抑癌p53基因在星形細(xì)胞瘤中陽性表達(dá)的意義

1、DOC格式論文，方便您的復(fù)制修改刪減抑癌p53基因在星形細(xì)胞瘤中陽性表達(dá)的意義(作者：單位：郵編：)作者：薛建榮，秦坤明，陳家康，陸建吾，文超勇【摘要】目的 研究p53在星形細(xì)胞瘤發(fā)生、增殖過程中的作用及臨床意義。方法 采用免疫組織化學(xué)法(S擬P法)檢測62例資料完 整的星形細(xì)胞瘤及10例正常腦組織的p53表達(dá)，分析p53蛋白在星 形細(xì)胞瘤及正常腦組織中的表達(dá)情況。結(jié)果正常腦組織中未見 p53蛋白陽性表達(dá)，62例星形細(xì)胞瘤中共有26例腫瘤p53蛋白表達(dá)呈陽 性，二者差異有顯著性(X 2=4.872，PV 0.05 )，其中在I級星形細(xì) 胞瘤中陽性率為8.33%(1/12)， H級星形細(xì)胞瘤中陽

2、性率為 21.05%(4/19)，皿級間變性星形細(xì)胞瘤中陽性率為 60%(9/15)，W級 膠質(zhì)母細(xì)胞瘤中陽性率為75%(12/16)。結(jié)論 星形細(xì)胞瘤中p53蛋白 的表達(dá)與腫瘤的級別相關(guān)，分化程度越低，p53蛋白陽性表達(dá)率越高， 檢測p53有助于臨床判斷預(yù)后?！娟P(guān)鍵詞】 星形細(xì)胞瘤 抑癌p53基因 免疫組織化學(xué)【Abstract Objective To investigate therole of p53 duringthe proccess of the astrocytomaoccurre neeand cellproliferation,soas the clinicalsignif

3、icance.MethodsThepositiveexpressionof p53 proteinwere detected in thespecime ns of 62 cases of astrocytoma by S 擬 P immuno logical tech niq ue,asidewith 10 cases of no rmal bra in tissue. Then theexpressi onof p53prote inin these tissues wereanalysed.Results There were 26 cases positive expression o

4、f p53 protein in 62 astrocytoma specimens and no positiveexpressionof p53 protein in the normal brain tissue. It showed a significant diversity between the two groups(x 2=4.872,P v0.05). The positivepercentage was 8.33%(1/12) in grade Iastrocytomas,21.05%(4/19) in grade II astrocytomas,60%(9/15) in

5、grade III an aplastic astrocytomas(AA) and 75%(12/16) in grade IV glioblastoma multiforme(GBM).C on clusio n The results reveal a correlationbetween p53 proteinexpression andhistopathological typing and grading in astrocytomas. The degree of celldifferentiationis lower, the ratio andintensityof p53

6、expression is obviously higher, which can helpto evalue prog no sis.【Key words astrocytoma ; anti 擬 oncogene p53 ;immun ohistochemistry星形細(xì)胞腫瘤是顱內(nèi)最常見的腫瘤，約占膠質(zhì)瘤21.2 %51.6 %,因生長迅速，侵襲性強(qiáng)，與正常腦組織分界不清，治療棘手， 易復(fù)發(fā)。近年來，隨著研究的深入，人們認(rèn)識到作為重要的抑癌基因 之一的p53基因若發(fā)生突變，其基因編碼的突變p53蛋白具有促進(jìn)細(xì) 胞無序增殖，演變成腫瘤，并且滅活正常的p53蛋白。本實(shí)驗(yàn)采用免 疫組織化學(xué)染色

7、技術(shù)，檢測p53蛋白在星形細(xì)胞瘤中的表達(dá)。資料和方法1臨床資料 收集廣西醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院20042005年臨床和病理資料完整的星形細(xì)胞瘤 62例，其中男39例，女23例，年 齡1681歲，平均39 13.72歲。腫瘤部位：額葉18例，顳葉13 例，頂葉9例，枕葉5例，顳頂葉7例，小腦5例，腦干1例，脊髓 4例。所有病例術(shù)前均未經(jīng)放療和化療，所收集標(biāo)本均經(jīng)石蠟包埋處 理，每例石蠟標(biāo)本病理結(jié)果由兩名富有經(jīng)驗(yàn)的神經(jīng)病理學(xué)專家確診， 分級依據(jù)WHO200年中樞神經(jīng)系統(tǒng)腫瘤分類標(biāo)準(zhǔn)，包括I級星形細(xì)胞 瘤12例、H級星形細(xì)胞瘤19例，皿級間變性星形細(xì)胞瘤 15例， W級膠質(zhì)母細(xì)胞瘤16例。另收集10例

8、因重型顱腦損傷而行顱內(nèi)減 壓手術(shù)切除的正常腦組織制成石蠟標(biāo)本作為陰性對照。所有標(biāo)本均制 成厚4卩m連續(xù)組織切片，置于已經(jīng)過膠（APES的清潔載玻片上。2. 方法 采用免疫組化染色法（S擬P法），所有試劑均購自 福建邁新生物技術(shù)有限公司。切片經(jīng)烤片，脫蠟，梯度酒精水化，3% H2O2滅活內(nèi)源性過氧化物酶，磷酸鹽緩沖液（PBS沖洗，微波抗原 修復(fù)，10%E常山羊血清封閉，濕盒內(nèi)孵育在同一組織蠟塊所切的組 織切片分別加入p53單克隆抗體，PBS代替一抗作為空白對照，PBS 沖洗后滴加生物素標(biāo)記的二抗工作液 （抗小鼠），均置于濕盒內(nèi)，37C 孵育30分鐘，滴加鏈霉菌抗生物素?cái)M過氧化物酶（辣根過氧化物酶

9、）； DABS色劑顯色，蘇木素復(fù)染，鹽酸酒精分化，氨水中反藍(lán)；封片后 顯微鏡觀察結(jié)果。采用試劑公司提供的陽性組織切片作陽性對照，PBS 代替一抗作空白對照。正常腦組織標(biāo)本切片作為陰性對照。3. 結(jié)果判定 細(xì)胞內(nèi)出現(xiàn)棕黃色顆粒即定為陽性，無棕黃色 顆粒為陰性。每張切片選取具有代表性的腫瘤區(qū)域在高倍鏡下（X 400）隨機(jī)選擇5個(gè)以上視野，計(jì)數(shù)1000個(gè)腫瘤細(xì)胞，計(jì)陽性細(xì)胞百 分率，壞死區(qū)和血管內(nèi)皮細(xì)胞不被計(jì)算在內(nèi)。4. 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理根據(jù)實(shí)驗(yàn)資料的性質(zhì)，對于所得數(shù)據(jù)采用SPSS for Windows 13.0 統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行x 2檢驗(yàn)，Pv 0.05為差異有 統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)果1.p53在星形細(xì)胞瘤和正

10、常腦組織中的表達(dá)情況 p53在星形細(xì) 胞瘤和正常腦組織的表達(dá)率分別為 41.94%和0%經(jīng)卡方檢驗(yàn)，二者 差異有顯著性意義（X 2=4.872，Pv 0.05 ），見表1。p53在星形細(xì)胞 中的陽性表達(dá)見圖1。表1 p53在星形細(xì)胞瘤和正常腦組織的表達(dá)（略）注：X 2=4.872 : PV 0.05圖1 p53在星形細(xì)胞瘤中的陽性表達(dá)（X 400）（略）2.p53在各級別星形細(xì)胞瘤中的表達(dá)情況 星形細(xì)胞瘤級別 不同，p53蛋白陽性表達(dá)情況不同，差異有顯著性意義（x 2=18.161 , PV 0.01 ）。隨著星形細(xì)胞瘤級別的提高，陽性表達(dá)率增高，見表 2。表2星形細(xì)胞瘤中p53蛋白的陽性表達(dá)

11、情況（略）注：各級陽性率比較，X 2=18.161，PV 0.01討論現(xiàn)代分子生物學(xué)理論認(rèn)為，腫瘤的發(fā)生主要是由于原癌基因的激 活或抑癌基因的失活，造成細(xì)胞增殖周期的失控而形成。p53基因是抑癌基因的一種，定位于人17號染色體短臂上（17p13.1），有11個(gè) 外顯子和10個(gè)內(nèi)含子，起著防止腫瘤發(fā)生的作用，主要生物學(xué)功能 是對細(xì)胞增殖、凋亡、分化起負(fù)性調(diào)控作用，通過獨(dú)立和非獨(dú)立機(jī)制 確保細(xì)胞進(jìn)入有效的死亡程序過程，其他p53基因家族成員也能夠促 進(jìn)腫瘤細(xì)胞的程序性凋亡，這一作用與p53基因并行或協(xié)調(diào)1p53 可由于多種細(xì)胞應(yīng)激而激活，包括DNA損傷、組織缺氧和促有絲分裂 的腫瘤基因。p53基因

12、應(yīng)對細(xì)胞過多增殖而激活，其腫瘤抑制活力來 源于消除存在腫瘤基因表達(dá)的細(xì)胞2。在各種致癌因子作用下，p53基因發(fā)生突變后，失去野生型的各種生物功能，不能保持基因的穩(wěn)定性，不能夠發(fā)揮程序性凋亡作 用，從而促進(jìn)腫瘤的發(fā)生和抗藥性3。當(dāng)發(fā)生p53基因突變和雜合、 丟失、重排而失活時(shí)，常引起腫瘤的發(fā)生和發(fā)展4。Gil擬Perotin 等研究室管膜下區(qū)膠質(zhì)瘤發(fā)現(xiàn)p53缺失提供了該區(qū)細(xì)胞群全速或快速增殖的優(yōu)勢，這與迅速出現(xiàn)的變異相關(guān)，細(xì)胞數(shù)量和密度增加，當(dāng) 缺乏p53的誘變刺激時(shí)，導(dǎo)致細(xì)胞自我更新及分化功能受損的變化， 這可能是成人室管膜下區(qū)慢增殖細(xì)胞產(chǎn)生膠質(zhì)瘤的機(jī)制5。正常腦發(fā)育過程中神經(jīng)膠原控制途徑異常

13、，如神經(jīng)干細(xì)胞分化成星形細(xì)胞的 過程，可能導(dǎo)致多型性膠質(zhì)母細(xì)胞瘤形成，這些途徑包括生長因子介導(dǎo)的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑和細(xì)胞周期進(jìn)程的控制過程，例如pl曲CDK4： RB和AR曲!.MDM2p53途徑6。p53基因突變后其編碼的蛋白構(gòu)象也 發(fā)生了改變，半衰期延長，在細(xì)胞中穩(wěn)定性增加。由于其半衰期延長能 夠被免疫組化法檢測出來，因而可作為p53基因突變的間接指標(biāo)。本實(shí)驗(yàn)顯示p53蛋白陽性表達(dá)主要位于細(xì)胞核，免疫組織化 學(xué)呈棕黃色染色。p53蛋白陽性細(xì)胞呈局灶性、分散性不均勻分布。 正常腦組織中無p53蛋白陽性表達(dá)，而星形細(xì)胞瘤中p53蛋白陽性表 達(dá)率為41.94%,二者之間的差異有顯著性(x 2=4.87

14、2，Pv 0.05 )， 這進(jìn)一步證實(shí)了 p53在星形細(xì)胞瘤的發(fā)生中起重要作用。 隨著腫瘤分 級的增高，p53蛋白陽性細(xì)胞數(shù)表達(dá)率也增高(x 2=18.161,P v0.01), 這表明突變型的 p53基因的存在與星形細(xì)胞瘤的惡性程度有關(guān)。 Ganigi等回顧性分析54例年齡從9歲到15歲的部位不同的兒童多型性膠質(zhì)母細(xì)胞瘤，發(fā)現(xiàn)p53在53.7%病例中免疫組化反應(yīng)陽性，其 中主要是位于丘腦（75%）和大腦半球（62.2%）的多型性膠質(zhì)母細(xì)胞瘤， 其次是位于腦干的腫瘤（30%），而在小腦腫瘤不表達(dá) p53蛋白。與 p53陰性表達(dá)的腫瘤相比，p53陽性的的腫瘤具有高的Ml期1（Ki擬67） LI

15、（P=0.003 。p53和bcl擬2陽性表達(dá)的病人預(yù)后差， 并且p53在幕上腫瘤表達(dá)更多，認(rèn)為p53和bcl擬2陽性表達(dá)與不良 預(yù)后相關(guān)7。本實(shí)驗(yàn)中p53蛋白在多型性膠質(zhì)母細(xì)胞瘤中的表達(dá)率 比Ganigi的結(jié)果略高，可能是因?yàn)檫x取病例的年齡段不同，腫瘤部 位不同的原因也不能排除，本實(shí)驗(yàn)的病例年齡跨度大，多位于幕上。Deb等認(rèn)為多型性膠質(zhì)母細(xì)胞瘤生存期（中位數(shù)）為 1012月，超 過3年到5年的很少，他研究6例平均生存時(shí)間達(dá)9年（范圍515 年）多型性膠質(zhì)母細(xì)胞瘤，發(fā)現(xiàn)其中的5個(gè)病例中有4個(gè)p53蛋白免 疫表達(dá)呈陽性，MI1LI平均為12% （范圍6%20%）,認(rèn)為對于有 少突膠質(zhì)細(xì)胞和（或者

16、）巨細(xì)胞組成的年輕的病人，包括有增殖指數(shù) 和p53表達(dá)的，應(yīng)該謹(jǐn)慎的評價(jià)預(yù)后，這部分病人可能有預(yù)后的不確 定性8?？梢姡琾53對于星形細(xì)胞瘤的腫瘤分級有一定的幫助，可 作為判斷星形細(xì)胞瘤惡性程度及預(yù)后的指標(biāo)?！緟⒖嘉墨I(xiàn)】1 Fridman JS,Lowe SW.Control of apoptosis by p53J .Oncogene,2003, 22（56）: 9030-9040.2 LoweSW.Activation of p53 by oncogenes J .EndocrRelat Cancer,1999,6(1):45-48.3 Afshar GJelluma N,Yang X,e

17、t al. Radiation-induced caspase-8 mediates p53-i ndepe ndent apoptosis in glioma cellsJ .Cancer Res,2006, 66(8):4223-4232.4 Soussi T.Role of p53 gene in human malignant tumous.A major discovery in on cology J .Rev Prat,1993,43(19):2531-2535.5 Gil-Perotin S,Marin-Husstege M,Li J, et al.Lossof p53 in duces cha nges in the behavior of subve ntricular zonecells: implicatio n for the gen esis of glial tumors J .JNeurosci, 2006, 26(4):1107-1116.6 Hulleman E,Helin K.Molecularmechanisms ingliomagenesis J .Adv Cancer Res, 2005, 94: 1-27.7 Ganigi PM,Santosh V,An