實(shí)驗(yàn)三離體蛙心灌流ppt課件

1、實(shí)驗(yàn)三 電刺激和化學(xué)因素對心臟活動的影響,1,一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?1.學(xué)習(xí)離體蛙心灌流方法。 2.觀察在心臟活動周期內(nèi)給予刺激所引起的期前收縮和代償間歇。 3.觀察Na+、K+、Ca2+、Adr（腎上腺素）、Ach（乙酰膽堿）對心臟活動的影響，理解內(nèi)環(huán)境理化因素相對恒定對維持心臟正常活動的重要性。,2,1、心肌的生理特性： 2、兩棲類動物的心起搏點(diǎn)： 3、心肌興奮性的周期性變化：,二、實(shí)驗(yàn)原理,自律性、興奮性、傳導(dǎo)性、收縮性。,靜脈竇。,有效不應(yīng)期； 相對不應(yīng)期； 超常期。,3,有效不應(yīng)期 = 收縮期 + 舒張?jiān)缙?期前收縮：給予心室肌一次有效刺激，產(chǎn)生一次正常節(jié)律以外的收縮反應(yīng)，該收縮先于下一次正

2、常竇房結(jié)興奮引起的收縮。,4,1、心臟的正常節(jié)律性活動需要一個(gè)適宜的內(nèi)環(huán)境（離子濃度、pH等），內(nèi)環(huán)境的變化直接影響到心臟的正常節(jié)律性活動。 2、因此可用人工灌流的方法，觀察灌流液成分的改變對離體心臟活動的影響。 無Ca2+任氏液； 任氏液（1% KCl；1% CaCl2；2% CaCl2)。,二、實(shí)驗(yàn)原理,5,1、神經(jīng)調(diào)節(jié)：在體心臟受交感神經(jīng)和迷走神經(jīng)的雙重支配。 交感神經(jīng)末梢釋放NE（去甲腎上腺素），使心肌收縮力加強(qiáng)，傳導(dǎo)速度加快，心率加快，即產(chǎn)生正性變時(shí)、變力、變傳導(dǎo)作用； 迷走神經(jīng)末梢釋放Ach（乙酰膽堿），使心肌收縮力減弱，心肌傳導(dǎo)速度減慢，心率減慢，即產(chǎn)生負(fù)性變時(shí)、變力、變傳導(dǎo)作用

3、 。 2、體液調(diào)節(jié) 0.01% Adr（腎上腺素） 0.01% Ach（乙酰膽堿）,心臟活動調(diào)節(jié),6,三、實(shí)驗(yàn)器材及藥品,實(shí)驗(yàn)對象：蟾蜍,7,實(shí)驗(yàn)藥品： 任氏液 無Ca任氏液 1 % KCl 1 % CaCl2 2 % CaCl2 0.01% Ach 0.01% Adr,實(shí)驗(yàn)器材： 張力換能器 蛙類手術(shù)器械一套 鐵支架 雙凹夾 蛙心套管 蛙心夾 刺激電極 滴管 燒杯,8,四、手術(shù)操作,1.取蟾蜍，破壞腦和脊髓、暴露心臟。,1,2,3,4,9,（腹面）,（背面）,（兩棲類動物心臟解剖結(jié)構(gòu)示意圖）,10,2. 蛙心插管（操作難點(diǎn)）,1,2,3,4,11,蛙心插管步驟小結(jié)：,1、在主動脈下穿線，備結(jié)

4、扎用；,2、在主動脈根部剪一斜切口；,3、插管裝任氏液，食指堵住上口；,5、將插管轉(zhuǎn)向插入心室（插入后有血液進(jìn)入插管），將絲線結(jié)扎固定在蛙心套管上。,4、將插管順著主動脈方向插入動脈圓錐；,（腹面）,12,3.游離蛙心,1、輕提起蛙心插管，剪斷動靜脈(勿損傷靜脈竇），將心臟離體，觀察插管內(nèi)液面高度是否隨著心臟的收縮和舒張而變化？,2、用滴管吸凈插管內(nèi)余血，加入新鮮任氏液，反復(fù)換洗數(shù)次，直至液體完全澄清。,3、始終保持灌流液面高度恒定（1-2cm）。,13,五、儀器連接,1,2,3,4,14,將插好離體心臟的套管固定在支架上，用蛙心夾夾住少許心尖部肌肉，再將蛙心夾上的系線與張力傳感器相連。,儀器

5、連接注意事項(xiàng),15,六、軟件操作,16,1.描記正常蛙心收縮曲線 曲線疏密：代表心跳頻率。 曲線的規(guī)律性：代表心室的節(jié)律性。 曲線的頂點(diǎn)水平：代表心室收縮的程度。 曲線的基線：代表心室舒張的程度。,七、實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目觀察與記錄,17,2.期前收縮和代償間歇,18,3.改變灌流液成分對心臟活動的影響,對心臟活動的影響 （心率、收縮力度、基線水平）,無鈣任氏液； 任氏液內(nèi)分別添加: ( 1% KCl； 1% CaCl2； 0.01% Ach； 0.01% Adr； 2% CaCl2； ）,19,（1）吸出插管內(nèi)全部任氏液，換入無鈣任氏液，觀察心縮曲線變化，待效應(yīng)明顯后，吸出灌流液，用新鮮任氏液換洗3次，

6、直至心縮曲線恢復(fù)正常。,20,（2）加1-2滴1% KCl于新?lián)Q入的任氏液中，觀察心縮曲線的變化。待出現(xiàn)效應(yīng)后，用新鮮任氏液換洗3次至曲線恢復(fù)正常。,21,（3）加入1-2滴1% CaCl2于新?lián)Q入的任氏液中，觀察心縮曲線的變化。待出現(xiàn)效應(yīng)后，用新鮮任氏液換洗3次至曲線恢復(fù)正常。,22,（4）加入1-2滴0.01% Adr于任氏液中，待效應(yīng)出現(xiàn)后，用任氏液換洗至曲線恢復(fù)正常。,23,（5）加入1-2滴0.01%Ach于任氏液中，待效應(yīng)出現(xiàn) 后，用任氏液換洗至曲線恢復(fù)正常。,24,（6）鈣僵： 加入4-5滴% CaCl2于新?lián)Q入的任氏液中，觀察心縮曲線的變化。,25,八、注意事項(xiàng),1.制備標(biāo)本時(shí)

7、，應(yīng)按指導(dǎo)試探著插管，避免損傷心臟(包括靜脈竇)。 2.每次換液時(shí)，插管內(nèi)的液面均應(yīng)保持恒定高度。 3.各種試劑的滴管不要混淆,以免影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。 4.藥物作用不明顯時(shí)，可適量增加。每次加藥，心搏曲線出現(xiàn)變化后立即將插管內(nèi)液體吸出。 5.滴加任氏液于心臟表面使之濕潤。 6.固定換能器時(shí)應(yīng)稍向下傾斜，以免自心臟滴下的液體進(jìn)入換能器內(nèi)造成短路。,26,觀看實(shí)驗(yàn)錄像,27,九、討論分析,分析各觀察結(jié)果的原因。 心肌有效不應(yīng)期長的生理意義。 心率過慢，期前收縮后是否有代償間歇？ 實(shí)驗(yàn)中套管內(nèi)液面為什么要保持相同高度？,28,部分結(jié)果分析,無鈣任氏液，心跳減弱 心肌收縮活動有Ca2+觸發(fā)，心肌肌漿網(wǎng)不發(fā)

8、達(dá)，因此其收縮強(qiáng)弱依賴于細(xì)胞外Ca2+濃度,灌流液中缺乏Ca2+，心肌細(xì)胞內(nèi)Ca2+大大減少，心肌興奮-收縮藕聯(lián)過程減弱，心肌收縮活動減弱,29,高K+任氏液，心跳明顯減弱甚至停跳于舒張狀態(tài),部分結(jié)果分析,K+與Ca2+有競爭性拮抗作用。細(xì)胞外K+濃度增加可抑制細(xì)胞膜對Ca2+的轉(zhuǎn)運(yùn)，從而使進(jìn)入胞內(nèi)的Ca2+減少，心肌興奮-收縮藕聯(lián)過程減弱，心縮力降低甚至停于舒張狀態(tài)。,30,高Ca2+，心縮加強(qiáng)，舒張不完全，甚至停于收縮狀態(tài),部分結(jié)果分析,心肌舒縮活動取決于胞內(nèi)Ca2+濃度，當(dāng)Ca2+升高到0.01mM，肌鈣蛋白可結(jié)合足夠Ca2+發(fā)生構(gòu)型改變而觸發(fā)心肌收縮；當(dāng)胞內(nèi)Ca2+濃度降到0.0001

9、mM時(shí)則可解離發(fā)生心肌舒張。高Ca2+使肌鈣蛋白與Ca2+不能解離而造成心肌持續(xù)收縮。,31,部分結(jié)果分析,腎上腺素，心臟正性作用并且舒張完全,1.腎上腺素與心肌細(xì)胞膜受體結(jié)合，使心肌細(xì)胞膜上腺苷酸環(huán)化酶活化作用于ATP產(chǎn)生cAMP,cAMP的作用： （1）激活Ca2+內(nèi)流； （2）肌漿網(wǎng)釋放Ca2+ 因此心肌收縮加強(qiáng),2.腎上腺素使Ca2+泵活動增強(qiáng)，肌漿網(wǎng)攝取Ca2+向細(xì)胞外轉(zhuǎn)運(yùn)，胞內(nèi)Ca2+減少，心肌舒張過程加快，舒張完全,32,乙酰膽堿，心縮減弱，心率減慢，興奮傳導(dǎo)速度變慢,部分結(jié)果分析,乙酰膽堿與心肌M受體結(jié)合：,1. K+通透性增加：,（1）動作電位2，3期縮短，Ca2+內(nèi)流減少心縮力減弱；,（2）