醫(yī)院感染管理科工作制度

1、第六章 醫(yī)院感染管理科工作規(guī)程醫(yī)院感染管理科是醫(yī)院感染控制的重點(diǎn)科室，規(guī)范的操作規(guī)程是做好醫(yī)院感染監(jiān)測、控制、 管理工作的基礎(chǔ)第一節(jié) 醫(yī)院感染病例監(jiān)測規(guī)程一、感染病例的資料收集1、每日到各病區(qū)詢問了解使用抗菌藥物及發(fā)熱病人的情況，追蹤了解發(fā)熱和使用抗菌藥物原因，對可疑醫(yī)院感染病例進(jìn)行調(diào)查取證。2、每日到臨檢中心收集了解申請細(xì)菌培養(yǎng)病例， 對可疑醫(yī)院感染病例進(jìn)行調(diào)查取證， 對 多重耐藥病例， 根據(jù)具體情況制定相應(yīng)的隔離和消毒措施， 協(xié)助臨床醫(yī)師有效控制院 內(nèi)耐藥菌株交叉感染。3、查看住院病歷，從入院診斷、確定診斷、感染情況、病程、細(xì)菌培養(yǎng)及輔助檢查情況 等幾方面了解有無醫(yī)院感染的發(fā)生。4、發(fā)現(xiàn)可

2、疑醫(yī)院感染病例和臨床醫(yī)師共同探討， 意見不統(tǒng)一時， 由醫(yī)院感染管理小組討 論決定，一旦確定為醫(yī)院感染，立即采取相應(yīng)措施并填寫醫(yī)院感染病例登記表，有效 控制醫(yī)院交叉感染的發(fā)生。5、監(jiān)督臨床醫(yī)師填寫醫(yī)院感染病例登記本， 以便臨床科室及時了解本科室的醫(yī)院感染動 態(tài)。6、監(jiān)督臨床醫(yī)師抗菌藥物使用情況，促進(jìn)臨床科室合理使用抗菌藥物。二、監(jiān)測資料匯總及反饋1、每月對醫(yī)院感染病例資料進(jìn)行分析匯總， 總結(jié)全院及各科室醫(yī)院感染發(fā)生率、 部位發(fā) 病率、細(xì)菌培養(yǎng)陽性情況、病原菌藥物敏感情況。2、每月 25 日前將醫(yī)院感染病例匯總資料上報科主任和院長。3、每季度第一個月 20 日前將醫(yī)院感染病例上報衛(wèi)生部全國醫(yī)院感染

3、監(jiān)測網(wǎng)。4、每季度對醫(yī)院感染病例資料進(jìn)行分析匯總，總結(jié)全院及各科室醫(yī)院感染發(fā)生率、 部位發(fā)病率、細(xì)菌培養(yǎng)陽性情況、病原菌藥物敏感情況，并將匯總結(jié)果以院感通訊或其他 方式通報全院各科室，使其及時了解醫(yī)院感染動態(tài)。第二節(jié) 醫(yī)院感染流行趨勢調(diào)研程序 醫(yī)院感染多為散發(fā)型，有時出現(xiàn)爆發(fā)流行。暴發(fā)是指在短時間內(nèi)某一病人群體中（醫(yī) 院、科室）突然發(fā)生數(shù)例（ 3 例以上）同種同源病原體引起的感染，也稱病例聚集性發(fā)生。 暴發(fā)是醫(yī)院感染流行的一種方式。無論散發(fā)還是爆發(fā)，進(jìn)行流行病學(xué)調(diào)查非常重要。 一、暴發(fā)的調(diào)查目的1、及時發(fā)現(xiàn)暴發(fā)的原因，以便采取有效措施，控制疾病的蔓延。2、確證暴發(fā)是否發(fā)生3、對調(diào)查暴發(fā)的結(jié)果加

4、以分析，查明引起暴發(fā)的原因，傳播途徑并檢驗控制措施效果， 總結(jié)經(jīng)驗，防止類似事件再次發(fā)生。二、調(diào)查方法 調(diào)查暴發(fā)的基本原則是邊調(diào)查邊采取控制措施。1、深入現(xiàn)場進(jìn)行初步調(diào)查 ，了解基本感染情況，以便及時向醫(yī)院感染管理委員會報告病 例的分布特征。（1）發(fā)生醫(yī)院感染的時間。（2）發(fā)生醫(yī)院感染的范圍和時間，具體到各科室（可以提示病例的聚集現(xiàn)象） 。（3）發(fā)生醫(yī)院感染的人群特點(diǎn)，包括年齡、性別、習(xí)慣、疾病類型、免疫力、抗菌藥物 或免疫抑制劑的使用情況、暴露因素、與他人和環(huán)境的接觸機(jī)會等。2、采集標(biāo)本，積極查找感染源。兌換病的病人、接觸者、可疑傳染源、環(huán)境物品、醫(yī)務(wù) 人員及陪護(hù)人員等，進(jìn)行病原學(xué)檢驗。3、

5、核實診斷，證實暴發(fā)。醫(yī)院感染管理專職人員與臨床醫(yī)學(xué)專家一起，根據(jù)流行病學(xué)資 料、實驗室檢驗及其他輔助檢查結(jié)果，對可疑感染病例進(jìn)行確診，并計算其罹患者，若罹患率大于該科室或病區(qū)以往的發(fā)病率，則認(rèn)為有某病的流行或暴發(fā)。 罹患率：是一種特殊的發(fā)病率，多用在暴發(fā)流行中，一般一百以分率表示。罹患率（%）=某時期發(fā)生某種感染病人數(shù)（觀察期間新發(fā)病例數(shù)）X=100%同時期處于危險中病人數(shù)（觀察期間的暴露人數(shù)）4、提出初步控制措施（1）根據(jù)初步調(diào)查結(jié)果，采取必要的消毒隔離措施。（2）對病人做適當(dāng)治療，需要隔離的病人及時隔離，必要時暫停接受病人。5、 根據(jù)分布特征提出假設(shè)根據(jù)調(diào)查所得的分布特征，提出導(dǎo)致感染的的

6、可能原因，在 提出假設(shè)時，不僅要說明某些病人為什么發(fā)生醫(yī)院感染，還應(yīng)說明其他病人為什么沒 有發(fā)生醫(yī)院感染。6、深入調(diào)查 調(diào)查的方法多種多樣，主要根據(jù)暴露的接觸史進(jìn)行調(diào)查，例如按暴露因素 來分組進(jìn)行調(diào)查，分析暴露組和非暴露組的罹患率以及發(fā)病組與對照的暴露史的比例。 通過深入調(diào)查，以查明傳染源（感染源和儲菌所）和傳播途徑，從而采取有效的控制 措施。常用的調(diào)查方法包括：（1） 病例對照研究：將醫(yī)院感染的病例組與未感染的對照進(jìn)行感染情況的比較，將比較的結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計分析，如果兩組之間的差異有統(tǒng)計學(xué)意義，可初步確定感染的原因。具體步驟如下。1）確定發(fā)生醫(yī)院感染的危險因素。2）按照醫(yī)院感染診斷標(biāo)準(zhǔn)確定發(fā)生醫(yī)

7、院感染的病例。3）選擇對照人群：在未發(fā)生醫(yī)院感染的人群中找出與發(fā)生醫(yī)院感染的病例在非危險因素方面盡可能一致的病例，病例組合對照組的人數(shù)比例為1:1或1:2，最多1:4,如果是感染暴發(fā)，可以設(shè)兩個對照組，第一個對照組，取在爆發(fā)前后住院而未受到感染的病 人。第二個對照組，取暴發(fā)期間未受到感染的病人。4）配比樣本：要求每例發(fā)生醫(yī)院感染的病人與一例或一例以上未發(fā)生醫(yī)院感染的病人， 按照特定的配比特性配對，須遵循隨機(jī)化原則。5）收集統(tǒng)計醫(yī)院感染病例的對照組病例資料，進(jìn)行研究分析，得出結(jié)論。（2）隊列研究：最常用的方法是橫斷面研究，又稱現(xiàn)況研究，是隊列研究的一種。在醫(yī)院感染發(fā)生的某一時點(diǎn)或在短暫時間內(nèi)研究

8、一些因素與醫(yī)院感染之間的關(guān)系。通過分析醫(yī)院感染在時間、地點(diǎn)、人群中的分布，闡明發(fā)生醫(yī)院感染的頻率的特點(diǎn)。發(fā)病率（%）=（特定的一段時間內(nèi)）發(fā)生感染的病人數(shù)X100%（特定的一段時間內(nèi)）受到感染威脅的病人數(shù)時點(diǎn)患病率（%）=某時點(diǎn)（某日的 24h內(nèi)）發(fā)生感染的新舊病人數(shù) X100%同時點(diǎn)內(nèi)的住院人數(shù)期間患病率（%）=某期間（周、月、年）發(fā)生感染的新舊病人數(shù)X100%同期間內(nèi)的住院人數(shù)（3）前瞻性研究： 對發(fā)生某種或某部位感染的特定人群進(jìn)行一定時間的隨訪觀察， 去的 完整可靠的資料可采用這種方法。 對一組暴露于某因素的人群進(jìn)行前瞻性觀察， 并 設(shè)有未暴露于該因素的人群組成對照組， 經(jīng)過一定的時間后

9、， 進(jìn)行兩組人群發(fā)病率 的比較， 得出他們之間發(fā)病率的差異， 優(yōu)點(diǎn)是可以獲得第一資料， 資料的偏差行小。（4）說明1）調(diào)查結(jié)果是說明感染與某種因素有聯(lián)系，但不一定是病因。2）不能認(rèn)為每一個感染病人都有引起疾病的暴露因素。3）以上僅僅是醫(yī)院感染流行調(diào)查研究的一些主要的辦法，具體研究方法需根據(jù)具體情而定。4）對培養(yǎng)出的微生物進(jìn)行分型，如細(xì)菌按耐藥譜分型、細(xì)菌素分型、嗜菌性分型、血清 學(xué)分型、質(zhì)粒分型及核酸指紋分型等。三、爆發(fā)調(diào)查結(jié)果的分析（一）描述病例的分布1、地區(qū)分布 按科室（病區(qū)）或病室，外科可按手術(shù)室等來分析，觀察病例是否集中于 某地方，計算并比較不同單位的罹患率。2、人群分布 主要是計算和

10、比較有無暴露史的兩組病人的罹患率，例如外科可按不同的 手術(shù)醫(yī)生或某一操作來描述人群分布3、時間分布 根據(jù)病例發(fā)生的情況計算單位時間內(nèi)的發(fā)病人的罹患率，單位時間可以小 時、天、月來計算，可繪制成直條圖。（二）暴發(fā)因素的分析 根據(jù)上述分析和比較，來推測可能的傳染源、傳播途徑或因素，結(jié)合實驗室檢驗結(jié)果及采 取措施的效果作出綜合判斷四、完善控制方案 醫(yī)院感染管理委員會保證感染控制工作中所需的財力、物力和人力的支持（成立應(yīng)急領(lǐng)導(dǎo)小組）。醫(yī)院感染管理科監(jiān)督執(zhí)行控制方案的實施。五、追蹤監(jiān)測 醫(yī)院感染管理科檢驗組檢驗控制效果，追蹤調(diào)查有無再發(fā)病例，并評價控制措施。六、結(jié)論 寫出調(diào)查報告，總結(jié)經(jīng)驗，防止類似事件

11、再次發(fā)生。1、將調(diào)查結(jié)果反饋相應(yīng)科室和醫(yī)院感染管理委員會。2、根據(jù)感染聚集發(fā)生事件提出醫(yī)院感染控制的長效措施3、醫(yī)院感染管理委員會根據(jù)調(diào)查報告和醫(yī)院感染控制方案組織討論，以便健全制度，加 強(qiáng)培訓(xùn)，改善醫(yī)院硬件條件等。4、將總結(jié)報告記錄歸檔。第三節(jié) 消毒滅菌效果檢驗操作常規(guī) 一、空氣微生物污染采樣及檢測方法（一）采樣時間 選擇消毒處理后并進(jìn)行醫(yī)療活動之前采樣。（二）采樣高度與地面垂直高度 80150cm（三）布點(diǎn)方法室內(nèi)面積w 30m2，設(shè)一條對角線上取 3點(diǎn)，即中心一點(diǎn)、兩端各距墻1m處各取一點(diǎn)；室內(nèi)面積30m2，設(shè)東、西、南、北、中 5點(diǎn)，其中東、西、南、北點(diǎn)均距墻1m。（四）采樣方法用直徑

12、為9cm的普通營養(yǎng) 平板放在室內(nèi)各采點(diǎn)，將平板蓋打開，扣放于平皿旁暴露 5min , 蓋好立即送檢培養(yǎng)（五）細(xì)菌菌落總數(shù)計算方法50000N空氣細(xì)菌菌落總數(shù)（cfu/m ）=AT式中；A 平板面積，cm2T 平板暴露時間，min;N 平板菌落數(shù)，cfu/平皿。二、層流手術(shù)室空氣污染采樣及檢測方法（一）層流手術(shù)室常規(guī)空氣采樣及檢驗方法參照中華人民共和國國家標(biāo)準(zhǔn)（GB15982 1995）1、采樣時間 選擇消毒處理后并進(jìn)行醫(yī)療活動之前采樣。2、 采樣高度 采樣點(diǎn)可布置在地面垂直高度80150cm的高度上。3、 采樣方法用直徑為9cm的普通營養(yǎng)瓊脂平皿放在室內(nèi)各采樣點(diǎn)，將平皿蓋打開，扣放 于平皿旁暴

13、露5min，蓋好立即置于 37C培養(yǎng)箱，培養(yǎng) 48h,然后計數(shù)生長的菌落數(shù)。 布點(diǎn)方法如圖2-6-1所示O西O中O東4、結(jié)果報告 層流潔凈手術(shù)室w 10cfu/m5、檢測時間每月一次二、物體表面微生物污染采樣及檢測方法（一）采樣時間選擇消毒處理后4h內(nèi)進(jìn)行采樣（二）采樣面積被采表面v 100cm2，取全部表面；被采面積 100cm2，取100cn2（三）采樣方法用5cm X 5cm的標(biāo)準(zhǔn)滅菌規(guī)格板，放在被檢物體表面，用浸有無菌生理鹽水采樣液的棉拭子1支，在規(guī)格板內(nèi)橫豎往返各涂抹5次，并隨之轉(zhuǎn)動棉拭子，連續(xù)采樣14各規(guī)格板面積，剪去手接觸部分，將棉拭子放入裝有10ml采樣液的試管中送檢。門把手等

14、小型物體則采用棉拭子直接涂抹物體表面的方法采樣。（四）檢測方法將采樣管在混均器上震蕩 20s或用力振打80次，用無菌吸管吸取1.0ml待檢樣品接種于 滅菌平皿，每一樣本接種 2個平皿，內(nèi)加入 4548C的普通營養(yǎng)瓊脂 1518ml，邊傾注邊 搖均，待瓊脂凝固，置 36 1C恒溫箱培養(yǎng)48h，計數(shù)菌落數(shù)。（四）結(jié)果計算平皿上菌落的平均數(shù)X采樣液稀釋倍數(shù)物體表面細(xì)菌菌落總數(shù)（cfu/cm 2）=采樣面積四、醫(yī)護(hù)人員手微生物采樣及檢測方法（一）采樣時間在接觸病人、從事醫(yī)療活動前進(jìn)行采樣（二）采樣面積及方法被檢人五指并攏，將浸有無菌生理鹽水采樣液的棉拭子一支在雙手指曲面從指根到指端 來回涂擦各兩次（一

15、只手涂擦面積約30cm2 ）并隨之轉(zhuǎn)動采樣棉拭子，剪去手接觸部位，將棉拭子放入裝有10ml采樣液的試管內(nèi)送檢。采樣面積按平方厘米（cm2）計算。（三）檢測方法將采樣管在混勻器上震蕩20s或用力振打80次，用無菌吸管吸取1.0ml待檢樣品接種于滅菌平皿，每一樣本接種2個平皿，內(nèi)加入已滅菌的 45C 48C的普通營養(yǎng)瓊脂 1518ml,邊傾注邊搖勻，待瓊脂凝固，置36 1C溫箱培養(yǎng)48h，計數(shù)菌落數(shù)。（四）結(jié)果計數(shù)平皿上菌落的平均數(shù)X采樣液稀釋倍數(shù)手細(xì)菌菌落總數(shù)（cfu/cm 2）=30 X 2五、沙門菌污染檢測（一）采樣方法對物體表面采樣時，用浸有滅菌生理鹽水的棉拭子進(jìn)行涂抹采樣，采樣面積不限，

16、但 每件樣品不得小于100cm2;對醫(yī)護(hù)人員手采樣時，用浸有滅菌生理鹽水的棉拭子在10個手指每個掌面往返涂抹采樣一次。采樣完畢后，將棉拭子放入膽鹽乳糖采樣管， 帶回實驗室。（二）檢驗程序（三）將裝有采樣棉拭子的膽鹽乳糖放入37C恒溫箱培養(yǎng)1824小時，然后接種ss或酸性亞甲藍(lán)瓊脂平板，置于37 C恒溫箱培養(yǎng)1824小時，挑去無色透明或半透明、圓形、邊緣整齊、表面光滑、濕潤菌落接種三糖鐵瓊脂斜面培養(yǎng)基中， 置于37C恒溫箱中培養(yǎng)1824h后挑取5個以上的可疑病原菌菌落，經(jīng)細(xì)菌檢定儀鑒定。六、壓力蒸汽滅菌器滅菌效果檢測（一）檢測用試劑1、 2%溴甲酚紫乙醇溶液，取溴甲酚紫2.0g，溶于100ml9

17、5%乙醇中。2、 溴甲酚紫蛋白胨水培養(yǎng)既配制，蛋白胨10.0g，葡萄糖5.0g，溶于1000ml蒸餾水中，調(diào)ph6.87.0，然后再加2%溴甲酚紫乙醇溶液 0.6ml，搖勻后，按 5ml/管， 分裝封口，置壓力蒸汽滅菌器中，于115C滅菌20min后備用。（二）操作方法將兩個菌片分別放入滅菌小紙袋或平皿內(nèi)。置于標(biāo)準(zhǔn)試驗包（下排氣25cmx 30cmX30cm;預(yù)真空23cmX 23cmX 15cm；手提式通氣儲物盒 22cmX 13cmx 6cm）中心部位。 分別放入滅菌柜室內(nèi)，上、中層中央和排氣口上方處各放置一個標(biāo)準(zhǔn)試驗包；手提 壓力蒸汽滅菌器用通氣貯物盒，盒內(nèi)盛滿中試管，指示菌片放于中心部

18、位兩只滅菌 試管內(nèi)（試管口滅菌牛皮紙包封） ，將盒平放手提壓力蒸汽滅菌器底部。經(jīng)一個滅菌 周期后，在無菌條件下取出菌片，投入溴甲酚紫蛋白胨水中，于56C培養(yǎng)7天后（自含式生物指示物按說明書執(zhí)行）根據(jù)其顏色變化判斷滅菌效果。（三）判斷方法 若培養(yǎng)基全部不變色，判定為滅菌合格。若培養(yǎng)基由紫色變成黃色，判定為滅菌不 合格。（四）注意事項 監(jiān)測所以菌片須經(jīng)衛(wèi)生部認(rèn)可，并在有效內(nèi)使用。生物指示物監(jiān)測，每月一次（五）快速生物監(jiān)測自動閱讀器：（藍(lán)帽）用于監(jiān)測132C下排氣鍋和（棕色帽）用于檢測121 C下排氣和132 C預(yù)真空鍋自動閱讀器閱讀由陽性的快速生物指示劑產(chǎn)生的熒光以提示滅菌過程失敗。一旦發(fā)現(xiàn) 結(jié)果

19、陽性（ +）會即時顯示。陰性（ - ）結(jié)果顯示需要整個培養(yǎng)過程。七、過氧化氫低溫等離子滅菌裝置消毒效果監(jiān)測（一）物理監(jiān)測 滅菌器顯示屏及最后打印結(jié)果所顯示的數(shù)據(jù)監(jiān)測;時間、溫度、壓力等。（二）化學(xué)監(jiān)測 通過化學(xué)指示劑顏色的改變來判斷滅菌參數(shù)是否達(dá)標(biāo)。1、過氧化氫指示膠帶（包外指示）2、過氧化氫指示卡（包內(nèi)指示）（三）生物監(jiān)測 使用標(biāo)準(zhǔn)菌滅菌處理后進(jìn)行培養(yǎng)，觀察結(jié)果判斷滅菌是否合格。1 、 指示菌種和培養(yǎng)基 指示菌為嗜熱脂肪肝菌芽孢 2.06 x 10cfu/ 片。培養(yǎng)基為胰蛋白 酶大豆肉湯。2、生物測試劑 自含式菌種包裝， 避免了培養(yǎng)操作中的污染。 將生物測試劑置入 75mmx 200mm或

20、100mnX 260mm或 150mnX 320mm的特衛(wèi)強(qiáng)滅菌袋內(nèi)。在使用生物測試劑 前，先檢查其有效期。3、測試方法 將內(nèi)附生物測試劑的特衛(wèi)強(qiáng)滅菌袋面朝上，置于滅菌艙下層內(nèi)角（與每天第一鍋物品同時滅菌） 。4、滅菌循環(huán)結(jié)束后從滅菌鍋內(nèi)取出滅菌袋，在拆除外包裝前，將測試劑完全下壓。 從袋中取出測試劑，檢驗證實頂蓋顯現(xiàn)金黃色。5、保持生物測試劑垂直，置于試管夾內(nèi)用力擠壓，直至其內(nèi)部的培養(yǎng)基小瓶壓碎。將滅菌處理后的生物測試劑置入5560C的恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)，培養(yǎng)48h同時取一個未處理的生物測試劑做陽性對照。6、結(jié)果顯示 滅菌處理后的生物監(jiān)測試劑黃色頂蓋和紫色內(nèi)容物，表明結(jié)果為陰性。 未經(jīng)滅菌處理的生

21、物測試劑應(yīng)為紅色頂蓋、黃色或混濁的內(nèi)容物，表明結(jié)果為陰性。 48h 讀出結(jié)果后立即將生物測試劑丟棄于危害物處理箱內(nèi)。呈陽性的對照組合任何陽性反應(yīng)的生物指示劑在丟棄前可以用121 C高壓蒸汽消毒30min或者焚燒、7、禁忌裝載物品 布類，如紗布、醫(yī)用膠布、醫(yī)用絲線、棉球；紙類，如脫敏膠布、 化驗單、手術(shù)貼膜、紙類器械、目錄、紙類日期標(biāo)簽；油類，如石蠟油、國產(chǎn)動 力系統(tǒng)的電池（內(nèi)含較多油類物質(zhì)，如需滅菌請與服務(wù)人員聯(lián)絡(luò)） ；水分，如未進(jìn) 行徹底干燥處理器械、管道內(nèi)外的水分；粉劑，如滑石粉、粉針劑藥品；木類， 如壓舌板等。十、食堂餐具消毒效果檢測 大腸菌群紙片檢測法：依據(jù)中華人民共和國國家標(biāo)準(zhǔn)食（飲

22、）具消毒衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn) GB14934-94.（一）紙片法采樣與檢驗 食（炊）具消毒采用專用的大腸菌群快速檢驗紙片。 隨機(jī)抽取消毒后備用的各類食具（碗、盤、杯等）每次采樣 610 件，每件貼紙片 2張，每張紙片面積 25cm2 （ 5cmx 5cm）用無菌生理鹽水濕潤大腸菌群檢測用紙片后， 立即貼于食具內(nèi)側(cè)表面， 30s 后取下，置于無菌塑料袋內(nèi)。筷子以 5 支為一件樣品，用毛細(xì)吸管取無菌生理鹽水濕潤紙片后，立即將筷子進(jìn)口端（約5cm）抹拭紙片，每件樣品抹試 2張，放入無菌塑料袋內(nèi)。將已采樣的紙片置 37C培養(yǎng)1518h，若紙片保持紫藍(lán)色不變?yōu)榇竽c菌群陰性，紙片變黃并在黃色背景上呈現(xiàn)紅色斑點(diǎn)或片狀紅

23、暈為陽性。（二）結(jié)果報告檢驗紙片兩片為一件（50cm2）報告結(jié)果為：50cm2檢出或未檢出大腸菌群。十一、內(nèi)鏡的消毒效果檢測（一）消毒效果生物學(xué)檢測方法1、采樣方法 監(jiān)測采樣部位為內(nèi)鏡的腔面。用無菌注射器抽取 10ml 含相應(yīng)中的和劑 緩沖液， 從待檢內(nèi)鏡活檢口注入， 用 15ml 無菌試驗管從活檢出口收集， 及時送檢， 2h 內(nèi)檢。2、 菌落計數(shù) 將送檢液用旋渦器充分震蕩，分別取0.5ml，加入2塊直徑9cm無菌平皿， 每個平皿分別加入滅菌的營養(yǎng)瓊脂1 51 8m l ，邊傾注邊搖勻， 待瓊脂凝固， 于36 1C培養(yǎng)48h后進(jìn)行菌落計數(shù)。結(jié)果判斷：菌落數(shù)/鏡=2個平皿菌落數(shù)平均值。3、 致病

24、菌檢測 將送檢液用于旋渦器充分震蕩，取0.2ml分別接種9cm血平皿、中國 蘭皿和ss平皿，均勻涂布，36 1C培養(yǎng)48h,觀察有無致病菌生長。（二）衛(wèi)生學(xué)標(biāo)準(zhǔn)消毒后的內(nèi)鏡合格標(biāo)準(zhǔn)：細(xì)菌總數(shù)v20cfu/件，不能檢出致病菌；滅菌后內(nèi)鏡合格標(biāo)準(zhǔn)：無菌檢測合格。（三）生物學(xué)檢測頻率 消毒后的內(nèi)鏡為每季度監(jiān)測一次，滅菌后的內(nèi)鏡每月監(jiān)測一次。 十二、污水消毒效果檢測（一） 總余氯的檢測1、 試劑配置 鄰聯(lián)甲苯胺溶液：稱取 1克鄰聯(lián)甲苯胺，溶于 5ml20%（容積/容積）鹽 酸中，將其調(diào)成糊狀，加入 150200ml 蒸餾水使其完全溶解，置于量筒中補(bǔ)加蒸 餾水至505ml，最后加入20%鹽酸496ml，

25、儲于棕色瓶中。2、測定步驟 在盛有 5ml 樣品的比色管內(nèi)滴加鄰聯(lián)甲苯溶液 2滴或 3滴， 混勻， 置暗 處15min,與余氯標(biāo)準(zhǔn)比色溶液比色測定 （比色時，眼睛從管口向下觀察或由前面 觀察）。檢測溫度應(yīng)控制在 1520 C；余氯過高會產(chǎn)生橘黃色，堿度過高或余氯很 低時可能會產(chǎn)生淡藍(lán)綠色或淡藍(lán)色，應(yīng)多加 1ml 1:2 的鹽酸或 1ml 鄰聯(lián)甲苯胺溶 液，即可產(chǎn)生正常的淡黃色進(jìn)行比色測定。3、 檢驗結(jié)果報告 檢驗結(jié)果以每升污水中含余氯的毫克數(shù)（mg/L ）（二） 大腸菌群數(shù)檢測：采用多管發(fā)酵法。1、采樣方法 用采樣器或其他滅菌容器采取污水樣 1000ml ，放入滅菌瓶內(nèi)，加 1.5% 硫代硫酸

26、鈉溶液 5ml 中和余 lv2、多管發(fā)酵法 初發(fā)酵試驗：將原液作 1:10 1:100 1:1000 稀釋。依次吸取 1:100 1:100 1:10及原液1ml，分別注入裝有10ml乳糖膽鹽培養(yǎng)液內(nèi)裝小發(fā)酵管的試管 中，將已接種的4支發(fā)酵管置于44C恒溫箱內(nèi)培養(yǎng)24h平板分離：取經(jīng)培養(yǎng) 24h 后產(chǎn)酸產(chǎn)氣，以及只產(chǎn)酸不產(chǎn)氣的發(fā)酵管中培養(yǎng)液，分別畫 線接種伊紅美藍(lán)培養(yǎng)基上，置37C恒溫箱內(nèi)培養(yǎng)1824h,挑選符合下列特征的菌落，進(jìn)行涂片，革蘭氏染色，鏡檢。伊紅美藍(lán)培養(yǎng)基上的菌落色澤：深紫黑色，具有金屬光澤的菌落；紫黑色，不帶或略 帶金屬光澤的菌落；淡紫紅色，中心色較深的菌落。復(fù)發(fā)酵實驗：上述涂

27、片鏡檢的菌落，如革蘭陰性無芽胞桿菌，再挑去該菌落接種于乳糖發(fā)酵管中（內(nèi)有倒管），置于44 C恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24h,有產(chǎn)酸產(chǎn)氣者即證實有糞大腸菌群存在，按陽性管數(shù)查表。（三）致病菌檢測檢測沙門菌屬和志賀菌屬1 、 污水取樣 取 250ml 污水，用無菌紗布或脫脂棉進(jìn)行初濾然后再用濾膜進(jìn)行抽濾。 將初濾，放入盛有100ml左右的單倍SF（GN增菌液的三角燒瓶中進(jìn)行增菌培養(yǎng)。 置于37 C恒溫培養(yǎng)箱，培養(yǎng) 24h （6-8h ）2、 平板分離取上述增菌培養(yǎng)液，分別接種SS平板和BS平板（SS平板和E、M B、 平板），置于37C恒溫培養(yǎng)箱培養(yǎng) 2448h。3、 挑選菌落 挑落在SS平板上呈無色透明

28、或中間有黑色，直徑12mm的菌落；挑選在BS平板上呈黑色有金屬光澤的菌落或灰綠色的菌落（挑取在SS和E、M B平板上呈無色透明，直徑 1-1.5mm 的菌落）。4、挑選 5 各以上的可疑病原菌菌落，經(jīng)細(xì)菌鑒定儀鑒定。5、結(jié)果報告 根據(jù)以上鑒別培養(yǎng)、細(xì)菌鑒定結(jié)果報告。注：括號內(nèi)為志賀菌屬的培養(yǎng)法。（四）檢測頻率1 、 檢測頻率（ 1 ） 總余氯： 醫(yī)療機(jī)構(gòu)經(jīng)過連續(xù)處理裝置消毒的污水， 總余氯至少檢測 2 次；經(jīng)過 間歇式處理裝置的污水，每次排放前均應(yīng)檢測。（ 2）糞大腸菌群：糞大腸菌群每月測不得少于 1 次。（3）致病菌： 醫(yī)療機(jī)構(gòu)污水中致病菌， 每年檢測不得少于 2次。 主要檢測沙門菌核志賀菌

29、，結(jié)核病醫(yī)療機(jī)構(gòu)檢測結(jié)核桿菌。2、醫(yī)療機(jī)構(gòu)污水排放標(biāo)準(zhǔn)糞大腸菌群w 900MPN/L;腸道致病菌不得檢出；總余氯（二氧化氯法）4.0mg/L第四節(jié) 消毒劑的有效濃度檢測一、有效氯含量測定 本方法可用于各種氯消毒劑的滴定（一） 試劑1、 配制 2mol/L 硫酸溶液 取 98ml 濃硫酸至蒸餾水中稀釋，最后用蒸餾水調(diào)至 500ml 刻度。2、 10%碘化鉀溶液 稱取碘化鉀10g加蒸餾水溶解，最后用蒸餾水調(diào)至100ml刻度。3、 0.5%淀粉溶液稱取可溶性淀粉 0.5g，用少量蒸餾水溶解，最后用蒸餾水調(diào)至100ml 刻度。4、配制并標(biāo)定0.1mol/L硫代硫酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液（二） 滴定方法1、 稱取消

30、毒劑 對液體含氯消毒劑，吸取1.0ml于容量瓶中，加蒸餾水至刻度，混勻；對固定含氯消毒劑，稱取1g（精確至0.001g ）置研缽研磨后以蒸餾水溶解，轉(zhuǎn)入100ml容量瓶中，（溶水中無殘渣者可免研磨）。稱量杯及研缽需用蒸餾水洗3次，洗液全部轉(zhuǎn)入容量瓶。2、 濃度滴定 向100ml碘瓶中加2mol硫酸10ml,10%碘化鉀溶液10ml和混勻的消毒劑稀 釋液10ml，此時溶液呈棕色。 蓋上蓋并振搖混勻后，加蒸餾水?dāng)?shù)低于碘量瓶蓋緣，置暗處5min。打開蓋，讓蓋緣蒸餾水流入瓶內(nèi)。用硫代硫酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液（裝于25ml滴定管中）滴定游離碘，邊滴邊搖勻，待溶液呈淡黃色時加入0.5%淀粉溶液10滴，溶液立即變藍(lán)色

31、，繼續(xù)滴定至藍(lán)色消失，記錄用去的硫代硫酸鈉溶液總量。重復(fù)測3次，取3次平均值進(jìn)行以下計算。3、 有效氯含量計算因1mol/l硫代硫酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液 1ml相當(dāng)于0.03545g，故可按下式計 算有效氯含量。有效氯含量=MxVx0.03545 x100%WM:硫代硫酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度mol/l。V:滴定用去硫代硫酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液毫升數(shù)W:碘量瓶中所含消毒齊U原藥克數(shù)（液體消毒劑則為毫升數(shù)）二、有效碘含量測定本方法可用于各種碘制劑的滴定。（一）試劑配制0.5%淀粉溶液，36%醋酸溶液，配制并標(biāo)定 0.1mol/L硫代硫酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液（二）滴定方法向100ml碘量憑著個精確加含碘消毒劑樣液5.0ml及醋酸1滴。

32、用0.1mol/L硫代硫酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定（通常用 25ml滴定，若預(yù)計有效碘濃度 5%時用50ml滴定管），邊滴邊搖 勻，待溶液呈淡黃色時加入 0.5%淀粉溶液10滴，溶液立即變藍(lán)色，繼續(xù)滴定至藍(lán)色消失， 記錄用去的硫代硫酸鈉溶液總量。重復(fù)測2次，取3次平均值進(jìn)行以下計算。（三）有效碘含量計算由于1mol/L硫代硫酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液1ml相當(dāng)于0.1269g有效碘，故可按下式計算有效碘含量。有效碘含量=MX VX 0.1269X 100%WM：硫代硫酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度（mol/L ）V:滴定用去硫代硫酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液毫升數(shù)。W碘量瓶中所含消毒齊U原藥克數(shù)（液體消毒劑則為毫升數(shù)）第五節(jié)使用中消毒劑微生物污染

33、檢測一、采樣時間常規(guī)采取使用中的消毒劑二、檢測方法1、 采樣 在無菌條件下，用無菌吸管取1ml被檢樣液，加入 9ml含相應(yīng)中和劑稀釋液中 混勻。對于醇類與酚類消毒劑，稀釋液用普通營養(yǎng)肉湯或無菌生理鹽水即可；對于含氯消毒劑、過氧化物消毒劑， 需在肉湯中加入0.1%硫代硫酸鈉；對于醛類消毒劑， 需 在肉湯中加入0.3%甘氨酸；對于含有表面活性劑的各種復(fù)方消毒劑，需在肉湯中加入0.3%（W/V吐溫80，以中被檢樣液的殘效作用。2、 檢測方法 分別取0.5ml放入2只滅菌平皿內(nèi)，加入滅菌的普通營養(yǎng)瓊脂 1518ml，邊 傾注邊搖勻，待瓊脂凝固，一平皿置20C培養(yǎng)7天，觀察霉菌生長情況； 另一平皿置 36 1C培養(yǎng)3天，計數(shù)菌落數(shù)，并檢測致病菌。（五）結(jié)果分析平皿上有菌生長，證明被檢樣液有殘存活菌，若每個平皿菌落數(shù)在5個以下，并未檢出致病菌為合格，可用于消毒處理（但不能用于滅菌）若每個平皿菌落數(shù)超過5個（說明每毫升被檢樣液含菌量已超過100個）