dysadherin在腫瘤中的表達(dá)及其意義(一).doc

1、dysadherin 在腫瘤中的表達(dá)及其意義(一)【關(guān)鍵詞】 dysadherin 腫瘤預(yù)后綜述2002 年 Ino 等 1首先發(fā)現(xiàn)一種能下調(diào) 表達(dá)，降低細(xì)胞間黏附的 “抗黏附分子 ”，并命名其為 dysadherin。dysadherin 在多種腫瘤細(xì)胞和少數(shù)正常細(xì)胞的胞膜表達(dá)，是一種癌相關(guān)細(xì)胞膜糖蛋白。 dysadherin 在腫瘤細(xì)胞的過表達(dá)能降低細(xì)胞間黏附、 促進(jìn)細(xì)胞運(yùn)動和轉(zhuǎn)移，對腫瘤演進(jìn)具有重要意義。近年來 ,很多研究都發(fā)現(xiàn) dysadherin 高表達(dá)與腫瘤的不良預(yù)后有關(guān)，檢測 dysadherin 表達(dá)對了解一些腫瘤的轉(zhuǎn)移及預(yù)后可能具有一定的價(jià)值。作者現(xiàn)就 dysadherin

2、及其與腫瘤發(fā)生發(fā)展的關(guān)系作一綜述。1dysadherin 分子結(jié)構(gòu)和組織分布dysadherin 的 cDNA 編碼 178 個(gè)氨基酸，包括一個(gè)可能的信號肽、糖基化的胞外結(jié)構(gòu)域、一個(gè)單跨膜結(jié)構(gòu)域和一個(gè)胞內(nèi)短尾。dysadherin 在胰腺癌、胃癌、甲狀腺癌、子宮頸鱗狀細(xì)胞癌、 結(jié)直腸癌、肺癌、惡性黑色素瘤、舌鱗狀細(xì)胞癌、頭頸部鱗狀細(xì)胞癌等多種腫瘤組織中都有不同程度的表達(dá)。另外，dysadherin 在少數(shù)正常細(xì)胞如 T 淋巴細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞、復(fù)層鱗狀上皮的基底細(xì)胞中也有表達(dá)。對轉(zhuǎn)染 dysadherincDNA的肝癌 PLC/PRF/5細(xì)胞的研究發(fā)現(xiàn)， dysadherin 多表達(dá)于細(xì)胞間接觸松

3、散的部位，免疫電鏡顯示dysadherin存在于細(xì)胞膜表面1。2dysadherin 促進(jìn)腫瘤進(jìn)展的作用機(jī)制dysadherin 過表達(dá)能影響肌動蛋白纖維組裝（actinorganization）、抑制介導(dǎo)的細(xì)胞間黏附，對細(xì)胞運(yùn)動、形態(tài)變化和轉(zhuǎn)移有著重要作用。另外， dysadherin 陽性細(xì)胞分泌趨化因子配體CCL2也可能是dysadherin 促進(jìn)腫瘤發(fā)生、發(fā)展和轉(zhuǎn)移的機(jī)制之一。2.1dysadherin 過表達(dá)影響肌動蛋白纖維組裝腫瘤細(xì)胞中過表達(dá)的dysadherin 能招募肌動蛋白纖維，對細(xì)胞形態(tài)變化、運(yùn)動和轉(zhuǎn)移有重要作用1，3。Shimamura 等 3發(fā)現(xiàn)，dysadherin

4、表達(dá)改變能引起肌動蛋白纖維組裝和細(xì)胞形態(tài)的變化。他們用dysadherin 的小分子干擾核糖核酸(siRNA，smallinterferingRNA)抑制人類胰腺癌細(xì)胞中 dysadherin 表達(dá)，發(fā)現(xiàn)這些細(xì)胞顯示出比對照組更大、更伸展、細(xì)胞間邊界更模糊的形態(tài)，提示dysadherin 低表達(dá)的細(xì)胞具有更強(qiáng)的黏附性，免疫熒光顯示dysadherin 低表達(dá)的細(xì)胞出現(xiàn)膜下肌動蛋白絲減少，并出現(xiàn)更多絲狀的橫向肌動蛋白張力纖維（這種肌動蛋白張力纖維與黏著斑的形成密切相關(guān)）；相反，轉(zhuǎn)染dysadherin 的人類胰腺癌細(xì)胞則出現(xiàn)明顯增多的膜下肌動蛋白絲，并在細(xì)胞膜表面出現(xiàn)絲狀偽足，而未見橫向肌動蛋白

5、張力纖維。他們對6 種具有不同dysadherin 表達(dá)水平的人類胰腺癌細(xì)胞系進(jìn)行對比研究發(fā)現(xiàn)，高表達(dá)dysadherin 的細(xì)胞具有比低表達(dá) dysadherin 細(xì)胞高得多的運(yùn)動指數(shù)，并且用dysadherincDNA轉(zhuǎn)染和 siRNA 方法改變細(xì)胞中dysadherin 表達(dá)水平都能影響這些細(xì)胞的運(yùn)動性。另外， dysadherin 過表達(dá)能促進(jìn)SCID小鼠體內(nèi)人類胰腺癌移植瘤的轉(zhuǎn)移。他們將轉(zhuǎn)染dysadherin的細(xì)胞移植入SCID小鼠體內(nèi)，35d后出現(xiàn)肝轉(zhuǎn)移，而親代Capa細(xì)胞移植瘤和模擬轉(zhuǎn)染（）dysadherin 的細(xì)胞移植瘤則未出現(xiàn)轉(zhuǎn)移。這些研究顯示，在人類胰腺癌細(xì)胞中過表達(dá)d

6、ysadherin可以增加膜下肌動蛋白絲的數(shù)量，減少橫向肌動蛋白張力纖維，抑制或干擾黏著斑的形成，提高運(yùn)動性和促進(jìn)腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移。2.2dysadherin 抑制介導(dǎo)的細(xì)胞間黏附dysadherin 通過轉(zhuǎn)錄后抑制作用下調(diào)蛋白表達(dá)，減少細(xì)胞間黏附。 Ino 等 1為明確 dysadherin 的生物學(xué)功能，將 dysadherincDNA 導(dǎo)入肝癌 PLC/PRF/5細(xì)胞（該細(xì)胞的 mRNA 和蛋白水平都無 dysadherin 表達(dá)），用 Westernblot 分析發(fā)現(xiàn)，相對于 dysadherincDNA模擬轉(zhuǎn)染組，dysadherincDNA轉(zhuǎn)染組細(xì)胞的蛋白表達(dá)明顯減少；而用Northe

7、rnblots分析則發(fā)現(xiàn)，模擬轉(zhuǎn)染組和dysadherincDNA轉(zhuǎn)染組細(xì)胞的具有等量表達(dá)。這些發(fā)現(xiàn)說明dysadherin轉(zhuǎn)染可導(dǎo)致蛋白表達(dá)減少、功能下降，但對mRNA無影響。另外對甲狀腺癌6 、舌鱗形細(xì)胞癌11等的免疫組化分析發(fā)現(xiàn)，dysadherin 蛋白表達(dá)與蛋白表達(dá)呈明顯負(fù)相關(guān)。這些發(fā)現(xiàn)提示， dysadherin 對具有轉(zhuǎn)錄后抑制作用1。另外 ,Ino 等 1發(fā)現(xiàn) dysadherin 存在于其 cDNA 轉(zhuǎn)染的肝癌 PLC/PRF/5細(xì)胞膜表面，細(xì)胞間隙中有大量微絨毛形成，細(xì)胞間黏附減少，而在模擬轉(zhuǎn)染組可以觀察到細(xì)胞間仍存在緊密連接。由于細(xì)胞間是通過與肌動蛋白細(xì)胞骨架相連形成連接

8、復(fù)合體，從而發(fā)揮細(xì)胞間黏附作用13，因此，dysadherin 也可能通過與競爭性結(jié)合肌動蛋白，進(jìn)而影響的黏附功能并促進(jìn)微絨毛的形成1。近年來還發(fā)現(xiàn)dysadherin的糖基化與功能抑制密切相關(guān)。 Tsuiji 等2發(fā)現(xiàn)dysadherin 是高度糖基化的黏液素樣分子，具有糖基化的富含絲氨酸蘇氨 酸脯氨酸的胞外結(jié)構(gòu)域，dysadherin 的這種糖基化結(jié)構(gòu)能抑制的功能。他們將轉(zhuǎn)染dysadherin 的肝癌細(xì)胞置于含糖基化抑制劑的環(huán)境中培養(yǎng)，出現(xiàn)同種細(xì)胞黏附增加伴形態(tài)學(xué)改變，提示dysadherin的抗黏附作用被減弱；在dysadherin 轉(zhuǎn)染組中抑制糖基化出現(xiàn)dysadherin 表達(dá)下調(diào)

9、和表達(dá)上調(diào)，而在對照組中，抑制糖基化對表達(dá)無影響。因此， dysadherin 的糖基化對抑制表達(dá)具有重要作用。需要指出的是，在胰腺癌4、胃癌 5、非小細(xì)胞肺癌9、皮膚惡性黑色素瘤10和舌鱗形細(xì)胞癌11 等腫瘤 中， dysadherin高表達(dá)與rin低表達(dá)之間的關(guān)系尚無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。并有研究3顯示，在胰腺癌細(xì)胞系的細(xì)胞中改變dysadherin 表達(dá)并不導(dǎo)致表達(dá)的改變，可能是這些組織中存在保持表達(dá)的強(qiáng)烈信號，而dysadherin 只能在多數(shù)病例中對抗這種信號。能在過表達(dá)dysadherin 的腫瘤中保留表達(dá)的機(jī)制尚需進(jìn)一步研究。2.3dysadherin 表達(dá)與趨化因子dysadherin

10、陽性細(xì)胞分泌趨化因子配體CCL2，對腫瘤具有轉(zhuǎn)移前作用。Nam 等 14 發(fā)現(xiàn)雖 然在表達(dá)n 的乳 腺癌細(xì)胞中 敲除dysadherin 表達(dá)，能使與肌動蛋白細(xì)胞骨架聯(lián)系更加緊密、細(xì)胞侵襲性減少 ,但是在不表達(dá)的細(xì)胞中，敲除 dysadherin也能抑制這部分細(xì)胞的侵襲性，提示dysadherin 還通過別的機(jī)制參與調(diào)節(jié)細(xì)胞運(yùn)動和轉(zhuǎn)移。他們對乳腺癌細(xì)胞的全基因表達(dá)分析顯示，敲除dysadherin對CCL2的影響最大，并發(fā)現(xiàn)dysadherin部分通過激活途徑調(diào)節(jié)CCL2表達(dá)。dysadherin陽性細(xì)胞以旁分泌形式分泌CCL2促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞轉(zhuǎn)移，而對CCL2的實(shí)驗(yàn)性抑制能減少乳腺癌細(xì)胞在體內(nèi)轉(zhuǎn)

11、移的能力。這些研究提示 ,dysadherin 陽性細(xì)胞分泌 CCL2對腫瘤具有重要的轉(zhuǎn)移前作用（ theprometastaticeffect ）。3dysadherin 在部分腫瘤中的表達(dá)及其意義3.1 胰腺癌胰腺導(dǎo)管腺癌中常有dysadherin 過表達(dá)，其表達(dá)水平與臨床病理特征及預(yù)后有密切關(guān)系 。 Shimamura 等4 用dysadherin 單克隆抗體對 125 例胰腺導(dǎo)管腺癌進(jìn)行免疫組化研究發(fā)現(xiàn)， 在非腫瘤組織中的正常導(dǎo)管和腺泡細(xì)胞或鄰近癌巢處增生的導(dǎo)管和腺泡細(xì)胞中無 dysadherin 表達(dá)；在正常內(nèi)皮細(xì)胞、基質(zhì)淋巴細(xì)胞、胰島部分細(xì)胞的細(xì)胞膜上可有 dysadherin 表

12、達(dá)；在浸潤性或低分化癌巢中幾乎所有癌細(xì)胞的細(xì)胞膜都表達(dá) dysadherin；在分化較好的癌巢中只有部分細(xì)胞表達(dá) dysadherin。根據(jù)陽性細(xì)胞比例，125 例胰腺導(dǎo)管腺癌中020%表達(dá)者有 23 例， 21%50%表達(dá)者有 38 例， 51%100%表達(dá)者有 64 例。結(jié)合臨床資料分析發(fā)現(xiàn)： 020%dysadherin 表達(dá)組具有比其他組更長的生存時(shí)間，平均為41.6 個(gè)月； 21%50%表達(dá)組的平均存活時(shí)間22.2 個(gè)月； 51%100%表達(dá)組的為 11.3 個(gè)月。 020%dysadherin 表達(dá)組中， 7/23的患者術(shù)后存活 5 年，只有 1 例患者術(shù)后不到1 年死亡。在期患者

13、中，dysadherin 表達(dá)與生存明顯相關(guān)； 在期患者中， 020%dysadherin表達(dá)者和 21%50%表達(dá)者的生存狀況比 51%100%表達(dá)者好，但差異不顯著。原發(fā)灶中 dysadherin 表達(dá)與腫瘤遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移、 較高的組織學(xué)分級、浸潤性生長方式等惡性特征密切相關(guān)。 結(jié)合分析 cadherin 表達(dá)發(fā)現(xiàn)，具有 50%100%dysadherin表達(dá)伴 低表達(dá)的患者平均術(shù)后生存時(shí)間只有 9.1 個(gè)月，而具有 050%dysadherin表達(dá)伴 正常表達(dá)的患者則具有更長的平均術(shù)后生存時(shí)間（ 31.7 個(gè)月）。這些結(jié)果都顯示 dysadherin 是一個(gè)良好的腫瘤標(biāo)記物， 結(jié)合分析 表達(dá)情況更有助于判斷胰腺癌的預(yù)后。3.2 胃癌dysadherin 陽性表達(dá)不但提示胃癌預(yù)后不良， 而且與血行轉(zhuǎn)移的發(fā)生密切相關(guān)。 Shimada 等 5 用免疫組化方法檢測 276 例胃癌樣本中 dysadherin 的表達(dá)情況，發(fā)現(xiàn) dysadhe