經穴效應循經特異性規(guī)律及關鍵影響因素基礎研究

1、項目名稱：經穴效應循經特異性規(guī)律及關鍵影響因素基礎研究首席科學家：起止年限：2012.1-2016.8依托部門：國家中醫(yī)藥管理局 四川省科技廳一、關鍵科學問題及研究內容（一）項目研究工作假說循經性是經穴效應特異性的基本表現(xiàn)形式，針刺手法、穴位配伍和得氣是影響經穴效應循經特異性的關鍵因素，局部始動-中樞整合-效應器官響應多環(huán)節(jié)靶向調節(jié)是經穴效應循經特異性的生物學基礎。（二）擬解決的關鍵科學問題在前期已完成973計劃項目初步證實經穴效應存在特異性的基礎上，運用多學科研究方法與手段，基于臨床，深入闡明經穴效應循經特異性基本規(guī)律和關鍵影響因素，揭示經穴效應循經特異性多環(huán)節(jié)靶向調節(jié)的生物學基礎。（三）主

2、要研究內容1、經穴效應循經特異性基本規(guī)律的臨床評價研究以中醫(yī)針灸理論為指導，結合針灸臨床研究規(guī)范、臨床流行病學、循證醫(yī)學和gcp臨床研究原則，以慢性穩(wěn)定性心絞痛、原發(fā)性高血壓等針灸有效病證為研究載體，運用多中心rct的研究方法，通過客觀、科學的臨床評價手段，進一步證實經穴效應循經特異性基本規(guī)律。2、經穴效應循經特異性基本規(guī)律的生物學基礎研究（1）經穴效應循經特異性局部啟動靶向調節(jié)生物學基礎研究運用在體組織膜片鉗、微透析、基因敲除、質子激發(fā)x射線熒光發(fā)射（pixe）等技術和手段，重點向神經纖維-肥大細胞關聯(lián)，肥大細胞脫顆粒下游分子事件、肥大細胞-微循環(huán)關聯(lián)等在局部始動環(huán)節(jié)的靶向調節(jié)機制深入，揭示

3、經穴效應循經特異性基本規(guī)律的局部啟動機制，闡釋經穴效應循經特異性基本規(guī)律在局部始動環(huán)節(jié)的生物學基礎。（2）經穴效應循經特異性中樞靶向整合生物學基礎研究運用功能磁共振/事件相關電位（fmri/erp）等功能神經影像技術和復雜網絡分析技術，觀察比較循經、非循經、非經非穴針刺對腦功能活動的影響，深入揭示經穴效應循經特異性的中樞整合響應模式特征。（3）經穴效應循經特異性靶器官響應生物學基礎研究運用雙源ct雙能量心肌灌注成像技術，重點針對靶器官血流響應模式特征，揭示經穴效應循經特異性靶器官血流動力學響應模式及特征；采用酸敏感離子通道（asic2-/-，asic3-/-）基因敲除小鼠，針對靶器官細胞膜鉀、

4、鈉、鈣離子通道及相關蛋白，揭示經穴效應循經特異性靶器官離子通道響應模式及特征；采用條件基因敲除等技術結合，重點針對靶器官腎上腺素-受體、毒蕈堿m2受體及其信號轉導通路，揭示經穴效應循經特異性靶器官受體響應模式及特征；采用代謝組學、chip-seq技術結合，揭示經穴效應循經特異性靶器官分子響應模式及特征。通過局部始動、中樞整合、靶器官響應三個環(huán)節(jié)的研究，系統(tǒng)、全面、深入地揭示經穴效應循經特異性基本規(guī)律的生物學基礎，闡釋經穴效應循經特異性基本規(guī)律的科學內涵。3、經穴效應循經特異性的關鍵影響因素的基礎研究（1）針刺手法對經穴效應循經特異性的影響特點及分子機制采用多因素設計方法，明確不同捻轉手法參數(shù)對

5、經穴效應特異性的影響特點，為針灸臨床提供新的針刺手法運用依據(jù)；圍繞針刺手法的力學事件，結合局部生物力學、生物化學、分子生物學、蛋白組學等技術手段探討不同捻轉手法對自發(fā)性高血壓大鼠（shr）腎素-血管緊張素-醛固酮系統(tǒng)（raas）的相關分子及差異蛋白質的影響，揭示針刺手法影響經穴效應循經特異性的分子機制。（2）穴位配伍對經穴效應循經特異性的影響特點及中樞整合機制采用隨機、對照臨床研究方法，觀察不同配伍方案針刺降壓效應差異，探討穴位配伍對經穴效應特異性的影響特點。運用fmri/pet-ct多模態(tài)神經影像技術和復雜網絡分析技術，揭示不同穴位配伍方法影響經穴效應的中樞靶點腦區(qū)及其作用機制；運用蛋白組學

6、方法分析靶點腦區(qū)的差異蛋白質，采用免疫組化方法再驗證靶效應腦區(qū)差異蛋白的分布，深入研究穴位配伍影響經穴效應循經特異性的中樞整合機制。（3）得氣對經穴效應循經特異性的影響特點及分子響應機制結合目前國際運用的得氣評價方法，設計符合針灸研究應用的得氣評價新體系，并明確不同得氣狀態(tài)對經穴效應循經特異性及其相關通道示蹤成像影響的異同；運用分子生物學技術，揭示得氣對經穴效應循經特異性靶器官通道開放、受體激活和分子級聯(lián)事件放大效應的影響，從分子水平詮釋得氣對靶器官環(huán)節(jié)產生關鍵影響的生物學基礎。二、預期目標（一）總體目標以中醫(yī)針灸理論為指導，運用多學科研究方法與手段，進一步證實經穴效應循經特異性基本規(guī)律；揭示

7、經穴效應循經特異性的生物學基礎和科學內涵；探討針刺手法、穴位配伍、得氣對經穴效應循經特異性的影響特點及機制，為針灸臨床合理選穴配方提供科學依據(jù)。（二）五年預期目標1、以慢性穩(wěn)定性心絞痛、原發(fā)性高血壓為研究載體，運用國際公認的多中心隨機對照研究方法，進一步證實經穴效應循經特異性基本規(guī)律，為針灸臨床合理選穴和國際推廣運用提供科學可靠的證據(jù)。2、圍繞經穴效應循經特異性局部始動、中樞整合及效應器官響應三個環(huán)節(jié)，系統(tǒng)揭示其多環(huán)節(jié)靶向調節(jié)的生物學機制，闡釋經穴效應循經特異性的科學內涵。3、圍繞針刺手法、穴位配伍和得氣三個關鍵影響因素，深入探討其對經穴效應循經特異性的影響特點及作用機制，為經穴效應循經特異性

8、的臨床運用提供科學依據(jù)。4、搭建或創(chuàng)新針灸臨床研究平臺、針灸機理可視化研究平臺、針灸多學科交叉研究平臺及針灸轉化醫(yī)學研究平臺，促進針灸機理研究的可視化、系統(tǒng)化、規(guī)范化和可應用化，提升針灸研究水平。5、開拓并完善針灸功能基因研究、針灸表觀遺傳調控研究、針灸代謝組學研究等新領域，引導國際針灸研究的新方向。6、整合多學科研究人員，構建經穴特異性研究國際協(xié)作網絡，組建一支長期合作、多學科交叉的創(chuàng)新研究團隊。7、發(fā)表文章140-150篇，sci收錄文章40-50篇，其中if的sci收錄文章不少于5篇，保持我國經穴特異性研究在國際上的領先地位。8、培養(yǎng)碩、博士研究生60-80名、教育部新世紀優(yōu)秀人才計劃或

9、國家杰出青年基金獲得者1-3名，建立一支結構合理的經穴特異性國際合作研究團隊。9、通過5年的研究，凝練和提升傳統(tǒng)經穴特異性理論，促進針灸學術的傳承、創(chuàng)新和可持續(xù)發(fā)展。三、研究方案（一）總體研究思路圍繞“循經性是經穴效應特異性的基本表現(xiàn)形式，針刺手法、穴位配伍和得氣是影響經穴效應循經特異性的關鍵因素，局部始動-中樞整合-效應器官響應多環(huán)節(jié)靶向調節(jié)是經穴效應循經特異性的生物學基礎”的工作假說，綜合運用臨床療效評價、分子生物學、功能基因組學、代謝組學、蛋白組學、生物信息學、表觀遺傳學、神經生物學、生物力學、神經影像學、腦連接組學、神經電生理學等多學科研究技術手段，結合中醫(yī)針灸學辨證循經、辨位循經的臨

10、床實踐特色，以原發(fā)性高血壓、慢性穩(wěn)定性心絞痛等作為研究載體，從臨床療效的角度進一步確證經穴效應循經特異性基本規(guī)律；從局部始動、中樞整合、靶器官響應三個環(huán)節(jié)，深入、系統(tǒng)、全面揭示經穴效應循經特異性的生物學基礎；從針刺手法、穴位配伍、得氣三個關鍵影響因素探討其經穴效應循經特異性的影響特點及其機制。（二）技術途徑（三）可行性分析1、選題符合指南，立項依據(jù)充分：本項目圍繞“深入闡明經穴效應循經特異性基本規(guī)律和關鍵影響因素，揭示經穴效應循經特異性多環(huán)節(jié)靶向調節(jié)的生物學基礎”這一關鍵科學問題開展研究，把握了針灸學發(fā)展中的關鍵科學問題。同時，在前期肯定經穴效應特異性的基礎上，深入研究經穴效應循經特異性基本規(guī)

11、律及其關鍵影響因素，不僅是應對國際針灸經絡研究挑戰(zhàn)、搶占國際經穴特異性研究領先地位具有重要的戰(zhàn)略意義，也是開創(chuàng)繼針刺鎮(zhèn)痛獲得國際認同之后又一新的突破口，對創(chuàng)新經絡腧穴理論和提高針灸臨床療效，推進針灸學科的現(xiàn)代化、國際化等具有重要的科學價值，其立項依據(jù)充分。2、研究思路清晰，技術路線可行：本項目以針灸理論與臨床的關鍵科學問題“經穴效應循經特異性基本規(guī)律、生物學基礎及關鍵影響因素”為切入點，以體現(xiàn)針灸辨證循經、辨位循經療效確切的疾病慢性穩(wěn)定性心絞痛、原發(fā)性高血壓和原發(fā)性痛經為研究載體，采取傳統(tǒng)和現(xiàn)代相結合、多學科交叉的研究方式，在進一步證實經穴效應循經特異性基本規(guī)律的基礎上，從局部啟動、中樞整合、

12、靶器官響應環(huán)節(jié)深入、系統(tǒng)、全面揭示經穴效應循經特異性的生物學基礎；從針刺手法、穴位配伍、得氣三個方面探討經穴效應循經特異性的關鍵影響因素。其研究思路清晰，研究目標明確，研究層次清楚，技術路線切實可行。3、研究基礎良好，工作積累深厚：項目組成員研究領域和學科涵蓋針灸學、循證醫(yī)學、臨床流行病學、神經影像學、代謝組學、分子生物學、表觀遺傳學、生物力學、神經生物學、生物信息學、生物醫(yī)學工程學等，具有多學科協(xié)作研究的顯著特點；項目組成員先后承擔了國家“七五”、“八五”、“九五”、“十五”科技攻關、973計劃、“十一五”支撐計劃、國家自然科學基金重點項目、國家自然科學基金重大研究計劃等重大項目的研究工作，

13、取得了一系列研究成果，研究經驗豐富、研究基礎雄厚；本項目首席科學家所主持完成的973項目“基于臨床的經穴特異性基礎研究”，通過運用傳統(tǒng)和現(xiàn)代研究的方法已初步證實了經穴特異性客觀存在，相關科研成果獲省部級獎勵15項，發(fā)表相關學術論文680篇，出版相關學術專著27部。該項目的研究已經在國際、國內產生了廣泛的輻射和推動效應，為本項目的完成提供了堅實的保障。4、研究條件優(yōu)越，儀器設備先進：項目承擔單位及各課題單位擁有4個國家級重點學科，11個省部級重點學科，5個省部級重點實驗室，5個國家中醫(yī)藥管理局重點研究室，3個國家中醫(yī)臨床研究基地建設單位，7個國家中醫(yī)藥管理局三級科研實驗室；擁有功能神經影像、神經

14、電生理、表觀遺傳、分子生物、代謝組、蛋白質組等本項目研究所需的儀器設備，為項目的實施提供了先進、優(yōu)越的工作條件，可充分保障研究工作的順利實施和完成。（四）創(chuàng)新點1、在前期肯定經穴效應存在特異性的基礎上，結合針灸辨證循經、辨位循經的臨床特色，率先開展更符合針灸理論與臨床實際的經穴效應循經特異性基本規(guī)律研究，突破了國際經穴特異性研究主要基于辨病開展穴位與非穴位效應差異的研究思路，與國內外研究相比，研究思路更具創(chuàng)新性。2、緊密圍繞“局部始動-中樞整合-效應器官響應多環(huán)節(jié)靶向調節(jié)是經穴效應循經特異性的生物學基礎”的假說，率先對“神經-肥大細胞聯(lián)動、肥大細胞-微循環(huán)整合、肥大細胞脫顆粒下游分子響應”的局

15、部靶向調節(jié)機制，中樞時空網絡整合機制以及靶器官響應的血管、離子通道、受體、代謝靶標分子機制進行系統(tǒng)、全面和深入的研究，是國際經穴特異性機理研究的首次全面探索。3、針對經穴效應循經特異性的三大影響因素針刺手法、穴位配伍和得氣的不同作用特點，分別研究針刺手法的分子機制、穴位配伍的中樞網絡整合特點、得氣對靶器官分子的放大效應，重點突出，目的明確，有望取得突破性進展。4、在技術手段上，既運用了形態(tài)學、神經生物學、分子生物學等還原論方法，又結合了代謝組學、蛋白組學等系統(tǒng)生物學的手段；既借鑒了傳統(tǒng)、經典學科的研究方法，又引入功能影像學、在體組織膜片鉗、微透析等針灸研究的特色和共識技術；還首次引入了chip

16、-seq等表觀遺傳學等新興學科領域的技術方法，同時在各課題設置中充分考慮到正向證明和反向驗證，這些方法的綜合運用將有利于促進經穴特異性機理的深入和系統(tǒng)闡明，引導國際針灸研究的創(chuàng)新發(fā)展。5、本項目通過多學科交叉研究，不僅“經穴效應循經特異性多環(huán)節(jié)靶向調節(jié)生物學基礎”是整個項目的總體創(chuàng)新成果，而且，局部啟動的靶向調節(jié)機制、中樞時空網絡整合及關鍵分子靶點、針刺手法效應的分子機制、穴位配伍的中樞網絡整合、得氣的靶器官分子級聯(lián)放大機制等研究成果都將是總體創(chuàng)新成果下的具體化，將對針灸經絡理論的發(fā)展、臨床療效的提高等產生深遠的影響，與國內外同類研究相比，其研究結果具有重要的科學意義和臨床價值。（五）課題設置

17、課題1：經穴效應循經特異性基本規(guī)律臨床評價及中樞靶向整合生物學基礎研究【研究目標】（一）總體目標以慢性穩(wěn)定性心絞痛、原發(fā)性高血壓為研究載體，運用國際公認的多中心rct方法和多模態(tài)神經影像及復雜網絡分析技術，進一步證實經穴效應循經特異性基本規(guī)律及中樞靶向整合機制，為針灸臨床合理選穴和國際推廣運用提供科學可靠的證據(jù)。（二）五年目標1、以針灸臨床確有療效的慢性穩(wěn)定性心絞痛、原發(fā)性高血壓為研究載體，從臨床評價的角度進一步證實經穴效應循經特異性基本規(guī)律；2、以慢性穩(wěn)定性心絞痛為研究載體，采用多模態(tài)神經影像及復雜網絡分析技術等，揭示經穴效應循經特異性的中樞網絡整合機制；3、發(fā)表論文50篇，sci論文10-

18、15篇，其中if.5的文章不少于2篇；出版專著1-2部；4、培養(yǎng)教育部新世紀優(yōu)秀人才計劃或國家杰出青年基金1人，培養(yǎng)20-30名碩、博士研究生?！狙芯績热荨?、經穴效應循經特異性基本規(guī)律臨床評價研究（1）以慢性穩(wěn)定性心絞痛患者為研究對象，采用多中心rct的臨床試驗方法，在基礎治療上分別采用辨位循經取穴、他經取穴、非經非穴的干預方案，系統(tǒng)評價經穴效應循經特異性基本規(guī)律；（2）以原發(fā)性高血壓患者為研究對象，采用多中心隨機對照的臨床試驗方法，在基礎治療上分別采用辨證循經及非經非穴的干預方案，系統(tǒng)評價經穴效應循經特異性基本規(guī)律。2、經穴效應循經特異性中樞整合機制研究以慢性穩(wěn)定性心絞痛為研究載體，綜合運

19、用血氧飽和依賴功能磁共振技術（bold-fmri）和事件相關電位（erp）技術，采集循經取穴針刺與非循經取穴針刺、非經非穴針刺所引起的大腦神經信息響應時空特征，分別構建循經、非循經、非經非穴針刺效應的中樞時空網絡模型?！狙芯糠桨浮?、經穴效應循經特異性基本規(guī)律臨床評價研究（1）慢性穩(wěn)定性心絞痛針刺治療循經特異性基本規(guī)律臨床評價采用多中心、隨機、對照臨床研究方法，采用解釋性試驗設計，系統(tǒng)評價辨位循經取穴、他經取穴、非經非穴的干預方案治療治療慢性穩(wěn)定性心絞痛的臨床療效。研究對象：378例慢性穩(wěn)定性心絞痛患者研究對象的選擇：納入標準： 符合慢性穩(wěn)定性心絞痛診斷標準； 年齡在18至80歲之間； 發(fā)病大

20、于3個月以上； 冠狀動脈狹窄超過50%，且每周心絞痛發(fā)作次數(shù)5次； 加拿大心血管協(xié)會心功能評定量表為iii級； 藥物治療3個月及以上。排除標準： 近三個月內發(fā)展為不穩(wěn)定性心絞痛或心肌梗死； 心衰患者，加拿大心血管協(xié)會心功能評定量表為iiiiv級； 伴有其他重要臟器實質性損害的患者，如肺氣腫、肝腎功異常（ast，alt，gun等指標高于正常值3倍以上）等； 懷孕婦女； 心電圖提示出現(xiàn)其他心臟功能惡化改變。試驗分組：循心經、心包經取穴組：內關、神門等；循肺經（他經）取穴組：列缺、太淵等；非經非穴組：非穴點1：肘內側,肘尖與腋窩連線中點。非穴點2：肱骨內上髁與尺骨腕部之間中點，尺側緣等。觀察指標：主

21、要結局指標：每周心絞痛發(fā)作次數(shù)：采用日記方式，記錄心絞痛患者每周心絞痛發(fā)作次數(shù)。次要結局指標： 心電圖運動負荷時間：運用動態(tài)心電圖監(jiān)測患者在活動平板上進行負荷運動，直到st段壓低0.1ma的時間。 心絞痛程度評價：采用vas評分模式，記分從010，分值越低，疼痛程度越輕。 st段最大壓低值：評價患者在運動負荷時，心電圖監(jiān)測顯示的st段降低的最大值。 生活質量評分（2）原發(fā)性高血壓針刺治療循經特異性基本規(guī)律臨床評價采用多中心隨機對照臨床研究方法，采用解釋性試驗設計，系統(tǒng)評價辨證循經及非經非穴的干預方案治療治療原發(fā)性高血壓的臨床療效。研究對象：309例原發(fā)性高血壓患者研究對象的選擇：納入標準： 原

22、發(fā)性高血壓患者在停用降血壓藥物后血壓維持在140/90mmhg和179/109mmhg之間； 18歲以上患者； 近6個月以來沒有接受過針灸治療； 沒有停用降壓藥物的禁忌癥； 入組前2個月內沒有更換過降壓藥物或者沒有接受藥物治療。排除標準： 24小時動態(tài)血壓監(jiān)測發(fā)現(xiàn)收縮壓峰值高于220mmhg，舒張壓峰值高于115 mmhg的患者； 繼發(fā)性高血壓患者； 重要臟器損害，監(jiān)測指標高于正常值3倍； 伴有糖尿病、心衰、腦血管意外、心肌梗死、腫瘤等重大疾病的患者。試驗分組：辨證循經取穴組；非辨證循經取穴組；非經非穴組；觀察指標：主要結局指標：24小時內血壓均值。使用動態(tài)血壓監(jiān)測患者24小時內的收縮壓和舒張

23、壓，計算24小時內的均值。次要結局指標： 白天和夜晚的血壓均值。分別計算白天和夜晚患者的收縮壓和舒張壓均值 血壓峰值。使用動態(tài)血壓監(jiān)測觀察患者24小時內血壓，記錄血壓最高值。 血壓改善值。隨訪點的血壓均值和基線期血壓均值的差值。 血壓晝夜節(jié)律、血壓變異性等。2、經穴效應循經特異性中樞整合機制研究以60例符合納入標準的慢性穩(wěn)定性心絞痛患者為研究對象，隨機分為循經取穴組（內關等）；循他經取穴組（列缺等）；非經非穴組；等待治療組，每組15人，分別采集針刺治療前后的影像數(shù)據(jù)，采用復雜網絡分析等方法研究不同取穴針刺治療前后腦功能響應的差異，并采用相關分析融合影像數(shù)據(jù)與臨床治療數(shù)據(jù)，分析腦功能響應和臨床療

24、效的相關性，深入探討經穴效應循經特異性的中樞網絡整合機制?！境袚鷨挝弧砍啥贾嗅t(yī)藥大學、西安電子科技大學、南京中醫(yī)藥大學【課題負責人】唐勇【經費比例】32%課題2：經穴效應循經特異性局部啟動靶向調節(jié)生物學基礎研究【研究目標】（一）總體目標以慢性心肌缺血動物模型為研究載體，觀察針刺對穴區(qū)組織內肥大細胞、神經電活動、微循環(huán)及肥大細胞脫顆粒后分子事件的影響，探討經穴效應循經特異性的局部肥大細胞相關始動及傳入機制。（二）五年目標1. 以慢性心肌缺血動物模型為研究載體，觀察針刺對穴區(qū)組織內肥大細胞、神經電活動、微循環(huán)及肥大細胞脫顆粒后分子事件，探討經穴效應循經特異性的局部肥大細胞相關始動及傳入機制；2.

25、以健康受試者和慢性穩(wěn)定性心絞痛患者為研究對象，觀察不同穴位皮內微血管自律性舒縮活動的異同及針刺對微循環(huán)單位的影響，探討經穴效應循經特異性的局部微循環(huán)始動及傳入機制。3. 以上海市針灸經絡研究中心為基地，與國內外有關組織合作，吸引更多的一流科學家和科研機構投入到中醫(yī)基礎理論研究中，建立多學科開放式針灸經絡現(xiàn)代研究平臺，培養(yǎng)高水平具有國際視野、掌握相關現(xiàn)代科學技術的針灸經絡研究人才。為加強我國在針灸經絡研究方面的國際學術地位奠定基礎。4. 發(fā)表核心期刊學術論文40篇，sci雜志收錄15篇，其中影響因子4的3篇；培養(yǎng)博士研究生10名以上，并注意研究隊伍建設，鍛煉出一支多學科高水平研究隊伍，形成合理的

26、人才梯隊，培養(yǎng)優(yōu)秀年輕人。【研究內容】1、肥大細胞等與經穴效應循經特異性的相關性研究（1）以慢性心肌缺血動物模型為研究載體，采用在體組織膜片鉗等技術，觀察針刺對肥大細胞膜上的鈣、氯通道的影響，探討針刺產生的應力調控作用機制；（2）以動物模型為研究載體，運用離體肥大細胞在不同剪切速率、方向、振幅下，發(fā)現(xiàn)機械力刺激導致trp通道開放的規(guī)律，采用剔除trp通道蛋白上不同蛋白段的肥大細胞，重復實驗，確定其物理機制，研究循經取穴、他經穴和非經非穴膠原纖維在不同應力參數(shù)刺激下的生物物理特性變化，闡明機械和電刺激產生不同的始動信號與療效的關系；（3）以動物模型為研究載體，通過剔除神經纖維和肥大細胞之間的連接

27、蛋白基因，觀察針刺對神經啟動信號的影響，研究肥大細胞和神經纖維的細胞膜和化學物質的關聯(lián)關系，以及這種關聯(lián)對針刺信號在向神經系統(tǒng)轉移中的重要作用，獲得針刺有效信號的啟動與傳入特征；（4）以動物模型為研究載體，通過調節(jié)穴位處化學物質濃度、拮抗或激活相應受體對有關傳入神經放電以及針刺穴位引起的臟腑效應的影響，研究肥大細胞脫顆粒下游分子事件、肥大細胞-微循環(huán)關聯(lián)、揭示肥大細胞相關分子及肥大細胞-微循環(huán)靶向整合的機制。2、經穴區(qū)微血管自律性舒縮活動的循經特異性研究以健康志愿者和慢性穩(wěn)定性心絞痛患者為研究對象，分別比較經穴與非經非穴、同一經脈不同穴區(qū)、以及不同經脈穴位區(qū)皮內微血管自律性舒縮活動的特異性、共

28、性和差異性，揭示經穴區(qū)皮內微血管自律性舒縮活動的循經特異性?！狙芯糠桨浮?、肥大細胞等與經穴效應循經特異性的相關性研究（1）擬采用心肌缺血大鼠模型，分別用定量手針儀和電針儀兩種不同模式的針刺工具刺激實驗動物穴位，以心電變化、血壓變化、痛閾提高等作為效應指標。同時對穴位處進行微透析，采用高效液相分析方法研究針刺前后穴位處腺苷類等化學物質的變化水平與針刺效應之間的關系。循經穴位處組織染色觀察肥大細胞的形態(tài)，研究腺苷類物質在針刺過程中的變化與肥大細胞脫顆粒之間的聯(lián)系。（2）擬通過基因手段培養(yǎng)trpv2蛋白缺失的小鼠，以同窩野生型為對照，結合局部注射特異性拮抗劑觀察針刺內關穴區(qū)等對心臟電活動的影響，闡

29、明穴位處該基因蛋白在經穴效應循經特異性中的作用。（3） 利用人體肥大細胞系（hmc-1）的培養(yǎng)，通過平行板流動腔技術，施加切應力刺激，模擬循徑組織液流動狀態(tài)下的環(huán)境因素，使用鈣熒光技術對細胞內的鈣離子濃度進行實時測量，考察人體肥大細胞在不同形式的切應力刺激激活率的變化。同時，采用trpv2蛋白的特異性拮抗劑，屏蔽肥大細胞膜上trpv2蛋白，進一步研究肥大細胞在切應力刺激下激活的分子基礎。（4） 應用粗外電極記錄方法，記錄不同針刺手法誘發(fā)的外周傳入神經電活動信號時域和頻域的變化，同時利用形態(tài)學方法觀測針刺循經穴位區(qū)肥大細胞脫顆粒的變化。運用肥大細胞膜穩(wěn)定劑或激動劑，分別屏蔽或促進穴位區(qū)或非經非穴

30、區(qū)的肥大細胞脫顆粒，同時觀察傳入神經電活動信號的變化，從而研究循經肥大細胞與針刺傳入信號之間的相互關系，及其在針刺效應中的作用。（5） 實時記錄心肌細胞膜上的鈣通道、鈉鈣交換蛋白和鈉鉀泵的功能活性隨著細胞外液的改變（即在不同的血清條件下）所發(fā)生的變化，由此揭示針刺通過體液因素影響心肌細胞膜鈣轉運系統(tǒng)，降低心肌細胞內鈣離子濃度的靶蛋白，為進一步闡明其中的機制提供有力的證據(jù)。（6） 運用神經元-肥大細胞共培養(yǎng)模型，研究多細胞神經免疫系統(tǒng)生物信息的雙向交流，針對穴位的解剖學特性，擬選用大鼠背根神經節(jié)內的感覺神經元和大鼠腹腔肥大細胞建立共培養(yǎng)模型。利用該模型在細胞水平上研究機械力、溫度及低強度激光照射

31、對兩者之間信息交流的影響，為針灸的機制提供理論基礎。（7） 利用模式細胞作為異源基因表達系統(tǒng)，通過細胞分子生物學技術將與慢性心肌缺血相關的細胞膜蛋白基因篩選出并表達在模式細胞膜上，再利用細胞電生理技術，研究這些細胞過表達外源性基因后，它們對刺激的敏感性，有利于了解針刺治療慢性心肌缺血的細胞分子機制。（8） 通過心肌缺血的動物模型，用電生理、rna干擾、基因過表達等多種技術研究：針刺是否部分通過dor和其它相關受體活動的改變而減輕缺血心臟的損傷和異常興奮性；dor表達的增加或減少是否影響該針刺效應；針刺通過dor保護心臟的細胞內信號通路。揭示針刺減輕缺血性心臟損傷、減少心律失常的外周機制。（9）

32、 通過在心肌缺血的動物模型，用電生理和分子生物學技術探索：心肌缺血如何影響腦干心血管神經元的活動；心肌缺血時針刺對腦干心血管神經元的影響；該針刺效應是否有賴于dor和通道蛋白的整合調節(jié)及特定膜-胞信號的傳遞。進一步揭示針刺減輕缺血性心臟損傷、減少心律失常的中樞機制。（10） 通過共聚焦顯微鏡上加裝雙激光系統(tǒng)，研究針刺的應力等刺激因素對肥大細胞胞內ph值變化的影響。結合研究模型動物在患本病前后、針刺治療前后h+濃度的變化趨勢，開展比較研究，研究影響ph值變化的機制，探索通過何種生化產物，誘導肥大細胞表面的鈣離子通道的開放，從而使得胞內鈣離子濃度增加，并導致脫顆粒。進一步研究鈣離子通道結構及其開啟

33、功能的關聯(lián)性，并以此解釋針刺手法和鈣離子通道開啟的關系。（11） 研究細胞外基質中透明質酸分子量、濃度對肥大細胞的trpv鈣離子通道開閉以及脫顆粒的影響。研究應力與壓力等刺激對多糖水凝膠網絡體系的粘彈性的影響，和對靶細胞的作用機制，分析透明質酸受體的影響。2、經穴區(qū)微血管自律性舒縮活動的循經特異性研究（1）經穴區(qū)皮內微血管自律性舒縮活動的特異性研究以健康志愿者和慢性穩(wěn)定性心絞痛患者為研究對象，每條經脈選擇10個穴位，并在穴位旁開1厘米處任意一點作為對照，利用激光多普勒微循環(huán)血流儀同步監(jiān)測、記錄穴位與對照點的皮內微循環(huán)血流情況，分析比較經穴區(qū)相對于非經穴區(qū)皮內微血管自律性舒縮活動的特異性。（2）

34、同一經脈不同穴位區(qū)皮內微血管自律性舒縮活動的共性研究以健康志愿者和慢性穩(wěn)定性心絞痛患者為研究對象，在同一經脈上，選取至少4個穴位，這些穴位相距較遠、處于不同的神經節(jié)段分布區(qū)、或為軀體對側的同名穴，兩兩組合，利用激光多普勒微循環(huán)血流儀，同步監(jiān)測、記錄其皮內的血流變化情況，分析比較同一經脈不同穴位間皮內微血管自律性舒縮活動的頻率是否相同。（3）不同經脈穴位區(qū)皮內微血管自律性舒縮活動的差異性研究以健康志愿者和慢性穩(wěn)定性心絞痛患者為研究對象，研究涉及全部經脈，利用兩兩比較方法，即在同一神經節(jié)段區(qū)的不同經脈上選取一對穴位，利用激光多普勒微循環(huán)血流儀，同步監(jiān)測、記錄其皮內的血流變化情況，分析不同經脈穴位間

35、皮內微血管自律性舒縮活動的頻率是否相同。（4）針灸對施術區(qū)經穴皮內微血管自律性舒縮活動的影響研究以健康志愿者和慢性穩(wěn)定性心絞痛患者為研究對象，分別利用針刺、艾灸等方法刺激穴位，利用激光多普勒微循環(huán)血流儀，監(jiān)測、記錄刺激前后穴區(qū)皮內的血流變化情況，分析比較刺激前后，得氣穴位的皮內微血管自律性舒縮活動的振幅是否提高。（5）針灸對同一經脈上其它經穴區(qū)皮內微血管自律性舒縮活動的影響研究以健康志愿者和慢性穩(wěn)定性心絞痛患者為研究對象，分別利用針刺、艾灸、穴位導入提高微血管自律性舒縮活動振幅藥物等方法刺激穴位，利用激光多普勒微循環(huán)血流儀，同步監(jiān)測、記錄刺激前后該經脈上其它穴位區(qū)、與該經脈相鄰的其它經脈線上穴

36、位區(qū)皮內的血流變化情況，分析比較刺激前后，所監(jiān)測穴位的皮內微血管自律性舒縮活動的振幅是否提高。（6）針灸對軀體對側同名經脈上穴區(qū)皮內微血管自律性舒縮活動的影響研究以健康志愿者和慢性穩(wěn)定性心絞痛患者為研究對象，分別通過針刺、艾灸、穴位導入提高微血管自律性舒縮活動振幅藥物等方法刺激穴位，利用激光多普勒微循環(huán)血流儀，同步監(jiān)測、記錄軀體對側同名穴位及與該穴相鄰的非同一經脈上穴位的血流變化情況，分析比較刺激前后，所監(jiān)測穴位皮內微血管自律性舒縮活動的振幅是否提高。【承擔單位】上海市針灸經絡研究中心、北京農學院【課題負責人】丁光宏【經費比例】17%課題3：經穴效應循經特異性靶器官響應的生物學基礎研究【研究目

37、標】（一）總體目標1、以慢性心肌缺血模型為研究載體，揭示經穴效應循經特異性靶器官血流動力學響應模式及特征；2、以慢性心肌缺血模型為研究載體，揭示經穴效應循經特異性靶器官離子通道響應模式及特征；3、以慢性心肌缺血模型為研究載體，揭示經穴效應循經特異性靶器官受體響應模式及特征；4、以慢性穩(wěn)定性心絞痛和/或高血壓為研究載體，揭示經穴效應循經特異性靶器官分子響應特征。（二）五年目標1、明確經穴效應循經特異性在心臟器官水平的響應特征；2、觀察針刺對心臟細胞膜鈣離子通道及相關蛋白，揭示經穴效應循經特異性心臟離子通道響應模式及特征；3、 研究針刺對心臟活動、心臟腎上腺素-受體、毒蕈堿m2受體及1-ar和m2

38、受體后信號成份cross-talk的影響，揭示經穴效應循經特異性靶器官受體響應模式及特征；4、 建立慢性心肌缺血小型豬動物模型；形成ct冠狀動脈成像、雙能心肌灌注技術、左心室功能評估一站式影像學檢查動物豬方法；5、 與列缺穴及非經穴點對照，電針內關穴治療慢性心肌缺血小型豬4周前后分別行心臟ct灌注療效評估、觀察蛋白組學及分子生物學方面變化，初步揭示電針動物內關穴對心肌缺血的循經特異性；6、 揭示循經取穴針刺治療心肌缺血和/或高血壓靶器官分子響應特征； 7、 發(fā)表論文20-30篇，其中sci論文3-5篇、影響因子5的1-2篇；培養(yǎng)博、碩士10名，鍛煉出一支高水平的研究隊伍，形成合理人才梯隊，培養(yǎng)

39、出一批年輕的優(yōu)秀科研人員。【研究內容】1、循經取穴針刺病理狀態(tài)下心臟血流動力學響應特征研究分別以輕中度穩(wěn)定性心絞痛患者和慢性心肌缺血小型豬為研究對象，采用第二代雙源ct雙能量心肌灌注成像技術，動態(tài)觀察針刺對慢性心肌缺血病人和慢性心肌缺血小型豬的心肌灌注、左心室功能變化影響的規(guī)律，明確經穴效應循經特異性在心臟器官水平的響應特征。2、循經取穴針刺病理狀態(tài)下心臟離子通道響應特征研究采用酸敏感離子通道（asic2-/-，asic3-/-）基因敲除小鼠為載體，運用免疫印跡、定量pcr技術結合膜片鉗電生理技術，觀察針刺對心臟細胞膜鈣離子通道及相關蛋白，揭示經穴效應循經特異性心臟離子通道響應模式及特征。3、

40、循經取穴針刺病理狀態(tài)下心臟受體響應特征研究以慢性心肌缺血動物模型、特異性靶向心血管腎上腺素能1受體特異性基因敲除小鼠（adrb1tm1bkk）及毒蕈堿m2受體特異性基因敲除小鼠（由北京維通利華生物制品有限公司提供）為載體，運用免疫印跡、電生理技術，從正、反兩方面研究針刺對心臟活動、心臟腎上腺素-受體、毒蕈堿m2受體及1-ar和m2受體后信號成份cross-talk的影響，揭示經穴效應循經特異性靶器官受體響應模式及特征。4、循經取穴針刺病理狀態(tài)下心臟分子響應特征研究采用chip-seq、代謝組學及分子生物學等技術，研究循經針刺對心肌組織中基因表達水平、心肌表觀遺傳學-組蛋白修飾的改變，以及血漿代

41、謝產物、心臟組織代謝產物譜的影響，揭示經穴效應循經特異性靶器官響應分子基礎?！狙芯糠桨浮?、循經取穴針刺病理狀態(tài)下心臟血流動力學響應特征研究（1）電針調節(jié)缺血心臟功能活動自主神經及交感活動相關體液因素分析在特異性靶向心血管腎上腺素能1/2能受體基因敲除小鼠上，觀察針刺對心臟活動的影響；采用電生理法記錄ecg，分析心率變異性和平均動脈壓，觀察電針內關穴區(qū)等對急性心肌缺血動物和患者自主神經活動的影響；與列缺穴及非經穴點對照，采用雙源雙能ct心肌灌注成像動態(tài)觀察電針內關穴治療前后對慢性心肌缺血小型豬、慢性心肌缺血病人心功能及心肌灌注血流動力學的影響，包括蛋白組學肽質量指紋圖，分子生物學檢查erk1/

42、2、p-erk1/2等的變化。2、循經取穴針刺病理狀態(tài)下心臟離子通道響應特征研究（1）延腦-脊髓-神經節(jié)心交感控制通路在針刺調節(jié)缺血心臟功能活動中的作用以腎上腺素能1/2受體基因敲除小鼠（adrb1tm1bkk、adrb2tm1bkk/j）、中華小型豬和環(huán)扣式慢性心肌缺血（mi）動物模型為研究對象，采用western blot、 real-time-pcr等技術進行延腦腹外側區(qū)口側區(qū)（rvlm）內臟前運動神經元群作用分析；檢測調節(jié)心交感活動的物質表達水平，如：一氧化氮合酶（nos，nos ii gene）、腺苷受體（a(1) r）、膽堿能毒蕈堿m2、m4受體等的表達；檢測脊髓側角（中間內側神經

43、元柱,和中央管周圍自主區(qū)）組胺5-ht(3) 受體、at1r、nos ii、beta1-ar 表達；檢測星狀神經節(jié)酪氨酸羥化酶（th）、去甲腎上腺素轉運體（net）、nnos和beta1-ar表達。 （2）延腦-節(jié)狀神經節(jié)-心迷走通路在針刺調節(jié)缺血心臟功能活動中的作用 分別以特異性心血管膽堿能m2/m4基因敲除的小鼠、毒蕈堿m2/m4受體基因敲除小鼠為研究對象，研究膽堿能神經在針刺調節(jié)性功能活動中的作用分析；在特異性心血管膽堿能m2/m4基因敲除的小鼠上，記錄心電活動，觀察針刺對心臟功能活動的影響；na-迷走神經背核（dmv）區(qū)、nts作用分析。 （3）針刺對缺血心肌左心室肌細胞腎上腺素能相關

44、活動調節(jié)的細胞分子機制分別以特異性心血管膽堿能m2/m4基因敲除的小鼠、毒蕈堿m2/m4受體基因敲除小鼠為研究對象，研究減少ne釋放的物質；促進ne釋放的物質；細胞介質；緩激肽（bradykinin，bk）b2-受體（激活at1r）、辣椒素受體（trpv1）蛋白表達；針刺改善心肌缺穴與細胞內信號轉導通路活動關系的分析。（4）循經取穴對缺血心肌細胞膜鈣離子通道及相關蛋白活動的影響分別以特異性心血管膽堿能m2/m4基因敲除的小鼠、毒蕈堿m2/m4受體基因敲除小鼠為研究對象，采用western blot、定量pcr技術結合膜片鉗電生理記錄離體心肌細胞膜離子通道的工作觀察電針預處理對缺氧心肌細胞膜離子

45、通道的作用，分析針刺改善缺血心肌細胞膜活動的機制。 （5）星狀節(jié)等交感神經節(jié)、脊髓胸段內參與針刺調節(jié)缺血心臟功能活動的差異蛋白譜分析采用雙向電泳、質譜、基質輔助激光解析離子化系統(tǒng)結合同位素標記技術檢測參與針刺改善心肌缺血的差異蛋白表達譜。3、循經取穴針刺病理狀態(tài)下心臟受體響應特征研究以腎上腺素能1受體基因敲除小鼠（adrb1tm1bkk）和特異性心血管膽堿能m2基因敲除小鼠為研究對象：（1）分別采用受體結合實驗或western blot觀察比較心肌細胞1-受體、m2/m4受體的數(shù)量及親和力或含量，并以熒光染料fura-2為鈣標記，測量單個心肌細胞內鈣對1-受體激動劑dobutamine的反應性

46、，以探討心臟靶器官1-受體、m2/m4受體的數(shù)量/親和力或反應性是否參與介導了循經取穴抗心肌缺血效應的特異性；（2）采用western blot方法測定心肌細胞gs-蛋白含量，以探討1-受體、m2/m4受體后信號成分gs-蛋白是否參與介導了經穴效應循經特異性；（3）測量單個心肌細胞內鈣對腺苷酸環(huán)化酶（ac）激動劑-forskolin的反應性，以探討1-受體、m2/m4受體后信號成分ac是否參與介導了經穴效應循經特異性；（4）采用elisa法測定心肌camp含量，以探討1-受體、m2/m4受體后信號成分camp是否參與介導了經穴效應循經特異性；（5）測量單個心肌細胞內鈣對pka激動劑db-cam

47、p的反應性，以探討1-受體、m2/m4受體后信號成分pka是否參與介導了經穴效應循經特異性；（6）測量單個心肌細胞內鈣對鈣通道激動劑bay-k8644的反應性，以探討1-受體、m2/m4受體后信號成分鈣通道是否參與介導了經穴效應循經特異性。4、循經取穴針刺病理狀態(tài)下心臟分子響應特征研究（1）經穴效應循經特異性表觀遺傳分子調控機制研究動物實驗 模型：犬心肌缺血再灌注模型 分組：空白組、空白+針刺組，模型組、模型+針刺組 穴位選擇：內關 刺激參數(shù)：2hz，20分鐘，每日一次，連續(xù)7天 觀察指標：心電圖和心率、血壓；心肌缺血面積測量；心肌組織中基因表達水平的檢測（運用熒光定量pcr、生物芯片等分子生

48、物學技術結合檢測）；心肌表觀遺傳學-組蛋白修飾的改變h3k4me3（activated）、h3k27me3 （inactivated）的chip-seq臨床試驗： 分組：健康組、慢性穩(wěn)定性心絞痛患者、慢性穩(wěn)定性心絞痛患者+針刺組 病人診斷納入、排除等標準：同臨床研究 樣本量：每組患者10例 針刺穴位：內關 刺激參數(shù)：同臨床研究 指標檢測：效應指標：癥狀評價、心電圖等；表觀遺傳調控：外周血中性粒細胞chip-seq（2）經穴效應循經特異性代謝分子調控機制研究分別以符合納入標準的慢性穩(wěn)定性心絞痛患者和原發(fā)性高血壓患者為研究對象，每種疾病納入60例受試者。采用nmr等方法對血樣分別采集弛豫濾波和擴散

49、濾波的譜圖，對組織樣本分別進行水溶性和脂溶性樣本進行nmr代謝組學譜觀察，進行：代謝組學高通量數(shù)據(jù)的生物信息學分析；生物標記物識別；經穴效應特異性基本規(guī)律的生物分子網絡研究?！境袚鷨挝弧恐袊嗅t(yī)科學院針灸研究所、遼寧中醫(yī)藥大學、成都中醫(yī)藥大學【課題負責人】榮培晶【經費比例】16%課題4：穴位配伍對經穴效應循經特異性的影響特點及中樞整合機制【研究目標】（一）總體目標1、以原發(fā)性高血壓患者為研究對象，基于循經取穴配伍原則，展開穴位配伍的研究，從pet、fmri腦功能成像角度，分析循經取穴配伍對于經穴效應循經性的影響，從腦對穴位針刺信號的整合，探討穴位配伍影響經穴循經效應的機制。2、以自發(fā)性高血壓大

50、鼠為研究對象，基于循經取穴配伍原則，展開穴位配伍的研究，用pet-ct結合fmri腦掃描確定經穴激活的關鍵靶效應腦區(qū)，用蛋白組學方法分析靶效應腦區(qū)的差異蛋白質，用全基因表達譜芯片分析經穴循經取穴配伍對自發(fā)性高血壓大鼠關鍵靶效應腦區(qū)基因表達差異，用抗體芯片檢測經穴循經取穴配伍對自發(fā)性高血壓大鼠靶效應腦區(qū)炎癥因子的影響，從宏觀和微觀水平緊密結合起來闡明循經取穴配伍對于經穴效應循經特異性的中樞整合機制。（二）五年目標1、以健康志愿者、原發(fā)性高血壓患者為研究對象，分析健康和病理狀態(tài)下，以太沖為主的本經穴位配伍、表里經穴位配伍、同名經穴位配伍、非穴配伍對于腦部功能區(qū)葡萄糖代謝和血流狀態(tài)的影響。2、以自發(fā)

51、性高血壓大鼠為研究對象，通過pet-ct、fmri腦掃描、itraq技術、全基因表達譜芯片分析以及抗體芯片分析深入闡述穴位配伍影響經穴效應循經特異性的中樞整合機制。3、建立穴位配伍對經穴效應循經特異性研究的平臺技術體系，進一步強化穴位配伍對穴位效應循經特異性的中樞機制研究，并爭取實現(xiàn)穴位配伍對經穴效應循經特異性靶標或新的生物標記物的自主創(chuàng)新。4、發(fā)表影響因子大于5的sci刊物上發(fā)表學術論文4-5篇左右，申報專利1-2項；培養(yǎng)博士后和博士研究生，造就一支結構合理、具備攻堅能力的國際先進水平的研究隊伍?！狙芯績热荨?、穴位配伍對經穴效應循經特異性的影響特點研究以原發(fā)性高血壓患者為研究對象，采用rc

52、t臨床研究方法，觀察不同配伍方案（以太沖為主穴，觀察本經配穴、表里經配穴、同名經配穴、非穴配伍）針刺降壓效應差異，探討穴位配伍對經穴效應循經特異性的影響特點。2、穴位配伍影響經穴效應循經特異性的中樞整合機制（1）以原發(fā)性高血壓患者為研究對象，采用fmri/pet-ct多模態(tài)神經影像技術，觀察不同配伍方案針刺對腦部功能區(qū)葡萄糖代謝和血流狀態(tài)的影響，探討不同循經取穴配伍狀態(tài)下特異性變化腦區(qū)及中樞整合機制。（2）以自發(fā)性高血壓動物模型（shr）為研究對象，采用pet-ct成像技術觀察本經穴位配伍、表里經穴位配伍、同名經穴位配伍、非穴配伍對腦部功能區(qū)葡萄糖代謝和血流狀態(tài)的影響，并篩選經穴特異性的關鍵靶

53、點腦區(qū)；對不同配伍治療方案治療后關鍵靶點腦區(qū)進行蛋白組學分析、全基因表達譜系分析和炎癥因子的抗體芯片分析，以深入研究穴位配伍影響經穴效應循經特異性的中樞分子整合機制。【研究方案】1、穴位配伍對經穴效應循經特異性的影響特點研究采用隨機、對照研究方法，研究不同穴位配伍針刺對原發(fā)性高血壓患者降壓效應的影響。研究對象：150例原發(fā)性高血壓患者研究對象的選擇：納入標準和排除標準同課題1；試驗分組：本經取穴組：太沖；本經配伍組：太沖、曲泉；同名經配伍組：太沖、內關；表里經配伍組：太沖、風池；非穴配伍：太沖、非穴。觀察指標：分別在針刺留針1 min、5 min、10 min、20 min、30 min等5個

54、時間點測量患者肱動脈舒張壓和收縮壓。分別在針刺留針1 min、5 min、10 min、20 min、30 min等5個時間點行捻轉平補平瀉法30s后即刻，測量患者肱動脈舒張壓和收縮壓。2、穴位配伍影響經穴效應循經特異性的中樞整合機制（1）健康青年志愿者經穴循經取穴配伍的腦功能成像研究以100名健康青年志愿者為研究對象，隨機分為空白對照組、太沖穴針刺組、曲泉穴針刺組、風池穴針刺組、內關穴針刺組、非穴針刺組、本經配穴針刺組（太沖+曲泉）、同名經配穴針刺組（太沖+內關）、表里經配穴針刺組（太沖+風池）、非穴配穴針刺組（太沖+非穴），每組10人，接受fmri和pet-ct掃描，觀察不同穴位配伍對腦部

55、功能區(qū)葡萄糖代謝和血流狀態(tài)的影響，選取適當?shù)摹胺N子點”開展功能連接的分析研究，找出關鍵作用腦區(qū)。（2）原發(fā)性高血壓病患者經穴循經取穴配伍的腦功能成像研究以290名肝陽上亢型原發(fā)性高血壓患者為研究對象，隨機分為空白對照組、太沖穴針刺組、曲泉穴針刺組、風池穴針刺組、內關穴針刺組、非穴針刺組、本經配穴針刺組（太沖+曲泉）、同名經配穴針刺組（太沖+內關）、表里經配穴針刺組（太沖+風池）、非穴配穴針刺組（太沖+非穴），每組10人，分別接受fmri和pet-ct掃描，觀察不同穴位配伍針刺治療前后對腦部功能區(qū)葡萄糖代謝和血流狀態(tài)的影響，選取適當?shù)摹胺N子”開展功能連接的分析研究，找出關鍵作用腦區(qū)。（3）循經取

56、穴配伍對自發(fā)性高血壓大鼠關鍵靶效應腦區(qū)的差異蛋白組學研究以180只自發(fā)性高血壓大鼠（shr）為研究對象，隨機分為太沖穴針刺組、曲泉穴針刺組、風池穴針刺組、內關穴針刺組、非穴針刺組、本經配穴針刺組（太沖+曲泉）、同名經配穴針刺組（太沖+內關）、表里經配穴針刺組（太沖+風池）、非穴配穴針刺組（太沖+非穴），每組20只。同周齡正常血壓sd大鼠20只為正常對照組，分別接受不同的針刺治療，并于針刺前、針刺第一天以及針刺第七天治療結束后，對各組大鼠進行pet-ct掃描。在激活的腦網絡基礎上，選取適當?shù)摹胺N子”開展功能連接的分析研究，找出關鍵作用的靶效應腦區(qū)；提取靶效應腦區(qū)的蛋白質，進行itraq標記、肽段

57、分離及鑒定，進行生物信息學分析，并采用qrt-pcr、western blot及免疫組化進行差異蛋白表達再驗證，確定這些差異蛋白在關鍵靶效應腦區(qū)的分布情況。（4）循經取穴配伍對shr大鼠關鍵靶效應腦區(qū)基因表達的差異研究對象和實驗分組同上，shr大鼠分別接受不同的針刺治療，并于針刺前、針刺第一天以及針刺第七天治療結束后，對各組大鼠進行pet-ct掃描。在篩選出關鍵作用的靶效應腦區(qū)基礎上，對不同配伍治療方案治療后關鍵靶點腦區(qū)進行全基因表達譜系分析，包括芯片制備、探針制備、雜交及信號掃描、基因表達譜系分析等。（5）循經取穴配伍對shr大鼠靶效應腦區(qū)炎癥因子的影響研究對象和實驗分組同上，shr大鼠分別接受不同的針刺治療，并于針刺前、針刺第一天以及針刺第七天治療結束后，對各組大鼠進行pet-ct掃描。在篩選出關鍵作用的靶效應腦區(qū)基礎上，對不同配伍治療方案治療后關鍵靶點腦區(qū)進行大鼠相關腦區(qū)的炎癥因子抗體芯片檢測：包括樣品蛋白提取、蛋白質定量、炎癥因子抗體芯片封閉和抗體孵育及抗體芯片檢測?！境袚鷨挝弧繌V州中醫(yī)藥大學、浙江中醫(yī)藥大學【課題負責人】唐純志【經費比例】1