講稿9分光光度法測定水樣中鐵的含量

1、南昌大學(xué)撫州醫(yī)學(xué)分院講稿 實驗九分光光度法測定水樣中鐵的含量 一、實驗?zāi)康?1、了解利用可見分光光度法進行定量分析的原理和方法； 2、初步掌握分光光度計的使用方法，學(xué)習(xí)測繪溶液的吸光度； 3、掌握利用標(biāo)準(zhǔn)曲線法進行定量分析的操作與數(shù)據(jù)處理方法。 二、實驗原理 2+在pH為和Fe$9的溶液中，生成一種穩(wěn)定的phen)鄰二氮菲(鄰菲羅啉，2+4-1-1。 cmmol k,其 lgK=21.3, =1.1 x 10 橙紅色絡(luò)合物 Fe(phe n) L 508 32+ 2+-Fe 鄰菲 羅啉一絡(luò)合物鄰菲羅啉+ Fe (無色)(橙紅色) -1范圍內(nèi)遵守Lambert-Beer定律： 鐵含量在0.16卩

2、g mLA= bc=K c 其吸收曲線如下圖所示。 鄰菲羅啉-鐵(n)的吸收曲線 3+2+,然后再加入鄰二氮全部還原為 Fe顯色前需用鹽酸羥胺或抗壞血酸將 Fe菲, 并調(diào)節(jié)溶液酸度至適宜的顯色酸度范圍。有關(guān)反應(yīng)如下： 3+2+- f +2H +NO+4H2Fe2FeOH +2NHHC1 = +2CI222 用分光光度法測定物質(zhì)的含 量，一般采用標(biāo)準(zhǔn)曲線法，即配制一系列濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液，在實驗條件下依次用 分光光度計測量各標(biāo)準(zhǔn)溶液的吸光度(A)，以溶 1頁4共頁第 南昌大學(xué)撫州醫(yī)學(xué)分院講稿 液的濃度為橫坐標(biāo)，相應(yīng)的吸光度為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。在同樣實驗條件下， 測定待測溶液的吸光度，根據(jù)測得吸光

3、度值從標(biāo)準(zhǔn)曲線上查出相應(yīng)的濃度值，即 可計算試樣中被測物質(zhì)的質(zhì)量濃度。 三、實驗儀器與試劑 電子天平，容量瓶（25ml X 7,或用比色管代替）,刻度移液管（1ml ,2ml，5ml， 10ml X 2），752型分光光度計，1 cm玻璃比色皿，滴管；2mmol/L鐵標(biāo)準(zhǔn) 溶液，待測含鐵水樣，1.5mol/L鹽酸羥胺溶液，8mmol/L鄰 二氮菲溶液，1.0 mol/L醋酸鈉溶液，蒸餾水。 四、實驗內(nèi)容與步驟 2+溶液系列及待測溶液的配制1、標(biāo)準(zhǔn)Fe按表1所示，在編號為1-7的50 mL 容量瓶（或比色管）中分別按照表1的數(shù)據(jù)加入鐵標(biāo)準(zhǔn)溶液或待測水樣，然后分 別加入1.00 mL 1.5mol

4、/L鹽酸羥胺溶液，搖勻后放置 2 min,再各加入2.00 mL 8mmol/L鄰菲羅啉溶液、5.00 mL 1.0 mol/L乙酸鈉溶液，以水稀釋至刻度，搖勻。 表1標(biāo)準(zhǔn)系列溶液和樣品液的配制 實驗序號 1 2 3 4 5 6 7 2+/ml標(biāo)準(zhǔn)Fe溶液 0 0.40 0.80 1.20 1.60 2.00 0 /ml待測水樣 0 0 0 0 0 0 10.00 /ml鹽酸羥胺 1.00 1.00 1.00 1.00 1.00 1.00 1.00 /ml鄰菲羅啉 2.00 2.00 2.00 2.00 2.00 2.00 2.00 /ml醋酸鈉 2.00 2.00 2.00 2.00 2.0

5、0 2.00 2.00 ） V稀釋（總 25.00 25.00 25.00 25.00 25.00 25.00 25.00 -12+ L(Fec)/mmol 稀 釋 2、吸光度A的測定（分光光度計的使用參照后附說明） 選擇最大吸收光波長入=510nm為入射光波長，以試劑空白溶液（1號）為參max比 溶液，用1 cm比色皿作吸收池，在分光光度計上測出所配一系列標(biāo)準(zhǔn)溶液的吸 光度。 3、標(biāo)準(zhǔn)曲線的測繪 在坐標(biāo)紙上，以鐵標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度為橫坐標(biāo)，相應(yīng)的吸光度為縱坐標(biāo)，繪制 2頁4共頁第 南昌大學(xué)撫州醫(yī)學(xué)分院講稿 標(biāo)準(zhǔn)曲線。 4、待測含鐵水樣中鐵含量的測定 按照同標(biāo)準(zhǔn)曲線系列溶液相同的條件，測量待測水樣

6、的吸光度，由標(biāo)準(zhǔn)曲線計算 試樣中鐵的含量。 五、實驗注意事項 1、分光光度計測量前應(yīng)預(yù)熱30mi n； 2、儀器操作應(yīng)在教師指導(dǎo)下進行； 3、手拿比色杯的粗糙面； 4、本實驗的試劑加入順序不能隨意改變； 5、反應(yīng)時間應(yīng)嚴(yán)格控制足夠長，保證反應(yīng)完全； 6測定順序是從稀到濃。 六、實驗思考討論 1、根據(jù)有關(guān)實驗數(shù)據(jù)，計算鄰二氮菲-Fe(H )絡(luò)合物在選定波長下的摩爾吸收系 數(shù)。 2、在有關(guān)條件實驗中，均以水為參比，為什么在測繪標(biāo)準(zhǔn)曲線和測定試液時， 要以試劑空白溶液為參比？ 型可見分光光度計的使用說明附：722S 一、儀器的基本操作1、測定溶液的透射 比)T置100% (0% ( T)t置預(yù)熱t(yī)

7、設(shè)定波長 t置參比樣品和待測樣品t 記錄測試數(shù)據(jù) t t選擇透射比操作模式t拉動拉桿，使待測樣品進入光路、測定溶液 的吸光度 2 t 30min預(yù)熱)0.7之間(吸光度值一般選在 0.2入max設(shè)定波長 t最大吸 收波長、吸水紙擦干 裝2/3-3/4 置參比樣品和待測樣品t拿粗糙面、潤2-3次、 模式、開 蓋或用黑體)t t置0% (T tt模式、參比100% (T)置(模式)選擇吸光度操作模 式t mode t拉動拉桿，使待測樣品進入光路 記錄測試數(shù)據(jù) 3頁4共頁第 南昌大學(xué)撫州醫(yī)學(xué)分院講稿 二、吸收池的使用 吸收池要配對使用，因為相同規(guī)格的吸收池仍有或多或少的差異，致使光通過比色溶液時，吸 收情況將有所不同。 注意保護吸收池的透光面，拿取時，手指應(yīng)捏住其毛玻璃的兩面，以免沾污或磨損透光面。 在已配對的吸收池上，于毛玻璃面上做好記號，使其中一只專置參比溶液，另一只專置試液。 同時還應(yīng)注意吸收池放入吸收池槽架時應(yīng)有固定朝向。 如果試液是易揮發(fā)的有機溶劑，則應(yīng)加蓋后，放入比色皿槽架上。 凡含有腐蝕玻璃的物質(zhì)的溶液，不得長時間盛放在吸收池中。 倒入溶液前，應(yīng)先用該溶液淋洗內(nèi)壁三次，倒入量不可過多，以吸收池高度的2/3-3/4為宜。 每次使用完畢后，應(yīng)用蒸餾水仔細淋洗，并以吸水性好的軟紙吸干外壁水珠，放回吸收池盒內(nèi)。 不能