧化酶的重要組成之一，它能將氧自由基O-2催化從成H2O2，但其

17、生成的H2O2和O2-反應(yīng)生成有毒的羥基自由基，因此由SOD催化產(chǎn)生的H2O2需要及時清除；而CAT主要催化H2O2轉(zhuǎn)化為H2O和O2，可以降低H2O2的濃度，從而保護(hù)機(jī)體組織，維持機(jī)體細(xì)胞內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)定。清除活性氧自由基的反應(yīng)如下：O-2+2H+ H2O2 +O2 (SOD催化反應(yīng))H2O2 H2O +O2 (CAT催化反應(yīng))自由基是有氧生物所必需的，但是如果自由基的生成量過大，抗氧化防御系統(tǒng)的抗氧化清除能力不夠，不能及時清除，從而受到抑制，長期下來就會導(dǎo)致抗氧化防御系統(tǒng)損傷，抗氧化能力下降。因此，抗氧化酶活性的變化成為魚類的機(jī)體狀況依據(jù)。1.6本論文研究目的和意義 在現(xiàn)如今，我們不當(dāng)當(dāng)要面對

18、由于抗生素的濫用，使得生物耐藥性增強(qiáng)，還需要解決抗生素帶來的潛在生態(tài)毒性?？股卮蠖鄶?shù)的研究還是集中在藻類急性毒性和短期毒性，在魚體上研究較少。這就需要增添這方面的研究數(shù)據(jù)，所以選取常見的錦鯽作為實(shí)驗(yàn)對象，研究在不同三氯卡班濃度下，錦鯽肝臟對脫氫酶的變化情況。通過觀察到的變化，初步判斷三氯卡班的毒性大小，也會后續(xù)的研究提供方向。實(shí)驗(yàn)主要通過判斷蛋白質(zhì)濃度、SOD酶活性、CAT酶活性的變化差異而得出結(jié)論。2 實(shí)驗(yàn)部分2.1 實(shí)驗(yàn)儀器及試劑2.1.1 實(shí)驗(yàn)儀器高效液相色譜質(zhì)譜儀（HPLC-ESI-MS）、冷凍離心機(jī) (Beckman,美國)、旋轉(zhuǎn)切片機(jī)（L eica rM2015. Germany

19、)、解剖剪、鑷子及解剖刀；2.1.2 實(shí)驗(yàn)試劑三氯卡班（TCC，純度：100）購自于上海邁瑞爾化學(xué)技術(shù)有限公司；二甲苯溶液、福爾馬林（國藥集團(tuán)試劑有限公司，上海）、SOD、CAT和蛋白質(zhì)含量測定試劑盒（南京建成生物工程研究院，南京），實(shí)驗(yàn)中所用的試劑純度均為100%。2.2 實(shí)驗(yàn)過程2.2.1采樣和樣品預(yù)處理錦鯽購于寧德市魚市場，分別在暴露天數(shù)為7、14、30天采樣，每組取3條錦鯽，撈取實(shí)驗(yàn)用魚擊昏后快速用濾紙吸干表面的水，放在天平上迅速稱重，后進(jìn)行解剖，取出魚的肝臟，用錫箔紙包好，稱重后放入冰箱冷藏備用。2.2.2暴露實(shí)驗(yàn)暴露實(shí)驗(yàn)是錦鯽模擬在室內(nèi)條件下進(jìn)行半靜態(tài)染毒實(shí)驗(yàn)。將錦鯽隨機(jī)分成若干實(shí)

20、驗(yàn)組 ，分別設(shè)置三個濃度組(0mgkg-1、10mgkg-1、100mgkg-1)進(jìn)行單獨(dú)暴露。光暗比設(shè)置為14h:10h,每條魚喂食量約10 mg/d，一天喂食一次或喂食多次，每天記錄魚的體長和體重，每天及時清除食物殘?jiān)图S便。采集樣品時需撈出錦鯽、擊暈錦鯽并放在稱量盤上，迅速稱重，并用儀器測量錦鯽體長和解剖錦鯽各器官，將魚的腮及肝臟，使用0.9%的生理鹽水沖洗干凈后，迅速放入-100冰箱或液氮罐中保存?zhèn)溆?，保證所取樣品是鮮活的。測定樣品時，先用濾紙吸干樣品表面的水分，迅速稱重并放入1：9（質(zhì)量體積比)的冷生理鹽水中，用電動勻漿器勻漿，接著在冷凍離心機(jī)上離心15min。離心結(jié)束取其上清液測量

21、酶活性。2.2.3 總蛋白的測定總蛋白的測定是根據(jù)Liying的方法測定，用考馬斯亮藍(lán)G-250作為染料，牛血清白蛋白作為標(biāo)準(zhǔn)蛋白，在游離狀態(tài)下的G-250呈棕紅色，當(dāng)標(biāo)準(zhǔn)蛋白液或樣品與顯色劑反應(yīng)時，溶液成藍(lán)色。特定區(qū)間內(nèi)的蛋白質(zhì)含量與色素的結(jié)合物在595nm下的吸光度隨光密度值的增大而增大，用測定的蛋白質(zhì)含量校正酶的活性。提取適量酶提取液于試管中，滴加3ml考馬斯亮藍(lán)G-250染料進(jìn)行染色，使其充分混合，10分鐘后在595nm波長下測量其吸光度，同時用對照管（蒸餾水空白）的吸光度作校正。2.2.4 SOD酶活性的測定SOD酶活性的測定是根據(jù)Otting和Flohe（1984）文章中的方法，采

22、用南京建成生物工程研究所的試劑盒測定相關(guān)生化參數(shù)。其實(shí)驗(yàn)原理：黃嘌呤在黃嘌呤氧化酶的催化下生成超氧離子自由基，在氧化羥胺的作用下，形成亞硝酸鹽。加入顯色劑后，在550nm下用分光光度計(jì)測其吸光度，可觀察到顏色變?yōu)榈霞t色。超氧離子具有專一抑制SOD酶的特點(diǎn)，當(dāng)被測樣品中含有SOD酶時，生成的亞硝酸鹽量降低，直接導(dǎo)致吸光度減小。通過對比標(biāo)準(zhǔn)樣品吸光度與所測樣品之間的吸光度，推算出SOD酶的活性，單位為 U SOD/g蛋白質(zhì)。通過實(shí)驗(yàn)中吸光度的變化，間接計(jì)算出SOD酶的活性，活力表達(dá)式為 U/mg protein。 SOD酶活性定義：每毫克組織蛋白在1mL反應(yīng)液中，抑制率達(dá)50%時，所對應(yīng)的SOD

23、酶量為一個活力單位(U)。同時用對照管（蒸餾水空白）的吸光度作校正。2.2.5 CAT酶活性的測定CAT酶活性的測定是利用南京建成生物工程研究所的試劑盒進(jìn)行批量化測定。采用鉬酸銨比色法：在CAT酶的催化下H2O2分解成H2O和O2，CAT酶反應(yīng)完后，剩余的H2O2 與鉬酸銨反應(yīng)生成淡黃色的絡(luò)合物，使反應(yīng)迅速得到平衡，然后用分光光度計(jì)測定其在405nm波長處的吸光度，間接可計(jì)算出CAT酶的活性，CAT活性表達(dá)式為U/mg protein。同時用對照管（蒸餾水空白）的吸光度作校正。2.2.6數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析利用SPSS軟件（Statistical Package for Social Sciences

24、，ver.12.0，SPSS公司，芝加哥，美國）進(jìn)行實(shí)驗(yàn)過程中的數(shù)據(jù)處理和分析。用平均值標(biāo)準(zhǔn)誤差（standard deviation，SD）的方式來表示實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。當(dāng)P0.05可認(rèn)為實(shí)驗(yàn)組與對照組之間有明顯的差異；文中統(tǒng)計(jì)分析圖均用Origin 10.1繪制。3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果3.1 蛋白質(zhì)濃度的變化情況觀察圖3-1看出，實(shí)驗(yàn)進(jìn)行到7天時，10mg/kg濃度組對其蛋白濃度沒有有明顯的誘導(dǎo)現(xiàn)象，100mg/kg濃度組對其蛋白濃度沒有有明顯的抑制現(xiàn)象（P0.05）。第14天，10gL-1和100gL-1濃度組沒有顯著的抑制作用（P0.05）。第30天，濃度組還是存在抑制現(xiàn)象，但沒有明顯的差異性。表3-1

25、 不同濃度的TCC在不同時間暴露下的蛋白質(zhì)濃度的變化暴露時間/天TCC暴露濃度Control10mg/kg100mg/kg71.441.451.16140.970.950.91301.161.071.01圖3-1不同劑量三氯卡班暴露下蛋白質(zhì)濃度變化3.2 SOD酶活性的變化情況觀察圖3-2看出，暴露實(shí)驗(yàn)進(jìn)行到第7天時，10mg/kg濃度組對錦鯽肝臟SOD酶活性沒有顯著性抑制，100mg/kg濃度組對錦鯽肝臟SOD酶活性沒有顯著性誘導(dǎo)（P0.05）。實(shí)驗(yàn)進(jìn)行到第14天時，10mg/kg濃度組對錦鯽肝臟SOD酶活性有顯著性誘導(dǎo)，100mg/kg濃度組對錦鯽肝臟SOD酶活性有顯著性誘導(dǎo)現(xiàn)象（P0.0

26、5）；在第30天時，10mg/kg、100mg/kg濃度組SOD酶活性與對照組相比，仍有明顯誘導(dǎo)現(xiàn)象（P0.05）；表3-2 不同濃度的TCC在不同時間暴露下的SOD酶活性的變化暴露時間/天TCC暴露濃度Control10mg/kg100mg/kg754.3349.3760.741464.4581.3579.433068.7683.3886.52圖3-2：不同劑量三氯卡班暴露下SOD酶活性變化3.3CAT酶活性的變化情況觀察圖3-3看出，實(shí)驗(yàn)的第7天時，10mgkg-1濃度組CAT酶活性沒有明顯抑制現(xiàn)象，100mgkg-1濃度組CAT酶活性有明顯的抑制現(xiàn)象（對比對照組）。這可能是高濃度組（10

27、0mgkg-1）魚體未能產(chǎn)生大量的氧自由基，導(dǎo)致CAT酶降低了合成量，使CAT酶表現(xiàn)出暫時的較低活性水平；在第14天時，低濃度組（10mgkg-1)開始出現(xiàn)上升現(xiàn)象，而高濃度組（100mgkg-1）CAT酶活性出現(xiàn)了抑制現(xiàn)象。對于低濃度組現(xiàn)象，可能是因?yàn)榭寡趸烙到y(tǒng)中其他的抗氧化酶參與調(diào)節(jié)，使得CAT酶活性從剛開始被抑制的狀態(tài)到輕微誘導(dǎo)現(xiàn)象。對于高濃度組，可能是魚體產(chǎn)生過量的氧自由基，消耗掉大量CAT酶。使得其CAT酶活性呈現(xiàn)下降趨勢；在第30天時，10mg/kg濃度組CAT酶活性與對照組相比，沒有顯著性抑制差異；100mg/kg濃度組CAT酶活性與對照組相比，有顯著性抑制現(xiàn)象，這說明10m

28、g/kg濃度的三氯卡班并不會對魚體肝臟抗氧化防御系統(tǒng)造成較大的損傷，魚體還能通過自身的調(diào)節(jié)進(jìn)行正常的生命活動。表3-3 不同濃度的TCC在不同時間暴露下的CAT酶活性的變化暴露時間/天TCC暴露濃度Control10mg/kg100mg/kg715.4415.2710.551421.5227.0716.813020.9719.0114.83圖3-3：不同劑量三氯卡班暴露下肝臟CAT酶活力變化3.4討論本實(shí)驗(yàn)研究目的是了解三氯卡班對錦鯽的毒性大小及機(jī)理，初步探討三氯卡班對錦鯽肝臟的氧化應(yīng)激系統(tǒng)損傷，為明確三氯卡班對水生生態(tài)系統(tǒng)的影響提供依據(jù)。總的來說，在暴露實(shí)驗(yàn)的早期階段，肝臟抗氧化防御系統(tǒng)的S

29、OD呈現(xiàn)誘導(dǎo)現(xiàn)象，CAT的酶活性呈現(xiàn)抑制現(xiàn)象，其中SOD酶活性的誘導(dǎo)程度大。SOD 酶屬于機(jī)體抗氧化防御系統(tǒng)的第一道防線，能對外部刺激迅速作出反應(yīng)，CAT酶和GPX酶組成系統(tǒng)的第二道防線，參與機(jī)體的自我調(diào)節(jié)。相比SOD酶活性的變化幅度，CAT酶活性變化較小，其原因是由于其他抗氧化酶（如GPX酶）的參與消除過量的氧自由基，使得CAT酶活性變化程度較小，基本保持在正常的水平（對比對照組）。在實(shí)驗(yàn)進(jìn)行到中期時，高濃度組SOD酶活性出現(xiàn)了短暫的顯著性誘導(dǎo)，而低濃度組SOD酶活性出現(xiàn)了滯后，在實(shí)驗(yàn)后期呈現(xiàn)出了誘導(dǎo)趨勢。盧彤巖等人通過觀察暴露在不同濃度（20、50、100mg/kg）的達(dá)氟沙星的施氏鱘肝臟

30、抗氧化系統(tǒng)抗氧化酶變化，發(fā)現(xiàn)高濃度組SOD酶活性首先被誘導(dǎo)，而低濃度組SOD酶的誘導(dǎo)現(xiàn)象滯后表現(xiàn)。在暴露實(shí)驗(yàn)進(jìn)行到后期，SOD和CAT酶活性基本恢復(fù)到正常水平（對比對照組）。孟文娜等研究發(fā)現(xiàn)不同濃度（0.05、0.01、0.1、0.5、1.0、5.0、10mg/L）土霉素暴露下，錦鯽肝臟抗氧化酶出現(xiàn)了不同程度的抑制和氧化損傷，在實(shí)驗(yàn)后期抗氧化酶活性都回升到對照組水平，得出了土霉素對抗氧化防御系統(tǒng)有輕微的氧化損傷，但不會有明顯的毒害。吳志剛等在研究CPFX對錦鯽肝臟的氧化損傷時，也發(fā)現(xiàn)暴露實(shí)驗(yàn)期間，CPFX未能對抗氧化防御系統(tǒng)造成損傷。這與本實(shí)驗(yàn)結(jié)論相符。在三氯卡班暴露下，SOD和CAT酶活性呈

31、一個連續(xù)性的變化，從抑制到誘導(dǎo)再到正常水平，說明了機(jī)體的抗氧化防御系統(tǒng)處于一個動態(tài)平衡，通過自身抗氧化酶的調(diào)節(jié)消除過量的氧自由基，維持機(jī)體進(jìn)行正常的生命活動，也說明了該實(shí)驗(yàn)濃度下的三氯卡班對錦鯽肝臟氧化損傷影響較小，這也與章強(qiáng)在三氯卡班與銅對小型魚類的生態(tài)毒性研究中得出的結(jié)論相符。4結(jié)論本論文針對三氯卡班進(jìn)入環(huán)境后錦鯽肝臟的損傷以及對肝臟抗氧化應(yīng)激系統(tǒng)的影響。論文主要研究結(jié)論如下：（1）在實(shí)驗(yàn)期間SOD和CAT酶活性從抑制到誘導(dǎo)再到正常水平，處于一種連續(xù)動態(tài)變化中。高濃度組SOD酶活性出現(xiàn)了顯著性誘導(dǎo)，說明魚體對三氯卡班刺激作出了反應(yīng)。（2）在本次暴露實(shí)驗(yàn)最后，SOD活性，CAT活性沒有對三氯

32、卡班表現(xiàn)出顯著的抑制，所以今后還需要嘗試改變實(shí)驗(yàn)對象，從微生物、細(xì)胞等方面深入研究三氯卡班的生態(tài)毒性。5展望1.全面深入的探究三氯卡班對于生物體抗氧化防御系統(tǒng)的毒性效應(yīng)。2.未來可以探究三氯卡班具體對哪個器官有損傷，在各器官的濃度大小。3.研究三氯卡班對生物體整個抗氧化防御系統(tǒng)抗氧化酶的影響。參 考 文 獻(xiàn)1 Singer H, Muller S, Tixier C, et al. Triclosan: occurrence and fate of a widely usedbiocide in the aquatic environment: Field measurements in wa

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