核酸的化學(xué)3學(xué)分

1、第五章第五章 核酸的化學(xué)核酸的化學(xué)核酸的種類、分布、核酸的種類、分布、功能功能核酸的組成核酸的組成成分成分DNA的的結(jié)構(gòu)結(jié)構(gòu)RNA的結(jié)構(gòu)和的結(jié)構(gòu)和功能功能核酸的核酸的性質(zhì)性質(zhì)核酸的序列核酸的序列測定測定1868年，瑞士Miescher發(fā)現(xiàn)核酸發(fā)現(xiàn)核酸。1889年，Altmann提出核酸核酸概念。1953年，Watson和Crick提出DNA雙螺旋結(jié)構(gòu)模型雙螺旋結(jié)構(gòu)模型，是20世紀(jì)自然科學(xué)最偉大成就之一。1958年，Crick提出遺傳信息傳遞的中心法則中心法則，并于1971年修改了該法則。1961年，Jacob和Monod提出操縱子學(xué)說操縱子學(xué)說1966年，Nirenberg等破譯出遺傳密碼遺傳

2、密碼1981年，Cech發(fā)現(xiàn)核酶核酶（Ribozyme）1983年，Simons等發(fā)現(xiàn)反義反義RNA20世紀(jì)70年代，誕生DNA重組技術(shù)重組技術(shù)。并誕生基因工程。20世紀(jì)90年代開始實施人類基因組計劃人類基因組計劃，開始進(jìn)行基因組學(xué)研究。生物技術(shù)產(chǎn)業(yè)空前發(fā)展。核核酸酸的的研研究究歷歷程程20世紀(jì)40年代末，Avery 的“肺炎雙球菌轉(zhuǎn)化”實驗證明DNA是有機體的遺傳物質(zhì)：DNA無莢膜，不致病溫育有莢膜，致病傳代傳代有莢膜，致病有莢膜，致病有莢膜，致病一、核酸的種類、分布、功能核酸的種類、分布、功能種類種類 脫氧核糖核酸（脫氧核糖核酸（DNA）：）：是主要的遺傳物質(zhì)。核糖核酸（核糖核酸（RNA）

3、 tRNA (15%) mRNA (3-5%) rRNA (80%) 其它其它RNA：如反義RNA等 所有生物細(xì)胞都含有DNA和RNA這兩類核酸，而病毒只含DNA或RNA。 分布分布p473DNA原核生物真核生物擬核擬核質(zhì)粒質(zhì)粒染色體（質(zhì)）細(xì)胞器：如線粒體、葉綠體等RNA：核內(nèi)（snRNA、hnRNA）、胞質(zhì)(scRNA)、細(xì)胞器 功能功能p475DNA：是是主要的遺傳物質(zhì)主要的遺傳物質(zhì)，遺傳信息以密碼形式編碼，遺傳信息以密碼形式編碼在核酸分子上，表現(xiàn)為特定的核苷酸序列。在核酸分子上，表現(xiàn)為特定的核苷酸序列。RNA參與蛋白質(zhì)合成參與蛋白質(zhì)合成tRNA： 轉(zhuǎn)運、識別轉(zhuǎn)運、識別rRNA： 裝配、催

4、化裝配、催化mRNA：信使、模板：信使、模板多種細(xì)胞功能多種細(xì)胞功能參與基因表達(dá)的信息加工和調(diào)節(jié)參與基因表達(dá)的信息加工和調(diào)節(jié) 真核生物染色體真核生物染色體DNA是是線型雙鏈線型雙鏈DNA。原核生物的染色體。原核生物的染色體DNA、質(zhì)粒、質(zhì)粒DNA和真核生物的細(xì)胞器和真核生物的細(xì)胞器DNA都是都是環(huán)狀雙鏈環(huán)狀雙鏈DNA。 細(xì)胞細(xì)胞RNA通常都是通常都是線型單鏈線型單鏈，但，但病毒病毒RNA則有線型與環(huán)狀、雙鏈與單鏈之分。則有線型與環(huán)狀、雙鏈與單鏈之分。RNA的的5種功能種功能控制蛋白質(zhì)合成控制蛋白質(zhì)合成作用于作用于RNA轉(zhuǎn)錄后加工與修飾轉(zhuǎn)錄后加工與修飾基因表達(dá)與細(xì)胞功能調(diào)節(jié)：如反義基因表達(dá)與細(xì)胞

5、功能調(diào)節(jié)：如反義RNA、RNAi（RNA干擾干擾）生物催化與細(xì)胞持家功能（細(xì)胞基本功能）生物催化與細(xì)胞持家功能（細(xì)胞基本功能）遺傳信息的加工與進(jìn)化遺傳信息的加工與進(jìn)化 生物體通過生物體通過DNA復(fù)制將遺傳信息由親代傳遞給子代。通過復(fù)制將遺傳信息由親代傳遞給子代。通過RNA轉(zhuǎn)錄和蛋白質(zhì)翻譯使遺傳信息在子代中得以表達(dá)轉(zhuǎn)錄和蛋白質(zhì)翻譯使遺傳信息在子代中得以表達(dá)。 基因表達(dá)基因表達(dá)二、核酸的組成成分二、核酸的組成成分 p478核酸 nucleic acid核苷酸 nucleotide核苷 nucleoside磷酸 phosphate嘌呤堿 purine base 嘧啶堿 pyrimidine base

6、（堿基 base）核糖 ribose (或 脫氧核糖脫氧核糖 deoxyribose) （戊糖 amyl sugar）核酸是由核苷酸組成，含磷較多，酸性較強的高分子化合物。核酸是由核苷酸組成，含磷較多，酸性較強的高分子化合物。（一）核糖和脫氧核糖（一）核糖和脫氧核糖OHOH2COHOHOH12OHOH2COHOH12-D-2-核糖-D-2-脫氧核糖O核糖 + H +糠醛甲基間苯二酚(地衣酚)FeCl3綠色產(chǎn)物綠色產(chǎn)物脫氧核糖 + H+ -羥基-酮戊醛二苯胺藍(lán)色產(chǎn)物藍(lán)色產(chǎn)物RNA和和DNA定性、定量測定定性、定量測定（二）嘌呤堿和嘧啶堿（二）嘌呤堿和嘧啶堿NNNNHHHHNNNNHHHH123

7、456789嘌呤PuNH2腺嘌呤 adenine（A）NNNNHHHHOH2N鳥嘌呤 guanine（G）NNHHHH嘧啶Py123456NNHHHHNH2OH胞嘧啶 Cytosine（C）NNHHHHOOHH尿嘧啶 uracil（U）NNHHHHOOHHCH3胸腺嘧啶 thymine（T）NNOOHHH酮式HNNOOHHH酮式HHH烯醇式（三）核苷（三）核苷OHOH2COHOHOH12345核 糖NNNNHNH2HH9腺嘌呤腺苷OHOH2COHOHOH12345核 糖OHOH2COHOH12345核 糖NNOOHHH尿嘧啶H1尿苷NCOONHHH51OH假尿苷（）（四）核苷酸（四）核苷酸OH

8、OH2COHOHOH12345核 糖NNNNHNH2HH9腺嘌呤胸 苷PO-OO胸苷-5-磷酸AMPOP O-OOADPATPP O-OO各種核苷三磷酸和脫氧核苷三磷酸是體內(nèi)合成各種核苷三磷酸和脫氧核苷三磷酸是體內(nèi)合成RNA和和DNA合成的直接原料。合成的直接原料。在體內(nèi)能量代謝中的作用在體內(nèi)能量代謝中的作用：ATP能量“貨幣”UTP參加糖的互相轉(zhuǎn)化與合成CTP參加磷脂的合成GTP參加蛋白質(zhì)和嘌呤的合成第二信使第二信使cAMPHO-O OCH2 TO=PO-35OHHO-O OCH2 GO=PO-35OHO OCH2OHH AO=POO-35351PPPOHATGpGpTpAOHpG-T-Ap

9、GTA脫氧核苷酸的序列脫氧核苷酸的序列常被認(rèn)為是常被認(rèn)為是堿基序堿基序列列（base sequence)。通常堿基序列由通常堿基序列由DNA鏈鏈53方向方向?qū)?。寫。（一）（一）DNA的一級結(jié)構(gòu)的一級結(jié)構(gòu)三、三、DNA的結(jié)構(gòu)的結(jié)構(gòu)DNA的的四四級級結(jié)結(jié)構(gòu)構(gòu)一級結(jié)構(gòu)：一級結(jié)構(gòu)：由多個脫氧核苷酸分子通過由多個脫氧核苷酸分子通過3，5磷酸二磷酸二酯鍵連接形成的直線型或環(huán)型多聚體。酯鍵連接形成的直線型或環(huán)型多聚體。二級結(jié)構(gòu)：二級結(jié)構(gòu)：在堿基互補配對的基礎(chǔ)上形成的在堿基互補配對的基礎(chǔ)上形成的DNA雙螺旋結(jié)構(gòu)雙螺旋結(jié)構(gòu)。三級結(jié)構(gòu)：三級結(jié)構(gòu)：在二級結(jié)構(gòu)上，在二級結(jié)構(gòu)上，DNA雙螺旋結(jié)構(gòu)通過折疊和扭曲雙螺旋結(jié)構(gòu)

10、通過折疊和扭曲所形成的特定構(gòu)象。如超螺旋等。所形成的特定構(gòu)象。如超螺旋等。四級結(jié)構(gòu)：四級結(jié)構(gòu)：指指DNA與蛋白質(zhì)形成的復(fù)合物。如與蛋白質(zhì)形成的復(fù)合物。如染色體染色體（質(zhì)）。（質(zhì)）。1. 雙螺旋結(jié)構(gòu)的主要依據(jù)雙螺旋結(jié)構(gòu)的主要依據(jù)（1）Wilkins和Franklin發(fā)現(xiàn)不同來源的DNA纖維具有相似的X射線衍射圖譜。（2）Chargaff規(guī)則規(guī)則 在雙鏈DNA分子中，堿基摩爾數(shù)存在下列關(guān)系：A=T G=C A+C=G+T A+G=T+C （3）電位滴定證明，嘌呤與嘧啶的可解離基團由氫鍵連接。電位滴定證明，嘌呤與嘧啶的可解離基團由氫鍵連接。后后Pauling 和和Corey發(fā)現(xiàn)發(fā)現(xiàn)A與與T生成生成2

11、個氫鍵、個氫鍵、C與與G生成生成3個氫鍵。個氫鍵。2. 雙螺旋雙螺旋結(jié)構(gòu)模型要點結(jié)構(gòu)模型要點 p486（1）主鏈主鏈：兩條多核苷酸鏈反向平行。兩條多核苷酸鏈反向平行。兩條鏈均為右手螺旋。堿基平面與兩條鏈均為右手螺旋。堿基平面與縱軸垂直，糖環(huán)平面與縱軸平行；縱軸垂直，糖環(huán)平面與縱軸平行；（2）堿基：堿基：堿基位于內(nèi)側(cè)，堿基互補配對， A與T、G與C配對。（3）螺距螺距：雙螺旋每轉(zhuǎn)一周有：雙螺旋每轉(zhuǎn)一周有10個個bp，螺距，螺距3.4nm，直徑，直徑2nm。 (4)大溝和大溝和小溝小溝（二）（二）DNA的雙螺旋結(jié)構(gòu)的雙螺旋結(jié)構(gòu)1953年，Watson 和Crick 提出。3. 雙螺旋結(jié)構(gòu)的穩(wěn)定因素

12、雙螺旋結(jié)構(gòu)的穩(wěn)定因素（1）氫鍵氫鍵（太弱）；（2）堿基堆積力堿基堆積力（base stacking force，由芳香族堿基電子間的相互作用引起的，能形成疏水核心，是穩(wěn)定DNA最重要的因素；（3）離子鍵離子鍵（減少雙鏈間的靜電斥力）。4. DNA雙螺旋的構(gòu)象類型雙螺旋的構(gòu)象類型B-DNA：92%相對濕度，鈉鹽；接近細(xì)胞內(nèi)的DNA構(gòu)象，與Watson 和Crick提出的模型相似。5.堿基在一條鏈上的排列順序不受限制，但一旦確定后，即可決定另一條互補鏈上的序列。C-DNA：4446%相對濕度?？赡苁翘囟l件下B-DNA和A-DNA的轉(zhuǎn)化中間物。D-DNA：60%相對濕度。 E-DNA（三）（三）D

13、NA的三級結(jié)構(gòu)的三級結(jié)構(gòu)線形分子、雙鏈環(huán)狀(dcDNA) 超螺旋、染色體包裝染色體包裝A-DNA：75%相對濕度，與溶液中DNA-RNA雜交分子的構(gòu)象相似。Z-DNA：主鏈呈鋸齒型左向盤繞左向盤繞。B-DNA與Z-DNA的相互轉(zhuǎn)換可能和基因的調(diào)控有關(guān)。 p489 再次扭曲、螺旋再次扭曲、螺旋（四）染色體包裝的結(jié)構(gòu)模型多級螺旋模型多級螺旋模型壓縮倍數(shù) 7 6 40 5 （8400） DNA 核小體 螺線管 超螺線管 染色單體 2nm 10nm 30nm 400nm 210m 一級包裝 二級包裝 三級包裝 四級包裝 四、四、DNA與基因組織與基因組織DNATranscription RNA（mRN

14、A、tRNA、rRNA）TranslationProtein基因基因基因基因是指具有遺傳效應(yīng)的是指具有遺傳效應(yīng)的DNA片段或片段或RNA，它能編碼，它能編碼蛋白質(zhì)或功能蛋白質(zhì)或功能RNA。某些病毒的基因組是。某些病毒的基因組是RNA。結(jié)構(gòu)基因調(diào)節(jié)基因基因組基因組（一）（一）DNA與基因與基因（二）原核生物基因組的特點（二）原核生物基因組的特點1. DNA大部分為結(jié)構(gòu)基因，每個基因出現(xiàn)頻率低。2. 功能相關(guān)基因串聯(lián)在一起，并轉(zhuǎn)錄在同一mRNA中（多順反子）。3.有基因重疊現(xiàn)象。ABCDEFG（三）真核生物基因組的特點（三）真核生物基因組的特點1. 重復(fù)序列單拷貝序列：在整個在整個DNA中只出現(xiàn)一

15、次或少數(shù)幾次，中只出現(xiàn)一次或少數(shù)幾次，主要為編碼蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)基因。主要為編碼蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)基因。中度重復(fù)序列：在：在DNA中可重復(fù)幾十次到幾千次中可重復(fù)幾十次到幾千次。高度重復(fù)序列 ：可重復(fù)幾百萬次可重復(fù)幾百萬次高度重復(fù)序列一般富含A-T或G-C，富含A-T的在密度梯度離心時在離心管中形成的區(qū)帶比主體DNA更靠近管口；富含G-C的更靠近管底，稱為衛(wèi)星衛(wèi)星DNA（satellite DNA）富含A-T富含G-C主體DNA2. 有斷裂基因mRNA1 872bp內(nèi)含子（內(nèi)含子（intron)：基因中不為多肽編碼，不在：基因中不為多肽編碼，不在mRNA中出現(xiàn)。中出現(xiàn)。ABCDEG7 700bpF外顯子（

16、外顯子（exons）：為多肽編碼的基因片段。）：為多肽編碼的基因片段。：由于基因中內(nèi)含子的存在。例外例外：組蛋白基因(histongene)和干擾素基因(interferon gene)沒有內(nèi)含子。transcription四、四、RNA的結(jié)構(gòu)與功能的結(jié)構(gòu)與功能RNA分子高級結(jié)構(gòu)是含短的不完全的螺旋區(qū)的多核分子高級結(jié)構(gòu)是含短的不完全的螺旋區(qū)的多核苷酸鏈苷酸鏈。（一）（一）tRNAtRNA約占RNA總量的15%，主要作用是轉(zhuǎn)運氨基酸用于合成蛋白質(zhì)。tRNA分子量為4S，1965年Holley 測定酵母tRNAAla一級結(jié)構(gòu)，提出三葉草三葉草二級結(jié)構(gòu)模型。 倒倒L型型三級結(jié)構(gòu)主要特征主要特征：1.

17、四臂四環(huán)；2.氨基酸臂3端有CCAOH的共有結(jié)構(gòu)；3.D環(huán)上有二氫尿嘧啶（D）；4.反密碼環(huán)上的反密碼子與mRNA相互作用；5.可變環(huán)上的核苷酸數(shù)目可以變動；6.TC環(huán)含有T和；7.含有修飾堿基和不變核苷酸。RNA二級結(jié)構(gòu)的通式：發(fā)夾結(jié)構(gòu)或莖環(huán)結(jié)構(gòu)二級結(jié)構(gòu)的通式：發(fā)夾結(jié)構(gòu)或莖環(huán)結(jié)構(gòu)（二）（二）rRNA占細(xì)胞RNA總量的80%，與蛋白質(zhì)（40%）共同組成核糖體。原原 核核 生生 物物 真真 核核 生生 物物核糖體rRNA核糖體rRNA70S（30S、50S）16S、5S、23S80S（40S、60S）18S、5S、5.8S、28S 90年代初，Noller證明23SrRNA具肽酰轉(zhuǎn)移酶活性，蛋白

18、質(zhì)只是維持rRNA的構(gòu)象。（三）（三）mRNA與與hnRNAmRNA約占細(xì)胞RNA總量的35%，是蛋白質(zhì)合成的模板。真核生物mRNA的前體在核內(nèi)合成，包括整個基因的內(nèi)含子和外顯子的轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物，形成分子大小極不均勻的hnRNA。真核生物真核生物mRNA特點特點：5端有帽子結(jié)構(gòu)；端有帽子結(jié)構(gòu)；3端加端加poly A尾尾（四）（四）snRNA和和asRNAsnRNA主要存于細(xì)胞核中，占細(xì)胞RNA總量的0.11%，與蛋白質(zhì)以RNP（核糖核酸蛋白）的形式存在，在hnRNA和rRNA的加工、細(xì)胞分裂和分化、協(xié)助細(xì)胞內(nèi)物質(zhì)運輸、構(gòu)成染色質(zhì)等方面有重要作用。asRNA可通過互補序列與特定的mRNA結(jié)合，抑制mR

19、NA的翻譯，還可抑制DNA的復(fù)制和轉(zhuǎn)錄。五、核酸的性質(zhì)五、核酸的性質(zhì) p503（一）一般理化性質(zhì)（一）一般理化性質(zhì)1.為兩性電解質(zhì)，通常表現(xiàn)為酸性。為兩性電解質(zhì)，通常表現(xiàn)為酸性。2.DNA為白色纖維狀固體，為白色纖維狀固體，RNA為白色粉末為白色粉末3.DNA溶液的粘度極高，而溶液的粘度極高，而RNA溶液要小得多。溶液要小得多。5.RNA能在室溫條件下被稀堿能在室溫條件下被稀堿水解水解而而DNA對堿穩(wěn)定。對堿穩(wěn)定。6.利用核糖和脫氧核糖不同的顯色反應(yīng)鑒定利用核糖和脫氧核糖不同的顯色反應(yīng)鑒定DNA與與RNA。（二）核酸的紫外吸收性質(zhì)（二）核酸的紫外吸收性質(zhì) p507核酸核酸的堿基具有共扼雙鍵，因

20、而有紫外吸收性質(zhì)，吸收峰在260nm（蛋白質(zhì)蛋白質(zhì)的紫外吸收峰在280nm）。4.都溶于水不溶于有機溶劑如乙醇。都溶于水不溶于有機溶劑如乙醇。 分離分離核酸的光吸收值比各核苷酸光吸收值的和少核酸的光吸收值比各核苷酸光吸收值的和少3040%，當(dāng)核，當(dāng)核酸變性或降解時光吸收值顯著增加（酸變性或降解時光吸收值顯著增加（增色效應(yīng)增色效應(yīng)），但核酸），但核酸復(fù)性后，光吸收值又回復(fù)到原有水平（復(fù)性后，光吸收值又回復(fù)到原有水平（減色效應(yīng)減色效應(yīng)）。00.10.20.30.4220240260280300波長 / nm光吸收當(dāng)當(dāng)A1時，時， DNA：50ug/ml， RNA和單鏈和單鏈DNA：40ug/ml，

21、 寡核苷酸：寡核苷酸：20ug/ml。純純DNA，A260/A280 =1.8 =2.0。若溶液中含有雜蛋白或苯酚，則若溶液中含有雜蛋白或苯酚，則A260/A280比值明顯降低。比值明顯降低。 1.8，DNA很純；很純；=2 RNA很純很純用用A260/A280還可來表示還可來表示核酸的純度：核酸的純度：核酸含量測定核酸含量測定7075808590T /A /260nm（三）核酸的變性（三）核酸的變性：雙螺旋區(qū)氫鍵斷裂，空間結(jié)構(gòu)破壞，雙螺旋區(qū)氫鍵斷裂，空間結(jié)構(gòu)破壞，變成單鏈，并不涉及共價鍵的斷裂。變成單鏈，并不涉及共價鍵的斷裂。DNA變性是個突變過程。變性是個突變過程。將紫外吸收的增加量達(dá)到將

22、紫外吸收的增加量達(dá)到最大增量一半時的溫度稱最大增量一半時的溫度稱熔解溫度熔解溫度(melting temperature, Tm)。TmTmDNA的雙螺旋結(jié)構(gòu)失去一半時對應(yīng)的溫度的雙螺旋結(jié)構(gòu)失去一半時對應(yīng)的溫度 熱變性熱變性 因素因素 酸堿變性（酸堿變性（pH小于小于4或大于或大于11，堿基間氫鍵全部斷裂），堿基間氫鍵全部斷裂） 變性劑（尿素、鹽酸胍、甲醛）變性劑（尿素、鹽酸胍、甲醛） 變性后變性后 粘度降低，紫外吸收增加。粘度降低，紫外吸收增加。 二級結(jié)構(gòu)改變，部分失活。二級結(jié)構(gòu)改變，部分失活。 影響影響Tm的因素的因素：（1）G-C的相對含量的相對含量 （G+C）% =（Tm 69.3）

23、2.44（2）介質(zhì)離子強度低，介質(zhì)離子強度低，Tm低。低。（3）DNA均一性均一性 均一性高，熔解過程發(fā)生在很均一性高，熔解過程發(fā)生在很小的溫度范圍小的溫度范圍（五）核酸的復(fù)性（退火）（五）核酸的復(fù)性（退火）：變性核酸的兩條互補鏈在適變性核酸的兩條互補鏈在適當(dāng)條件下重新締合成雙螺旋的當(dāng)條件下重新締合成雙螺旋的過程。過程。影響復(fù)性速度的因素影響復(fù)性速度的因素：（1）單鏈片段濃度）單鏈片段濃度（2）單鏈片段的大?。﹩捂溒蔚拇笮。?）溶液離子強度的大?。┤芤弘x子強度的大小 （越高越容易）（越高越容易）（4）溶液溫度的高低）溶液溫度的高低 復(fù)性速度可用復(fù)性速度可用Cot1/2 衡量衡量（六）分子雜交

24、（六）分子雜交p510：在退火條件下，不同來源的在退火條件下，不同來源的DNA互補形互補形成雙鏈，或成雙鏈，或DNA單鏈和單鏈和RNA鏈的互補形成鏈的互補形成DNA-RNA雜合雙鏈的過程。雜合雙鏈的過程。探針探針：一段與待測一段與待測DNA或或RNA互補的核苷酸序列，用放射性同位素或熒互補的核苷酸序列，用放射性同位素或熒光等標(biāo)記。光等標(biāo)記。原位原位雜交技術(shù)雜交技術(shù)：直接用探針與菌落或組織細(xì)胞中的核酸直接用探針與菌落或組織細(xì)胞中的核酸雜交，未改變核酸所在的位置。雜交，未改變核酸所在的位置。Southern印跡法印跡法：將電泳分離后的將電泳分離后的DNA片段從凝膠轉(zhuǎn)移到片段從凝膠轉(zhuǎn)移到硝酸纖維素膜

25、上，再進(jìn)行雜交。硝酸纖維素膜上，再進(jìn)行雜交。Northern印跡法印跡法：將電泳分離后的將電泳分離后的RNA吸印到纖維素膜上吸印到纖維素膜上再進(jìn)行分子雜交。再進(jìn)行分子雜交。六、核酸的序列測定六、核酸的序列測定 p518目前多采用Sanger的酶法和Maxam-Gilbert的化學(xué)法OHOH2CHHOH12345核 糖NNNNHHHH9腺嘌呤ddATPPP P原理：基本反應(yīng)也是利用原理：基本反應(yīng)也是利用DNA聚合酶的酶促反應(yīng)。聚合酶的酶促反應(yīng)。反應(yīng)體系包括模板反應(yīng)體系包括模板DNA、引物、引物、4種核苷酸和種核苷酸和DNA聚聚合酶外，還加入一定比例的合酶外，還加入一定比例的ddNTP，它隨機的摻

26、入合，它隨機的摻入合成的成的DNA鏈，一旦摻入鏈，一旦摻入DNA合成終止，得到以合成終止，得到以ddNTP為結(jié)尾的不同大小片段。為結(jié)尾的不同大小片段。通過電泳直接讀出通過電泳直接讀出DNA序列。序列。小溝小溝大溝大溝主要特征主要特征：1.四臂四環(huán)；四臂四環(huán)；2.氨基酸臂氨基酸臂3端端CCAOH的的共有結(jié)構(gòu)；共有結(jié)構(gòu)；3.D環(huán)上有二氫尿嘧啶環(huán)上有二氫尿嘧啶（D）；）；4.反密碼環(huán)上的反密碼子反密碼環(huán)上的反密碼子與與mRNA相互作用；相互作用；5.可變環(huán)上的核苷酸數(shù)目可變環(huán)上的核苷酸數(shù)目可以變動；可以變動；6.TC環(huán)含有環(huán)含有T和和；7.含有修飾堿基和不變核含有修飾堿基和不變核苷酸。苷酸。CCGG

27、TAGCAATT35模板模板引物引物GG53GGCGGCCGGCCATCCddCTPGGCCAGGCCATCGTTGAddATPAGGCCATCGGGCCATCGTTGGddGTPGGCCATGGCCATCGTGGCCATCGTTTddTTPCCATCGTTGA53 1989年，第一種基因藥物重組重組lblb干擾素干擾素獲準(zhǔn)投放市場。至1999年，我國已有18種基因藥物和疫苗獲準(zhǔn)進(jìn)行商業(yè)化生產(chǎn)，另有26種基因藥物處于臨床前或臨床、期試驗，生物醫(yī)藥產(chǎn)業(yè)已初具規(guī)模。 1990年我國研制了第一例轉(zhuǎn)基因家畜，1991年山羊克隆獲得成功。 1993年我國第一例轉(zhuǎn)基因作物抗病毒煙草抗病毒煙草進(jìn)入了大田試驗

28、。 1997年第一例轉(zhuǎn)基因耐儲存番茄耐儲存番茄獲準(zhǔn)進(jìn)行商品化生產(chǎn)，至1999年共有6種轉(zhuǎn)基因作物產(chǎn)品投放市場。2000年我國轉(zhuǎn)基因抗蟲棉花抗蟲棉花種植面積超過550萬畝。 我國是人類基因組計劃人類基因組計劃國際大協(xié)作的成員國，承擔(dān)完成1%的任務(wù)。美、英、日、法、德、中科學(xué)家于2000年6月26日宣布人類基因組全部DNA序列的工作框架圖已經(jīng)完成。 我國在國際上首先發(fā)現(xiàn)神經(jīng)性耳聾的基因神經(jīng)性耳聾的基因，基因治療已有4個項目進(jìn)入臨床試驗階段。 生物芯片技術(shù)生物芯片技術(shù)的開發(fā)研究與產(chǎn)業(yè)化正在與國際同步發(fā)展。染色體多級螺旋模型染色體多級螺旋模型核酸水解 p502 酸水解酸水解：糖苷鍵比磷酸酯鍵易水解，嘌

29、呤比嘧啶糖苷鍵易斷裂。（最易是（最易是DNA的嘌呤糖苷鍵）的嘌呤糖苷鍵） 堿水解堿水解：RNA易被堿水解（室溫，0.1mol/LNaOH0.1mol/LNaOH可將可將RNARNA完全水解，完全水解，得到得到2 2- -或或3 3- -磷酸核苷的混合物磷酸核苷的混合物）；）；DNA耐堿 酶水解酶水解 生物體內(nèi)存在多種核酸水解酶 RNA水解酶 RNaseDNA水解酶 DNase核酸外切酶從末端逐個切下核苷酸核酸內(nèi)切酶 ： 專一性水解某一特定核甘酸所形成的磷酸二酯鍵專一性水解某一特定核甘酸所形成的磷酸二酯鍵 最重要的：限制性核酸內(nèi)切酶 水解某一特定堿基序列水解某一特定堿基序列 回文結(jié)構(gòu)回文結(jié)構(gòu)核酸含量測定 p514-516 一）紫外吸收法 二）定磷法： 9.5% 三）定糖法：地衣酚 二苯胺 核酸純度測定最簡單方法：紫外吸收法 DNA的凝膠電泳按分子大小來分離 溴化乙錠EB熒光染色 DNA的分離 p513 DNP溶于濃鹽溶液溶于濃鹽溶液1N NaCl，但不溶于稀鹽溶液，但不溶于稀鹽溶液0.