完整版實驗一常用單細(xì)胞藻類的形態(tài)觀察

1、實驗一 常用單細(xì)胞藻類的形態(tài)觀察、實驗?zāi)康模?觀察并識別作為餌料生物的代表性單細(xì)胞藻類的種類，為后繼單細(xì)胞藻類的分離和 培養(yǎng)做準(zhǔn)備。二、實驗器材：1、藻種綠藻門： Chlorophyta綠藻門： Chlorophyta小球藻 Chlorella sp.鹽藻 Dunaliella sp.青島大扁藻 Platymonas helgolandica var. tsingtaoensis亞心形扁藻 Platymonas subcodiformis微綠球藻 Nannochloropsis oculata硅藻門： Bacillariophyta三角褐指藻 Phaeodactylum tricornutum

2、小新月菱形藻 Nitzschia closterium f. minutissima中肋骨條藻 Skeletonema costatum牟氏角毛藻 Chaetoceros muelleri金藻門： Chrysophyta Pavlova viridis球等鞭金藻 Isochrysis galbana湛江等鞭金藻 Isochrysis zhanjiangensis藍(lán)藻門： Cyanophyta鈍頂螺旋藻 Spirulina platensis黃藻門： Xanthophyta異膠藻 Heterogloea sp.2、實驗器材 2、實驗器材 2、實驗器材光學(xué)顯微鏡，載玻片，蓋玻片，膠頭滴管，魯哥氏碘

3、液，甲醛溶液，滴瓶，無菌水， 擦鏡紙，吸水紙 三、操作步驟及要求：用膠頭滴管吸取液體培養(yǎng)的各種藻類樣品， 滴到載玻片上 （若藻種濃度大用無菌水稀釋），用顯微鏡（低倍和高倍）觀察細(xì)胞的形態(tài)大小，色素分布，運動方式， 然后用碘液或甲醛固定樣品，觀察細(xì)胞的鞭毛著生情況（長度、數(shù)量），細(xì)胞的內(nèi) 部結(jié)構(gòu)等。四、結(jié)果與討論：1、描繪 5 種藻類形態(tài)、構(gòu)造圖，描述各種藻類的特征顏色。運動性的藻類，描述其 細(xì)胞游動方式。2、用甲醛固定樣品與用碘液固定樣品， 在觀察細(xì)胞結(jié)構(gòu)上有何不同的效果？如何根 據(jù)實驗?zāi)康倪x擇碘液或甲醛作為固定劑？實驗一 常用單細(xì)胞藻類的形態(tài)觀察、實驗?zāi)康模?觀察并識別作為餌料生物的代表性單

4、細(xì)胞藻類的種類，為后繼單細(xì)胞藻類的分離和 培養(yǎng)做準(zhǔn)備。二、實驗器材：1、藻種綠藻門： Chlorophyta綠藻門： Chlorophyta小球藻 Chlorella sp.鹽藻 Dunaliella sp.青島大扁藻 Platymonas helgolandica var. tsingtaoensis亞心形扁藻 Platymonas subcodiformis微綠球藻 Nannochloropsis oculata硅藻門： Bacillariophyta三角褐指藻 Phaeodactylum tricornutum小新月菱形藻 Nitzschia closterium f. minutiss

5、ima中肋骨條藻 Skeletonema costatum牟氏角毛藻 Chaetoceros muelleri金藻門： Chrysophyta Pavlova viridis球等鞭金藻 Isochrysis galbana湛江等鞭金藻 Isochrysis zhanjiangensis藍(lán)藻門： Cyanophyta鈍頂螺旋藻 Spirulina platensis黃藻門： Xanthophyta異膠藻 Heterogloea sp.2、實驗器材 2、實驗器材 2、實驗器材光學(xué)顯微鏡，載玻片，蓋玻片，膠頭滴管，魯哥氏碘液，甲醛溶液，滴瓶，無菌水， 擦鏡紙，吸水紙 三、操作步驟及要求：用膠頭滴管吸

6、取液體培養(yǎng)的各種藻類樣品， 滴到載玻片上 （若藻種濃度大用無菌水稀釋），用顯微鏡（低倍和高倍）觀察細(xì)胞的形態(tài)大小，色素分布，運動方式， 然后用碘液或甲醛固定樣品，觀察細(xì)胞的鞭毛著生情況（長度、數(shù)量），細(xì)胞的內(nèi) 部結(jié)構(gòu)等。四、結(jié)果與討論：1、描繪 5 種藻類形態(tài)、構(gòu)造圖，描述各種藻類的特征顏色。運動性的藻類，描述其 細(xì)胞游動方式。2、用甲醛固定樣品與用碘液固定樣品， 在觀察細(xì)胞結(jié)構(gòu)上有何不同的效果？如何根 據(jù)實驗?zāi)康倪x擇碘液或甲醛作為固定劑？實驗一 常用單細(xì)胞藻類的形態(tài)觀察、實驗?zāi)康模?觀察并識別作為餌料生物的代表性單細(xì)胞藻類的種類，為后繼單細(xì)胞藻類的分離和 培養(yǎng)做準(zhǔn)備。二、實驗器材：1、藻種綠

7、藻門： Chlorophyta綠藻門： Chlorophyta小球藻 Chlorella sp.鹽藻 Dunaliella sp.青島大扁藻 Platymonas helgolandica var. tsingtaoensis亞心形扁藻 Platymonas subcodiformis微綠球藻 Nannochloropsis oculata硅藻門： Bacillariophyta三角褐指藻 Phaeodactylum tricornutum小新月菱形藻 Nitzschia closterium f. minutissima中肋骨條藻 Skeletonema costatum牟氏角毛藻 Chae

8、toceros muelleri金藻門： Chrysophyta Pavlova viridis球等鞭金藻 Isochrysis galbana湛江等鞭金藻 Isochrysis zhanjiangensis藍(lán)藻門： Cyanophyta鈍頂螺旋藻 Spirulina platensis黃藻門： Xanthophyta異膠藻 Heterogloea sp.2、實驗器材 2、實驗器材 2、實驗器材光學(xué)顯微鏡，載玻片，蓋玻片，膠頭滴管，魯哥氏碘液，甲醛溶液，滴瓶，無菌水， 擦鏡紙，吸水紙 三、操作步驟及要求：用膠頭滴管吸取液體培養(yǎng)的各種藻類樣品， 滴到載玻片上 （若藻種濃度大用無菌水稀釋），用顯微

9、鏡（低倍和高倍）觀察細(xì)胞的形態(tài)大小，色素分布，運動方式， 然后用碘液或甲醛固定樣品，觀察細(xì)胞的鞭毛著生情況（長度、數(shù)量），細(xì)胞的內(nèi) 部結(jié)構(gòu)等。四、結(jié)果與討論：1、描繪 5 種藻類形態(tài)、構(gòu)造圖，描述各種藻類的特征顏色。運動性的藻類，描述其 細(xì)胞游動方式。2、用甲醛固定樣品與用碘液固定樣品， 在觀察細(xì)胞結(jié)構(gòu)上有何不同的效果？如何根 據(jù)實驗?zāi)康倪x擇碘液或甲醛作為固定劑？實驗一 常用單細(xì)胞藻類的形態(tài)觀察、實驗?zāi)康模?觀察并識別作為餌料生物的代表性單細(xì)胞藻類的種類， 為后繼單細(xì)胞藻類的分離 和培養(yǎng)做準(zhǔn)備。二、實驗器材：1、藻種綠藻門： Chlorophyta綠藻門： Chlorophyta小球藻 Chl

10、orella sp.鹽藻 Dunaliella sp.青島大扁藻 Platymonas helgolandica var. tsingtaoensis亞心形扁藻 Platymonas subcodiformis微綠球藻 Nannochloropsis oculata硅藻門： Bacillariophyta三角褐指藻 Phaeodactylum tricornutum小新月菱形藻 Nitzschia closterium f. minutissima中肋骨條藻 Skeletonema costatum牟氏角毛藻 Chaetoceros muelleri金藻門： Chrysophyta Pavlo

11、va viridis球等鞭金藻 Isochrysis galbana湛江等鞭金藻 Isochrysis zhanjiangensis藍(lán)藻門： Cyanophyta鈍頂螺旋藻 Spirulina platensis黃藻門： Xanthophyta異膠藻 Heterogloea sp.2、實驗器材 2、實驗器材 2、實驗器材光學(xué)顯微鏡，載玻片，蓋玻片，膠頭滴管，魯哥氏碘液，甲醛溶液，滴瓶，無菌 水，擦鏡紙，吸水紙 三、操作步驟及要求：用膠頭滴管吸取液體培養(yǎng)的各種藻類樣品，滴到載玻片上（若藻種濃度大用無菌水稀釋），用顯微鏡（低倍和高倍）觀察細(xì)胞的形態(tài)大小，色素分布，運動 方式，然后用碘液或甲醛固定樣

12、品，觀察細(xì)胞的鞭毛著生情況（長度、數(shù)量）， 細(xì)胞的內(nèi)部結(jié)構(gòu)等。四、結(jié)果與討論：1、描繪 5 種藻類形態(tài)、構(gòu)造圖，描述各種藻類的特征顏色。運動性的藻類，描 述其細(xì)胞游動方式。2、用甲醛固定樣品與用碘液固定樣品，在觀察細(xì)胞結(jié)構(gòu)上有何不同的效果？如何根據(jù)實驗?zāi)康倪x擇碘液或甲醛作為固定劑？ 實驗二 餌料生物個體及篩網(wǎng)孔徑大小的測量、實驗?zāi)康模?、學(xué)會并掌握使用目測微尺和臺測微尺在顯微鏡下測量物體大小。2、對各種生物餌料和篩網(wǎng)孔徑大小有直觀認(rèn)識。、實驗器材：1、器材光學(xué)顯微鏡，目測微尺，臺測微尺，載玻片，蓋玻片，膠頭滴管，魯哥氏碘液， 擦鏡紙，水，吸水紙2、樣品各種規(guī)格的篩網(wǎng)小片，扁藻，三角褐指藻，小球

13、藻，鹵蟲休眠卵，褶皺臂尾輪蟲 三、方法與步驟：一）、目測微尺的校正 目測微尺也稱目微尺，為一圓形光學(xué)玻璃片，可被安裝到光學(xué)顯微鏡的目鏡中。玻片中央刻有一條線段， 此線段被等分成共 100 格。由于顯微鏡物鏡下的物體經(jīng) 過放大，而目鏡中的目測微尺沒有被放大，因此，當(dāng)以目測微尺為參照物，目測 微尺的每一格刻度線的測量長度因顯微鏡物鏡的放大倍數(shù)的不同而不同。 故必須 用臺測微尺進(jìn)行校正， 以求得在特定的放大倍數(shù)下， 目測微尺每一格線所代表的 真實長度。臺測微尺也稱臺微尺，是一片中央部分刻有精確等分線的載玻片，一般為 1mm等份成100格，每一格的實際長度為1/100mm即10.0微米。當(dāng)要校正目測微

14、尺時， 先將顯微鏡的目鏡取下， 旋開目鏡， 將目測微尺裝入目鏡 鏡筒內(nèi)的擱板上，然后旋緊目鏡。注意，目測微尺的有刻度面應(yīng)朝上。將帶有目 測微尺的目鏡重新裝好， 此時觀察目鏡可見視野中央有一刻度尺。 確認(rèn)目測微尺 的刻度線清晰，明了。若刻度線不清楚，則需將目測微尺重新取出，用擦鏡紙小 心擦拭后重新安裝。將臺測微尺置于顯微鏡的載物臺上， 先用低倍鏡觀察， 調(diào)節(jié)調(diào)焦旋鈕和光柵， 直 至看清楚臺測微尺的刻度線。 旋轉(zhuǎn)目鏡， 使目測微尺與臺測微尺平行。 移動載物 臺的推進(jìn)器， 先使兩尺重疊， 再使兩尺在視野的左方某一刻度完全重合。 然后從 左到右尋找第二個完全重合的刻度。 并計數(shù)兩重合線段之間目測微尺和

15、臺測微尺 的格數(shù)。由于臺測微尺的刻度是鏡臺上的實際長度（ 1 0微米），故可通過下列公式計算出當(dāng)前放大倍數(shù)下目測微尺每格的測量長度： 目測微尺每格長度（微米） =兩重疊刻度之間臺測微尺的格數(shù) *10/兩重疊刻度之間目測微尺的格數(shù) 同樣，將物鏡轉(zhuǎn)換成高倍物鏡，再次校正在高倍鏡下目測微尺每格的測量長度。校正完畢，將臺測微尺擦拭干凈后小心放好。二）測量： 取一干凈的載片。用吸管吸一滴微藻樣品。小心地加好蓋片后在顯微鏡下觀察。調(diào)好焦距。 轉(zhuǎn)動目微尺測出其長、 寬各等于目微尺多少格。 再由已經(jīng)計算出的相 應(yīng)的放大倍數(shù)下目微尺每格的長度（u）。算出餌料個體的長，寬的實際長度。將輪蟲用魯哥氏碘液固定后， 在

16、低倍鏡下測量輪蟲兜甲的長寬。 其他餌料樣品依 次同樣進(jìn)行測量。在測定篩網(wǎng)孔徑大小時，先在載玻片上滴加一滴水，將一小片篩網(wǎng)放在水滴上， 然后在其上加蓋蓋玻片，測量其孔徑（內(nèi)徑）的長寬。四、實驗報告：1. 寫明你所用的顯微鏡號碼， 高，低倍鏡的放大倍數(shù)及在高、 低倍鏡下目測微尺 每格長度的計算。2 量出 4 種生物餌料樣品的長，寬，每種測量 3 個細(xì)胞。3. 測量 200目、 120目、 100 目和 80目四種篩網(wǎng)的孔徑大小。4. 討論： 1）測量篩網(wǎng)孔徑時滴水的目的。 2）如何使測量結(jié)果更準(zhǔn)確。 實驗三 單細(xì)胞藻類濃度的測定、實驗?zāi)康模?、熟悉餌料微生物的定量方法。2、掌握血球計數(shù)板的使用，學(xué)

17、會正確定量餌料微生物的濃度。、血球計數(shù)板的原理和構(gòu)造： 血球計數(shù)板由一塊特殊規(guī)格的載玻片特制而成。 板的中央透明區(qū)一般由一 H 形溝 分成兩塊。每一塊即是一計數(shù)池。每個計數(shù)池上分別刻有準(zhǔn)確面積的大、中、小 方格。一般每個計數(shù)池被分成九個大方格。 每個大方格的面積為 1 平方毫米。計 數(shù)池兩側(cè)的凸起部分與計數(shù)池之間有 0.1 毫米的高程差。 因此，當(dāng)在計數(shù)池上方 加蓋蓋玻片時， 蓋玻片下每個大方格區(qū)域內(nèi)的體積為 0.1 立方毫米。 計數(shù)池中央 的大格又被雙線劃分成 25 個中格，其中的每個中格又被單線劃分成 16 個小格（也 有一類計數(shù)板的每一個中央大格先分成 16 個中格，每個中格分成 25

18、個小格）。因此，在中央大格內(nèi)， 1平方毫米被均勻分成 16*25（即 400）等份。計數(shù)時， 當(dāng)樣品用細(xì)口滴管滴加到計數(shù)池后，通常計數(shù)中央大格的五個中格內(nèi)的細(xì)胞數(shù)， 即可推算出整個中央大格內(nèi)的細(xì)胞數(shù)， 即 0.1 立方毫米的細(xì)胞數(shù)。 由此可推算每 毫升內(nèi)餌料生物的濃度。三、實驗器材：1、器材光學(xué)顯微鏡，血球計數(shù)板，蓋玻片，計數(shù)器， 5毫升量筒， 1 毫升移液管，細(xì)口 膠頭吸管，擦鏡紙，吸水紙，消毒海水，魯哥氏碘液，紗布。2、樣品小球藻，湛江等鞭金藻 四、方法與步驟：1、將蓋玻片和計數(shù)板用擦鏡紙擦拭干凈，將蓋有蓋玻片的計數(shù)板放在顯微鏡的載物臺上，調(diào)焦，用低倍鏡仔細(xì)觀察計數(shù)池的結(jié)構(gòu)。2、將計數(shù)板連

19、同蓋玻片一起取下，用細(xì)口膠頭滴管吸取搖勻的藻液，迅速將吸管尖靠在計數(shù)池上蓋玻片的邊緣， 略擠膠頭滴管使藻液進(jìn)入蓋玻片下， 直至充滿 整個空間，多余的藻液會流入 H 形的凹溝中。注意，當(dāng)藻液濃度高時，為了便于 計數(shù)，可將藻液稀釋后進(jìn)行計數(shù)。 在計數(shù)有鞭毛或有運動性的藻類時， 可先吸取 定量的藻液，滴加魯哥氏碘液進(jìn)行固定，然后添加消毒海水稀釋后計數(shù)。3、樣品添加到計數(shù)池后，靜置片刻。在顯微鏡下仔細(xì)調(diào)焦，同時調(diào)節(jié)光柵，必要時調(diào)節(jié)光源和反光鏡角度，直至細(xì)胞和縱橫格線都清楚。4、統(tǒng)計計數(shù)池中央大方格內(nèi)四角及中央中格內(nèi)的餌料生物的數(shù)量。并記錄。計數(shù)時，小心移動載物臺， 從上到下， 由左及右又由右及左依次計

20、數(shù)各小格內(nèi)的細(xì) 胞數(shù)。凡壓方格的上線和左線的細(xì)胞， 統(tǒng)一算此方格內(nèi)的細(xì)胞， 而壓方格的下線 和右線的細(xì)胞，統(tǒng)一不算此方格內(nèi)的細(xì)胞。5、將計數(shù)板及蓋玻片用流水沖洗，擦干，重復(fù)上述步驟，對同一樣品再技術(shù)2-3次。6將同一樣品的計數(shù)結(jié)果，取平均值。代如下式，求算單胞藻的密度:單胞藻密度（個/ml）=平均每小格內(nèi)的細(xì)胞數(shù)*16*25*10000*稀釋倍數(shù)7、計數(shù)完畢，將血球計數(shù)板沖洗干凈，用紗布吸干水分，用擦鏡紙包裝后連同蓋玻片一起放入原盒子內(nèi)。135791、將原始記錄連同計數(shù)結(jié)果，填寫實驗報告。 2、樣品滴加到計數(shù)池后，為什么要靜置片刻后才計數(shù)? 五、報告與數(shù)據(jù)處理:實驗四 單細(xì)胞藻類的分離（一）微

21、吸管分離法實驗?zāi)康?藻類在自然界中與其他生物雜居在一起，在研究工作中。常常需要把它們和其 他生物，特別是其他藻類分開，進(jìn)行單種或純種培養(yǎng)，這叫分離。本實驗的目 的是使學(xué)生熟悉單細(xì)胞藻類的微吸管法分離技術(shù)。實驗器材:解剖鏡，顯微鏡，凹玻片，載玻片，大蓋片，噴燈，砂輪，細(xì)玻管，橡皮頭, 培養(yǎng)皿，無菌培養(yǎng)液，待分離藻種。三、方法與步驟:1、拉制微吸管：用砂輪將孔徑3 4mn玻璃管載成3540mm勺段。浸入濃HCL（或 HNO）3 溶液中洗去污物。先用自來水，后用蒸餾水洗凈烘干。然后點燃噴 燈，兩臂加緊，手持玻璃管在火焰上燒灼其中部一面燒一面轉(zhuǎn)一面。使其受熱 均勻。待玻璃管燒紅軟化后稍向上提，兩手均勻

22、用力。向相反方向拉引。將中段拉長約6 10cm使這段孔徑約為0 .5mm。冷卻后從中間拉斷。尾部在噴燈上燒紅迅速壓在玻璃板或石棉網(wǎng)上，使成擴張狀。使用前將吸管在酒精燈上加熱，用鑷子夾住細(xì)頭部拉成孔徑約 0.1mm的微吸管,尾部套上橡皮頭或孔膠管備用，如進(jìn)行純種（無菌）培養(yǎng)，微吸管需經(jīng)滅菌。為了防止擦傷藻體，微吸管頭部可在酒精燈上燒灼圓滑。2、分離：首先鏡檢待分離藻液，如濃度過大應(yīng)予以稀釋，一般以每小滴藻液中含 510 個藻細(xì)胞為宜。在一已滅菌后的清潔載片上滴加 9 滴消毒培養(yǎng)液，方法如上圖。另取一載玻片滴一滴稀釋的待分離藻液，在解剖鏡（或顯微鏡）下用微吸管吸取其中所需的 藻體（最好是 1 個，

23、也可以是多個 25 個）放入第一滴水中，用一干燥的吸管 洗（從一邊吹水滴，使藻體在水中旋轉(zhuǎn)，均勻）。然后換一干凈的微吸管從第 一滴水中吸一個（或數(shù)個）藻細(xì)胞，放入第二滴水中，清洗，依次而下，直至 水滴中含一個藻細(xì)胞。 （清洗是為了洗去藻體上附有的細(xì)菌，進(jìn)行無菌培養(yǎng)）。 用微吸管將此單個藻細(xì)胞轉(zhuǎn)移到滴有培養(yǎng)液的蓋玻片上，將蓋玻片在凹玻面上 進(jìn)行懸滴培養(yǎng)。每天數(shù)次觀察藻體分裂情況。如繁殖良好，可以擴大培養(yǎng)成純（單）種。擴大后的培養(yǎng)液鏡檢為單種時，分離成功。注意：1、培養(yǎng)液配方根據(jù)待分離藻種的不同選擇，一般用F/2 配方。2、此微吸管所形成的小滴以顯微鏡低倍鏡一個視野能全看到為宜。但又不能太 小，以

24、免很快干掉。四、報告與討論:1在分離中需要注意哪些問題?2怎樣才能熟練掌握分離技術(shù)?實驗五 單細(xì)胞藻的分離（二）平板分離純化技術(shù)實驗?zāi)康?本實驗的目的是使學(xué)生熟悉并掌握利用平板分離單細(xì)胞藻類的技術(shù)。分離原理:用平板分離純化藻種，一般可分為劃線，噴霧和傾注平板等方法。其共同點是 分離用水樣首先經(jīng)過適當(dāng)稀釋，再使水樣分散到固體平板培養(yǎng)基上。等藻類在 平板上成藻團時進(jìn)一步分離，直至成單種。實驗器材:中試管，大試管，培養(yǎng)皿，移液管，燒杯，分裝漏斗，血球計數(shù)板，計數(shù)器,接種針，噴霧器，營養(yǎng)鹽成分，待分離單胞藻等。四、方法和步驟:1培養(yǎng)基的制備配方如下:1000ml培養(yǎng)基中的加入量100ml培養(yǎng)基中的加入

25、量N- 4( F/2)N1 ml (相當(dāng)于4mlF/2N)8 滴*(F/2N)P 4 (F/2 ) P1 ml相當(dāng)于8滴4mlF/2F）EDTA-Na21 ml （4*36.3um 儲液）2滴檸檬酸鐵0.5ml（1% 儲液）1滴Soil extract（濃）1ml2滴Agar12g1.2gSea Water1000ml100ml*每ml約等于20滴(1)將試管、培養(yǎng)皿、移液管等玻璃工具在烘箱中消毒。(2)在燒杯中加入100ml海水，水位標(biāo)號。稱取1.2g瓊脂，撕碎加入海水中, 在電爐上加熱，不斷攪拌至瓊脂完全溶化。損失的水分用蒸餾水調(diào)整。(3)按配方比例加入各營養(yǎng)成分、攪勻。(4)分裝試管：每

26、組分裝中試管12支(5ml/支)，大試管4支(20 ml/支)，無菌海水3支(9 ml/支)，標(biāo)明班組。(5)高壓滅菌：15磅/時2、121C、20分鐘。稍冷卻后在超凈工作臺內(nèi)分裝試管，完成后置斜面，在培養(yǎng)皿中倒平板。2、分離:(1)分離前的水樣先用血球計數(shù)板濃度，一般以每毫升1000- 5000個為宜,太濃時應(yīng)先進(jìn)行稀釋。用滅過菌的1ml移液管吸取1 ml水樣加入9ml無菌海水中，換一移液管進(jìn)行第二次，第三次稀釋，稀釋水樣標(biāo)號。(2)噴霧法:將稀釋好的水樣(10-2、10-3 )裝進(jìn)滅好菌的噴霧器中，對準(zhǔn)事先做好的平板 進(jìn)行噴霧，然后蓋好，放入光亮處培養(yǎng)。3）傾注法：用滅過菌的移液管吸取 1

27、ml 稀釋過的水樣（ 10-1 、10-2 ）加入事先先滅過菌的 培養(yǎng)皿中，接著倒入45C的培養(yǎng)基（保存在恒溫水浴中）輕輕搖動一下使水樣 和培養(yǎng)基混合均勻，放在光亮處培養(yǎng)。4）固體斜面大接種：等藻團長出后，鏡檢是否為單種，如不是單種，進(jìn)一步進(jìn)行平板劃線分離，至 單種時，用接種環(huán)挑取藻體在斜面上劃線。1、結(jié)果與記錄幾天后觀察藻類生長情況并進(jìn)行記錄，描述（包括培養(yǎng)條件）將結(jié)果寫進(jìn)實驗 報告，交實物和報告。注意：1、用于傾注法的水樣應(yīng)比噴霧法濃一個數(shù)量級， 因為多數(shù)海水藻類的最適溫度 為25r左右。加入45C培養(yǎng)基時必有一部分藻類被燙死不能生長繁殖。2、培養(yǎng)條件非常重要，要求一定的溫度（25r左右。

28、根據(jù)藻種不同而異）和一定光照。否則藻類不能生長而細(xì)菌則大量繁殖，導(dǎo)致分離失敗。實驗六 藻類培養(yǎng)和中繼培養(yǎng)、實驗?zāi)康模?本實驗要求學(xué)生掌握培養(yǎng)基成份計算，配制培養(yǎng)基，消毒、接種、測定等有關(guān) 培養(yǎng)的基本操作與管理，鞏固課堂講授知識從而有可能做到有計劃地為使用培 養(yǎng)提供足夠數(shù)量的符合質(zhì)量的藻種，、實驗器材：1、配方：F/2 配方NaNO30.88mlNaH2PO4 H2O 36.3ulT6m貯液1mlVitamin貯液1mlNa2SiO30.054ml(硅藻才加 ）自然海水 11、藻種：扁藻固體試管斜面單鐘 單鞭金藻液體單種1、器材：公用器材：電爐、鋁鍋、燒杯、海水比重計、量筒（250ml）、溫度計

29、、塑料盒、 扎瓶口的牛皮紙，橡皮圈，長鑷子，剪刀，過濾海水，固定液，基礎(chǔ)配方貯液。1000小組用器材：顯微鏡，血球計數(shù)板，計數(shù)器，量筒，長滴管，微吸管，滅菌燒 杯，紗布，蓋玻片，載玻片，擦鏡紙，吸水紙，酒精燈，火柴，標(biāo)簽紙， 毫升燒瓶。三、方法與步驟：1、各種玻璃器皿用洗潔凈刷洗干凈，放入100度烘箱烘干。2、取 2只 500毫升的三角燒瓶，加入 100毫升的自來水，擦干瓶外水滴，瓶上安裝漏斗，將其加熱煮沸， 利用瓶中水產(chǎn)生的蒸汽消毒 5分鐘，然后將水倒掉。3、用量筒量取 100 毫升過濾海水， 加入三角燒瓶， 同時加入配方的營養(yǎng)鹽母液 各 0.1 毫升。4、將海水消毒，（同 2），當(dāng)開始冒泡

30、時將其取下。瓶口立即用消毒后的牛皮 紙及橡皮圈消毒。培養(yǎng)液自然冷卻到室溫。震蕩燒瓶，恢復(fù)原海水中氣體溶解 量。5、將消毒冷卻好的培養(yǎng)液倒入消毒小燒杯中， 按無菌操作的要求， 將培養(yǎng)溶液 倒入藻種的固體藻種培養(yǎng)基試管內(nèi)，將藻種洗下來。6、接種液體藻種，將其添加到消毒培養(yǎng)液中。7、強烈震蕩三角燒瓶，用消毒滴管取樣 1毫升，加固定液（運動藻類） 1 滴， 用血球計數(shù)板計數(shù)。8、將培養(yǎng)瓶置于一定的光照和溫度下進(jìn)行培養(yǎng)管理，并做好記錄，一周左右，再次用血球計數(shù)板計數(shù)培養(yǎng)密度，視情況按一定比例擴種。四、報告與討論： 培養(yǎng)結(jié)束后提交培養(yǎng)報告，并討論以下問題：1、試述配方中N、P貯液各配置1升需多少硝酸鈉和磷

31、酸二氫鈉， 配方中的N/P 比是多少？2、本實驗適于保種級培養(yǎng)， 采用海水和營養(yǎng)鹽混合在一起進(jìn)行煮沸消毒， 并非 唯一方法，因地制宜采用不同方法，試舉例。探標(biāo)題七 實驗七 輪蟲的培養(yǎng)、實驗?zāi)康模?輪蟲是多種水產(chǎn)動物苗種培養(yǎng)過程中的理想餌料。本實驗的目的是了解并熟悉 輪蟲培養(yǎng)過程中的管理工作。、實驗器材：100 毫升三角燒瓶，解剖鏡，細(xì)吸管，小燒杯，浮游動物技術(shù)框，量筒，種輪 蟲。三、方法與步驟：1. 器皿洗凈，烘干。每只三角燒瓶中分別加入 50ml 培養(yǎng)好的小球藻，扁藻， 單鞭金藻，每種藻兩瓶，貼好標(biāo)簽。注明種名，接種日期，接種量。2. 在解剖鏡下用吸管吸取輪蟲(大小，帶卵情況一致)，每只三角

32、燒瓶內(nèi)放10只，分好瓶口，置于有光處2025 r培養(yǎng)。3. 每天搖動三角燒瓶，觀察輪蟲生長情況。4. 當(dāng)藻液變清，肉眼可見輪蟲時，計數(shù)輪蟲密度，比較幾種藻液的培養(yǎng)情況 四、結(jié)果與報告：記錄培養(yǎng)條件與輪蟲采收時的密度、 抱卵量、 休眠卵密度， 比較不同餌料 對輪蟲種群增長的影響。實驗八 鹵蟲卵的去殼、實驗?zāi)康模蝴u蟲( Artimia satina L )是海水養(yǎng)殖中的一種重要的活餌料，主要用其 初孵幼體。由于沒有找到十分有效的分離方法。在使用時，大量卵殼和未孵化 卵隨幼體一起投喂到培養(yǎng)池中，不但影響水質(zhì)，而且造成養(yǎng)殖對象吞食卵殼和 未孵化卵后腸梗塞而死亡。因此，鹵蟲卵的去殼十分重要。本實驗旨在讓同學(xué) 掌握鹵蟲卵去殼技術(shù)及去殼過程中鹵蟲卵的變化。、實驗原理：鹵蟲卵殼的外層主要成分是脂蛋白和正鐵血紅素。這些物質(zhì)在強堿性條件可以被一定濃度的次氯酸氧化除去。只剩下一層透明的卵膜。胚的活力不受影響。去殼液由次氯酸鹽， 海水和 pH 穩(wěn)定劑配置而成， 已有經(jīng)驗表明： 次氯酸鹽中的每克有效氯可氧化 22.5 克鹵蟲卵的卵殼，去殼液的總體積按 13 ml/g卵比例計算