色譜基礎(chǔ)知識(shí)簡(jiǎn)介課件

1、色譜基礎(chǔ)知識(shí)簡(jiǎn)介,1,編制本教材的任務(wù)是給車間員工進(jìn)行培訓(xùn)。 且已經(jīng)有對(duì)應(yīng)的模版了，模板中所涉及的大綱你到教材中都需要體現(xiàn)出來(lái)，如：目的、原理、規(guī)范操作（送樣、取樣、看分析結(jié)果等方面的）、操作存在的風(fēng)險(xiǎn)（取樣操作如何取出具有代表性的樣品等方面）。 總體而言，你到這份講義的側(cè)重點(diǎn)應(yīng)該在如何規(guī)范取樣、送樣、看分析結(jié)果。這些的前天是需要對(duì)GC、LC有相關(guān)的了解?？梢越Y(jié)合一些圖片說(shuō)明。,色譜基礎(chǔ)知識(shí)簡(jiǎn)介,2,色譜基礎(chǔ)知識(shí)簡(jiǎn)介,氣相色譜 高效液相色譜法（high performance liquid chromatography, HPLC） 質(zhì)譜基礎(chǔ)知識(shí),色譜基礎(chǔ)知識(shí)簡(jiǎn)介,3,1.1氣相色譜特點(diǎn),氣相

2、色譜法是指用氣體作為流動(dòng)相的色譜法。由于樣品在氣相中傳遞速度快，因此樣品組分在流動(dòng)相和固定相之間可以瞬間地達(dá)到平衡。另外加上可選作固定相的物質(zhì)很多，因此氣相色譜法是一個(gè)分析速度快和分離效率高的分離分析方法。近年來(lái)采用高靈敏選擇性檢測(cè)器，使得它又具有分析靈敏度高、應(yīng)用范圍廣等優(yōu)點(diǎn)。,色譜基礎(chǔ)知識(shí)簡(jiǎn)介,4,1.2氣相色譜原理,GC主要是利用物質(zhì)的沸點(diǎn)、極性及吸附性質(zhì)的差異來(lái)實(shí)現(xiàn)混合物的分離。 待分析樣品在汽化室汽化后被惰性氣體（即載氣，也叫流動(dòng)相）帶入色譜柱，柱內(nèi)含有液體或固體流動(dòng)相，由于樣品中各組分的沸點(diǎn)、極性或吸附性能不同，每種組分都傾向于在流動(dòng)相和固定相之間形成分配或吸附平衡。但由于載氣是流

3、動(dòng)的，這種平衡實(shí)際上很難建立起來(lái)。也正是由于載氣的流動(dòng)，使樣品組分在運(yùn)動(dòng)中進(jìn)行反復(fù)多次的分配或吸附/解吸附，結(jié)果是在載氣中濃度大的組分先流出色譜柱，而在固定相中分配濃度大的組分后流出。當(dāng)組分流出色譜柱后，立即進(jìn)入檢測(cè)器。檢測(cè)器能夠?qū)悠方M分的與否轉(zhuǎn)變?yōu)殡娦盘?hào)，而電信號(hào)的大小與被測(cè)組分的量或濃度成正比。當(dāng)將這些信號(hào)放大并記錄下來(lái)時(shí)，就是氣相色譜圖了。,色譜基礎(chǔ)知識(shí)簡(jiǎn)介,5,1.3氣相色譜儀的基本結(jié)構(gòu),圖示,鋼瓶He,N2,數(shù)據(jù)處理,色譜基礎(chǔ)知識(shí)簡(jiǎn)介,6,1. 進(jìn)樣口溫度 考慮樣品中各組分的沸點(diǎn)，設(shè)定溫度使樣品瞬間汽化。 2.色譜柱溫度 考慮樣品中各組分的沸點(diǎn)，及希望的分析周期，寬沸程樣品應(yīng)使用程

4、序升溫。 3.檢測(cè)器溫度 防止檢測(cè)器污染，一般比色譜柱溫度高20-30。根據(jù)炭數(shù)確定分析條件,1.4進(jìn)樣口、色譜柱、檢測(cè)器的溫度設(shè)定,色譜基礎(chǔ)知識(shí)簡(jiǎn)介,7,1.5氣相色譜儀的流動(dòng)相-載氣,氦氣（純度99.99%以上） 氮?dú)猓兌?9.99%以上） 氬氣（純度99.99%以上）特殊分析使用 氫氣（純度99.99%以上）注意安全,色譜基礎(chǔ)知識(shí)簡(jiǎn)介,8,1.6色譜術(shù)語(yǔ),1）基線：在實(shí)驗(yàn)條件下，色譜柱后僅有純流動(dòng)相進(jìn)入檢測(cè)器時(shí)的流出曲線稱為基線?；€在穩(wěn)定的條件下應(yīng)是一條水平的直線。它的平直與否可反應(yīng)出實(shí)驗(yàn)條件的穩(wěn)定情況。 2）峰高（h）和峰面積 ：色譜峰頂點(diǎn)與基線的距離叫峰高。色譜峰與峰底基線所圍成

5、區(qū)域的面積叫峰面積。 3）保留值 a. 死時(shí)間(t0) ：不與固定相作用的物質(zhì)從進(jìn)樣到出現(xiàn)峰極大值時(shí)的時(shí)間，它與色譜柱的空隙體積成正比。由于該物質(zhì)不與固定相作用，因此，其流速與流動(dòng)相的流速相近。據(jù) t0 可求出流動(dòng)相平均流速,色譜基礎(chǔ)知識(shí)簡(jiǎn)介,9,1.7.1 數(shù)據(jù)可靠性判斷,良好的峰面積重現(xiàn)性，一般CV%在0.53% （變異系數(shù)（什么叫變異系數(shù)）：標(biāo)準(zhǔn)差與均值的比率) 工作曲線具有良好的線性 相關(guān)性要在三個(gè)9以上。 峰形正常，避免拖尾峰和前沿峰 (柱選擇恰當(dāng)、襯管無(wú)污染、溫度及流量設(shè)定) 色譜峰分離良好(分離度(什么叫分離度)1.5),色譜基礎(chǔ)知識(shí)簡(jiǎn)介,10,1.7.2 計(jì)算方法-峰處理參數(shù),

6、峰處理參數(shù)(半峰寬, 斜率, 漂移, 變參時(shí)間等) 半峰寬：設(shè)為最窄峰的半高寬，單位：秒 控制斜率測(cè)試時(shí)間（對(duì)于這些現(xiàn)場(chǎng)人員不能理解的專業(yè)俗語(yǔ)可以不提或使用通俗易懂的語(yǔ)言進(jìn)行描述）：10半峰寬 推薦值：填充柱5 s 毛細(xì)柱 23 s 斜率：10倍半峰寬內(nèi)所有信號(hào)的總和 判斷峰起點(diǎn) 濾除低平噪聲（如蛇行等） 斜率值確定：一般采用斜率測(cè)試值，也可根據(jù)實(shí)際需要手動(dòng)輸入。 漂移：判斷相鄰峰的積分方式 設(shè)定值為0時(shí)，工作站將自動(dòng)判斷 如漂移值與基線至峰谷連線較接近時(shí)，積分可能不穩(wěn)定，導(dǎo)致面 積值變化較大，需加以注意。,色譜基礎(chǔ)知識(shí)簡(jiǎn)介,11,1.8 總結(jié)-氣相色譜分析步驟,開(kāi)機(jī)：連好流路，先開(kāi)載氣、氫氣

7、、空氣，再開(kāi)打開(kāi)GC儀器，再打開(kāi)計(jì)算機(jī) 設(shè)定流量、溫度、檢測(cè)器參數(shù) 用默認(rèn)處理參數(shù)進(jìn)行樣品分析 根據(jù)圖譜調(diào)整分析條件，再分析樣品，直至得到理想譜圖 確定定量方法（內(nèi)標(biāo)、外標(biāo)、面積歸一等） 選擇校正點(diǎn)數(shù)，編輯ID表（輸入組分的保留時(shí)間和標(biāo)樣濃度） 選擇校正次數(shù)（每濃度取幾次均值） 選擇曲線計(jì)算方式（直線、最小二乘或折線） 按從低濃度到高濃度的順序，分析完所有標(biāo)樣，即完成曲線制作 進(jìn)行未知樣分析，每次分析結(jié)束，自動(dòng)計(jì)算定量結(jié)果 分析完了，關(guān)機(jī)，系統(tǒng)降溫后，關(guān)閉工作站窗口。關(guān)載氣。關(guān)閉GC主機(jī)電源。,色譜基礎(chǔ)知識(shí)簡(jiǎn)介,12,一、概述 氣相色譜只適合分析較易揮發(fā)、且化學(xué)性質(zhì)穩(wěn)定的有機(jī)化合物，而HPLC

8、則適合于分析那些用氣相色譜難以分析的物質(zhì)，如揮發(fā)性差、極性強(qiáng)、具有生物活性、熱穩(wěn)定性差的物質(zhì)。所以，HPLC的應(yīng)用范圍已經(jīng)遠(yuǎn)遠(yuǎn)超過(guò)氣相色譜。 通常將液相色譜法按分離機(jī)理分成吸附色譜法、分配色譜法、離子色譜法和凝膠色譜法四大類。其實(shí)，有些液相色譜方法并不能簡(jiǎn)單地歸于這四類,2.1高效液相色譜法,色譜基礎(chǔ)知識(shí)簡(jiǎn)介,13,2.2高效液相色譜儀,色譜基礎(chǔ)知識(shí)簡(jiǎn)介,14,2.3液相色譜簡(jiǎn)易流程圖,輸液泵,進(jìn)樣器,色譜柱,柱溫箱,檢測(cè)器,溶劑,數(shù)據(jù)處理,廢液,色譜基礎(chǔ)知識(shí)簡(jiǎn)介,15,2.4基本分析方法 高效液相色譜法在醫(yī)藥領(lǐng)域中的應(yīng)用非常廣泛，它能用于化學(xué)合成藥物的含量測(cè)定和雜質(zhì)限量分析，用于中草藥和中成

9、藥的定性鑒別和有效成分或指標(biāo)成分的測(cè)定，也用于制劑分析，還用于藥物代謝和動(dòng)力學(xué)研究。此外，HPLC還廣泛用于天然藥物有效成份的分離制備和純化。這些方法主要分為：定性分析、定量分析、雜質(zhì)分析。對(duì)于任何方法都必須進(jìn)行驗(yàn)證和評(píng)價(jià)。,色譜基礎(chǔ)知識(shí)簡(jiǎn)介,16,一、 HPLC分析方法的參數(shù)及驗(yàn)證 1.專一性 專一性（specificity）又稱為特效性，是指在可能存在諸多干擾組分時(shí)方法明確確定被分析組分的能力，分析含有和不含有干擾組分的樣品，比較分析結(jié)果，其差異即是方法偏差（bias）。如果結(jié)果沒(méi)有差異，則說(shuō)明方法具有專一性。 HPLC方法的專一性可以通過(guò)檢查色譜峰純度來(lái)驗(yàn)證。采用多波長(zhǎng)紫外檢測(cè)器時(shí)，同時(shí)

10、在兩個(gè)波 長(zhǎng)下檢測(cè)色譜峰，如果測(cè)得該峰在兩波長(zhǎng)之處的吸收之,色譜基礎(chǔ)知識(shí)簡(jiǎn)介,17,比值恒定不變，則該峰為純組分色譜峰。 2.準(zhǔn)確度 分析方法的準(zhǔn)確度（accuracy）表示測(cè)得值與真值或認(rèn)可的參考值之間的一致程度。此外，真實(shí)性（trueness）表示一組測(cè)量值的平均值與真實(shí)值間的差異，偏差（bias）表示多組測(cè)量值的平均值與真實(shí)值間的差異,偏差是由系統(tǒng)誤差引起的。通常用回收率實(shí)驗(yàn)來(lái)驗(yàn)證準(zhǔn)確度。方法回收率實(shí)驗(yàn)應(yīng)包括整個(gè)實(shí)驗(yàn)過(guò)程，實(shí)際上是以相同的方法配置分析對(duì)照品系列和測(cè)試樣,色譜基礎(chǔ)知識(shí)簡(jiǎn)介,18,品，以對(duì)照品結(jié)果繪制標(biāo)準(zhǔn)（工作）曲線，在以此曲線確定樣品的濃度。再在已知濃度的樣品中加入一定量的

11、 對(duì)照品，檢測(cè)其含量。測(cè)得值與已知值之差除以加入值 再乘以%即為回收率。回收率一般在1005%。 3.精密度 分析方法的精密度（precision）表示在規(guī)定條件下對(duì)同一均勻樣品多次測(cè)得的一組測(cè)得值之間的一致程度。精密度的表示方法有標(biāo)準(zhǔn)偏差、方差，更多的是相對(duì)標(biāo)準(zhǔn),色譜基礎(chǔ)知識(shí)簡(jiǎn)介,19,偏差（RSD）。 精密度可分為重復(fù)性（repeatability）、中間精密度(intermediate precision)和再現(xiàn)性（reproducibility），后兩者統(tǒng)稱為再現(xiàn)性。重復(fù)性表示在相同條件下，短時(shí)間間隔內(nèi)的一致程度，如日內(nèi)精密度（intra-day precision）和批內(nèi)精密度(in

12、tra-assay 或intra-run precision)；中間精密度表示同一實(shí)驗(yàn)室內(nèi)不同日期（intra-day）、不同實(shí)驗(yàn)批（intra-assay）、不同分析者、不同儀器間的一致程度。再現(xiàn)性是不同實(shí)驗(yàn)室間的,色譜基礎(chǔ)知識(shí)簡(jiǎn)介,20,一致程度。 在HPLC分析中，如果只用對(duì)照品（或樣品）溶液重復(fù)進(jìn)樣測(cè)定精密度，這只表示色譜系統(tǒng)的精密度。而方法的精密度的驗(yàn)證應(yīng)該對(duì)均一的真實(shí)（QC）樣品進(jìn)行包括樣品處理在內(nèi)的全過(guò)程操作,用接近最低、中間和最高濃度的三個(gè)樣品濃度進(jìn)行隨機(jī)分析。日間精密度還應(yīng)該連續(xù)測(cè)定8天，每個(gè)樣品每天至少測(cè)定2次。,色譜基礎(chǔ)知識(shí)簡(jiǎn)介,21,4.檢測(cè)限和定量限 在樣品中能檢測(cè)出

13、的被測(cè)組分的最低濃度（量）稱為檢測(cè)限（limit of detection,LOD），對(duì)其測(cè)定的準(zhǔn)確度和精密度沒(méi)有確定的要求。 能以適當(dāng)準(zhǔn)確度和精密度定量測(cè)定的樣品中組分的最低濃度（量）稱為定量限（limit of quantitation,LOQ）。這對(duì)低含量的組分的測(cè)定如雜質(zhì)含量的定量測(cè)定和體內(nèi)代謝物的測(cè)定十分重要。在定量分析中，定量限比檢測(cè)限更重要。,色譜基礎(chǔ)知識(shí)簡(jiǎn)介,22,二、定性分析方法 定性分析及鑒別試驗(yàn)可以分為色譜鑒別法和非色譜鑒別法，后者又可分為化學(xué)鑒別法和光譜鑒別法。 1.色譜鑒別法 色譜鑒別法是利用色譜定性參數(shù)保留時(shí)間（或保留體積）對(duì)組分進(jìn)行定性分析，其原理是同一物質(zhì)在相同

14、色譜條件下保留時(shí)間相同。此法只適用于已知范圍的未知物，如合成藥物的前體或藥物的可能代謝產(chǎn)物等。,色譜基礎(chǔ)知識(shí)簡(jiǎn)介,23,常常采用已知物對(duì)照法，即往樣品中加入某一純物質(zhì)（對(duì)照品），混勻進(jìn)樣。對(duì)比加入前后的色譜圖，若加入后某峰相對(duì)增高，則該組分與對(duì)照品為同一物質(zhì)。 2.化學(xué)鑒別法 化學(xué)鑒別法是利用專屬性化學(xué)反應(yīng)對(duì)分離后收集的組分進(jìn)行定性分析。此法只能鑒別組分屬于哪一類化合物。通常是收集色譜餾分，再與官能團(tuán)分類試劑反應(yīng)。有關(guān)官能團(tuán)鑒別試劑可查閱有關(guān)文獻(xiàn)。,色譜基礎(chǔ)知識(shí)簡(jiǎn)介,24,3.光譜鑒別法 3.1. 兩譜聯(lián)用法：當(dāng)相鄰組分的分離度足夠大時(shí)，以制備HPLC獲得純組分，而后用紅外光譜、質(zhì)譜或核磁共振

15、等分析手段進(jìn)行定性鑒別。 3.2. 兩譜聯(lián)用儀：將高效液相色譜儀與光譜儀用界面連成一個(gè)整體儀器，實(shí)現(xiàn)在線檢測(cè)，稱為兩譜聯(lián)用儀。兩譜聯(lián)用儀能同時(shí)給出樣品的色譜圖和每個(gè)組分的光譜圖，獲得定性、定量分析信息。因此，高效液相色譜-光譜聯(lián)用儀是當(dāng)今最重要的分析鑒別方法。,色譜基礎(chǔ)知識(shí)簡(jiǎn)介,25,三、定量分析方法 HPLC定量分析的參數(shù)是色譜峰高和峰面積，定量依據(jù)是樣品中組分的量（或濃度）與峰高或峰面積成正比。常用的定量方法有外標(biāo)法、內(nèi)標(biāo)法。 1.外標(biāo)法 用與待測(cè)組分同質(zhì)的標(biāo)準(zhǔn)品作對(duì)照品，以對(duì)照品的量對(duì)比求算試樣含量的方法稱為外標(biāo)法。外標(biāo)法分為外標(biāo)工作曲線法、外標(biāo)一點(diǎn)法和外標(biāo)兩點(diǎn)法等。只要待測(cè)組分出峰、無(wú)

16、干擾、保留時(shí)間適宜，即可用外標(biāo)法進(jìn)行定,色譜基礎(chǔ)知識(shí)簡(jiǎn)介,26,量分析。但要求進(jìn)樣量必須準(zhǔn)確，否則定量誤差大。 2.內(nèi)標(biāo)法 選擇適宜的物質(zhì)作內(nèi)標(biāo)物，以待測(cè)組分和內(nèi)標(biāo)物的峰高比或峰面積比求算試樣含量的方法稱為內(nèi)標(biāo)法。內(nèi)標(biāo)法的關(guān)鍵是選擇合適的內(nèi)標(biāo)物。內(nèi)標(biāo)物應(yīng)該是樣品中不含有的物質(zhì)，純度要高，與待測(cè)組分有相似的理化性質(zhì)，保留時(shí)間與待測(cè)組分相近，與樣品中各組分能完全分離且不與樣品反應(yīng)。 也分為工作曲線法、內(nèi)標(biāo)一點(diǎn)法（內(nèi)標(biāo)對(duì)比法）。,色譜基礎(chǔ)知識(shí)簡(jiǎn)介,27,3.1質(zhì)譜法的基本原理,一、概述 質(zhì)譜分析法是在高真空系統(tǒng)中測(cè)定樣品的分子離子及碎片離子質(zhì)量，以確定樣品相對(duì)分子質(zhì)量及分子結(jié)構(gòu)的方法。 化合物分子受

17、到電子流沖擊后，形成的帶正電荷分子離子及碎片離子，按照其質(zhì)量m和電荷z的比值m/z（質(zhì)荷比）大小依次排列而被記錄下來(lái)的圖譜，稱為質(zhì)譜。,色譜基礎(chǔ)知識(shí)簡(jiǎn)介,28,3.2質(zhì)譜分析特點(diǎn)：,應(yīng)用范圍廣； 靈敏度高，樣品用量少； 分析速度快，并可實(shí)現(xiàn)多組分同時(shí)測(cè)定； 與其它儀器相比，儀器結(jié)構(gòu)復(fù)雜，價(jià)格昂貴，使用及維修比較困難； 對(duì)樣品有破壞性，無(wú)法回收。,色譜基礎(chǔ)知識(shí)簡(jiǎn)介,29,3.3質(zhì)譜法的產(chǎn)生機(jī)理及基本過(guò)程,產(chǎn)生機(jī)理 質(zhì)譜法是將樣品置于高真空中（10-3 Pa），并受到高速電子流或強(qiáng)電場(chǎng)等作用，失去外層電子而生成分子離子，或化學(xué)鍵斷裂生成各種碎片離子，然后將分子離子和碎片離子引入到一個(gè)強(qiáng)的正電場(chǎng)中，

18、使之加速，加速電位通常用到68kV，此時(shí)可認(rèn)為各種帶正電荷的離子都有近似相同的動(dòng)能。,色譜基礎(chǔ)知識(shí)簡(jiǎn)介,30,但是不同質(zhì)荷比（m/z）的離子具有不同的速度，利用離子不同質(zhì)荷比及其速度差異，質(zhì)量分析器可以將其分離，然后由檢測(cè)器測(cè)量其強(qiáng)度，記錄后得到一張以質(zhì)荷比為橫坐標(biāo)，以相對(duì)強(qiáng)度為縱坐標(biāo)的質(zhì)譜圖。,色譜基礎(chǔ)知識(shí)簡(jiǎn)介,31,3.4質(zhì)譜分析的四個(gè)過(guò)程,通過(guò)合適的進(jìn)樣裝置將樣品引入并進(jìn)行氣化； 氣化后的樣品引入到離子源進(jìn)行電離離子化過(guò)程； 電離后的離子經(jīng)過(guò)適當(dāng)?shù)募铀俸筮M(jìn)入質(zhì)量分析器，按不同的質(zhì)荷比（m/z）進(jìn)行分離； 經(jīng)檢測(cè)、記錄，獲得一張譜圖。,進(jìn)樣系統(tǒng),離子源,質(zhì)量分析器,記錄（質(zhì)譜圖）,檢測(cè)器,

19、色譜基礎(chǔ)知識(shí)簡(jiǎn)介,32,3.5質(zhì)譜儀,質(zhì)譜儀按用途分： 同位素質(zhì)譜儀（測(cè)定同位素）、無(wú)機(jī)質(zhì)譜儀（測(cè)定無(wú)機(jī)化合物）、有機(jī)質(zhì)譜儀（測(cè)定有機(jī)化合物）等。 根據(jù)質(zhì)量分析器的工作原理分： 靜態(tài)儀器：采用穩(wěn)定磁場(chǎng)，按空間位置區(qū)分不同質(zhì)荷比的離子 單聚焦和雙聚焦質(zhì)譜儀 動(dòng)態(tài)儀器：采用變化的電磁場(chǎng)，按時(shí)空來(lái)區(qū)分不同質(zhì)荷比的離子 飛行時(shí)間和四極濾質(zhì)器式質(zhì)譜儀,色譜基礎(chǔ)知識(shí)簡(jiǎn)介,33,3.6質(zhì)譜及主要離子峰的類型,一、質(zhì)譜的表示方法 以質(zhì)荷比m/z為橫坐標(biāo)，以對(duì)基峰(最強(qiáng)離子峰，規(guī)定相對(duì)強(qiáng)度為100%)相對(duì)強(qiáng)度為縱坐標(biāo)所構(gòu)成的譜圖，稱之為質(zhì)譜圖。,丙酮,色譜基礎(chǔ)知識(shí)簡(jiǎn)介,34,二、質(zhì)譜儀的分辨率,分辨率是指儀器對(duì)

20、質(zhì)量非常接近的兩種離子的分辨能力。一般定義是：對(duì)兩個(gè)相等強(qiáng)度的相鄰峰，當(dāng)兩峰間的峰谷不大于其峰高10%時(shí)，則認(rèn)為兩峰已經(jīng)分開(kāi)，其分辨率：,（ m1 m2）,色譜基礎(chǔ)知識(shí)簡(jiǎn)介,35,3.7離子峰的主要類型,1.分子離子峰 樣品分子失去一個(gè)電子而形成的離子稱為分子離子。所產(chǎn)生的峰稱為分子離子峰或稱母峰，一般用符號(hào)M+表示。其中“+”代表正離子，“ ”代表不成對(duì)電子。 M + e- M+ + 2e- 分子離子峰的m/z就是該分子的分子量。,色譜基礎(chǔ)知識(shí)簡(jiǎn)介,36,3.8分子離子峰的特點(diǎn)：,一般出現(xiàn)在質(zhì)荷比最高的位置，但有例外。分子離子峰的穩(wěn)定性取決于分子結(jié)構(gòu)。分子離子峰的強(qiáng)度與結(jié)構(gòu)的關(guān)系： a 碳鏈

21、越長(zhǎng)，分子離子峰越弱； b 存在支鏈有利于分子離子裂解，故分子離子峰很弱； c 飽和醇類及胺類化合物的分子離子弱； d 有共振系統(tǒng)的分子離子穩(wěn)定，分子離子峰強(qiáng)； e 環(huán)狀分子一般有較強(qiáng)的分子離子峰 分子離子峰的相對(duì)強(qiáng)度取決于M+相對(duì)于裂解產(chǎn)物的穩(wěn)定性：芳香環(huán)共軛烯烯環(huán)狀化合物羰基化合物醚酯胺酸醇高度分支的烴類,色譜基礎(chǔ)知識(shí)簡(jiǎn)介,37,3.9分子離子峰的識(shí)別：,（1）氮規(guī)則： 由C，H，O 組成的有機(jī)化合物，M 一定是偶數(shù)。 由C，H，O，N 組成的有機(jī)化合物，N 奇數(shù)，M 奇數(shù)。 由C，H，O，N 組成的有機(jī)化合物，N 偶數(shù)，M 偶數(shù)。 （2）分子離子峰與相鄰峰的質(zhì)量差是否合理： 通常在分子離

22、子峰的左側(cè)314個(gè)質(zhì)量單位處，不應(yīng)有其他碎片離子峰出現(xiàn)。如有其它峰（出現(xiàn)），則該峰不是分子離子峰。因?yàn)椴豢赡軓姆肿与x子上失去相當(dāng)于314個(gè)質(zhì)量單位的結(jié)構(gòu)碎片。,色譜基礎(chǔ)知識(shí)簡(jiǎn)介,38,3.10同位素離子峰,除P、F、I外，組成有機(jī)化合物的十幾種元素都有同位素。因而在質(zhì)譜中會(huì)出現(xiàn)由不同質(zhì)量的同位素形成的峰（M+1、M+2等），稱為同位素離子峰。,色譜基礎(chǔ)知識(shí)簡(jiǎn)介,39,對(duì)于含S的化合物：I(M+2)+/IM+ n4.40 （n是分子含S個(gè)數(shù)） 如在CH3Cl、C2H5Cl等分子中ClM+2/ClM=32.5%，而在含有一個(gè)溴原子的化合物中(M+2)+峰的相對(duì)強(qiáng)度幾乎與M+ 峰的相等。利用同位素離

23、子峰可用來(lái)確定分子離子峰。,色譜基礎(chǔ)知識(shí)簡(jiǎn)介,40,3.11質(zhì)譜法的應(yīng)用,一、定性分析 1. 相對(duì)分子質(zhì)量的測(cè)定 2. 確定化合物的分子式 3. 結(jié)構(gòu)式的確定（質(zhì)譜解析） 二、定量分析 質(zhì)譜檢測(cè)出的離子流強(qiáng)度與離子數(shù)目成正比,色譜基礎(chǔ)知識(shí)簡(jiǎn)介,41,3.12相對(duì)分子量的確定,從分子離子峰可以準(zhǔn)確地測(cè)定該物質(zhì)的相對(duì)分子量關(guān)鍵是分子離子峰的判斷： （i）注意m/z值的氮規(guī)律 只有C. H. O組成的有機(jī)化合物，其分子離子峰的m/z一定是偶數(shù)。在含氮的有機(jī)化合物（N的化合價(jià)為奇數(shù)）中，N原子個(gè)數(shù)為奇數(shù)時(shí)，其分子離子峰m/z一定是奇數(shù)；N原子個(gè)數(shù)為偶數(shù)時(shí)，則分子離子峰m/z一定是偶數(shù)。,色譜基礎(chǔ)知識(shí)簡(jiǎn)介,42,（ii）注意該峰與其它碎片離子峰之間的質(zhì)量差是否有意義 通常在分子離子峰的左側(cè)314個(gè)質(zhì)量單位處，不應(yīng)有其他碎片離子峰出現(xiàn)。如有其它峰（出現(xiàn)），則該峰不是分子離子峰。因?yàn)椴豢赡軓姆肿与x子上失去相當(dāng)于314個(gè)質(zhì)量單位的結(jié)構(gòu)碎片。 （iii）同位素峰對(duì)確定分子離子峰的貢獻(xiàn) 利用某些元素的同位素峰的特點(diǎn)（在自然界中的含量），來(lái)確定含有這些原子的分子離子峰。,色譜基礎(chǔ)知識(shí)簡(jiǎn)介,43,3.13分子式的確定,（1）用高分辨質(zhì)譜確定分子式 高分辨質(zhì)譜儀可精確測(cè)定分子離子或碎片離子的質(zhì)核比（誤差小于10-5）