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文檔簡介
1、畢業(yè)論文畢業(yè)論文PPTPPT格式建議如下:格式建議如下: 一、研究目的一、研究目的 二、技術(shù)路線二、技術(shù)路線 三、研究材料三、研究材料 四、研究方法四、研究方法 五、研究結(jié)果五、研究結(jié)果 六、主要結(jié)論六、主要結(jié)論 七、創(chuàng)新點(diǎn)及今后努力方向七、創(chuàng)新點(diǎn)及今后努力方向 八、致謝八、致謝 香樟籽乙醇提取物成分及其香樟籽乙醇提取物成分及其 抑菌活性研究抑菌活性研究 Chemical composition and Antibacterial activity of the Ethanol extracts of Cinnamomum camphora seed 系所:生物科學(xué)系系所:生物科學(xué)系 專業(yè):生
2、物科學(xué)專業(yè):生物科學(xué) 學(xué)號:學(xué)號:0512400605124006 作者姓名:楊作者姓名:楊 順順 指導(dǎo)老師:余海忠指導(dǎo)老師:余海忠 一、研究目的一、研究目的 隨著社會的發(fā)展和我國綜合國力的提高,人們對生活質(zhì)量的 要求日益提高,對生態(tài)農(nóng)業(yè)、綠色食品、持續(xù)農(nóng)業(yè)、生物多 樣性保護(hù)及環(huán)境保護(hù)的呼聲越來越高。為了與我國可持續(xù) 發(fā)展策略相適應(yīng),研制開發(fā)的新農(nóng)藥必須具有安全性高、殘 留低、無公害、生物活性高、選擇性高、使用費(fèi)用低等特 性。植物性農(nóng)藥由于其原材料取自于天然植物, 自然界有其 順暢的降解途徑, 具有無殘留、無公害、不易產(chǎn)生抗藥性等 優(yōu)點(diǎn), 可廣泛用于農(nóng)作物病蟲害防治。 香樟樹系樟樹屬的常綠喬木
3、植物,是我國亞熱帶綠 闊葉林的主要樹種之一,具有驅(qū)蟲、防腐耐蛀的功能,樟 樹籽可提取色素、香料或樟油等物質(zhì)制成植物農(nóng)藥, 樟樹籽為可再生資源, 其應(yīng)用前景廣闊。我國很早就將 樟樹籽作為藥物用于治病,并認(rèn)為樟樹籽有驅(qū)風(fēng)散寒、 行氣止痛之功效,主要含有癸酸(C10)的樟樹籽脂肪油 已被試制成碳酸甘油脂,用于治療脂肪代謝紊亂病癥,并 能降血脂及膽固醇。 那么,這種對人體起作用的香樟籽,它的乙醇提取 物對綠色木霉,酵母菌,黑曲霉,木質(zhì)層孔菌,枯草 芽孢桿菌等微生物會不會有抑制作用呢?其作用方式 又如何?因此,本研究擬就,香樟籽乙醇提取物成分和 抑菌活性展開探討。在實(shí)驗(yàn)中以香樟籽提取物為抑菌 劑,對上述
4、微生物生長及孢子萌發(fā)的影響進(jìn)行試驗(yàn), 以研究其抑菌作用。 香樟樹籽 二、技術(shù)路線二、技術(shù)路線 三、實(shí)驗(yàn)材料三、實(shí)驗(yàn)材料 1 1、供試植物、供試植物 香樟籽(Cinnamomum camphora seeds)采自湖北襄 樊學(xué)院校內(nèi)。 2 2、供試微生物、供試微生物 真菌:綠色木霉Trichoderma viride 啤酒酵母Saccharomyces cerevisiae 黑曲霉Aspergillus niger 木質(zhì)層孔菌Fomes ligneus 細(xì)菌:枯草芽孢桿菌Bacillus subtilis 以上五個菌株由襄樊學(xué)院化學(xué)工程與食品科學(xué)院廖雪義 老師提供,實(shí)驗(yàn)室置冰箱中待用。 1 1、
5、香樟籽的粗提方法、香樟籽的粗提方法 本實(shí)驗(yàn)利用醇浸法提取,具體步驟如下: (1)將采摘的紫色香樟籽盛在白瓷盤,置于鼓風(fēng)干燥箱中烘烤 (50),使其干燥。然后用微型植物粉碎機(jī)粉碎(或用研缽研 碎),得到粉末。(2)將上述粉末分裝到250ml磨口三角瓶中 (0.25倍體積),然后加無水乙醇浸泡,間隔24h收集初提液, 并在原瓶中加新的無水乙醇浸泡,收集所有初提液,并抽濾得過 濾液。(3)用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀減壓濃縮上述過濾液,得膏狀物。 四、實(shí)驗(yàn)方法四、實(shí)驗(yàn)方法 2 2、氣相色譜及質(zhì)譜條件、氣相色譜及質(zhì)譜條件 香樟籽無水乙醇提取物組分的測定在襄樊市產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)督檢 驗(yàn)所進(jìn)行,所用儀器為氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀。氣
6、相色譜條件: DB-5ms彈性石英毛細(xì)管色譜柱(0.25 mm30m,0.25m)。升 溫程序:初始溫度600C保持10min,以10Cmin-1至800C,保持 15min,以20Cmin-1至2000C,以200Cmin-1至2200C,保持5 min。載氣為氦氣,流速0.8 mlmin-1;進(jìn)樣口溫度2200C。質(zhì)譜 條件:離子源為EI,電離電壓70eV,離子源溫度2000C,溶劑延 遲時間,7 min,質(zhì)譜掃描范圍m/z 40400;掃描周期0.5 S 。 3 3、生長速率測定法生長速率測定法 1 1)從試管中挑取原種接種與液體培養(yǎng)基中,在250C, 光照條件下?lián)u床培養(yǎng)。培養(yǎng)時間,不同
7、的菌培養(yǎng)時間不同, 以錐形瓶中有渾濁為宜(細(xì)小顆粒懸?。?2 2)固體培養(yǎng)基融化后倒平板,待培養(yǎng)基凝固后吸取1ml 菌液涂布,然后在250C,光照培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。倒平板時, 倒一半即可,搖均形成一薄層,以利于打菌餅。 3 3)取45ml土豆濾液于100ml錐形瓶中,加入0.9g瓊脂 粉。同樣做15瓶;取75ml土豆濾液于100ml錐形瓶中,加 入1.5g瓊脂粉。同樣做3瓶。然后于1210C滅菌30min。 4)PDA固體培養(yǎng)基加熱融化后,在恒溫水浴鍋中降溫至 500C左右。用10ml量筒(也可用移液槍)量取5ml香樟籽無水乙 醇提取液,倒入裝有45ml PDA培養(yǎng)基的錐形瓶中;用10ml量筒
8、量取8.33ml對照液,倒入裝有75ml PDA培養(yǎng)基的錐形瓶中,即 比例為9:1。倒平板時,倒一半即可,搖均形成一薄層,以利于 能平均倒3份平板。注:倒平板時,應(yīng)在無菌環(huán)境中操作,但實(shí) 驗(yàn)在酒精燈旁進(jìn)行時,由于對照液(如乙醇)易揮發(fā)燃燒,靠的 太近會燒著。 5)在酒精燈旁進(jìn)行,打孔器沾酒精后燒著滅菌,待降溫至室 溫后再打菌餅。 6)接種環(huán)滅菌后挑取菌塊于倒平板的培養(yǎng)皿中,每皿2塊, 菌餅反向置于培養(yǎng)基上,光照培養(yǎng)箱培養(yǎng)。各菌培養(yǎng)條件見表1。 7)觀測時應(yīng)在同一地方,同一人,同一把米尺測量,以盡量減少誤差。 72h后觀測; 8)重復(fù)以上步驟,對五種供試菌種分別定時進(jìn)行測定。 9)生長抑制率的計(jì)
9、算方法: 4 4、孢子萌發(fā)法、孢子萌發(fā)法 本實(shí)驗(yàn)采用懸浮液測定法,具體步驟如下: 1 1)取17ml土豆濾液于100ml錐形瓶中,每種香樟籽無水乙醇提取液做6瓶,然 后于1210C滅菌30min。 2 2)用無菌生理鹽水沖洗長滿孢子的培養(yǎng)基,將孢子沖進(jìn)錐形瓶中,用紗布濾 去雜質(zhì)。在每個裝有液體培養(yǎng)基的錐形瓶中加入1ml孢子懸浮液,其中5瓶再加入 2ml香樟籽無水乙醇提取液,另1瓶加對照液2ml,達(dá)到9:1比例,然后在搖床中培 養(yǎng)。培養(yǎng)溫度比表1中的最高溫度高10C(孢子培養(yǎng)比病原菌溫度高有利于萌發(fā))。 3 3)孢子萌發(fā)(以孢子芽管長度大于孢子短半徑者為萌發(fā))后,用無菌水稀釋到 適當(dāng)濃度 (以1
10、010 低倍鏡下, 每個視野3040個孢子為宜) 7,加到血細(xì)胞計(jì) 數(shù)板上,在10*10倍顯微鏡下觀測。 4 4)孢子抑制率的計(jì)算方法)孢子抑制率的計(jì)算方法: 1 1、香樟籽無水乙醇提取物組分、香樟籽無水乙醇提取物組分 在前述色譜條件下分析,經(jīng)計(jì)算機(jī)檢索(質(zhì)譜數(shù)據(jù)庫 N IST147,N IST27)及人工解析質(zhì)譜并與標(biāo)準(zhǔn)圖核對,用 峰面積歸一化法定量測出它們的相對含量,結(jié)果見表2。 五、實(shí)驗(yàn)結(jié)果五、實(shí)驗(yàn)結(jié)果 2 2、香樟籽無水乙醇提取物對供試菌菌絲生長的抑制活性、香樟籽無水乙醇提取物對供試菌菌絲生長的抑制活性 由表3可知,在5種供試菌中,香樟籽無水乙醇提取液在濃度為0.016 g/ml時對黑
11、曲霉的抑制率最高,為49.42%,對木質(zhì)層孔菌的抑制率最小 為7.14%;在濃度為0.008 g/ml時對黑曲霉的抑制率最高,為4.65%,對 啤酒酵母,木質(zhì)層孔菌,枯草桿菌的抑制率最小,都為0;且對5種供試 菌的抑制作用都隨提取液濃度的升高而增強(qiáng)。 培養(yǎng)72h后的黑曲霉(藥液濃度0.008g/ml) 菌餅接入到含不同濃度藥液的培養(yǎng)基中培養(yǎng) 3 3、香樟籽無水乙醇提取物對供試菌孢子萌發(fā)的抑制活性、香樟籽無水乙醇提取物對供試菌孢子萌發(fā)的抑制活性 由表4可知,在5種供試菌孢子中,香樟籽無水乙醇提取液在濃度為0.016g/ml時 對黑曲霉孢子的抑制率最高,為60.00%,對木質(zhì)層孔菌孢子的抑制率最小
12、為 12.00%;在濃度為0.008 g/ml時,對綠色木霉孢子的抑制率最高,為12.50%, 對啤酒酵母孢子的抑制率最小,為0;且對5種供試菌孢子的抑制作用都隨提取 液濃度的升高而增強(qiáng)。 六、主要結(jié)論六、主要結(jié)論 采用氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀分析香樟籽無水乙醇提取物的主要組分為:癸酸 (18.44%)、月桂酸(14.87%)、肉豆蔻酸(10.88%)、2-莰酮(10.46%)、a-松油 醇(8.69%)、黃樟油素(8.51%)、辛酸(7.90%)、-蒎烯(3.57%)、檸檬烯 (2.52%)、莰烯(2.48%) 等37種化合物。 (2)以提取物對供試菌菌絲生長的抑制率為考察指標(biāo),在5種供試菌中,香
13、樟籽 無水乙醇提取液在濃度為0.016 g/ml時對黑曲霉的抑制率最高,為49.42%, 對木質(zhì)層孔菌的抑制率最小為7.14%;在濃度為 0.008 g/ml 時對黑曲霉的 抑制率最高,為4.65%,對啤酒酵母,木質(zhì)層孔菌,枯草桿菌的抑制率最小, 都為0;且對5種供試菌的抑制作用都隨提取液濃度的升高而增強(qiáng)。 (3)以孢子萌發(fā)抑制率為考察指標(biāo),在5種供試菌孢子中,香樟籽無水乙醇提取 液在濃度為0.016g/ml時對黑曲霉孢子的抑制率最高,為60.00%,對木質(zhì)層 孔菌孢子的抑制率最小為12.00%;在濃度為0.008 g/ml時,對綠色木霉孢子 的抑制率最高,為12.50%,對啤酒酵母孢子的抑制
14、率最小,為0;且對5種供 試菌孢子的抑制作用都隨提取液濃度的升高而增強(qiáng)。 七、創(chuàng)新之處 (1)香樟樹具有速生性、觀賞性、長壽性等特性,故種植極為普遍.自然落下香 樟籽,數(shù)量很大,已經(jīng)成為城市環(huán)境整治的一大負(fù)擔(dān)。本實(shí)驗(yàn)的研究目的是科學(xué) 地利用這些“廢物”,對城市環(huán)境的保護(hù)和經(jīng)濟(jì)發(fā)展將會有重要的意義。 (2)目前,香樟籽極少數(shù)被采集入藥,對其研究主要集中在油脂產(chǎn)品的開發(fā)上, 但對其活性物質(zhì)參與農(nóng)業(yè)用藥劑這方面的研究為數(shù)不多,鮮見報道。因此,本 實(shí)驗(yàn)擬通過對香樟籽活性物質(zhì)對供試真菌和細(xì)菌控制展開深入研究,以期發(fā)現(xiàn) 一種新型天然抗菌劑,為保護(hù)環(huán)境、維護(hù)生態(tài)平衡、恢復(fù)和改善人類生存環(huán)境 提供技術(shù)支持和保
15、障。 需改進(jìn)的地方 (1)醇浸法對香樟籽活性成分的提取有較高的產(chǎn)量,但處理過程比較麻煩、復(fù) 雜,且所需溶劑數(shù)量較多,故需要對此提取方式進(jìn)行優(yōu)化。另外,也可以采用水 蒸汽蒸餾法進(jìn)行提取,方法簡便。 (2)本實(shí)驗(yàn)只局限于小試范圍,建議在中試時對提取的加工工藝、設(shè)備技術(shù)等 方面作進(jìn)一步的研究。 (3)應(yīng)該多選幾種代表性的細(xì)菌做抑制實(shí)驗(yàn),使研究結(jié)果更準(zhǔn)確。同時需要測 定最小抑菌濃度(MIC)和最小殺菌濃度(MBC),為最佳用藥量提供一定依據(jù)。 八、致八、致 謝謝 本文是在余海忠老師悉心指導(dǎo)下完的,從論文選 題、實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)到實(shí)驗(yàn)材料的采集、實(shí)驗(yàn)的實(shí)施、論文 的撰寫,導(dǎo)師都傾注大量的心血,導(dǎo)師學(xué)術(shù)上嚴(yán)謹(jǐn)?shù)?治學(xué)
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