牛肝菌中含尼古丁成因研究報(bào)告

1、牛肝菌中含尼古丁成因研究報(bào)告 彭云霞1 馬曉剛1 李云飛1 熊清1 趙永昌2 車(chē)玥泉3 劉自強(qiáng) 4 （1、云南出入境檢驗(yàn)檢疫局技術(shù)中心 昆明650028; 2、云南省農(nóng)業(yè)科學(xué)院生物技術(shù)與種質(zhì)資源研究所，昆明650054； 3、云南省牛肝菌協(xié)會(huì)，昆明650032；4、中國(guó)食品土畜進(jìn)出口商會(huì)食用菌分會(huì)） 摘要：在2009年野生食用菌的生產(chǎn)季節(jié)，研究小組通過(guò)對(duì)尼古丁外源性污染的排查和內(nèi)源性成因的驗(yàn)證等兩方面的工作得出牛肝菌等食用菌含尼古丁是內(nèi)源性次生代謝產(chǎn)物的結(jié)論，并對(duì)影響牛肝菌尼古丁含量水平的自然因素和牛肝菌中含尼古丁的風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估依據(jù)進(jìn)行了初步的研究。 關(guān)鍵詞：牛肝菌 尼古丁 內(nèi)源性次生代謝產(chǎn)物 一

2、、研究方法及樣本 1、檢測(cè)方法 本項(xiàng)目組所采用的檢測(cè)方法是中國(guó)正式公布的由云南ciq實(shí)驗(yàn)室同eurofins蘇州實(shí)驗(yàn)室共同起草的進(jìn)出口行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)sn/t2397-2009進(jìn)出口食品中尼古丁檢測(cè)方法，同時(shí)近期云南ciq實(shí)驗(yàn)室還參加了歐盟基準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)室crl組織的國(guó)際實(shí)驗(yàn)室間能力驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)，檢測(cè)結(jié)果為滿(mǎn)意結(jié)果。在11月4日-5日在德國(guó)漢堡由esa協(xié)會(huì)主辦的中歐尼古丁成因研究會(huì)已確認(rèn)：對(duì)尼古丁的檢測(cè)eurofins方法為篩選檢測(cè)方法，云南ciq方法為確證方法。 2、樣本采集 2.1實(shí)驗(yàn)樣本數(shù)量 2.1.1各類(lèi)牛肝菌樣本：700份，其中鮮樣：100份、速凍樣品73份，鹽漬加工樣品59份；干片468份； 2.1

3、.2其它食用菌干片樣本96份； 2.1.3云南主產(chǎn)區(qū)及四川、東北的食用菌生長(zhǎng)周邊環(huán)境樣本55份進(jìn)行尼古丁含量的檢測(cè)：其中根系土壤樣品30個(gè)，水樣品 10個(gè)，大氣樣品15份； 2.1.4 實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)的人工菌絲體四種: 本研究在實(shí)驗(yàn)室內(nèi)人工培育了羊肚菌（morchellaesculenta）、暗褐色網(wǎng)柄牛肝(phlebopus portentosus)、黑曲霉（aspergillus niger ）、青霉菌（penicillum sp.）等四種菌絲體。 2.2樣本來(lái)源 2.2.1云南食用菌主產(chǎn)區(qū)的樣本由項(xiàng)目組到產(chǎn)地直接采集后在實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行加工，其采集加工過(guò)程嚴(yán)格控制，保證樣本不受任何外界環(huán)境的污染。

4、 2.2.2 歐洲區(qū)的牛肝菌干片樣本是在歐盟市埸上購(gòu)買(mǎi) 2.2.3中國(guó)其它產(chǎn)區(qū)的實(shí)驗(yàn)樣本由云南省牛肝菌協(xié)會(huì)會(huì)員在當(dāng)?shù)厥召?gòu)后提供給項(xiàng)目研究小組。 2.2.4大氣樣本委托云南省楚雄、思茅、麗江環(huán)境監(jiān)測(cè)站對(duì)當(dāng)?shù)卮髿猸h(huán)境按相關(guān)技術(shù)規(guī)范進(jìn)行采集。 2.2.5 真菌菌絲體由云南省農(nóng)業(yè)科學(xué)院生物技術(shù)與種質(zhì)資源研究所提供，其菌菌絲體培養(yǎng)條件： 試驗(yàn)菌株在ypda（0.2%酵母膏，0.2&蛋白胨，2%葡萄糖，1.2%瓊脂粉）斜面上25培養(yǎng)7-8天，培養(yǎng)的菌絲接入ypd液體培養(yǎng)基（500ml的三角瓶裝入200ml的培養(yǎng)基），接種后搖床振蕩培養(yǎng)（250c,150rm）10天，每個(gè)菌株設(shè)三個(gè)重復(fù)，培養(yǎng)好后采用離心收集

5、法收集菌絲體，8000rpm離心20分鐘菌絲體培養(yǎng)液，棄上清收集沉淀即為培養(yǎng)所需的菌絲體，于40度下儲(chǔ)存?zhèn)溆?。同時(shí)使用不接入菌絲的培養(yǎng)基同上述操作條件同步培養(yǎng)進(jìn)行空白實(shí)驗(yàn)。 3、 實(shí)驗(yàn)結(jié)果的第三方驗(yàn)證 為保證實(shí)驗(yàn)結(jié)論的科學(xué)準(zhǔn)確，本項(xiàng)目研究組專(zhuān)門(mén)送了9份比對(duì)樣本到eurofins蘇州實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行檢測(cè)，同期也收集了由中國(guó)出口商送至歐洲第三方實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)結(jié)果的數(shù)據(jù)進(jìn)行分析研究。 二、 試驗(yàn)結(jié)果數(shù)據(jù) 1、項(xiàng)目研究組的檢測(cè)結(jié)果數(shù)據(jù) 表1人工培育的菌絲體中的尼古丁 樣本名稱(chēng)樣本數(shù)量尼古丁檢出值（pg） morchella esculenta 羊肚菌菌絲體315.8-77 phlebopus portentos

6、us暗褐色網(wǎng)柄牛肝315.2-35.2 aspergillus niger 黑曲霉318.3-24.8 penicillum sp.青霉菌320.8-27.6 空白培養(yǎng)基3陰性 表2 云南產(chǎn)區(qū)鮮牛肝菌子實(shí)體樣本的檢測(cè)結(jié)果 樣本樣本數(shù)量取樣地尼古丁含量（ug/kg）平均含量（ug/kg） 1期牛肝菌 10楚雄33-7157 10麗江41-6452 10思茅28-8863 10大理42-9265 10文山38-7961 2期牛肝菌 10楚雄19-4835 10麗江24-5838 10思茅27-4941 10大理26-4539 10文山23-5336 備注：1期牛肝菌比2期生長(zhǎng)期長(zhǎng) 表3云南產(chǎn)區(qū)牛肝

7、菌干片尼古丁的檢測(cè)結(jié)果 樣本名稱(chēng)數(shù)量產(chǎn)區(qū)尼古丁含量（ug/kg）平均含量（ug/kg） 牛肝菌干片a級(jí)（熱風(fēng)和土爐烤制） 15大理228-2060756 15麗江391-27891343 20楚雄189-30451089 15文山110-2031897 15思茅562-29911213 牛肝菌干片b級(jí)（熱風(fēng)和土爐烤制） 15大理455-54521798 15麗江678-35121431 20楚雄441-38811888 15文山567-30781982 15思茅334-36772011 牛肝菌干片c級(jí)（熱風(fēng)和土爐烤制） 15大理1797-44982458 15麗江1899-56722321 20楚雄2016-51222678 15文山1688-45672201 15思茅1908-69852532 牛肝菌干片d級(jí)（熱風(fēng)和土爐烤制） 15大理988-112343679 15麗江2061-221344012 20楚雄2455-341225618 15文山2299-178994234 15