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1、實(shí)驗(yàn)八 細(xì)胞融合- 小鼠骨髓瘤SP2/0細(xì)胞與小鼠脾細(xì)胞融合,一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?了解細(xì)胞融合的原理 掌握細(xì)胞融合的基本方法,細(xì)胞融合的概念,二、實(shí)驗(yàn)原理,病毒誘導(dǎo)融合 聚乙二醇誘導(dǎo)融合 電場(chǎng)誘導(dǎo)融合 激光誘導(dǎo)融合,常用的誘導(dǎo)融合手段有哪些,二、實(shí)驗(yàn)原理,細(xì)胞融合的概念,三、儀器、材料與試劑,儀器： 離心機(jī)、 CO2培養(yǎng)箱、超凈臺(tái)、 37恒溫水浴鍋、顯微鏡、血球計(jì)數(shù)板、解剖器械、燒杯、載玻片、蓋玻片、離心管。 材料： SP2/0細(xì)胞、昆明小鼠 試劑： Hanks液、45%PEG ，75%乙醇,四、實(shí) 驗(yàn)步驟,1）小鼠摘眼球放血（可不做）, 拉頸 處死，浸泡在75%酒精內(nèi)，35min （2）無菌取脾臟

2、， Hanks液洗一次，脾臟剪碎，培養(yǎng)液洗 一次，過不銹鋼篩網(wǎng)，轉(zhuǎn)移至10mL離心管 （3）800g 離心10分鐘，取沉淀細(xì)胞用Hanks液洗2次（每次加入5mL溶液，輕輕混勻800g 離心10分鐘,4）細(xì)胞計(jì)數(shù)，待用。 （5）取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)骨髓瘤細(xì)胞， 800g 離心10分鐘，取沉淀細(xì)胞用Hanks液洗2次（每次加入5mL Hanks液，輕輕混勻800g 離心10分鐘） （6）細(xì)胞計(jì)數(shù)，待用。 （7）將骨髓瘤細(xì)胞(105-6)與脾細(xì)胞(106-7)按1：10比例混合在一起800g 離心10分鐘，棄上清，用吸管吸凈殘留液體，以免影響聚乙二醇（PEG）濃度。輕輕彈擊離心管底，使細(xì)胞沉淀略松動(dòng)。 （每組混合兩份樣品) （8） 90s內(nèi)加入37預(yù)溫的1mL 45%PEG（分子量4000）或Hanks液，邊加邊輕微搖動(dòng)。37水浴90s。 （9）加37預(yù)溫的Hanks液8mL以終止PEG作用 （10） 800g 離心10分鐘，棄上清，加入1mL Hanks液，鏡檢,實(shí)驗(yàn)報(bào)告,1. 觀察對(duì)照組,辨認(rèn)兩種細(xì)胞,看兩種細(xì)胞是否融合。 2.

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