呼吸道合胞病毒疫苗研制進(jìn)展

1、呼吸道合胞病毒疫苗研制進(jìn)展2/一2;248?綜述?呼吸道合胞病毒疫苗研制進(jìn)展西安醫(yī)科大學(xué)第二附屬醫(yī)院ll(710004.11)侯偉王麗綜述雷謄蓮一審校a摘要枷.,.染.近年來,rsv疫苗研制取得1較太的進(jìn)展.減毒活疫苗亞單位痘苗和基因重組覆苗的研制,為rsv關(guān)鍵詞呼吸道舍胞病毒保護(hù)性抗原疫苗呼吸道合胞病毒(rsv)是嬰幼兒下呼吸道感染的最常見病原體.rsv感染通常引起嬰幼兒毛細(xì)支氣管炎和肺炎,其感染呈世界性分布,估計(jì)壘球年發(fā)病人數(shù)和死亡人數(shù)分別為6500萬和16萬.rsv感染多發(fā)生于2歲以內(nèi)的嬰幼兒,26十月發(fā)病率最高婁對(duì)rsv感染的免痙是不完壘的,既往感染不能阻止以后疾病的再發(fā).rsv感染后

2、可繼發(fā)反復(fù)喘息,哮喘私免疫功能紊亂目前rsv已成為嚴(yán)重威脅嬰圭f】兒健康的疾病.因此研制安全有效的痙苗預(yù)防rsv感染就顯得特別重要.故who已將rsv痙苗研制列為優(yōu)先發(fā)展項(xiàng)目之一口本文就近年來rsv痘苗研制進(jìn)展作一簡要綜述.1rsv的保護(hù)性抗原rsv屬副粘液病毒科肺炎病毒屬,為單鏈負(fù)股rsv病毒.已被識(shí)別的表面蛋白有10種,其中4種對(duì)rsv感染后的免疫起主要作用這4種蛋白分別為:f椿蛋白,g糖蛋白,mz基質(zhì)蛋白和n棱蛋白.g蛋白為體液免疫的保護(hù)性抗原,而f蛋白既是誘發(fā)儺液免疫的保護(hù)性抗原也是誘發(fā)細(xì)咆免疫的抗原.m和n蛋白為細(xì)胞免疫的保護(hù)性抗原在rsv的保護(hù)性抗原中,其重要性依次為f>g&

3、gt;m>n.2rsv疫苗研制中存在的問題大量的研究表明:rsv感染的發(fā)病機(jī)理與機(jī)體異常的免疫病理有密切關(guān)系rsv的發(fā)病高峰在26個(gè)月,在這個(gè)時(shí)期患兒體內(nèi)有較高滴度的母?jìng)骺贵w,它可干擾rsv痙苗的效果以及安壘性和反應(yīng)原性在早期的研究中,使用福爾馬林滅活疫苗(firsv)雖然可以誘導(dǎo)產(chǎn)生高滴度中和抗體,但兒童在后自然感染后發(fā)生病情加重.由于目前耐rsv感染的發(fā)病機(jī)理尚不完皂了解在研制rsv疫苗中存在許多困難,但一種*富縣婦幼保鰱院兒科*安醫(yī)科大學(xué)第一附屆醫(yī)院兒科物成功的痙苗應(yīng)具備下條件:在母體抗儺存在的情況下育效;能誘導(dǎo)對(duì)rsv兩十亞型的抵抗力;在接種后自然感染中不出現(xiàn)疾病增強(qiáng)作用.針對(duì)以

4、上問題研究員進(jìn)行了大量的研究.3rsv滅活疫苗60年代.rsv疫苗研制玎期,發(fā)現(xiàn)firsv不僅無保護(hù)作用,相匣在以后的rsv自然感染中,痙苗接種組鞍對(duì)照組感染率高日病情嚴(yán)重(即疾病增強(qiáng)作用)研究發(fā)現(xiàn)firsv與自然感染誘導(dǎo)的免疫應(yīng)答之間有明顯不舊.firsv接種后雖可誘導(dǎo)產(chǎn)生高滴度的中和抗體,但其活性較低.棉鼠被動(dòng)輸入這種抗體不能抵抗rsv的感染.也不出現(xiàn)疾病增強(qiáng)作用.時(shí)此,推測(cè)firsv引起的疾病增強(qiáng)作用不是血清抗體介導(dǎo)的,而是由特異性t細(xì)胞介導(dǎo)的.connors等研究發(fā)現(xiàn),用firsv免疫balb/c小鼠后,體內(nèi)可出現(xiàn)大量的cd:淋巴細(xì)胞,而ci淋巴細(xì)胞水平較低,用特異性單克降抗體(mca

5、b)消除cd+細(xì)胞后,呱_f可完全消蹤疾病增強(qiáng)作用;而用cdmcab消除cd細(xì)胞后,只能濺輕疾病增強(qiáng)作用.并證實(shí)且有特異性抗體,若沒有cd和cd/細(xì)胞存在.則無疾病增強(qiáng)作用所以rsv特異性cdt和cd/細(xì)胞具有清除rsv和使病加重的雙重作用,cd細(xì)咆的這種作用比cd+細(xì)胞強(qiáng).隨后gnham等用p標(biāo)記鵲寡核苷酸探針進(jìn)行枝釀雜交舒析rsv疫苗接補(bǔ)后棉鼠肺組織c細(xì)咆因子mrna的表達(dá)結(jié)果顯示:firsv疫苗和rsv亞單位痘苗可誘導(dǎo)機(jī)儺產(chǎn)生il一4和il10等泌,表現(xiàn)th樣反應(yīng),而rsv減毒活疰苗則誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生inf,ii一2,表現(xiàn)為th樣臣應(yīng)壤近的研究靛聰時(shí)淌昧ii一4和il10的作用,可消脒fir

6、sv的痘病增強(qiáng)作lhj,只消除1l一4的:用nr被輕_芷氣話病理般告的程度.消i袋ii一2和nf一7對(duì)疾病增強(qiáng)捧川1】影.,總之,firsv時(shí)癌摘增強(qiáng)作用的帆恥叫f痘苗改變或目止了局部抗體辛皿航體帕碰符,fd胞,1,第卷第菩:志雜睦瞟蠹中華兒童保健雜志1996年第4卷第4期249的增多,產(chǎn)生了不適當(dāng)?shù)膖k細(xì)晌應(yīng)答,釋放細(xì)胞固于il一4和illo,1】【剛炎癥及改變b細(xì)咆的成熟過程.于f1一rsv接種后更易發(fā)生疾病,而不能產(chǎn)生像護(hù)性免痙,因此f1一rsv不能用于預(yù)防rsv感染.4rsv的減毒焉疫苗鑒于firsv引起的嚴(yán)重后果,促使人們改變痘苗的發(fā)展方向,研制減毒活疫苗.用rsv減毒活痤苗預(yù)舫rs

7、v感染具有許多優(yōu)點(diǎn),如:活疫苗可同時(shí)誘導(dǎo)呼吸道局部和血清抗體產(chǎn)生,接種后不會(huì)發(fā)生疾病墻強(qiáng)作用母?jìng)骺沟看嬖诓挥绊懫涿庖咝Ч鉀Q硅苗減毒性和免疫原性之間的平衡以及遺傳穩(wěn)定性也并非易事.最初研究活疫苗是通過低溫連續(xù)傳代得到rsv玲適應(yīng)(c8)突變抹friedewad等在26經(jīng)16歡傳代得到ca減毒疫苗,但由于這種疫苗仍保留有低度剩余毒力,可在易感個(gè)體中引起鼻溢,低熱,輕度中耳炎,固而被放棄.睫后又有人研制溫度敏感(ts)性突變株.pringle等在實(shí)驗(yàn)中把rsv經(jīng)過3次連續(xù)誘變產(chǎn)生ts突變株tsic,其阻斷(shuto)溫度為37c,但因麒仍保留部分毒力,不能用于血清陰性的兒童為獲得完全減毒,基

8、固穩(wěn)定和免疫原性良好的疫苗,有人在鬻培養(yǎng)液中加入5一氟脲嘧啶(5一fu),使ts誘變,獲得進(jìn)步減毒痘苗.growe等在血清陰性黑猩撂中對(duì)rsva野毒抹豹3個(gè)ts突變錸ts1,ts一1一ng一1和ts一4進(jìn)行研究rsv.a經(jīng)5一fu誘變產(chǎn)生ts1和ts一4,而ts1再經(jīng)亞硝基臟(n6)誘變產(chǎn)生ts一1一ng-1這種突變抹具有高度構(gòu)免疫原性,能有效地抑制rsv的復(fù)制但_仍可引起嚴(yán)重的鼻濫.為獲得完壘減毒的活瘴苗,研究人員又研制了cpes一248和cpes一530等突變辣,這些疰苗在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中表現(xiàn)出了良好的特性|_.睫他們可萜成為膏希望的候選疫苗.5rsv亞單位疫苗隨著生物拉術(shù)的發(fā)展,毋f究人員開始

9、嘗試rsv亞單位璉前.研究表明:在rsv的抗原組成巾f犧蛋白鈍誘導(dǎo)產(chǎn)生保護(hù)性免疫反應(yīng),且稿型rsvf雖自較岱定,在動(dòng)物試驗(yàn)中f疆臼能誘導(dǎo)兩型病罐韻交叉保戶作用,相反6蛋白對(duì)予瞬型rsv其產(chǎn)生較弱的保護(hù)作用,不能提供完全亞型交叉保護(hù)作用心此,rsv?f白和不同亞型的g盤自是,單位硅苗鹋主要或銜.tristram等用純億f蛋白啦單位疫l盲在13名rsv抗體陽性=f1兒印進(jìn)行的【期臨床觀察顯示.f蛋白對(duì)人具有良好的免癌原性wathen等給棉鼠皮r往時(shí)rsva柏f蛋白,可性褓鼠蕺塒rsva,b盟攻擊產(chǎn)生抵抗力,而rsva的g蛋白!對(duì)rsv?a型的攻擊產(chǎn)生較弱的抵抗力.除純化f蛋白亞單位疫苗外,還有人用

10、化學(xué)方法直接獲得fg嵌合亞單位疫苗.kakuk等在非洲綠弦進(jìn)行帕實(shí)驗(yàn)表明:fg亞單位疫苗不會(huì)引起瘴病增強(qiáng)作用,其免疫效果與f純化蛋白相似.為增強(qiáng)rsv亞單位疫苗的免疫效果,wmsh等m用霍亂毒紊b鏈(ctb)作為佐劑觀察f蛋白的免疫效果,小鼠鼻內(nèi)接種ctbf瘦苗后可誘導(dǎo)局部iga和血清igg升高,對(duì)上下呼吸道均有明顯的保護(hù)作用.雖然用佐劑可增強(qiáng)亞單位硅苗的免疫效果,但這種亞蘋位痘苗不能完全保護(hù)rsv的攻擊研究人員對(duì)rsv亞單位疫苗所誘導(dǎo)的保護(hù)性免疫機(jī)制進(jìn)行的研究表明,呼吸道局部免疫,體液免瘦和細(xì)胞免醺均參與保護(hù)性免疫研究發(fā)現(xiàn),rsvf蛋白蹤可誘導(dǎo)產(chǎn)生局音lj抗體iga和血清中午【抗體lgg,還

11、可匱導(dǎo)產(chǎn):生c州種cdt細(xì)咆,而g蛋白僅誘導(dǎo)cdtt細(xì)胞.此外,f蛋白還可誘導(dǎo)rsv特異性細(xì)胞毒性t細(xì)1地(ctl)的活性.f和g蛋白誘導(dǎo)產(chǎn)生的細(xì)胞因子種類也不阿,f蛋白可誘導(dǎo)產(chǎn)生tl2,il一3表現(xiàn)th廈應(yīng),而g蛋白則誘導(dǎo)產(chǎn)生il一3,il一4表現(xiàn)thz反應(yīng).接種亞單位疫苗可誘導(dǎo)機(jī)體局部和血清產(chǎn)生保護(hù)性抗體,及誘導(dǎo)細(xì)晌介導(dǎo)的免疫應(yīng)答(cm1).這對(duì)保護(hù)rsv感染有一定的作用,但這種保護(hù)作用不完全,不持久hat1等研究發(fā)現(xiàn),即使體內(nèi)有高水平的f和g蛋臼抗體,仍有25重復(fù)感染的可能性.局部特異性iga抗f#與保護(hù)作用無明顯聯(lián)系.亞單位痘苗雖可誘導(dǎo)全面免疫,但其免疫原性有待提高.這種疫苗仍處于早期

12、研究階段6rsv基因重組疫苗基重組痤茁是應(yīng)用基因工程技術(shù)把天然和人工合成的遺傳物磋插入適當(dāng)?shù)妮d體,然后選擇所需要基刪的載俸蓖隆獲得斑苗.rsv重組疫苗納載體有桿狀稍毒(baculovirus,bac),痘苗病毒(vaeciniavirusvac)椰雌病毒(adenovlrus,adv).已知vac商一大拈紐,其中有許多可供外來病毒插入的直點(diǎn)vacrsv重紕痙苗是將rsv基因插vac胸苷激酶(tk)位.wanthen等m用bac戴悼在昆蟲細(xì)施q1表述fg嵌臺(tái)蛋白,其免蛙原性極強(qiáng),兩劑2gfg蛋白免疫怖呵獲得對(duì)rsv攻擊的保護(hù).若用200rig免痤棉鼠,1個(gè)月后其【j科l抗體效價(jià)高選3264研究發(fā)

13、現(xiàn)小缸接補(bǔ)vacf或advf一可匱導(dǎo)產(chǎn)生高水f們f抗悼,與純化f墨白譙前不懈,選種抗體具有高蛙的性,可l虬止肺內(nèi)rsv的復(fù)制,也不會(huì)出刪疫病中華兒童保健雜志1996年第4卷第4辮增強(qiáng)作用.但用vac免疫小鼠后.在支氣管肺泡灌洗演中嗜酸性粒細(xì)胞增加(從3增加到1425,6).olmsted等0耵廂vacf免疫倉鼠后.可誘生高水平的中和抗體.其效價(jià)甚至超過rsv感染所產(chǎn)生的抗體效價(jià).并毖使倉鼠下呼吸遭獲得保護(hù).而用vacg該生的中和抗體僅為vacf的1/6.hsu等也證實(shí),表達(dá)f,g以及fg嵌合蛋白的重組adv疫茁,對(duì)拘具有良好的免疫原性,脆保護(hù)狗的上下呼吸道免于rsv感染.但甩adv一4.adv

14、-5和adv-7svf重組疫苗接種黑提理后,不脆使其獲得保護(hù),adv一7初免后僅產(chǎn)生低水平中和抗體.rsv基因重組疫苗雖然處于早期研兜階段.但它已表理出了良好的特性.重組疫苗免疫原性強(qiáng),可誘導(dǎo)機(jī)體全面免疫.在母?jìng)骺贵w存在時(shí)有效.因此.這種疫苗最可能成為預(yù)防rsv感染的理想疫苗.7結(jié)語近幾年來,rsv疫苗的研制取得了較大的進(jìn)展,但仍存在許多問題.由于rsv的發(fā)病機(jī)理十分復(fù)雜,酴了體赦免疫參與發(fā)翥外,細(xì)胞介導(dǎo)的免疫和局部牯膜的防耳也起十分重要的作用.目前尚無法兩測(cè)要兒對(duì)rsv疫苗免疫應(yīng)答的準(zhǔn)確方法,疫苗的那些成分與保護(hù)性免疫應(yīng)答有關(guān).這種免疫力的持久性,以及與有害免疫之間的關(guān)系尚不清楚.rsv減毒

15、活疫苗可誘導(dǎo)機(jī)體全面免疫,坦要獲得完全減毒且基因穩(wěn)定的疫苗仍有一定困難.亞單位疫苗安全,有效,但其免疫原性有待提高.基因重組疫苗不但安全,而且可誘導(dǎo)全面免疫應(yīng)答,能在體內(nèi)中和抗體存在時(shí)接種,是理想的rsv疫苗.參考文獻(xiàn)lalwanwh.kolowskawj,openshawpjm.distincttypesoflungdiseasecausedbyunctionalsubsetsafantivitaltcel1.jexpmed,1994179(1)t8l2hlcb,walshee.longceteta1.immunitytoanyfrequencyofreinfectionwithrespir

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17、4andil-10,jvirolt1994.68(8),532l5comorsm.collinspl,firestonecy,eta1.cottonratspreviouslyimmunizedwithachimericresplrtorysyncytlalvirusfgglycoproceindevelopen?hancedpulmonarypathologywheninfectedwithrsv.aphenomenonnotencounteredfollowingim?munlzationwithvaccinlarsvrecomblnanesorrsv.vaccine,l99210(7):

18、4756connorsm.kufkainiab-firestonecy.eta1.pui.monaryhistopathologyinducedbyrespiratorysyncytialvirtschallengeoiormalin?inactivatedrsvtmmurizedbalb/cmiceisahorogatedbydeple.tionofcd+tcel1.jvlrol,199266(12):74447grahambs,hendersongs,t日ngyw,etat.prim-lagimmunimtiondeterminesthelpercytokinemr-naexperessi

19、onpatternsinlungoimicecha1.1engedwithrespiratorysyncytialvirus,jimmunol,l993ll5l(4):20328pringlecrtfilipiukah,robinsonbs.etai_ira-monogen/cityandpathogenicityoftripletempera-turesensitvemodifiedrespiratorysyneytialvirusinadultvolunteers.vaccine,1994;1l(4):4739crowejejr-collinspl.londonwt,etai_ac0il1

20、.pafitsoninchimpazeesoitheimmunogenicityandefficacyofhattenuatrdrespjratonysyncydalvirustemperature?sensitivemutantvaccinesandvacdniavirusrecombinantsthatexpressthesur|aceglycoproteinsoirsv.vaccinet1993ii(4):139510crowejejr.buipt,londonwt.eta1.satlsac.tohlyattenuatedandprtectivemutantderivedroraapar

21、tiallyattenuationcold?pessagedresplra?torysyncytlalvirus/nutantbyintroduedonofadditionalattenuatingmutationsduringchemicalmutagensis.vaccine,1994l2(8):6911ltristramda,welliverbc,moharek.eta1.im.munogenicityandsaetyofrespiratiorysyncytmlvirussuhunltvaccineinseropositlvechildrenl836monthsold.jinjectd/s,1993;167(1):19112hakuktjtsoikek,brideaurj,eta1.ahumanrespiratorysyncytalvirusprimatemodel0fen-hancedpulmonarypathologyinducodwithafor-maljnnactivatedrsvvaccinebutnotarecomhi.攀.j7u中華兒童保健雜志1996年第4卷第4期251吉林市46988名人托兒童傳染性疾病調(diào)查分析吉林市婦女兒童保健所(132001)王馨王吉平侯春華馬虹君一.7我所對(duì)199o年1994年吉林市入托兒童患各種趨勢(shì).