HPLC測定富馬酸福莫特羅原料的有關(guān)物質(zhì)

1、HPLC測定富馬酸福莫特羅原料的有關(guān)物質(zhì)摘 要：建立HPLC法測定富馬酸福莫特羅的有關(guān)物質(zhì)。 所有驗(yàn)證結(jié)果均符合中國藥典 2010 年版二部附錄 XIX A 藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)分析方法驗(yàn)證指導(dǎo)原則的相關(guān)要求。關(guān)鍵詞：高效液相色譜法；富馬酸福莫特羅；有關(guān)物質(zhì)富馬酸福莫特羅是一種長效B 2受體激動(dòng)劑，具有長效，高選擇性，副作用小的顯著特點(diǎn)，臨床上廣泛用于哮 喘。本實(shí)驗(yàn)參照 USP37的色譜條件，建立 HPLC測定富馬酸 福莫特羅有關(guān)物質(zhì)的方法。1 儀器和試藥美國Waters e2695高效液相色譜儀：2489紫外檢測器， A10707051Z 四元泵，A105CH251G 柱溫箱，Empower 3 色

2、譜 工作站，KQ5200B超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）. 富馬酸福莫特羅工作對(duì)照品：自制（滴定純度99.9%），雜質(zhì)G、A、C、E對(duì)照品由上海醫(yī)藥工業(yè)研究院提供。乙腈為色 譜純，其他試劑為分析純，水為制藥用注射用水。2 方法和結(jié)果2.1 色譜條件與系統(tǒng)適應(yīng)性試驗(yàn) 色譜柱：采用 Agilent，ZORBAX SB-C8 column（150 mm x 4.6 mm , 5 um）, 稱取 4.212g二水磷酸二氫鈉，加水 1000ml溶解并混勻（加磷酸調(diào)節(jié)PH為3.1 0.1 ）為流動(dòng)相A,乙腈為流動(dòng)相 B,流速 1.0ml/min，檢測波長為 214nm，柱溫：25C,進(jìn)樣量：20u

3、l, 理論塔板數(shù)按福莫特羅峰計(jì)算不低于 2000。2.2 稀釋劑溶液的配制 稀釋劑： 含 0.037mol/L 磷酸二氫 鈉和 0.005mol/L 磷酸氫二鈉的水溶液， pH 為 6.0 0.1） -乙 腈（84： 16）2.3 空白干擾試驗(yàn) 取制藥用注射用水為空白溶液， 精密 進(jìn)樣20ul，記錄色譜圖。2.4 系統(tǒng)適應(yīng)性溶液的配制 稱取富馬酸福莫特羅對(duì)照 品和富馬酸福莫特羅雜質(zhì) C 對(duì)照品適量，加稀釋劑溶解并稀 釋制成每1ml中約含富馬酸福莫特羅 200卩g以及富馬酸福 莫特羅雜質(zhì)C0.4卩g的系統(tǒng)適用性溶液，量取 20卩l(xiāng)注入液 相色譜儀，記錄色譜圖。2.5樣品溶液的配制 富馬酸福莫特羅

4、樣品 20mg，精密 稱定，置100mL量瓶中，加稀釋劑約 50mL,超聲溶解。放 冷至室溫，加稀釋劑稀釋至刻度，搖勻，配成 0.2mg/mL 的 樣品溶液。2.6 專屬性試驗(yàn) 考察空白溶劑或其他有關(guān)物質(zhì)存在情 況下，樣品中有關(guān)物質(zhì)的測定是否受到干擾。2.6.1 空白溶劑、 富馬酸福莫特羅系統(tǒng)適用性溶液、 樣品 溶液均按照方法描述配制。在方法規(guī)定的色譜條件下進(jìn)樣， 并記錄色譜圖。2.6.2 空白溶劑在富馬酸福莫特羅及其各有關(guān)物質(zhì)出峰 處沒有干擾。各峰與各待測雜質(zhì)之間，各峰與主峰之間的分 離度均大于 1.5，且主峰與雜質(zhì) C 的分離度大于 1.5，各待 測雜質(zhì)之間的分離度也同樣大于1.5。2.7

5、 線性范圍試驗(yàn)2.7.1 制備富馬酸福莫特羅及雜質(zhì)G、A、 C、E 對(duì)照品配制成 0.2mg/mL 的儲(chǔ)備溶液。精密移取富馬酸福莫特羅儲(chǔ) 備溶液、雜質(zhì) E 對(duì)照品儲(chǔ)備溶液、雜質(zhì) G 對(duì)照品儲(chǔ)備溶液 各1ml、雜質(zhì)C對(duì)照品儲(chǔ)備溶液2ml、雜質(zhì)A對(duì)照品儲(chǔ)備 溶液3mL,稀釋500倍制成線性測試對(duì)照品混合儲(chǔ)備溶液。2.7.2 結(jié)果：富馬酸福莫特羅峰面積對(duì)濃度的線性回歸 方程為 y = 86.573x - 0.1523，線性相關(guān)系數(shù) r= 0.999 ， Y 軸 截距值小于定量限響應(yīng)值的 50%；結(jié)果顯示該方法在各限度濃度的QL150%的濃度范圍內(nèi)響應(yīng)值與濃度呈現(xiàn)良好線性，線性范圍滿足要求。2.8 準(zhǔn)

6、確度試驗(yàn)2.8.1 按照規(guī)定的方法制備樣品溶液； 制備雜質(zhì)限度水平 的 50%、 100%和 150%水平的雜質(zhì)儲(chǔ)備溶液，每個(gè)水平平行制備三份，并用上述雜質(zhì)儲(chǔ)備溶液作為溶劑，制備成雜質(zhì)濃 度分別為限度水平的 50%、 100%和 150%水平的九份樣品溶 液。在方法規(guī)定的色譜條件進(jìn)樣 。2.8.2 在富馬酸福莫特羅原料藥雜質(zhì)限度水平的50%、100%、150%三個(gè)濃度下，分別計(jì)算各有關(guān)物質(zhì)的回收率， 考察方法的準(zhǔn)確度，回收率結(jié)果顯示：雜質(zhì) G 在 9 份樣品 的回收率均在 80.0%120.0%范圍內(nèi)，平均回收率為 110.1%， RSD 為 1.2%。2.9 精密度試驗(yàn)2.9.1 重復(fù)性試驗(yàn)

7、按照規(guī)定的方法計(jì)算單個(gè)有關(guān)物質(zhì)的量，并計(jì)算其制備 的六份樣品的 RSD結(jié)果顯示6份樣品中，各雜質(zhì)的量 RSD% 不大于 10 %。2.9.2 溶液穩(wěn)定性試驗(yàn) 取重復(fù)性加入各有關(guān)物質(zhì)的樣品溶液。在 0 天進(jìn)行測 定，按照規(guī)定的方法計(jì)算單個(gè)有關(guān)物質(zhì)的量。將上述樣品溶 液分裝成兩份，一份儲(chǔ)存于室溫下，另一份儲(chǔ)存于4C下，分別于 1 天、2 天進(jìn)樣，計(jì)算單個(gè)有關(guān)物質(zhì)的量。 結(jié)果顯示： 單個(gè)有關(guān)物質(zhì)的量差值應(yīng)不超過0.05 %。表示溶液穩(wěn)定性良好。2.9.3 樣品檢驗(yàn) 對(duì)制備的 3 批富馬酸福莫特羅樣品，按 上述方法進(jìn)行了配制，參照色譜條件進(jìn)行有關(guān)物質(zhì)測定并計(jì) 算各雜質(zhì)限度，結(jié)果見下表。3 討論試驗(yàn)參照了 USP37、BP2010 及 EP 7. 0中測定富馬酸富莫 特羅有關(guān)物質(zhì)所用的 HPLC方法及有關(guān)資料，通過多次試驗(yàn)， 最終確認(rèn)以稱取 4.212g 二水磷酸二氫鈉，加水 1000ml 溶解 并混勻（加磷酸調(diào)節(jié) PH為3.1 0.1 ）為流動(dòng)相A,乙腈為流 動(dòng)相B,流速1.0ml/min，檢測波長為214nm，采用梯度洗脫。 在此條件下，各雜質(zhì)峰分