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文檔簡(jiǎn)介
1、專題一課題1果酒和果醋的制作1、發(fā)酵:通過(guò)微生物技術(shù)的培養(yǎng)來(lái)生產(chǎn)大量代謝產(chǎn)物的過(guò)程。2、有氧發(fā)酵:醋酸發(fā)酵谷氨酸發(fā)酵無(wú)氧發(fā)酵:酒精發(fā)酵乳酸發(fā)酵3、酵母菌是兼性厭氧菌型微生物真菌酵母菌的生殖方式:出芽生殖4、在有氧條件下,酵母菌進(jìn)行有氧呼吸,大量繁殖。c6h12o66o26co26h2o5、在無(wú)氧條件下,酵母菌能進(jìn)行酒精發(fā)酵。c6h12o62c2h5oh6co26、20左右最適宜酵母菌繁殖酒精發(fā)酵時(shí)一般將溫度控制在18-257、在葡萄酒自然發(fā)酵的過(guò)程中,起主要作用的是附著在葡萄皮表面的野生型酵母菌.在發(fā)酵過(guò)程中,隨著酒精濃度的提高,紅葡萄皮的色素也進(jìn)入發(fā)酵液,使葡萄酒呈現(xiàn)深紅色.在缺氧呈酸性的發(fā)
2、酵液中,酵母菌可以生長(zhǎng)繁殖,而絕大多數(shù)其他微生物都因無(wú)法適應(yīng)這一環(huán)境而受到制約。8、果醋制作過(guò)程中,起作用的菌種是醋酸菌,該菌種是單細(xì)胞細(xì)菌(原核生物),代謝類型是異養(yǎng)需氧型,生殖方式為二分裂9、當(dāng)氧氣、糖源都充足時(shí),醋酸菌將葡萄汁中的糖分解成醋酸;當(dāng)缺少糖源時(shí),醋酸菌將乙醇變?yōu)橐胰?,再將乙醛變?yōu)榇姿帷2h5oho2ch3coohh2o在變酸的酒的表面觀察到的菌膜就是醋酸菌在液面繁殖而形成的10、控制發(fā)酵條件的作用醋酸菌對(duì)氧氣的含量特別敏感,當(dāng)進(jìn)行深層發(fā)酵時(shí),即使只是短時(shí)間中斷通入氧氣,也會(huì)引起醋酸菌死亡。醋酸菌最適生長(zhǎng)溫度為3035,控制好發(fā)酵溫度,使發(fā)酵時(shí)間縮短,又減少雜菌污染的機(jī)會(huì)。有
3、兩條途徑生成醋酸:直接氧化和以酒精為底物的氧化。11、實(shí)驗(yàn)流程:挑選葡萄沖洗榨汁酒精發(fā)酵果酒(醋酸發(fā)酵果醋)12、酒精檢驗(yàn):果汁發(fā)酵后是否有酒精產(chǎn)生,可以用重鉻酸鉀來(lái)檢驗(yàn)。在酸性條件下,重鉻酸鉀與酒精反應(yīng)呈現(xiàn)灰綠色。先在試管中加入發(fā)酵液2l,再滴入物質(zhì)的量濃度為3mol/l的h2so43滴,振蕩混勻,最后滴加常溫下飽和的重鉻酸鉀溶液3滴,振蕩試管,觀察顏色13、充氣口是在醋酸發(fā)酵時(shí)連接充氣泵進(jìn)行充氣用的;排氣口是在酒精發(fā)酵時(shí)用來(lái)排出二氧化碳的;出料口是用來(lái)取樣的。排氣口要通過(guò)一個(gè)長(zhǎng)而彎曲的膠管與瓶身相連接,其目的是防止空氣中微生物的污染。開(kāi)口向下的目的是有利于二氧化碳的排出。使用該裝置制酒時(shí),
4、應(yīng)該關(guān)閉充氣口;制醋時(shí),應(yīng)該充氣口連接氣泵,輸入氧氣。14利用上圖制作果酒、果醋時(shí),在發(fā)酵過(guò)程中,每隔12h將瓶蓋擰松一次(注意,不能打開(kāi)瓶蓋)目的是放出二氧化碳。當(dāng)發(fā)酵產(chǎn)生酒精后,對(duì)裝置的處理是打開(kāi)瓶蓋,蓋上一層紗布,進(jìn)行制葡萄醋的發(fā)酵15防止發(fā)酵液被污染:榨汁機(jī)要清洗干凈,并晾干發(fā)酵裝置要清洗干凈,并用體積分?jǐn)?shù)70%的酒精消毒,或用洗潔精洗滌。裝入榨好的葡萄汁后,封閉充氣口。16控制好發(fā)酵條件:將葡萄汁裝入發(fā)酵瓶,留大約三分之一的空間。制葡萄酒的過(guò)程中,將溫度嚴(yán)格控制在1825,時(shí)間控制在10到20天,可通過(guò)出料口發(fā)酵的情況進(jìn)行及時(shí)的監(jiān)測(cè)。在制葡萄醋的過(guò)程中,將溫度嚴(yán)格控制在3035,時(shí)間
5、控制在7到8天,并注意適時(shí)通過(guò)充氣口充氣。疑難解答(1)你認(rèn)為應(yīng)該先沖洗葡萄還是先除去枝梗?為什么?應(yīng)該先沖洗,然后再除去枝梗,以避免除去枝梗時(shí)引起葡萄破損,增加被雜菌污染的機(jī)會(huì)。(2)你認(rèn)為應(yīng)該從哪些方面防止發(fā)酵液被污染?如:要先沖洗葡萄,再除去枝梗;榨汁機(jī)、發(fā)酵裝置要清洗干凈,并進(jìn)行酒精消毒;每次排氣時(shí)只需擰松瓶蓋,不要完全揭開(kāi)瓶蓋等。(3)制葡萄酒時(shí),為什么要將溫度控制在1825?制葡萄醋時(shí),為什么要將溫度控制在3035?溫度是酵母菌生長(zhǎng)和發(fā)酵的重要條件。20左右最適合酵母菌的繁殖。因此需要將溫度控制在其最適溫度范圍內(nèi)。而醋酸菌是嗜溫菌,最適生長(zhǎng)溫度為3035,因此要將溫度控制在3035
6、。專題二課題1微生物的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)培養(yǎng)基:人們按照微生物對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的不同需求,配制出供其生長(zhǎng)繁殖的營(yíng)養(yǎng)基質(zhì),是進(jìn)行微生物培養(yǎng)的物質(zhì)基礎(chǔ)。培養(yǎng)基按照物理性質(zhì)可分為液體培養(yǎng)基半固體培養(yǎng)基和固體培養(yǎng)基。在液體培養(yǎng)基中加入凝固劑瓊脂后,制成瓊脂固體培養(yǎng)基。微生物在固體培養(yǎng)基表面生長(zhǎng),可以形成肉眼可見(jiàn)的菌落。根據(jù)菌落的特征可以判斷是哪一種菌。液體培養(yǎng)基應(yīng)用于工業(yè)或生活生產(chǎn),固體培養(yǎng)基應(yīng)用于微生物的分離和鑒定,半固體培養(yǎng)基則常用于觀察微生物的運(yùn)動(dòng)及菌種保藏等。培養(yǎng)基的化學(xué)成分包括水、無(wú)機(jī)鹽、碳源、氮源,此外還需要滿足微生物生長(zhǎng)對(duì)ph、特殊營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)以及氧氣的要求培養(yǎng)基還要滿足微生物生長(zhǎng)對(duì)ph、特殊營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)以及
7、氧氣的要求。例如,培養(yǎng)乳酸桿菌時(shí)需要在培養(yǎng)基中添加維生素,培養(yǎng)霉菌時(shí)須將培養(yǎng)基的ph調(diào)至酸性,培養(yǎng)細(xì)菌是需要將ph調(diào)至中性或微堿性,培養(yǎng)厭氧型微生物是則需要提供無(wú)氧的條件無(wú)菌技術(shù)獲得純凈培養(yǎng)物的關(guān)鍵是防止外來(lái)雜菌的入侵,要注意以下幾個(gè)方面:對(duì)實(shí)驗(yàn)操作的空間、操作者的衣著和手,進(jìn)行清潔和消毒。將用于微生物培養(yǎng)的器皿、接種用具和培養(yǎng)基等器具進(jìn)行滅菌。為避免周圍環(huán)境中微生物的污染,實(shí)驗(yàn)操作應(yīng)在酒精燈火焰附近進(jìn)行。實(shí)驗(yàn)操作時(shí)應(yīng)避免已經(jīng)滅菌處理的材料用具與周圍的物品相接觸。無(wú)菌技術(shù)除了用來(lái)防止實(shí)驗(yàn)室的培養(yǎng)物被其他外來(lái)微生物污染外,還有什么目的?答:無(wú)菌技術(shù)還能有效避免操作者自身被微生物感染。消毒與滅菌的
8、區(qū)別消毒指使用較為溫和的物理或化學(xué)方法僅殺死物體表面或內(nèi)部一部分對(duì)人體有害的微生物(不包括芽孢和孢子)。消毒方法常用煮沸消毒法,巴氏消毒法(對(duì)于一些不耐高溫的液體)還有化學(xué)藥劑(如酒精、氯氣、石炭酸等)消毒、紫外線消毒。滅菌則是指使用強(qiáng)烈的理化因素殺死物體內(nèi)外所有的微生物,包括芽孢和孢子。滅菌方法有灼燒滅菌、干熱滅菌、高壓蒸汽滅菌。滅菌方法:接種環(huán)、接種針、試管口等使用灼燒滅菌法;玻璃器皿、金屬用具等使用干熱滅菌法,所用器械是干熱滅菌箱;培養(yǎng)基、無(wú)菌水等使用高壓蒸汽滅菌法,所用器械是高壓蒸汽滅菌鍋。表面滅菌和空氣滅菌等使用紫外線滅菌法,所用器械是紫外燈。比較項(xiàng)理化因素的作用強(qiáng)度消滅微生物的數(shù)量
9、芽孢和孢子能否被消滅消毒滅菌較為溫和強(qiáng)烈部分生活狀態(tài)的微生物全部微生物不能能制作牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基(1)方法步驟:計(jì)算、稱量、溶化、滅菌、倒平板。稱量:牛肉膏比較黏稠,可以用玻棒挑取,放在稱量紙上稱量。牛肉膏和蛋白胨都容易吸潮,稱取時(shí)動(dòng)作要迅速,稱后要及時(shí)蓋上瓶蓋。倒平板時(shí)要待培養(yǎng)基冷卻至50左右時(shí),在酒精燈火焰附近進(jìn)行,等平板冷凝將平板倒置倒平板操作的討論1.培養(yǎng)基滅菌后,需要冷卻到50左右時(shí),才能用來(lái)倒平板。你用什么辦法來(lái)估計(jì)培養(yǎng)基的溫度?提示:可以用手觸摸盛有培養(yǎng)基的錐形瓶,感覺(jué)錐形瓶的溫度下降到剛剛不燙手時(shí),就可以進(jìn)行倒平板了。2.為什么需要使錐形瓶的瓶口通過(guò)火焰?答:通過(guò)灼燒滅菌
10、,防止瓶口的微生物污染培養(yǎng)基。3.平板冷凝后,為什么要將平板倒置?答:平板冷凝后,皿蓋上會(huì)凝結(jié)水珠,凝固后的培養(yǎng)基表面的濕度也比較高,將平板倒置,既可以使培養(yǎng)基表面的水分更好地?fù)]發(fā),又可以防止皿蓋上的水珠落入培養(yǎng)基,造成污染。4.在倒平板的過(guò)程中,如果不小心將培養(yǎng)基濺在皿蓋與皿底之間的部位,這個(gè)平板還能用來(lái)培養(yǎng)微生物嗎?為什么?答:空氣中的微生物可能在皿蓋與皿底之間的培養(yǎng)基上滋生,因此最好不要用這個(gè)平板培養(yǎng)微生物。純化大腸桿菌(1)微生物接種的方法最常用的是平板劃線法和稀釋涂布平板法。(2)平板劃線法是通過(guò)接種環(huán)在瓊脂固體培養(yǎng)基表面連續(xù)劃線的操作。將聚集的菌種逐步稀釋分散到培養(yǎng)基的表面。在數(shù)次
11、劃線后培養(yǎng),可以分離到由一個(gè)細(xì)胞繁殖而來(lái)的肉眼可見(jiàn)的子細(xì)胞群體,這就是菌落。(3)稀釋涂布平板法是將菌液進(jìn)行一系列的梯度稀釋,然后將不同稀釋度的菌液分別涂布到瓊脂固體培養(yǎng)基的表面,進(jìn)行培養(yǎng)。分為系列稀釋操作和涂布平板操作兩步。(4)用平板劃線法和稀釋涂布平板法接種的目的是:使聚集在一起的微生物分散成單個(gè)細(xì)胞,從而能在培養(yǎng)基表面形成單個(gè)的菌落,以便于純化菌種。(5)平板劃線法操作步驟:將接種環(huán)放在火焰上灼燒,直到接種環(huán)燒紅。在火焰旁冷卻接種環(huán),并打開(kāi)棉塞。將試管口通過(guò)火焰。將已冷卻的接種環(huán)伸入菌液中蘸取一環(huán)菌液。將試管通過(guò)火焰,并塞上棉塞。左手將皿蓋打開(kāi)一條縫隙,右手將沾有菌種的接種環(huán)迅速伸入平
12、板內(nèi),劃三至五條平行線,蓋上皿蓋。注意不要?jiǎng)澠婆囵B(yǎng)皿。灼燒接種環(huán),待其冷卻后,從第一區(qū)域劃線的末端開(kāi)始往第二區(qū)域內(nèi)劃線。重復(fù)以上操作,在三、四、五區(qū)域內(nèi)劃線。注意不要將最后一區(qū)的劃線與第一區(qū)相連。將平板倒置放入培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。平板劃線操作的討論1.為什么在操作的第一步以及每次劃線之前都要灼燒接種環(huán)?在劃線操作結(jié)束時(shí),仍然需要灼燒接種環(huán)嗎?為什么?答:操作的第一步灼燒接種環(huán)是為了避免接種環(huán)上可能存在的微生物污染培養(yǎng)物;每次劃線前灼燒接種環(huán)是為了殺死上次劃線結(jié)束后,接種環(huán)上殘留的菌種,使下一次劃線時(shí),接種環(huán)上的菌種直接來(lái)源于上次劃線的末端,從而通過(guò)劃線次數(shù)的增加,使每次劃線時(shí)菌種的數(shù)目逐漸減少,以便
13、得到菌落。劃線結(jié)束后灼燒接種環(huán),能及時(shí)殺死接種環(huán)上殘留的菌種,避免細(xì)菌污染環(huán)境和感染操作者。2.在灼燒接種環(huán)之后,為什么要等其冷卻后再進(jìn)行劃線?答:以免接種環(huán)溫度太高,殺死菌種。3.在作第二次以及其后的劃線操作時(shí),為什么總是從上一次劃線的末端開(kāi)始劃線?答:劃線后,線條末端細(xì)菌的數(shù)目比線條起始處要少,每次從上一次劃線的末端開(kāi)始,能使細(xì)菌的數(shù)目隨著劃線次數(shù)的增加而逐步減少,最終能得到由單個(gè)細(xì)菌繁殖而來(lái)的菌落。(6)涂布平板操作的步驟:將涂布器浸在盛有酒精的燒杯中。取少量菌液,滴加到培養(yǎng)基表面。將沾有少量酒精的涂布器在火焰上引燃,待酒精燃盡后,冷卻810s。用涂布器將菌液均勻地涂布在培養(yǎng)基表面。涂布
14、平板操作的討論涂布平板的所有操作都應(yīng)在火焰附近進(jìn)行。結(jié)合平板劃線與系列稀釋的無(wú)菌操作要求,想一想,第2步應(yīng)如何進(jìn)行無(wú)菌操作?提示:應(yīng)從操作的各個(gè)細(xì)節(jié)保證“無(wú)菌”。例如,酒精燈與培養(yǎng)皿的距離要合適、吸管頭不要接觸任何其他物體、吸管要在酒精燈火焰周圍;等等。菌種的保存(1)對(duì)于頻繁使用的菌種,可以采用臨時(shí)保藏的方法。臨時(shí)保藏方法將菌種接種到試管的固體斜面培養(yǎng)基上,在合適的溫度下培養(yǎng)。當(dāng)菌落長(zhǎng)成后,將試管放入4的冰箱中保藏。以后每36個(gè)月,都要重新將菌種從舊的培養(yǎng)基上轉(zhuǎn)移到新鮮的培養(yǎng)基上。缺點(diǎn):這種方法保存的時(shí)間不長(zhǎng),菌種容易被污染或產(chǎn)生變異。(2)對(duì)于需要長(zhǎng)期保存的菌種,可以采用甘油管藏的方法。在
15、3ml的甘油瓶中,裝入1ml甘油后滅菌。將1ml培養(yǎng)的菌液轉(zhuǎn)移到甘油瓶中,與甘油充分混勻后,放在20的冷凍箱中保存。疑難解答確定培養(yǎng)基制作是否合格的方法將未接種的培養(yǎng)基在恒溫箱中保溫12天,無(wú)菌落生長(zhǎng),說(shuō)明培養(yǎng)基的制備是成功的,否則需要重新制備。課題2土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計(jì)數(shù)尿素是一種重要的農(nóng)業(yè)氮肥,尿素并不能直接被農(nóng)作物吸收。只有當(dāng)土壤中的細(xì)菌將尿素分解成氨之后,才能被植物利用。土壤中的細(xì)菌之所以能分解尿素,是因?yàn)樗麄兡芎铣呻迕改蛩刈畛跏菑娜说哪蛞褐邪l(fā)現(xiàn)的篩選菌株(1)實(shí)驗(yàn)室中微生物的篩選應(yīng)用的原理人為提供有利于目的菌株生長(zhǎng)的條件(包括營(yíng)養(yǎng)、溫度、ph等),同時(shí)抑制或阻止其他微生物生
16、長(zhǎng)。(2)選擇性培養(yǎng)基在微生物學(xué)中,將允許特定種類的微生物生長(zhǎng),同時(shí)抑制或阻止其他種類微生物生長(zhǎng)的培養(yǎng)基,稱作選擇培養(yǎng)基。(3)配制選擇培養(yǎng)基的依據(jù)根據(jù)選擇培養(yǎng)的菌種的生理代謝特點(diǎn)加入某種物質(zhì)以達(dá)到選擇的目的。例如,培養(yǎng)基中不加入有機(jī)物可以選擇培養(yǎng)自養(yǎng)微生物;培養(yǎng)基中不加入氮元素,可以選擇培養(yǎng)能固氮的微生物;加入高濃度的食鹽可選擇培養(yǎng)金黃色葡萄球菌等。統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)目(1)測(cè)定微生物數(shù)量的常用方法有稀釋涂布平板法(活菌計(jì)數(shù)法)和顯微鏡直接計(jì)數(shù)。(2)稀釋涂布平板法統(tǒng)計(jì)樣品中活菌的數(shù)目的原理當(dāng)樣品的稀釋度足夠高時(shí),培養(yǎng)基表面生長(zhǎng)的一個(gè)菌落,來(lái)源于樣品稀釋液中的一個(gè)活菌。通過(guò)統(tǒng)計(jì)平板上的菌落數(shù),就能推
17、測(cè)出樣品中大約含有多少活細(xì)菌。為了保證結(jié)果準(zhǔn)確,一般設(shè)置35個(gè)平板,選擇菌落數(shù)在30300的平板進(jìn)行計(jì)數(shù),并取平均值。統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)往往比活菌的實(shí)際數(shù)目低,這是因?yàn)楫?dāng)兩個(gè)或多個(gè)細(xì)胞在一起時(shí),平板上觀察到的只是一個(gè)菌落。因此,統(tǒng)計(jì)結(jié)果一般用菌落數(shù)而不是活菌數(shù)來(lái)表示。采用此方法的注意事項(xiàng):選擇菌落數(shù)在30300的平板上計(jì)數(shù)。需培養(yǎng)計(jì)算出三個(gè)或三個(gè)以上的平板菌落求平均數(shù)。統(tǒng)計(jì)的菌落往往比活菌的實(shí)際數(shù)目低。每克樣品中的菌落數(shù)(cv)m其中,c代表某一稀釋度下平板上生長(zhǎng)的平均菌落數(shù),v代表涂布平板時(shí)所用的稀釋液的體積(ml),m代表稀釋倍數(shù)。設(shè)置對(duì)照設(shè)置對(duì)照的主要目的是排除實(shí)驗(yàn)組中非測(cè)試因素對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影
18、響,提高實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可信度。實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)包括實(shí)驗(yàn)方案,所需儀器、材料、用具和藥品,具體的實(shí)施步驟以及時(shí)間安排等的綜合考慮和安排。(1)土壤取樣:同其他生物環(huán)境相比,土壤中的微生物,數(shù)量最大,種類最多。在富含有機(jī)質(zhì)的土壤表層,有更多的微生物生長(zhǎng)。從富含有機(jī)物、潮濕、ph7的土壤中取樣。鏟去表層土,在距地表約38cm的土壤層取樣。(2)樣品的稀釋:樣品的稀釋程度將直接影響平板上生長(zhǎng)的菌落數(shù)目。在實(shí)際操作中,通常選用一定稀釋范圍的樣品液進(jìn)行培養(yǎng),以保證獲得菌落數(shù)在30300之間、適于計(jì)數(shù)的平板。測(cè)定土壤中細(xì)菌的數(shù)量,一般選用104105106測(cè)定放線菌的數(shù)量,一般選用103104105測(cè)定真菌的數(shù)
19、量,一般選用102103104(3)微生物的培養(yǎng)與觀察不同種類的微生物,往往需要不同的培養(yǎng)溫度和培養(yǎng)時(shí)間。細(xì)菌303712天放線菌252857天霉菌252834天每隔24小時(shí)統(tǒng)計(jì)一次菌落數(shù)目,選取菌落數(shù)目穩(wěn)定時(shí)的記錄作為結(jié)果,這樣可以防止因培養(yǎng)時(shí)間不足而導(dǎo)致一樓菌落的數(shù)目。一般來(lái)說(shuō),在一定的培養(yǎng)條件下(相同的培養(yǎng)基、唯獨(dú)及培養(yǎng)時(shí)間),同種微生物表現(xiàn)出穩(wěn)定的菌落特征。形狀、大小、隆起程度、顏色疑難解答(1)如何從平板上的菌落數(shù)推測(cè)出每克樣品中的菌落數(shù)?統(tǒng)計(jì)某一稀釋度下平板上的菌落數(shù),最好能統(tǒng)計(jì)3個(gè)平板,計(jì)算出平板菌落數(shù)的平均值每克樣品中的菌落數(shù)=(c/v)*m其中,c代表某一稀釋度下平板上生長(zhǎng)的
20、平均菌落數(shù),v代表涂布平板時(shí)所用的稀釋液的體積(ml),m代表稀釋倍數(shù)專題三課題1菊花的組織培養(yǎng)植物組織培養(yǎng)的基本過(guò)程細(xì)胞分化:在生物個(gè)體發(fā)育過(guò)程中,細(xì)胞在形態(tài)、結(jié)構(gòu)和生理功能上出現(xiàn)穩(wěn)定性差異的過(guò)程。離體的植物組織或細(xì)胞,在培養(yǎng)了一段時(shí)間以后,會(huì)通過(guò)細(xì)胞分裂,形成愈傷組織,愈傷組織的細(xì)胞排列疏松而無(wú)規(guī)則,是一種高度液泡化的呈無(wú)定形狀態(tài)的薄壁細(xì)胞。由高度分化的植物組織或細(xì)胞產(chǎn)生愈傷組織的過(guò)程,稱為植物細(xì)胞的脫分化,或者叫做去分化。脫分化產(chǎn)生的愈傷組織繼續(xù)進(jìn)行培養(yǎng),又可以重新分化成根或芽等器官,這個(gè)過(guò)程叫做再分化。再分化形成的試管苗,移栽到地里,可以發(fā)育成完整的植物體。植物細(xì)胞工程具有某種生物全套
21、遺傳信息的任何一個(gè)活細(xì)胞,都具有發(fā)育成完整個(gè)體的能力,即每個(gè)生物細(xì)胞都具有全能性。但在生物體的生長(zhǎng)發(fā)育過(guò)程中并不表現(xiàn)出來(lái),這是因?yàn)樵谔囟ǖ臅r(shí)間和空間條件下,通過(guò)基因的選擇性表達(dá),構(gòu)成不同組織和器官。植物組織培養(yǎng)技術(shù)的應(yīng)用有:實(shí)現(xiàn)優(yōu)良品種的快速繁殖;培育脫毒作物;制作人工種子;培育作物新品種以及細(xì)胞產(chǎn)物的工廠化生產(chǎn)等。細(xì)胞分化是一種持久性的變化,它有什么生理意義?使多細(xì)胞生物體中細(xì)胞結(jié)構(gòu)和功能趨向?qū)iT化,有利于提高各種生理功能的效率。影響植物組織培養(yǎng)的條件1材料:不同的植物組織,培養(yǎng)的難易程度差別很大。植物材料的選擇直接關(guān)系到試驗(yàn)的成敗。植物的種類、材料的年齡和保存時(shí)間的長(zhǎng)短等都會(huì)影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
22、菊花組織培養(yǎng)一般選擇未開(kāi)花植物的莖上部新萌生的側(cè)枝作材料。一般來(lái)說(shuō),容易進(jìn)行無(wú)性繁殖的植物容易進(jìn)行組織培養(yǎng)。選取生長(zhǎng)旺盛嫩枝進(jìn)行組培的是嫩枝生理狀態(tài)好,容易誘導(dǎo)脫分化和再分化。2營(yíng)養(yǎng):離體的植物組織和細(xì)胞,對(duì)營(yíng)養(yǎng)、環(huán)境等條件的要求相對(duì)特殊,需要配制適宜的培養(yǎng)基。常用的培養(yǎng)基是ms培養(yǎng)基,其中含有的大量元素是n、p、s、k、ca、mg,微量元素是fe、mn、b、zn、cu、mo、i、co,有機(jī)物有甘氨酸、煙酸、肌醇、維生素、蔗糖等,常常需要添加植物激素。3激素:植物激素中生長(zhǎng)素和細(xì)胞分裂素是啟動(dòng)細(xì)胞分裂、脫分化和再分化的關(guān)鍵性激素。在生長(zhǎng)素存在的情況下,細(xì)胞分裂素的作用呈現(xiàn)加強(qiáng)趨勢(shì)。在培養(yǎng)基中需
23、要添加生長(zhǎng)素和細(xì)胞分裂素等植物激素,其濃度、使用的先后順序、用量的比例等都影響結(jié)果。使用順序?qū)嶒?yàn)結(jié)果生長(zhǎng)素細(xì)胞分裂素比值與結(jié)果先生長(zhǎng)素,后細(xì)胞分裂素先細(xì)胞分裂素,后生長(zhǎng)素有利于分裂但不分化細(xì)胞既分裂也分化比值高時(shí)比值低時(shí)促根分化,抑芽形成促芽分化,抑根形成同時(shí)使用分化頻率提高比值適中促進(jìn)愈傷組織生長(zhǎng)+4環(huán)境條件:ph、溫度、光等環(huán)境條件。不同的植物對(duì)各種條件的要求往往不同。進(jìn)行菊花的組織培養(yǎng),一般將ph控制在5.8左右,溫度控制在1822,并且每日用日光燈照射12h.4、操作流程(1)配制ms固體培養(yǎng)基:配制各種母液:將各種成分按配方比例配制成的濃縮液(培養(yǎng)基母液)。使用時(shí)根據(jù)母液的濃縮倍數(shù),
24、計(jì)算用量,并加蒸餾水稀釋。配制培養(yǎng)基:應(yīng)加入的物質(zhì)有瓊脂、蔗糖、大量元素、微量元素、有機(jī)物和植物激素的母液,并用蒸餾水定容到1000毫升。在菊花組織培養(yǎng)中,可以不添加植物激素。原因是菊花莖段組織培養(yǎng)比較容易。滅菌:采取的滅菌方法是高壓蒸汽滅菌。(2)外植體的消毒外植體:用于離體培養(yǎng)的植物器官或組織片段。選取菊花莖段時(shí),要取生長(zhǎng)旺盛的嫩枝。菊花莖段用流水沖洗后可加少許洗衣粉,用軟刷輕輕刷洗,刷洗后在流水下沖洗20min左右。用無(wú)菌吸水紙吸干外植體表面的水分,放入體積分?jǐn)?shù)為70%的酒精中搖動(dòng)23次,持續(xù)67s,立即將外植體取出,在無(wú)菌水中清洗。取出后仍用無(wú)菌吸水紙吸干外植體表面水分,放入質(zhì)量分?jǐn)?shù)為
25、0.1%的氯化汞溶液中12min。取出后,在無(wú)菌水中至少清洗3次,漂洗消毒液。注意:對(duì)外植體進(jìn)行表面消毒時(shí),就要考慮藥劑的消毒效果,又要考慮植物的耐受能力。(3)接種:接種過(guò)程中插入外植體時(shí)形態(tài)學(xué)上端朝上,每個(gè)錐形瓶接種78個(gè)外植體。外植體接種與細(xì)菌接種相似,操作步驟相同,而且都要求無(wú)菌操作。插入時(shí)應(yīng)注意方向,不要倒插。(4)培養(yǎng):應(yīng)該放在無(wú)菌箱中進(jìn)行,并定期進(jìn)行消毒,保持適宜的溫度(1822)和光照(12h)(5)移栽:栽前應(yīng)先打開(kāi)培養(yǎng)瓶的封口膜,讓其在培養(yǎng)間生長(zhǎng)幾日,然后用流水清洗根部培養(yǎng)基。然后將幼苗移植到消過(guò)毒的蛭石或珍珠巖等環(huán)境中生活一段時(shí)間,進(jìn)行壯苗。最后進(jìn)行露天栽培。(6)栽培外植體在培養(yǎng)過(guò)程中可能會(huì)被污染,原因有外植體消毒不徹底;培養(yǎng)基滅菌不徹底;接種中被雜菌污染;錐形瓶密封性差等。專題六課題2胡蘿卜素的提取胡蘿卜素性質(zhì):橘黃色結(jié)晶,化學(xué)性質(zhì)比較穩(wěn)定,不溶于水,微溶于乙醇,易溶于石油醚等有機(jī)溶劑。依據(jù)碳碳雙鍵的數(shù)目劃分為、三類。其中最主要的組成成分為
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