微生物實驗室培養(yǎng)剖析

1、微生物實驗室培養(yǎng)剖析 專題專題2 :2 :微生物的培養(yǎng)與應(yīng)用微生物的培養(yǎng)與應(yīng)用 微生物實驗室培養(yǎng)剖析 一、培養(yǎng)基作用、種類一、培養(yǎng)基作用、種類 二、無菌技術(shù)二、無菌技術(shù) 三、制備牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基三、制備牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基 四、純化大腸桿菌四、純化大腸桿菌 主要內(nèi)容主要內(nèi)容 微生物實驗室培養(yǎng)剖析 微生物微生物 特點：結(jié)構(gòu)都相當(dāng)簡單特點：結(jié)構(gòu)都相當(dāng)簡單, ,個體多數(shù)十分微小個體多數(shù)十分微小. .通常通常 要用光學(xué)顯微鏡或電子顯微鏡才能看到，有的甚要用光學(xué)顯微鏡或電子顯微鏡才能看到，有的甚 至沒有細(xì)胞結(jié)構(gòu)至沒有細(xì)胞結(jié)構(gòu). .且體內(nèi)一般不含有葉綠素且體內(nèi)一般不含有葉綠素. .不能不能 進(jìn)行光合作用進(jìn)

2、行光合作用. . 原核生物界原核生物界 原生生物界原生生物界 真菌界真菌界 病毒界病毒界 (細(xì)菌、放線菌、藍(lán)藻細(xì)菌、放線菌、藍(lán)藻) (酵母菌酵母菌霉菌霉菌大型真菌大型真菌) (草履蟲草履蟲變形蟲變形蟲衣藻衣藻) (噬菌體、艾滋病毒噬菌體、艾滋病毒) 約有約有1010萬種萬種 微生物實驗室培養(yǎng)剖析 細(xì)菌的外形與大小細(xì)菌的外形與大小 單細(xì)胞不分枝的原核微生物單細(xì)胞不分枝的原核微生物。 細(xì)菌細(xì)胞細(xì)菌細(xì)胞，通常用適當(dāng)染料，通常用適當(dāng)染料后顯微鏡后顯微鏡 觀察觀察 圖圖1-1 常見的三種細(xì)菌典型形態(tài)常見的三種細(xì)菌典型形態(tài) 葡萄球菌葡萄球菌大腸桿菌大腸桿菌霍亂弧菌霍亂弧菌 細(xì)菌（細(xì)菌（bacteria）

3、微生物實驗室培養(yǎng)剖析 細(xì)菌細(xì)胞由外向里 依次有、菌菌 （、 、 ， 。 細(xì)菌的構(gòu)造 微生物實驗室培養(yǎng)剖析 *細(xì)胞壁 細(xì)胞壁有哪些功能？細(xì)胞壁有哪些功能？ 傷寒傷寒 桿菌桿菌 細(xì)胞細(xì)胞 壁中壁中 含毒含毒 素素 微生物實驗室培養(yǎng)剖析 有些細(xì)菌在一定的條件下，細(xì)胞里面形成一個橢圓形的休眠有些細(xì)菌在一定的條件下，細(xì)胞里面形成一個橢圓形的休眠 體，叫做芽孢。芽孢的壁很厚，對干旱、低溫、高溫等惡劣的環(huán)體，叫做芽孢。芽孢的壁很厚，對干旱、低溫、高溫等惡劣的環(huán) 境有很強的抵抗力。例如，有的細(xì)菌的芽孢，煮沸境有很強的抵抗力。例如，有的細(xì)菌的芽孢，煮沸3 3小時以后才小時以后才 死亡。芽孢又小又輕，可以隨風(fēng)飄散

4、。當(dāng)環(huán)境適宜（如溫度、水死亡。芽孢又小又輕，可以隨風(fēng)飄散。當(dāng)環(huán)境適宜（如溫度、水 分適宜）的時候，芽孢又可以萌發(fā)，形成一個細(xì)菌分適宜）的時候，芽孢又可以萌發(fā)，形成一個細(xì)菌. . 微生物實驗室培養(yǎng)剖析 是由一個核酸分子（是由一個核酸分子（DNADNA或或RNARNA）與蛋白質(zhì)構(gòu)成的非細(xì)胞）與蛋白質(zhì)構(gòu)成的非細(xì)胞 形態(tài)的營寄生生活的生命體。形態(tài)的營寄生生活的生命體。 病毒（病毒（virus) SARS病毒、病毒、 禽流感病毒、禽流感病毒、 微生物實驗室培養(yǎng)剖析 病毒的增殖：病毒的增殖： 微生物實驗室培養(yǎng)剖析 結(jié)構(gòu)：結(jié)構(gòu)： 單細(xì)胞原核單細(xì)胞原核 分支狀的菌絲（基內(nèi)菌絲、氣生菌絲）分支狀的菌絲（基內(nèi)菌絲

5、、氣生菌絲） 鏈霉素、土霉素、四環(huán)素、鏈霉素、土霉素、四環(huán)素、 氯霉素、紅霉素、慶大霉素氯霉素、紅霉素、慶大霉素 微生物中發(fā)現(xiàn)了幾千種抗生素，微生物中發(fā)現(xiàn)了幾千種抗生素， 其中其中2/3是由放線菌產(chǎn)生的是由放線菌產(chǎn)生的 應(yīng)用應(yīng)用: 微生物實驗室培養(yǎng)剖析 真菌真菌（Fungus） 是一種真核生物是一種真核生物 ，通常又分為三類，通常又分為三類 ，即酵母菌、霉菌和蕈菌（大型真菌），即酵母菌、霉菌和蕈菌（大型真菌） 微生物實驗室培養(yǎng)剖析 真菌真菌 微生物實驗室培養(yǎng)剖析 如圖是酵母菌電子顯微如圖是酵母菌電子顯微 鏡下的形態(tài)結(jié)構(gòu)鏡下的形態(tài)結(jié)構(gòu) 酵母菌和霉菌酵母菌和霉菌 青霉青霉 微生物實驗室培養(yǎng)剖析 是

6、動物界中最低等的一類真核單細(xì)胞動物，是動物界中最低等的一類真核單細(xì)胞動物， 個體由單個細(xì)胞組成。個體由單個細(xì)胞組成。 原生動物（原生動物（protozoan） 草履蟲草履蟲 大變形蟲大變形蟲 微生物實驗室培養(yǎng)剖析 想一想想一想 在制作果酒、果醋、腐乳等時可用優(yōu)良菌在制作果酒、果醋、腐乳等時可用優(yōu)良菌 種直接接種，以提高產(chǎn)品的質(zhì)量，那么，這些種直接接種，以提高產(chǎn)品的質(zhì)量，那么，這些 肉眼看不到的微生物是怎樣獲得呢？肉眼看不到的微生物是怎樣獲得呢？ 微生物實驗室培養(yǎng)剖析 微生物實驗室培養(yǎng)剖析 1.1.何為培養(yǎng)基？何為培養(yǎng)基？ 3.3.不同的培養(yǎng)基有不同的配方，但是其基不同的培養(yǎng)基有不同的配方，但是

7、其基 本成分都相同，都包括哪些營養(yǎng)元素？有本成分都相同，都包括哪些營養(yǎng)元素？有 何作用？請舉例說明。何作用？請舉例說明。 閱讀教材閱讀教材P1415P1415相關(guān)內(nèi)容，回答相關(guān)內(nèi)容，回答 以下問題：以下問題： 2.2.按照不同的培養(yǎng)基劃分標(biāo)準(zhǔn)，培養(yǎng)基有按照不同的培養(yǎng)基劃分標(biāo)準(zhǔn)，培養(yǎng)基有 哪些種類、配制特點及其應(yīng)用哪些種類、配制特點及其應(yīng)用？ 微生物實驗室培養(yǎng)剖析 一、基礎(chǔ)知識：一、基礎(chǔ)知識： （一）培養(yǎng)基（一）培養(yǎng)基 培養(yǎng)基是人們按照微生物對營養(yǎng)物質(zhì)的不培養(yǎng)基是人們按照微生物對營養(yǎng)物質(zhì)的不 同需求，配置的供其生長繁殖的營養(yǎng)基質(zhì)。同需求，配置的供其生長繁殖的營養(yǎng)基質(zhì)。 1.1.培養(yǎng)基的類型和用途

8、培養(yǎng)基的類型和用途 液體培養(yǎng)基液體培養(yǎng)基 半固體培養(yǎng)基半固體培養(yǎng)基 固體培養(yǎng)基固體培養(yǎng)基 據(jù)物理性質(zhì)分據(jù)物理性質(zhì)分 天然培養(yǎng)基天然培養(yǎng)基 合成培養(yǎng)基合成培養(yǎng)基 據(jù)化學(xué)成分分據(jù)化學(xué)成分分 選擇培養(yǎng)基選擇培養(yǎng)基 鑒別培養(yǎng)基鑒別培養(yǎng)基 據(jù)用途分據(jù)用途分 微生物實驗室培養(yǎng)剖析 培養(yǎng)基的種類培養(yǎng)基的種類 液體培養(yǎng)基液體培養(yǎng)基 半固體培養(yǎng)基半固體培養(yǎng)基 固體培養(yǎng)基固體培養(yǎng)基 據(jù)物理性質(zhì)分據(jù)物理性質(zhì)分 天然培養(yǎng)基天然培養(yǎng)基 合成培養(yǎng)基合成培養(yǎng)基 據(jù)化學(xué)成分分據(jù)化學(xué)成分分 選擇培養(yǎng)基選擇培養(yǎng)基 鑒別培養(yǎng)基鑒別培養(yǎng)基 據(jù)用途分據(jù)用途分 常用于工業(yè)生產(chǎn)常用于工業(yè)生產(chǎn) 常用于觀察微生物的運常用于觀察微生物的運 動、

9、鑒定菌種動、鑒定菌種 用于微生物的分離、用于微生物的分離、 計數(shù)計數(shù) 常用于工業(yè)生產(chǎn)常用于工業(yè)生產(chǎn) 常用于分類、鑒定常用于分類、鑒定 在培養(yǎng)基中加入某種化學(xué)物質(zhì)，以抑在培養(yǎng)基中加入某種化學(xué)物質(zhì)，以抑 制不需要的微生物的生長，促進(jìn)所需制不需要的微生物的生長，促進(jìn)所需 要的微生物的生長要的微生物的生長。例如，在培養(yǎng)基例如，在培養(yǎng)基 中加入青霉素，以抑制細(xì)菌、放線菌中加入青霉素，以抑制細(xì)菌、放線菌 的生長，從而分離到酵母菌和霉菌。的生長，從而分離到酵母菌和霉菌。 又如，在培養(yǎng)基中加入高濃度的食鹽又如，在培養(yǎng)基中加入高濃度的食鹽 可以抑制多種細(xì)菌的生長，但不影響可以抑制多種細(xì)菌的生長，但不影響 金黃色

10、葡萄球菌的生長。金黃色葡萄球菌的生長。 根據(jù)微生物的代謝特點，在培養(yǎng)基中加入根據(jù)微生物的代謝特點，在培養(yǎng)基中加入 某種指示劑或化學(xué)藥品配制而成，用以鑒某種指示劑或化學(xué)藥品配制而成，用以鑒 別不同種類的微生物別不同種類的微生物。例如，在培養(yǎng)基中加例如，在培養(yǎng)基中加 入伊紅和美藍(lán)，可以用來鑒別飲用水和乳制品入伊紅和美藍(lán)，可以用來鑒別飲用水和乳制品 中是否存在大腸桿菌等細(xì)菌：如果有大腸桿菌，中是否存在大腸桿菌等細(xì)菌：如果有大腸桿菌， 其代謝產(chǎn)物就與伊紅和美藍(lán)結(jié)合，使菌落呈深其代謝產(chǎn)物就與伊紅和美藍(lán)結(jié)合，使菌落呈深 紫色，并帶有金屬光澤。紫色，并帶有金屬光澤。 微生物實驗室培養(yǎng)剖析 加入青霉素的培養(yǎng)基

11、加入青霉素的培養(yǎng)基: : 不加氮源的無氮培養(yǎng)基不加氮源的無氮培養(yǎng)基: : 不加含碳有機物的無碳培養(yǎng)基不加含碳有機物的無碳培養(yǎng)基: : 幾種選擇培養(yǎng)基舉例：幾種選擇培養(yǎng)基舉例： 分離酵母菌、霉菌等真菌分離酵母菌、霉菌等真菌 分離固氮菌分離固氮菌 分離自養(yǎng)型微生物分離自養(yǎng)型微生物 唯一碳源為纖維素的培養(yǎng)基唯一碳源為纖維素的培養(yǎng)基 分解纖維素的細(xì)菌分解纖維素的細(xì)菌 微生物實驗室培養(yǎng)剖析 固體培養(yǎng)基固體培養(yǎng)基液體培養(yǎng)基液體培養(yǎng)基 微生物實驗室培養(yǎng)剖析 液體培養(yǎng)基：液體培養(yǎng)基： 表面生長表面生長均勻混濁生長均勻混濁生長 沉淀生長沉淀生長 微生物實驗室培養(yǎng)剖析 固體培養(yǎng)基：菌落，菌苔固體培養(yǎng)基：菌落，菌苔

12、 微生物實驗室培養(yǎng)剖析 返回返回 菌落菌落： 單個或少數(shù)細(xì)菌在固體培養(yǎng)單個或少數(shù)細(xì)菌在固體培養(yǎng) 基上大量繁殖時，就會形成基上大量繁殖時，就會形成 一個肉眼可見的，具有一定一個肉眼可見的，具有一定 形態(tài)結(jié)構(gòu)的子細(xì)胞群體，叫形態(tài)結(jié)構(gòu)的子細(xì)胞群體，叫 做菌落做菌落。 不同的細(xì)菌的菌落特征不同不同的細(xì)菌的菌落特征不同 菌落是鑒定菌種的重要依據(jù)。菌落是鑒定菌種的重要依據(jù)。 無鞭毛的球菌，常形成較小較厚邊無鞭毛的球菌，常形成較小較厚邊 緣較整齊的菌落，有鞭毛細(xì)菌形成緣較整齊的菌落，有鞭毛細(xì)菌形成 大而扁平、邊緣波浪或鋸齒狀菌落大而扁平、邊緣波浪或鋸齒狀菌落 微生物實驗室培養(yǎng)剖析 菌落 細(xì)菌的菌落特細(xì)菌的菌

13、落特 征因種而異征因種而異 微生物實驗室培養(yǎng)剖析 2. 2.不同的微生物往往需要采用不同不同的微生物往往需要采用不同 的培養(yǎng)基配方的培養(yǎng)基配方 (參考教材附錄內(nèi)容參考教材附錄內(nèi)容) 3.3.不管哪種培養(yǎng)基，一般都含有水、不管哪種培養(yǎng)基，一般都含有水、 碳源、和氮源、碳源、和氮源、 無機鹽、等營養(yǎng)物質(zhì)，無機鹽、等營養(yǎng)物質(zhì)， 另外還需要滿足微生物生長對另外還需要滿足微生物生長對pHpH、特殊、特殊 營養(yǎng)物質(zhì)營養(yǎng)物質(zhì), ,例如例如: :生長因子生長因子(即細(xì)菌生長必即細(xì)菌生長必 需，而自身不能合成的化合物需，而自身不能合成的化合物,如維生素、如維生素、 某些氨基酸、嘌呤、嘧啶某些氨基酸、嘌呤、嘧啶)

14、 )以及氧氣、二以及氧氣、二 氧化碳、滲透壓等的要求。氧化碳、滲透壓等的要求。 微生物實驗室培養(yǎng)剖析 （1）碳源）碳源 可作為碳源的物質(zhì)有可作為碳源的物質(zhì)有: a. 含碳無機物含碳無機物: 、 、 b. 含碳有機物：含碳有機物： 蛋白質(zhì)蛋白質(zhì) 脂肪酸脂肪酸 不同微生物所利用的碳源不同不同微生物所利用的碳源不同 a.異養(yǎng)型微生物的碳源為異養(yǎng)型微生物的碳源為 b.自養(yǎng)型微生物的碳源為自養(yǎng)型微生物的碳源為 碳酸鹽碳酸鹽碳酸氫鹽碳酸氫鹽二氧化碳等二氧化碳等 糖類（主要）糖類（主要） 含碳有機物（有機碳）含碳有機物（有機碳） 含碳無機物（無機碳）含碳無機物（無機碳） 微生物實驗室培養(yǎng)剖析 （2）氮源）氮

15、源 可作為氮源的物質(zhì)有可作為氮源的物質(zhì)有: a. 含氮無機物：含氮無機物： 、 、 、 b. 含氮有機物：含氮有機物： 蛋白胨蛋白胨 牛肉膏牛肉膏 尿素尿素 固氮微生物所利用的氮源是固氮微生物所利用的氮源是 氮氣氮氣氨氣氨氣硝酸鹽硝酸鹽氨鹽氨鹽 氮氣氮氣 微生物實驗室培養(yǎng)剖析 1.1.何為無菌技術(shù)？何為無菌技術(shù)？無菌技術(shù)包括哪些方面？無菌技術(shù)包括哪些方面？ 2.2.什么是消毒？滅菌？兩者有何區(qū)別？什么是消毒？滅菌？兩者有何區(qū)別？ 3.3.常用的消毒與滅菌的方法有哪些？有何常用的消毒與滅菌的方法有哪些？有何 要求要求？ 4.4.請說出干熱滅菌法和高壓蒸汽滅菌法的操請說出干熱滅菌法和高壓蒸汽滅菌法

16、的操 作步驟。作步驟。 微生物實驗室培養(yǎng)剖析 無菌技術(shù)泛指在培養(yǎng)微生物的操作中，無菌技術(shù)泛指在培養(yǎng)微生物的操作中， 所有防止雜菌污染的方法。所有防止雜菌污染的方法。 無論是隨后將要學(xué)到的倒平板、平板劃線操作，還是平板無論是隨后將要學(xué)到的倒平板、平板劃線操作，還是平板 稀釋涂布法，其操作中的每一步都需要做到稀釋涂布法，其操作中的每一步都需要做到“無菌無菌”，即，即 防止雜菌污染。只有熟練、規(guī)范地進(jìn)行無菌操作，才可能防止雜菌污染。只有熟練、規(guī)范地進(jìn)行無菌操作，才可能 成功地培養(yǎng)微生物。成功地培養(yǎng)微生物。 微生物實驗室培養(yǎng)剖析 微生物實驗室培養(yǎng)剖析 （）消毒定義：（）消毒定義： 指使用較為溫和的物理

17、或化學(xué)方法僅殺死物指使用較為溫和的物理或化學(xué)方法僅殺死物 體表面或內(nèi)部一部分對人體有害的微生物。（不體表面或內(nèi)部一部分對人體有害的微生物。（不 包括芽孢和孢子）包括芽孢和孢子） 2.2.消毒與滅菌的概念及兩者的區(qū)別消毒與滅菌的概念及兩者的區(qū)別 使用強烈的理化因素殺死物體內(nèi)外所有的微生使用強烈的理化因素殺死物體內(nèi)外所有的微生 物，包括芽孢和孢子，而達(dá)到完全無菌之過程。物，包括芽孢和孢子，而達(dá)到完全無菌之過程。 滅菌消毒技術(shù)是微生物有關(guān)工作中最普通也是滅菌消毒技術(shù)是微生物有關(guān)工作中最普通也是 最重要的技術(shù)。最重要的技術(shù)。 （2 2）滅菌的定義：）滅菌的定義： 微生物實驗室培養(yǎng)剖析 有些細(xì)菌在一定的

18、條件下，細(xì)胞里面形成一有些細(xì)菌在一定的條件下，細(xì)胞里面形成一 個橢圓形的休眠體，叫做芽孢。芽孢的壁很厚，個橢圓形的休眠體，叫做芽孢。芽孢的壁很厚， 對干旱、低溫、高溫等惡劣的環(huán)境有很強的抵抗對干旱、低溫、高溫等惡劣的環(huán)境有很強的抵抗 力。例如，有的細(xì)菌的芽孢，煮沸力。例如，有的細(xì)菌的芽孢，煮沸3 3小時以后才小時以后才 死亡。芽孢又小又輕，可以隨風(fēng)飄散。當(dāng)環(huán)境適死亡。芽孢又小又輕，可以隨風(fēng)飄散。當(dāng)環(huán)境適 宜（如溫度、水分適宜）的時候，芽孢又可以萌宜（如溫度、水分適宜）的時候，芽孢又可以萌 發(fā)，形成一個細(xì)菌。發(fā)，形成一個細(xì)菌。 細(xì)菌、原生動物、真菌和植物等產(chǎn)生的一細(xì)菌、原生動物、真菌和植物等產(chǎn)生

19、的一 種有繁殖或休眠作用的生殖細(xì)胞。能直接發(fā)育種有繁殖或休眠作用的生殖細(xì)胞。能直接發(fā)育 成新個體。成新個體。 微生物實驗室培養(yǎng)剖析 答：無菌技術(shù)還能有效避免操答：無菌技術(shù)還能有效避免操 作者自身被微生物感染。作者自身被微生物感染。 微生物實驗室培養(yǎng)剖析 答：（答：（1）、（）、（2）需要滅菌；（）需要滅菌；（3）需要消毒。）需要消毒。 微生物實驗室培養(yǎng)剖析 煮沸消毒法煮沸消毒法:100:100煮沸煮沸5-6min5-6min 巴氏消毒法：巴氏消毒法：707075 75 下煮下煮30min30min 或或 80 80 下煮下煮15min15min 化學(xué)藥劑消毒法化學(xué)藥劑消毒法: :用用75%75

20、%酒精進(jìn)行皮酒精進(jìn)行皮 膚消毒膚消毒; ;用氯氣消毒水源等用氯氣消毒水源等 紫外線消毒紫外線消毒 (1)消毒的方法消毒的方法 3 3. .常用的消毒與滅菌的方法常用的消毒與滅菌的方法 微生物實驗室培養(yǎng)剖析 灼燒滅菌灼燒滅菌 干熱滅菌：干熱滅菌： 160160170 170 下下 加熱加熱1 12h2h。 高壓蒸氣滅菌：高壓蒸氣滅菌： 100kPa100kPa、121 121 下維持下維持1515 30min.30min. (2)滅菌的方法滅菌的方法 微生物實驗室培養(yǎng)剖析 1 1關(guān)于微生物營養(yǎng)物質(zhì)的敘述中，關(guān)于微生物營養(yǎng)物質(zhì)的敘述中， 正確的是正確的是 A A、是碳源的物質(zhì)不可能同時是氮源、是碳

21、源的物質(zhì)不可能同時是氮源 B B、凡碳源都提供能量、凡碳源都提供能量 C C、除水以外的無機物只提供無機鹽、除水以外的無機物只提供無機鹽 DD、無機氮源也能提供能量、無機氮源也能提供能量 答案：答案：D 微生物實驗室培養(yǎng)剖析 2 2下面對發(fā)酵工程中滅菌的理下面對發(fā)酵工程中滅菌的理 解解的是的是 A A、防止雜菌污染、防止雜菌污染 B B、消滅雜菌、消滅雜菌 C C、培養(yǎng)基和發(fā)酵設(shè)備都必須滅、培養(yǎng)基和發(fā)酵設(shè)備都必須滅 菌菌 D D、滅菌必須在接種前、滅菌必須在接種前 答案：答案：B 微生物實驗室培養(yǎng)剖析 編號編號成分成分含量含量 粉狀硫粉狀硫10g10g （NHNH4 4） 2 2SO SO4

22、4 0.4g0.4g K K2 2HPOHPO4 44.0g4.0g MgSOMgSO4 49.25g9.25g FeSOFeSO4 40.5g0.5g CaClCaCl2 20.5g0.5g HH2 2OO 100m100m l l 3 3右表是某微生物培右表是某微生物培 養(yǎng)基成分，請據(jù)此回答：養(yǎng)基成分，請據(jù)此回答： （1 1）右表培養(yǎng)基可培）右表培養(yǎng)基可培 養(yǎng)的微生物類型養(yǎng)的微生物類型 是是 。 （2 2）若不慎將過量）若不慎將過量 NaClNaCl加入培養(yǎng)基中。加入培養(yǎng)基中。 如不想浪費此培養(yǎng)基，如不想浪費此培養(yǎng)基， 可再加入可再加入 。 自養(yǎng)型微生物自養(yǎng)型微生物 含碳有機物含碳有機物

23、微生物實驗室培養(yǎng)剖析 1 1、器具的滅菌、器具的滅菌 2 2、培養(yǎng)基的配制、培養(yǎng)基的配制 3 3、培養(yǎng)基的滅菌、培養(yǎng)基的滅菌 4 4、倒平板、倒平板 5 5、微生物接種、微生物接種 6 6、恒溫箱中培養(yǎng)、恒溫箱中培養(yǎng) 7 7、菌種的保存、菌種的保存 微生物實驗室培養(yǎng)剖析 微生物實驗室培養(yǎng)剖析 牛肉膏牛肉膏5.0g蛋白胨蛋白胨10.0g NaCl5.0g瓊脂瓊脂20.0g 將上述物質(zhì)溶解后，用蒸餾水定容至將上述物質(zhì)溶解后，用蒸餾水定容至1000mL 微生物實驗室培養(yǎng)剖析 注意注意 牛肉膏和蛋白胨都容易吸潮，稱取時 牛肉膏和蛋白胨都容易吸潮，稱取時 動作要迅速，稱后要及時蓋上瓶蓋。動作要迅速，稱后

24、要及時蓋上瓶蓋。 在壓力為在壓力為100kPa，溫度為，溫度為121條條 件下，滅菌件下，滅菌15-30min。 微生物實驗室培養(yǎng)剖析 答：可以用手觸摸盛有培養(yǎng)基的錐形瓶，答：可以用手觸摸盛有培養(yǎng)基的錐形瓶， 感覺錐形瓶的溫度下降到剛剛不燙手時，就感覺錐形瓶的溫度下降到剛剛不燙手時，就 可以進(jìn)行倒平板了?？梢赃M(jìn)行倒平板了。 討論討論 1. 培養(yǎng)基滅菌后，需要冷卻到培養(yǎng)基滅菌后，需要冷卻到50 左左 右時，才能用來倒平板。你用什么辦法來右時，才能用來倒平板。你用什么辦法來 估計培養(yǎng)基的溫度？估計培養(yǎng)基的溫度？ 微生物實驗室培養(yǎng)剖析 2.2.為什么需要使錐形瓶的瓶口通過火焰？為什么需要使錐形瓶的瓶

25、口通過火焰？ 答答：通過灼燒滅菌，防止瓶口的微生通過灼燒滅菌，防止瓶口的微生 物污染培養(yǎng)基。物污染培養(yǎng)基。 3.3.平板冷凝后，為什么要將平板倒置？平板冷凝后，為什么要將平板倒置？ 答：平板冷凝后，皿蓋上會凝結(jié)水珠，凝固答：平板冷凝后，皿蓋上會凝結(jié)水珠，凝固 后的培養(yǎng)基表面的濕度也比較高，將平板倒置，后的培養(yǎng)基表面的濕度也比較高，將平板倒置， 既可以使培養(yǎng)基表面的水分更好地?fù)]發(fā)，又可以既可以使培養(yǎng)基表面的水分更好地?fù)]發(fā)，又可以 防止皿蓋上的水珠落入培養(yǎng)基，造成污染。防止皿蓋上的水珠落入培養(yǎng)基，造成污染。 微生物實驗室培養(yǎng)剖析 4. 在倒平板的過程中，如果不小心將培在倒平板的過程中，如果不小心將

26、培 養(yǎng)基濺在皿蓋與皿底之間的部位，這個平板養(yǎng)基濺在皿蓋與皿底之間的部位，這個平板 還能用來培養(yǎng)微生物嗎？為什么？還能用來培養(yǎng)微生物嗎？為什么？ 答：空氣中的微生物可能在皿蓋與皿答：空氣中的微生物可能在皿蓋與皿 底之間的培養(yǎng)基上滋生，因此最好不要用底之間的培養(yǎng)基上滋生，因此最好不要用 這個平板培養(yǎng)微生物。這個平板培養(yǎng)微生物。 微生物實驗室培養(yǎng)剖析 （二）純化大腸桿菌（二）純化大腸桿菌 接種方法有：接種方法有： 平板劃線法和稀釋涂布平板法平板劃線法和稀釋涂布平板法 平板劃線法平板劃線法: :通過接種環(huán)在瓊脂固體培通過接種環(huán)在瓊脂固體培 養(yǎng)基表面連續(xù)劃線的操作，將聚集的菌養(yǎng)基表面連續(xù)劃線的操作，將聚

27、集的菌 種逐步稀釋分散到培養(yǎng)基的表面。種逐步稀釋分散到培養(yǎng)基的表面。 在數(shù)次劃線后，可以分離到由一個細(xì)在數(shù)次劃線后，可以分離到由一個細(xì) 胞繁殖而來的肉眼可見的子細(xì)胞群體，胞繁殖而來的肉眼可見的子細(xì)胞群體， 這就是菌落。這就是菌落。 微生物實驗室培養(yǎng)剖析 平板劃線的操作方法平板劃線的操作方法 微生物實驗室培養(yǎng)剖析 微生物實驗室培養(yǎng)剖析 培培 養(yǎng)養(yǎng) 基基 表表 面面 的的 單單 菌菌 落落 微生物實驗室培養(yǎng)剖析 微生物實驗室培養(yǎng)剖析 1. 為什么在操作的第一步以及每次劃線為什么在操作的第一步以及每次劃線 之前都要灼燒接種環(huán)？在劃線操作結(jié)束時，之前都要灼燒接種環(huán)？在劃線操作結(jié)束時， 仍然需要灼燒接種

28、環(huán)嗎？為什么？仍然需要灼燒接種環(huán)嗎？為什么？ 議一議 微生物實驗室培養(yǎng)剖析 答：操作的第一步灼燒接種環(huán)是為了答：操作的第一步灼燒接種環(huán)是為了 避免接種環(huán)上可能存在的微生物污染培養(yǎng)避免接種環(huán)上可能存在的微生物污染培養(yǎng) 物；每次劃線前灼燒接種環(huán)是為了殺死上物；每次劃線前灼燒接種環(huán)是為了殺死上 次劃線結(jié)束后，接種環(huán)上殘留的菌種，使次劃線結(jié)束后，接種環(huán)上殘留的菌種，使 下一次劃線時，接種環(huán)上的菌種直接來源下一次劃線時，接種環(huán)上的菌種直接來源 于上次劃線的末端，從而通過劃線次數(shù)的于上次劃線的末端，從而通過劃線次數(shù)的 增加，使每次劃線時菌種的數(shù)目逐漸減少，增加，使每次劃線時菌種的數(shù)目逐漸減少， 以便得到菌

29、落。劃線結(jié)束后灼燒接種環(huán)，以便得到菌落。劃線結(jié)束后灼燒接種環(huán)， 能及時殺死接種環(huán)上殘留的菌種，避免細(xì)能及時殺死接種環(huán)上殘留的菌種，避免細(xì) 菌污染環(huán)境和感染操作者。菌污染環(huán)境和感染操作者。 微生物實驗室培養(yǎng)剖析 2.2.在灼燒接種環(huán)之后，為什么要等其在灼燒接種環(huán)之后，為什么要等其 冷卻后再進(jìn)行劃線？冷卻后再進(jìn)行劃線？ 答：以免接種環(huán)溫度太高，殺死菌種。答：以免接種環(huán)溫度太高，殺死菌種。 3.3.在作第二次以及其后的劃線操作時，為什在作第二次以及其后的劃線操作時，為什 么總是從上一次劃線的末端開始劃線么總是從上一次劃線的末端開始劃線？ 答：劃線后，線條末端細(xì)菌的數(shù)目比線條起答：劃線后，線條末端細(xì)菌

30、的數(shù)目比線條起 始處要少，每次從上一次劃線的末端開始，始處要少，每次從上一次劃線的末端開始， 能使細(xì)菌的數(shù)目隨著劃線次數(shù)的增加而逐步能使細(xì)菌的數(shù)目隨著劃線次數(shù)的增加而逐步 減少，最終能得到由單個細(xì)菌繁殖而來的菌減少，最終能得到由單個細(xì)菌繁殖而來的菌 落。落。 微生物實驗室培養(yǎng)剖析 稀釋涂布法是將菌液進(jìn)行一系列梯度稀釋，稀釋涂布法是將菌液進(jìn)行一系列梯度稀釋， 然后將不同稀釋度的菌液分別涂布到瓊脂固體培然后將不同稀釋度的菌液分別涂布到瓊脂固體培 養(yǎng)基的表面，進(jìn)行培養(yǎng)。養(yǎng)基的表面，進(jìn)行培養(yǎng)。 微生物實驗室培養(yǎng)剖析 涂布平板的所有操作都應(yīng)在火焰附近進(jìn)行。涂布平板的所有操作都應(yīng)在火焰附近進(jìn)行。 結(jié)合平板

31、劃線與系列稀釋的無菌操作要求，想結(jié)合平板劃線與系列稀釋的無菌操作要求，想 一想，第一想，第2步應(yīng)如何進(jìn)行無菌操作？步應(yīng)如何進(jìn)行無菌操作？ 答：應(yīng)從操作的各個細(xì)節(jié)保證答：應(yīng)從操作的各個細(xì)節(jié)保證“無菌無菌”。例如，。例如， 酒精燈與培養(yǎng)皿的距離要合適、吸管頭不要接觸任何酒精燈與培養(yǎng)皿的距離要合適、吸管頭不要接觸任何 其他物體、吸管要在酒精燈火焰周圍等。其他物體、吸管要在酒精燈火焰周圍等。 討論討論 微生物實驗室培養(yǎng)剖析 微生物實驗室培養(yǎng)剖析 1 1、臨時保藏法、臨時保藏法 對象：對象： 溫度：溫度： 缺點：缺點： 2 2、甘油管藏法：、甘油管藏法： 對象：對象： 溫度：溫度： 頻繁使用的菌種頻繁使

32、用的菌種 44（冰箱）（冰箱） 容易被污染或容易被污染或 產(chǎn)生變異產(chǎn)生變異 長期保存的菌種長期保存的菌種 -20-20（冷凍箱）（冷凍箱） 微生物實驗室培養(yǎng)剖析 四、課題成果評價四、課題成果評價 （一）培養(yǎng)基的制作是否合格（一）培養(yǎng)基的制作是否合格 如果未接種的培養(yǎng)基在恒溫箱中保溫如果未接種的培養(yǎng)基在恒溫箱中保溫1 12 2 d d后無菌落生長，說明培養(yǎng)基的制備是成功的，后無菌落生長，說明培養(yǎng)基的制備是成功的， 否則需要重新制備。否則需要重新制備。 （二）接種操作是否符合無菌要求（二）接種操作是否符合無菌要求 如果培養(yǎng)基上生長的菌落的顏色、形狀、如果培養(yǎng)基上生長的菌落的顏色、形狀、 大小基本一

33、致，并符合大腸桿菌菌落的特點，則大小基本一致，并符合大腸桿菌菌落的特點，則 說明接種操作是符合要求的；如果培養(yǎng)基上出現(xiàn)說明接種操作是符合要求的；如果培養(yǎng)基上出現(xiàn) 了其他菌落，則說明接種過程中，無菌操作還未了其他菌落，則說明接種過程中，無菌操作還未 達(dá)到要求，需要分析原因，再次練習(xí)。達(dá)到要求，需要分析原因，再次練習(xí)。 （三）是否進(jìn)行了及時細(xì)致的觀察與記錄（三）是否進(jìn)行了及時細(xì)致的觀察與記錄 培養(yǎng)培養(yǎng)12 h12 h與與24 h24 h后的大腸桿菌菌落的大后的大腸桿菌菌落的大 小會有明顯不同小會有明顯不同 微生物實驗室培養(yǎng)剖析 微微 生生 物物 的的 培培 養(yǎng)養(yǎng) 基礎(chǔ)基礎(chǔ) 知識知識 實驗操作實驗操

34、作 結(jié)果分析與評價結(jié)果分析與評價 培養(yǎng)基培養(yǎng)基 定義：定義： 分類：分類： 人們按照微生物對營養(yǎng)物質(zhì)的人們按照微生物對營養(yǎng)物質(zhì)的 不同需求，配置出供其生長繁不同需求，配置出供其生長繁 殖的營養(yǎng)物質(zhì)殖的營養(yǎng)物質(zhì) 固體培養(yǎng)基固體培養(yǎng)基液體培養(yǎng)基液體培養(yǎng)基 無菌技術(shù)無菌技術(shù) 培養(yǎng)微生物的操作中，所有防培養(yǎng)微生物的操作中，所有防 止雜菌污染的方法止雜菌污染的方法 定義：定義： 消毒與滅菌消毒與滅菌 常用滅菌方法常用滅菌方法 制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基 純化大腸桿菌純化大腸桿菌 課堂小結(jié) 微生物實驗室培養(yǎng)剖析 練習(xí)1（多項選擇） 1、下列細(xì)菌中，能利用含碳無機物作碳源的是、下列

35、細(xì)菌中，能利用含碳無機物作碳源的是 A 光合細(xì)菌光合細(xì)菌 B 根瘤菌根瘤菌 C 硝化細(xì)菌硝化細(xì)菌 D 乳酸菌乳酸菌 2、培養(yǎng)大腸桿菌的培養(yǎng)基中，必需含有的碳源和氮、培養(yǎng)大腸桿菌的培養(yǎng)基中，必需含有的碳源和氮 源是源是 A 糖、有機酸等糖、有機酸等 B 二氧化碳、碳酸鹽二氧化碳、碳酸鹽 C 蛋白質(zhì)蛋白質(zhì) D 無機氮化物無機氮化物 3、下列敘述不正確的是、下列敘述不正確的是 A 培養(yǎng)基是為微生物的生長繁殖提供營養(yǎng)的基質(zhì)培養(yǎng)基是為微生物的生長繁殖提供營養(yǎng)的基質(zhì) B 液體培養(yǎng)基和固體培養(yǎng)基所含的最基本物質(zhì)不相同液體培養(yǎng)基和固體培養(yǎng)基所含的最基本物質(zhì)不相同 C 微生物在固體培養(yǎng)基上生長時，可以形成肉眼可見微生物在固體培養(yǎng)基上生長時，可以形成肉眼可見 的單個細(xì)菌的單個細(xì)菌 A.C A.C B.C. 微生物實驗室培養(yǎng)剖析 思考: 1)無菌技術(shù)除了用來防止實驗室的培養(yǎng)物被其他外來微無菌技術(shù)除了用來防止實驗室的培養(yǎng)物被其他外來微 生物污染外，還有什