有關(guān)物質(zhì)分析方法驗證方案講解

1、*制藥股份有限公司 文件編號：文件編號： 題目題目*原料有關(guān)物質(zhì)分析方法驗證方案原料有關(guān)物質(zhì)分析方法驗證方案 第第 1 頁頁 共共 12 頁頁 8 *原料有關(guān)物質(zhì)分析方法驗證方案原料有關(guān)物質(zhì)分析方法驗證方案 20*年*月 *制藥股份有限公司 文件編號：文件編號： 題目題目*原料有關(guān)物質(zhì)分析方法驗證方案原料有關(guān)物質(zhì)分析方法驗證方案 第第 2 頁頁 共共 12 頁頁 驗證方案的起草與審批驗證方案的起草與審批 驗證小組成員驗證小組成員 部門人員職責 驗證小組組長驗證小組組長 部門人員職責 負責組織起草驗證方案并按批準方案組織實施； 督促驗證人員做好記錄；負責各階段驗證結(jié)果 匯總及評價、組織起草驗證報

2、告；組織相關(guān)培 訓 方案審核方案審核 審核簽名及日期 驗證委員會 方案批準方案批準 批準人批準日期 方案實施日期：方案實施日期： *制藥股份有限公司 文件編號：文件編號： 題目題目*原料有關(guān)物質(zhì)分析方法驗證方案原料有關(guān)物質(zhì)分析方法驗證方案 第第 3 頁頁 共共 12 頁頁 目目 錄錄 1.驗證目的驗證目的.4 2.方法簡介與確認范圍方法簡介與確認范圍.4 3.標準品、供試品標準品、供試品.4 4.風險評估風險評估.4 5.驗證的可接受標準驗證的可接受標準.4 6.驗證步驟驗證步驟.4 6.1 系統(tǒng)適應(yīng)性系統(tǒng)適應(yīng)性.4 6.2 專屬性專屬性.6 6.3 檢測限與定量限檢測限與定量限.8 6.4

3、線性線性.9 6.5 準確度準確度.9 6.6 精密度精密度.10 6.6 范圍范圍.10 6.7 耐用性耐用性.10 6.8 樣品測定樣品測定.11 7.偏差偏差.11 8.風險的接收與評審風險的接收與評審.11 9.再驗證再驗證.11 10.確認結(jié)果評審和結(jié)論確認結(jié)果評審和結(jié)論.11 11.更改歷史更改歷史.12 12. 附錄附錄.12 *制藥股份有限公司 文件編號：文件編號： 題目題目*原料有關(guān)物質(zhì)分析方法驗證方案原料有關(guān)物質(zhì)分析方法驗證方案 第第 4 頁頁 共共 12 頁頁 1. 驗證目的驗證目的 根據(jù)法規(guī)的要求，采用非藥典或其它法規(guī)未收載的分析方法應(yīng)進行驗證，證明采用 的方法適合于相

4、應(yīng)的檢測要求。 這個驗證方案的目的是為驗證提供具體方法參數(shù)、可接受標準和研究步驟。 2. 方法簡介與確認范圍方法簡介與確認范圍 *原料有關(guān)物質(zhì)檢測方法為自行開發(fā)的液相室色譜方法。為確保方法的準確性和可 行性，為日常檢測方法提供依據(jù)，現(xiàn)對該方法進行驗證。方法驗證必須按照驗證方案進 行，此次驗證方案提供*原料含量分析方法驗證驗證，包括：專屬性、精密度、線性、 范圍、準確度、檢測限&定量限、耐用性。 3. 標準品、供試品標準品、供試品 3.1 標準品 名稱批號來源 3.2 供試品 名稱批號來源 4. 風險評估風險評估 按照質(zhì)量風險管理規(guī)程 ，質(zhì)量控制部和質(zhì)量管理部共同對分析方法進行了風險評 估，確定

5、了需進行方法確認的項目。具體見下表： 風險 因素 風險可能影響效應(yīng) 現(xiàn)有控制措 施 SPDRPN 風險 級別 建議采取措施 專屬性 不具有 專屬性 分離度不好， 影響雜質(zhì)定量 每次試驗測試 分離度 33327 中 首次使用前， 對專屬性進行 驗證 定量限 定量限 小的雜質(zhì)不能無 33327 中對該方法的定 *制藥股份有限公司 文件編號：文件編號： 題目題目*原料有關(guān)物質(zhì)分析方法驗證方案原料有關(guān)物質(zhì)分析方法驗證方案 第第 5 頁頁 共共 12 頁頁 與檢測 限 高被檢出量限進行驗證。 精密度 精密度 差 不同時間或人 員測定的結(jié)果 不一致 每次測試前進 行系統(tǒng)適用性 測試 33327 中 首次使

6、用前， 對精密度進行 驗證 準確度 回收率 低 雜質(zhì)結(jié)果不準 確 無 33327 中 首次使用前， 對準確度進行 驗證 線性 線性不 好 雜質(zhì)結(jié)果不準 確 無 33327 中 首次使用前， 對線性進行驗 證 范圍范圍窄 濃度超過范圍 后結(jié)果不準確 無 33327 中 首次使用前， 對范圍進行驗 證 耐用性 耐用性 差 參數(shù)微小變化 對結(jié)果影響很 大 無 33327 中 首次使用前， 對耐用性進行 驗證 風險評估人： 評估日期： 5. 驗證的可接受標準驗證的可接受標準 項目可接受標準 專屬性空白無干擾，主峰與相鄰峰之間的分離度不小于 1.5，峰純度應(yīng)不小于 0.990. 檢測限與定量限0.05%

7、 線性R0.999 準確度回收率在 0.05%質(zhì)量指標的 140%范圍內(nèi) 精密度重復(fù)性 RSD%10.0% 中間精密度 RSD%10.0% 精密度：兩組數(shù)據(jù)平均檢測結(jié)果的相對偏差 20.0% *制藥股份有限公司 文件編號：文件編號： 題目題目*原料有關(guān)物質(zhì)分析方法驗證方案原料有關(guān)物質(zhì)分析方法驗證方案 第第 6 頁頁 共共 12 頁頁 范圍應(yīng)至少為指標的 80%120% 耐用性評估柱溫、流速、色譜柱、緩沖鹽 pH、有機相比 例、流動相比例、溶液放置時間對檢測結(jié)果的影響 6. 驗證步驟驗證步驟 6.1 系統(tǒng)適應(yīng)性系統(tǒng)適應(yīng)性 分離度測試液：取*產(chǎn)品分離度標準品 5mg，置于一比色管中，加稀釋液 10

8、ml 溶解， 在 95下水浴加熱 30 分鐘，放冷。 標準液：取*產(chǎn)品標準品25mg，精密稱定，置于一25ml量瓶中，用乙腈5ml溶解， 然后用稀釋液溶解并稀釋至刻度；精密移取1ml，置于一100ml量瓶中，用稀釋液稀釋至 刻度。 取分離度測試液進樣，記錄色譜圖，*產(chǎn)品與*-3異構(gòu)體之間的分離度應(yīng)不小 于2.0。 取標準液進樣，記錄色譜圖，*產(chǎn)品主峰拖尾因子應(yīng)不大于 2.0，理論塔板數(shù)應(yīng)不 低于 3000；標準液連續(xù)進樣 6 次，主峰面積的相對標準偏差應(yīng)不大于 5.0%，保留時間的 相對標準偏差應(yīng)不大于 1.0%。 6.2 專屬性專屬性 a) 溶劑空白：取空白進樣，記錄色譜圖，溶劑對測定應(yīng)無干

9、擾。 b) 樣品液：取本品25mg，精密稱定，置于一25ml量瓶中，用乙腈5ml溶解，然后用稀 釋液溶解并稀釋至刻度。進樣分析，主峰與相鄰雜質(zhì)之間的分離度應(yīng)不小于1.5，主峰峰 純度應(yīng)不小于0.990。 c)雜質(zhì)1定位溶液：取雜質(zhì)1約25mg，精密稱定，置于一25ml量瓶中，用乙腈5ml溶解， 然后用稀釋液溶解并稀釋至刻度。移取5.0ml至25ml容量瓶中，用稀釋液溶解并稀釋至刻 度。主峰峰純度應(yīng)不小于0.990。 d)雜質(zhì)2定位溶液：取雜質(zhì)2約25mg，精密稱定，置于一25ml量瓶中，用乙腈5ml溶解， 然后用稀釋液溶解并稀釋至刻度。移取5.0ml至25ml容量瓶中，用稀釋液溶解并稀釋至刻

10、度。主峰峰純度應(yīng)不小于0.990。 e)雜質(zhì)3定位溶液：取雜質(zhì)3約25mg，精密稱定，置于一25ml量瓶中，用乙腈5ml溶解， 然后用稀釋液溶解并稀釋至刻度。移取5.0ml至25ml容量瓶中，用稀釋液溶解并稀釋至刻 度。主峰峰純度應(yīng)不小于0.990。 *制藥股份有限公司 文件編號：文件編號： 題目題目*原料有關(guān)物質(zhì)分析方法驗證方案原料有關(guān)物質(zhì)分析方法驗證方案 第第 7 頁頁 共共 12 頁頁 f)雜質(zhì)4定位溶液：取雜質(zhì)4約25mg，精密稱定，置于一25ml量瓶中，用乙腈5ml溶解， 然后用稀釋液溶解并稀釋至刻度。移取5.0ml至25ml容量瓶中，用稀釋液溶解并稀釋至刻 度。主峰峰純度應(yīng)不小于0

11、.990。 i)雜質(zhì)5定位溶液：取雜質(zhì)5約25mg，精密稱定，置于一25ml量瓶中，用乙腈5ml溶解， 然后用稀釋液溶解并稀釋至刻度。移取5.0ml至25ml容量瓶中，用稀釋液溶解并稀釋至刻 度。主峰峰純度應(yīng)不小于0.990。 j)雜質(zhì)6定位溶液：取雜質(zhì)6約25mg，精密稱定，置于一25ml量瓶中，用乙腈5ml溶解， 然后用稀釋液溶解并稀釋至刻度。移取5.0ml至25ml容量瓶中，用稀釋液溶解并稀釋至刻 度。主峰峰純度應(yīng)不小于0.990。 k)雜質(zhì)7定位溶液：取雜質(zhì)7約25mg，精密稱定，置于一25ml量瓶中，用乙腈5ml溶解， 然后用稀釋液溶解并稀釋至刻度。移取5.0ml至25ml容量瓶中，

12、用稀釋液溶解并稀釋至刻 度。主峰峰純度應(yīng)不小于0.990。 l)雜質(zhì)8定位溶液：取雜質(zhì)8約25mg，精密稱定，置于一25ml量瓶中，用乙腈5ml溶解， 然后用稀釋液溶解并稀釋至刻度。移取5.0ml至25ml容量瓶中，用稀釋液溶解并稀釋至刻 度。主峰峰純度應(yīng)不小于0.990。 m)雜質(zhì)9定位溶液：取雜質(zhì)9約25mg，精密稱定，置于一25ml量瓶中，用乙腈5ml溶解， 然后用稀釋液溶解并稀釋至刻度。移取5.0ml至25ml容量瓶中，用稀釋液溶解并稀釋至刻 度。主峰峰純度應(yīng)不小于0.990。 n)雜質(zhì) 10 定位溶液：取雜質(zhì) 10 約 25mg，精密稱定，置于一 25ml 量瓶中，用乙腈 5ml 溶

13、解，然后用稀釋液溶解并稀釋至刻度。移取 5.0ml 至 25ml 容量瓶中，用稀釋液溶 解并稀釋至刻度。主峰峰純度應(yīng)不小于 0.990。 o) 高溫破壞試驗：取在 60加熱 10 天的樣品 25mg，精密稱定，置于一 25ml 量瓶 中，用乙腈 5ml 溶解，然后用稀釋液溶解并稀釋至刻度，即得高溫破壞樣品溶液。進樣 分析，主峰與相鄰雜質(zhì)之間的分離度應(yīng)不小于 1.5，主峰峰純度應(yīng)不小于 0.990,記錄各雜 質(zhì)的變化。 p) 高濕破壞實驗：取在相對濕度為 90%5%的條件下放置 10 天的樣品 25mg，精密 稱定，置于一 25ml 量瓶中，用乙腈 5ml 溶解，然后用稀釋液溶解并稀釋至刻度，即

14、得高 濕破壞樣品溶液。進樣分析，主峰與相鄰雜質(zhì)之間的分離度應(yīng)不小于 1.5，主峰峰純度應(yīng) 不小于 0.990,記錄各雜質(zhì)的變化。 q) 強光破壞試驗：取經(jīng)取經(jīng)總照度不低于1.2106Lux.hr 強白光,近紫外能量不低于 200w.hr/m2破壞的的樣品 25mg，精密稱定，置于一 25ml 量瓶中，用乙腈 5ml 溶解，然后 *制藥股份有限公司 文件編號：文件編號： 題目題目*原料有關(guān)物質(zhì)分析方法驗證方案原料有關(guān)物質(zhì)分析方法驗證方案 第第 8 頁頁 共共 12 頁頁 用稀釋液溶解并稀釋至刻度，即得強光破壞樣品溶液。進樣分析，主峰與相鄰雜質(zhì)之間 的分離度應(yīng)不小于 1.5，主峰峰純度應(yīng)不小于 0

15、.990,記錄各雜質(zhì)的變化。 r) 酸破壞試驗：取樣品 25mg，置于 25ml 量瓶中，加入 0.1mol/L 鹽酸溶液 1.00ml，25下放置 24 小時，然后用 0.1mol/L 氫氧化鈉溶液 1.00ml 中和，用乙腈 5ml 溶 解，然后用稀釋液溶解并稀釋至刻度，即得酸破壞樣品溶液。進樣分析，主峰與相鄰雜 質(zhì)之間的分離度應(yīng)不小于 1.5，主峰峰純度應(yīng)不小于 0.990,記錄各雜質(zhì)的變化。 s) 堿破壞試驗：取樣品 25mg，置于 25ml 量瓶中，加入 0.1mol/L 氫氧化鈉溶液 1.00ml，25下放置 24 小時，然后用 0.1mol/L 鹽酸溶液 1.00ml 中和，用乙

16、腈 5ml 溶解， 然后用稀釋液溶解并稀釋至刻度，即得堿破壞樣品溶液。進樣分析，主峰與相鄰雜質(zhì)之 間的分離度應(yīng)不小于 1.5，主峰峰純度應(yīng)不小于 0.990,記錄各雜質(zhì)的變化。 t) 氧化破壞試驗：取樣品 25mg，置于 25ml 量瓶中，加入 10%過氧化氫溶液 1ml，25 下放置 24 小時，用乙腈 5ml 溶解，然后用稀釋液溶解并稀釋至刻度，即得氧化破壞樣品 溶液。進樣分析，主峰與相鄰雜質(zhì)之間的分離度應(yīng)不小于 1.5，主峰峰純度應(yīng)不小于 0.990,記錄各雜質(zhì)的變化。 i)根據(jù)雜質(zhì) 110 的定位溶液和*標準品溶液的主峰峰面積，計算響應(yīng)因子，以* 標準品為 1.0 計，計算各雜質(zhì)的相對

17、響應(yīng)因子。 6.3 檢測限與定量限檢測限與定量限 a) 定量限：取*產(chǎn)品標準品 25mg，精密稱定，置于一 25ml 量瓶中，用乙腈 5ml 溶 解，然后用稀釋液溶解并稀釋至刻度；用稀釋液分步稀釋成一定濃度的溶液，進樣，獲 得的色譜圖中，信噪比(S/N)為(1020):1 時，相應(yīng)的濃度即為定量限濃度。 定量限精密度：配制 6 個相同濃度的定量限溶液進樣，主峰保留時間的相對標準偏 差應(yīng)不大于 2.0%，峰面積的相對標準偏差應(yīng)不大于 5.0%。定量限應(yīng)不大于 0.05%。 定量限準確度： LOQ 儲備溶液：根據(jù) LOQ 測試結(jié)果配制 LOQ 儲備溶液，濃度為 LOQ 濃度的 5 倍。 LOQ 濃

18、度雜質(zhì)標準溶液：移取雜質(zhì)標準儲備溶液 5.0ml 至 25ml 容量瓶中，用流動相 稀釋至刻度。計算雜質(zhì)的單位濃度峰面積。同法配制 3 個。 供試液：取*產(chǎn)品 25mg，精密稱定，置于一 25ml 量瓶中，用乙腈 5ml 溶解，然后 用稀釋液溶解并稀釋至刻度。同法配制 3 個。 LOQ 回收率測試液：取*產(chǎn)品 25mg，精密稱定，置于一 25ml 量瓶中，精密加入 LOQ 儲備液 5.0ml，用稀釋液稀釋至刻度(相當于雜質(zhì)的 LOQ 濃度)。同法配制 3 個。 分別取 LOQ 濃度雜質(zhì)標準溶液、供試液進樣，計算雜質(zhì)標準的單位濃度峰面積和供 *制藥股份有限公司 文件編號：文件編號： 題目題目*原

19、料有關(guān)物質(zhì)分析方法驗證方案原料有關(guān)物質(zhì)分析方法驗證方案 第第 9 頁頁 共共 12 頁頁 試液中所含雜質(zhì)的單位濃度峰面積。LOQ 回收率測試液各進樣 3 針，計算回收率，每個回 收率及平均回收率應(yīng)為 80120%，各回收率的相對標準偏差應(yīng)不大于 15%。 回收率(%)=計算濃度100%/實際濃度。 b) 檢測限：取*產(chǎn)品標準品 25mg，精密稱定，置于一 25ml 量瓶中，用乙腈 5ml 溶 解，然后用稀釋液溶解并稀釋至刻度；用稀釋液分步稀釋成一定濃度的溶液，進樣，獲 得的色譜圖中，信噪比(S/N)為(35):1 時，相應(yīng)的濃度即為檢測限濃度。 6.4 線性線性 a)雜質(zhì)標準儲備溶液：取雜質(zhì)

20、1 約 10mg，雜質(zhì) 2 約 50mg,雜質(zhì) 3 約 15mg, 雜質(zhì) 4 約 75mg，雜質(zhì) 5 約 10mg,雜質(zhì) 6 約 50mg, 雜質(zhì) 7 約 15mg，雜質(zhì) 8 約 10mg,雜質(zhì) 9 約 50mg, 雜質(zhì) 10 約 50mg 至 100ml 容量瓶中，精密稱定，加乙腈 5ml 溶解后用流動相稀釋至刻度， 再移取 2.0ml 至 20ml 容量瓶中，流動相稀釋至刻度。 b)線性 L1 溶液：取檢測限與定量限項下的 LOQ 濃度雜質(zhì)標準溶液。 c)線性 L2 溶液：移取雜質(zhì)標準儲備溶液 3.0ml 至 25ml 容量瓶中，用流動相稀釋至 刻度。計算雜質(zhì)的單位濃度峰面積。 （相當于

21、60%雜質(zhì)限度，也可以不做，但至少保證有 5 個點） d)線性 L3 溶液：移取雜質(zhì)標準儲備溶液 4.0ml 至 25ml 容量瓶中，用流動相稀釋至 刻度。計算雜質(zhì)的單位濃度峰面積。 （相當于 80%雜質(zhì)限度） e)線性 L4 溶液：移取雜質(zhì)標準儲備溶液 5.0ml 至 25ml 容量瓶中，用流動相稀釋至 刻度。計算雜質(zhì)的單位濃度峰面積。 （相當于 100%雜質(zhì)限度） f)線性 L5 溶液：移取雜質(zhì)標準儲備溶液 6.0ml 至 25ml 容量瓶中，用流動相稀釋至 刻度。計算雜質(zhì)的單位濃度峰面積。 （相當于 120%雜質(zhì)限度） g)線性 L6 溶液：移取雜質(zhì)標準儲備溶液 7.0ml 至 25ml

22、 容量瓶中，用流動相稀釋至 刻度。計算雜質(zhì)的單位濃度峰面積。 （相當于 140%雜質(zhì)限度） 進樣，記錄色譜圖，以樣品濃度(g/ml)為橫坐標，以峰面積為縱坐標進行線性回歸計算， 得出線性回歸方程及相關(guān)系數(shù)。線性范圍為雜質(zhì)的定量限濃度至約 1.4 倍最大允許雜質(zhì)限 度濃度，相關(guān)系數(shù) R 應(yīng)不小于 0.990，Y 軸截距應(yīng)在 100%響應(yīng)值的 25%以內(nèi)，響應(yīng)因子 的相對標準偏差應(yīng)不大于 10%。 6.5 準確度準確度 a)雜質(zhì)標準儲備溶液：取雜質(zhì) 1 約 10mg，雜質(zhì) 2 約 50mg,雜質(zhì) 3 約 15mg, 雜質(zhì) 4 約 75mg，雜質(zhì) 5 約 10mg,雜質(zhì) 6 約 50mg, 雜質(zhì) 7

23、 約 15mg，雜質(zhì) 8 約 10mg,雜質(zhì) 9 約 50mg, *制藥股份有限公司 文件編號：文件編號： 題目題目*原料有關(guān)物質(zhì)分析方法驗證方案原料有關(guān)物質(zhì)分析方法驗證方案 第第 10 頁頁 共共 12 頁頁 雜質(zhì) 10 約 50mg 至 100ml 容量瓶中，精密稱定，加乙腈 5ml 溶解后用流動相稀釋至刻度， 再移取 2.0ml 至 20ml 容量瓶中，流動相稀釋至刻度。 b)LOQ 儲備溶液：根據(jù) LOQ 測試結(jié)果配制 LOQ 儲備溶液，濃度為 LOQ 濃度的 5 倍。 c)雜質(zhì)標準溶液：移取雜質(zhì)標準儲備溶液 5.0ml 至 25ml 容量瓶中，用流動相稀釋至 刻度。同法配制 3 個。

24、計算雜質(zhì)的單位濃度峰面積。 （相當于雜質(zhì)限度溶液） d)供試液：取*產(chǎn)品 25mg，精密稱定，置于一 25ml 量瓶中，用乙腈 5ml 溶解，然 后用稀釋液溶解并稀釋至刻度。同法配制 3 個。計算樣品中各雜質(zhì)的單位濃度峰面積， 用于扣除回收率測試中扣除空白的依據(jù)。 e)回收率測試液 1：取*產(chǎn)品 25mg，精密稱定，置于一 25ml 量瓶中，精密加入上 述雜質(zhì)標準液儲備液 5.0ml，用稀釋液稀釋至刻度(相當于雜質(zhì)的限度)。 f)回收率測試液 2：取*產(chǎn)品 25mg，精密稱定，置于一 25ml 量瓶中，精密加入上 述雜質(zhì)標準液儲備液 7.0ml，用稀釋液稀釋至刻度(相當于雜質(zhì)的限度的 1.4

25、倍)。 i)回收率測試液 3：取*產(chǎn)品 25mg，精密稱定，置于一 25ml 量瓶中，精密加入 LOQ 儲備液 5.0ml，用稀釋液稀釋至刻度(相當于雜質(zhì)的 LOQ 濃度)。(也可以配制相當于雜質(zhì) 限度的 0.8 倍的溶液，但是為了減少工作量，還是最好做 LOQ 點的回收率)。 分別取雜質(zhì)標準溶液、供試液、回收率測試液 1、回收率測試液 2、回收率測試液 3 各連續(xù)進樣 3 次，按外標法以峰面積計算*產(chǎn)品的量，并計算回收率，每個回收率及平 均回收率應(yīng)為 80120%，各回收率的相對標準偏差應(yīng)不大于 15%。 回收率(%)=計算濃度100%/實際濃度。 6.6 精密度精密度 a)重復(fù)性：稱取*產(chǎn)

26、品樣品適量，照有關(guān)物質(zhì)檢查方法配制樣品溶液，同法配制 6 份樣品溶液，進樣測試，各雜質(zhì)測定結(jié)果的相對標準偏差均應(yīng)不大于 10%。 b) 中間精密度：不同儀器(Agilent 1200)、不同檢驗人員(另一位化驗員)、新配制的流 動相、新配制的樣品液及標準液，與重復(fù)性測試測同一批樣品，各雜質(zhì)測定結(jié)果的相對 標準偏差均應(yīng)不大于 10%。 c) 精密度測試結(jié)果：重復(fù)性測定結(jié)果的平均值與中間精密度測定結(jié)果的平均值之間 的相對偏差不大于 20%。 6.6 范圍范圍 根據(jù)線性、精密度和準確度確定方法的范圍，在該濃度范圍內(nèi)，方法具有良好的精 *制藥股份有限公司 文件編號：文件編號： 題目題目*原料有關(guān)物質(zhì)分

27、析方法驗證方案原料有關(guān)物質(zhì)分析方法驗證方案 第第 11 頁頁 共共 12 頁頁 密度、線性和準確度。范圍至少在 0.05%質(zhì)量指標的 140%范圍內(nèi)。 6.7 耐用性耐用性 a) 色譜條件的影響：在其他條件不變情況下，單獨改變柱溫、流速、色譜柱、緩沖 液 pH 值、有機相比例、流動相比例等其中一個色譜條件，取分離度測試液分別進樣， *產(chǎn)品與*雜質(zhì)之間的分離度應(yīng)不小于 2.0。 改變項目柱溫流速(ml/ 分鐘) 色譜 柱 緩沖液 pH 值 甲醇、乙腈 比例 A、B 相初始 比例 設(shè)定值20 30 0.851.05另一 支 2.8 0 3.2 0 55:4 5 45:5 5 80:2070:30

28、b) 溶液穩(wěn)定性：按本方法配制標準溶液、供試品溶液和分離度溶液，供試品溶液分 別放置 0h，4h，8h，24h，48h，36h 后進樣測定，考察溶液的穩(wěn)定性。要求標準品溶液 的峰面積相對 0h 的增長率在5%范圍內(nèi)，供試品中各雜質(zhì)的增長相對 0h 不超過 20%，且無新的雜質(zhì)產(chǎn)生，分離度溶液分離度不小于 2.0。則表明溶液在這段時間內(nèi)穩(wěn) 定，否則說明溶液不穩(wěn)定，需根據(jù)溶液穩(wěn)定性結(jié)果考慮配制和進樣時間。 6.8 樣品測定樣品測定 應(yīng)用本方法，對 3 批樣品進行測定，樣品各雜質(zhì)均應(yīng)能夠符合限度要求。 7.偏差偏差 驗證過程中如果出現(xiàn)偏差應(yīng)及時進行調(diào)查和上報，并且采取適當?shù)拇胧┻M行處理， 并及時記錄

29、。如經(jīng)調(diào)查確定偏差的性質(zhì)會對驗證結(jié)果產(chǎn)生實質(zhì)影響，應(yīng)確定原因并采取 必要措施后重新進行驗證。 8.風險的接收與評審風險的接收與評審 經(jīng)分析，對上一步判斷的風險采取的控制措施，若經(jīng)檢查確認符合要求，則其相應(yīng) 的風險可降至為可接受風險。否則，需采取進一步的措施降低風險。 9.再驗證再驗證 發(fā)生下列情形之一時，需進行再驗證。 （1）生產(chǎn)工藝發(fā)生改變。 （2）檢驗方法發(fā)生改變。 10.確認結(jié)果評審和結(jié)論確認結(jié)果評審和結(jié)論 驗證小組負責收集各項驗證、試驗結(jié)果記錄，根據(jù)驗證、試驗結(jié)果起草驗證報告， *制藥股份有限公司 文件編號：文件編號： 題目題目*原料有關(guān)物質(zhì)分析方法驗證方案原料有關(guān)物質(zhì)分析方法驗證方案

30、 第第 12 頁頁 共共 12 頁頁 報驗證委員會。 驗證委員會負責對驗證結(jié)果進行綜合評審，做出驗證結(jié)論，確認再驗證周期。對驗 證結(jié)果的評審應(yīng)包括： 確認試驗是否有遺漏？ 確認試驗過程中對驗證方案有無修改，修改原因、依據(jù)以及是否經(jīng)過批準？ 確認記錄是否完整？ 確認試驗結(jié)果是否符合標準要求？偏差及對偏差說明是否合理？是否需要進一步補 充試驗？ 11.更改歷史更改歷史 12. 附錄附錄 附錄 1 *原料有關(guān)物質(zhì)分析方法 guideline on the limits of genotoxic impurities 版本號生效日期主要變更描述 第 1 版本文檔為新訂 *制藥股份有限公司 附錄附錄 1 *原料有關(guān)物質(zhì)分析方法原料有關(guān)物質(zhì)分析方法 1 儀器：LC-2010AHT高效液相色譜儀（日本島津公司） ，紫外檢測器。 2 標準品及試劑 *標準品 來源:USP 或公司自制 *分離度標準品 來源：U