復(fù)方新諾明在鱸魚體內(nèi)的藥物代謝動(dòng)力學(xué)研究

1、研究報(bào)告R EPORTSC HARACTERISTICSOF SWAN LAKE TIDAL WATERL EVELS , S HANDO NG PENINS ULAXUE Yun chuanJ IA Jian junGAO Shu( Institute of Oceanology ,Chinese Academy of Sciences ,Qingdao 266071)Received : Feb. 20 ,2000Key Words : Tidal inlet , Harmonic analysis ,Seasonal changes , Swan LakeAbstract2Two tid

2、al water level data sets , each with a length of 29 days , were obtained from the Swan lake using Aanderaa2y2 222222self recording tide gauges( Model WLR 8 and WLR 7) during November December 1998 and August September 1999.Harmonic analysis of the data was undertaken with the method developed by the

3、 Proudman Oceanographic Laboratory. The results show that the monthly average water level in winter is 0. 34 m lower than in summer. The tides in the Swan Lake areof a mixed type dominated by semidiurnal tides , and there exist phase lags in the major constituents between winter and summer. Furtherm

4、ore , shallow water overtides are significant in comparison with the major constituents , and non tidalconstituents(caused by storms etc. ) in winter are more remarked than in summer.The seasonal variations in the tidesdescribed above mabe caused by monsoon factors.(本文編輯:李本川)復(fù)方新諾明在鱸魚體內(nèi)的藥物代謝動(dòng)力學(xué)研究 *王

5、群孫修濤劉德月劉 琪李 健(中國(guó)水產(chǎn)科學(xué)研究院黃海水產(chǎn)研究所農(nóng)業(yè)部海水增養(yǎng)殖與病害重點(diǎn)開放實(shí)驗(yàn)室青島266071)提要 首次報(bào)道了用高效液相色譜法研究鱸魚口服復(fù)方新諾明的藥物代謝動(dòng)力學(xué)特征。結(jié)果表明 , 鱸魚單次口服劑量為 200 10 - 6的復(fù)方新諾明后 , 其血液藥物濃度2時(shí)間數(shù)據(jù)符合一室開放動(dòng)力學(xué)模型。藥物代謝動(dòng)力學(xué)參數(shù):吸收速率常數(shù)( ka) 為 0. 096 h - 1 、達(dá)峰時(shí)間( Tmax) 為21. 479 h ,峰濃度( Cmax) 為 50. 768g/ ml 、吸收半衰期( T(1/ 2 ) Ka) 為 7. 250 h、消除半衰期( T(1/ 2 ) K)為 38.

6、299 h ,藥時(shí)曲線下面積( AUC) 為 4 138. 400 ( mg h) / L 。鱸魚口服藥物 0. 5 h 后在肌肉、血液、肝臟、腎臟 4 種組織中就可以檢測(cè)到藥物的存在。藥物在 16 h 采樣點(diǎn) 4 種組織里的濃度達(dá)最高。藥物在肌肉、血液、肝臟中的平均回收率約 80 %90 % , 該方法的檢測(cè)限可達(dá) 0. 05 10 - 6 。關(guān)鍵詞復(fù)方新諾明 ,藥物代謝動(dòng)力學(xué) ,鱸魚 常用磺胺類藥物有十幾種 ,目前國(guó)外已研究了磺胺間甲氧嘧啶 ( SMM) 在養(yǎng)殖鰻鱺、磺胺22 , 62二甲氧嘧啶( SDM) 在虹鱒、大鱗大馬哈魚、斑點(diǎn)叉尾、大西洋鮭及對(duì)蝦 , 磺胺嘧啶 ( SDZ) 在大鱗

7、大馬哈魚、鮭魚體內(nèi)的藥物代謝動(dòng)力學(xué)1 , 國(guó)內(nèi)尚未見有關(guān)磺胺類藥物在水產(chǎn)動(dòng)物體內(nèi)藥物代謝動(dòng)力學(xué)的報(bào)道。復(fù)方新諾明 ( SMZ TMP = 5 1 , Sulfamethazine Trimethoprin = 5 1) 屬于中效磺胺類藥物與磺胺增效劑的復(fù)方制* 農(nóng)業(yè)部科研項(xiàng)目“魚用藥物代謝動(dòng)力學(xué)及藥物殘留的研究”。收稿日期:2000207213 ;修回日期:2000208225Marine Sciences/ Vol . 25 ,No . 2/ 2001351. 2. 4研究報(bào)告R EPORTS劑 ,抗菌譜廣 ,抗菌效果好 ,目前廣泛地應(yīng)用在國(guó)內(nèi)水產(chǎn)養(yǎng)殖上2 , 僅參考藥效學(xué)數(shù)據(jù)或憑經(jīng)驗(yàn)制定給

8、藥方案是不科學(xué)的 , 作者進(jìn)行復(fù)方新諾明的藥物代謝動(dòng)力學(xué)研究 , 目的是了解該種藥物在鱸魚體內(nèi)的藥物代謝規(guī)律 ,為防治魚類疾病的合理用藥(藥物的劑量、用藥的次數(shù)和周期) 提供理論依據(jù)。1 材料與方法1. 1材料1. 1. 1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 健康鱸魚 , 體重約 200 g , 飼養(yǎng)于青島麥島實(shí)驗(yàn)基地。水溫為 16 1 , 充氣 , 流水 ,每日投喂新鮮雜魚。1. 1. 2 試驗(yàn)藥品 復(fù)方新諾明標(biāo)準(zhǔn)品 , 純度 99. 5 % , 中國(guó)獸藥監(jiān)察所生產(chǎn); 原藥: 復(fù)方新諾明藥片 , 山東新華制藥股份公司生產(chǎn) , 批號(hào) : ( 1995) 032081。1. 1. 3 化學(xué)藥品和試劑 無水硫酸鈉 (A.

9、 R) 、二氯甲烷 (A. R) 、冰醋酸 (A. R) 、正己烷 (A. R) 、乙腈( HPLC) 。1. 1. 4實(shí)驗(yàn)儀器 Waters 600 型高效液相色譜儀 , 包括 Waters 600 型控制器和 WatersTM 600 泵 , Wa2tersTM 486 型紫外吸收檢測(cè)器 ; WatersTM 474 型掃描熒光檢測(cè)器 ,486 微機(jī)數(shù)據(jù)處理系統(tǒng) ,電子天平、冷凍離心機(jī)、漩渦振蕩器、冰箱、氮?dú)馄?、恒溫水浴鍋、勻漿機(jī)等。1. 2方法1. 2. 1 標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制 準(zhǔn)確稱取 20 mg 磺胺甲口惡唑 ( SMZ) 和 20 mg 甲氧芐啶 ( TMP) 溶于 100 ml 流動(dòng)

10、相中 ,配成 100g/ ml 的母液 ,再依次稀釋成 50 , 25 ,10 ,5 ,1g/ ml 的標(biāo)準(zhǔn)溶液 ,于冰箱中 4 保存。1. 2. 2 樣品的處理 準(zhǔn)確稱取 1 g 組織 (肌肉、肝臟和腎臟) 或準(zhǔn)確吸取 1 ml 血液 , 加入少許無水硫酸鈉 ,再加入 3 ml 二氯甲烷 ,16 000 r/ min 勻漿 10s ,再用 3 ml 二氯甲烷清洗刀頭 , 合并兩次提取液 , 振蕩 1 min , 5 000 r/ min 離心 10 min , 吸取全部上清液 , 在 40恒溫水浴下用氮?dú)獯蹈?, 殘?jiān)?1 ml 流動(dòng)相溶解 ,加入 1 ml 正己烷去脂肪 ,下層液過 0.

11、 22m 的微孔濾膜 ,過濾后的液體可進(jìn)行高效液相色譜測(cè)定。1. 2. 3 色譜條件 柱子: C18 ODS 柱; 柱溫: 25 ; 流動(dòng)相 乙腈 水 冰醋酸 = 20 80 0. 5 ( V/ V/ V) ; 流速: 1. 0 ml/ min ; 進(jìn)樣量: 10l ; 紫外檢測(cè):波長(zhǎng) 272 nm。標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備將配制的 1 , 2 , 5 , 10 ,25 ,50g/ ml 的標(biāo)準(zhǔn)品溶液用 HPLC 儀測(cè)其峰面積 ,然后以峰面積為縱坐標(biāo) , 濃度為橫坐標(biāo)做標(biāo)準(zhǔn)曲線 , 求出回歸方程和相關(guān)系數(shù)。1. 2. 5 回收率的確定 實(shí)驗(yàn)分兩組 , 一組將空白組織 (肌肉、肝臟和血液) 按表加入標(biāo)準(zhǔn)液

12、 , 然后按照樣品的處理程序進(jìn)行處理; 另一組將未加入標(biāo)準(zhǔn)液的空白組織按照樣品的處理程序進(jìn)行處理 , 然后再按表 1 加入標(biāo)準(zhǔn)液。按照公式進(jìn)行計(jì)算: 回收率( %) = (處理前加入標(biāo)準(zhǔn)液樣品的測(cè)定值/ 處理后加入標(biāo)準(zhǔn)液樣品的測(cè)定值) 100 %表 1 復(fù)方新諾明回收率的測(cè)定所加試劑的量Tab. 1Quantity of reagent in determining recovery of sul2famethazine實(shí)驗(yàn)組空白組織量 標(biāo)準(zhǔn)液濃度 標(biāo)準(zhǔn)液體積(g 或 ml)(g/ ml)( ml)111 . 01215 . 013110 . 014150 . 01空白1/1. 2. 6 給藥

13、及取樣 將實(shí)驗(yàn)用魚隨機(jī)分組 , 每組 5 尾 ,單次口服給藥(將藥物配成懸濁液 ,口灌) 。按不同的時(shí)間間隔取樣(肌肉、肝臟、腎臟和血液) ,每一時(shí)間點(diǎn)取一組魚。復(fù)方新諾明的實(shí)驗(yàn)用魚為鱸魚 , 給藥劑量為 200 10 - 6 , 取樣的時(shí)間點(diǎn)為 0. 5 , 1 , 2 , 4 , 8 , 16 ,32 ,48 ,72 h。1. 2. 7 數(shù)據(jù)處理 根據(jù)血液藥物濃度 2 時(shí)間 ( Ci2 Ti) 數(shù)值 , 采用 MCPKP 藥代動(dòng)力學(xué)程序進(jìn)行藥代動(dòng)力學(xué)分析和處理 , 該程序可自動(dòng)選擇最佳模型 , 并將其進(jìn)行非線性最小二乘法擬合 , 計(jì)算出藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)。2 結(jié)果與討論2. 1線性范圍及回收率

14、SMZ 和 TMP 在 150g/ ml 濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好 , 相關(guān)系數(shù) r 分別為 0. 996 642 和 0. 999 337 , 回歸方程 : C = 3. 126 25 10 - 4 A - 0. 479 301 和 C =1. 037 10 - 3 A - 0. 788 978 ( C 為濃度, A 為峰面積) 。復(fù)方新諾明以 150g/ ml 4 個(gè)水平 , 分別測(cè)其在肌肉、血液、肝臟中的回收。表 2 SMZ/ TMP 在 3 種組織中的回收率Tab. 2Recoveries of SMZ/ TMP in three tissues濃度回收率( %)(g/ ml)肌肉血液肝

15、臟192 . 2397 . 8594 . 7098 . 6090 . 4695 . 825 89 . 3594 . 87 92 . 1796 . 98 87 . 6890 . 111083 . 3991 . 15 90 . 1690 . 76 85 . 8386 . 845079 . 6982 . 02 84 . 9985 . 03 77 . 1281 . 0736海洋科學(xué)/ 2001 年/ 第 25 卷/ 第 2 期研究報(bào)告2. 2復(fù)方新諾明在組織中的濃度將高效液相色譜測(cè)得的復(fù)方新諾明的峰面積代入各自的標(biāo)準(zhǔn)曲線所繪制的回歸方程 , 就可以求出藥物在各組織中濃度值。表 3 列出鱸魚口服復(fù)方新諾

16、明后 , 4 種組織中的藥物濃度。鱸魚單次口服劑量為 200 10 - 6的復(fù)方新諾明 0. 5 h 后 ,S M Z 和 TMP 在肌肉、血液、肝臟、腎臟中的藥物濃度分別為 3. 60 ,1. 09 ,1. 21 ,0. 348g/ ml 和 2. 39 ,1. 79 ,5. 74 ,1. 48g/ ml 。SMZ 和 TMP 在復(fù)方新諾明中的比例為 5 1 ,但在最初的采樣點(diǎn) TMP 的藥物濃度卻比 S M Z 高 , 說明后者的吸收比前者迅速而且好 , 兩種成分在 16 h 的采樣點(diǎn)測(cè)得濃度最高 , 分別為 59. 09 , 60. 83 , 20. 88 ,29. 75g/ ml 和

17、29. 32 , 30. 75 , 38. 07 , 34. 10g/ ml , 根據(jù)數(shù)據(jù)可知 TMP 在 4 種組織中的濃度差別不大 , 而R EPORTS表 5SMZ 的藥物代謝動(dòng)力學(xué)參數(shù)Tab. 5Pharmacokinetic parameters of SMZ參數(shù)單位SMZD10 - 6200 . 00Cog/ ml74 . 882Kah - 10 . 096Kh - 10 . 018T (1/ 2)Kh7 . 250aT (1/ 2)Kh38 . 299T maxh21 . 479Cmaxg/ ml50 . 768A U C( mg. h) / L4 138 . 400D :劑量,

18、 C0 :初始藥物濃度 ; T max : 單劑量給藥后出現(xiàn)最高血藥濃度時(shí)間; Ka :表觀一級(jí)吸收速率常數(shù); T (1/ 2) Ka :吸收半衰期; K :藥物自體內(nèi)消除一級(jí)速率常數(shù); T (1/ 2) K :消除半衰期 ; Cmax :單劑量給藥后的最高血藥濃度 ; A U C :血藥2時(shí)間曲線下總面積。SMZ 在血液和肌肉中的濃度卻是肝臟和腎臟中的23 倍 , 這與一般的藥物在肝臟和腎臟中的濃度比在肌肉和血液中的濃度大恰恰相反 , 原因是磺胺類藥物被組織吸收后 , 在組織中有一個(gè)乙酰化的過程 , 乙?；首罡叩牟课皇歉闻K和腎臟 , 所以 SMZ 在肝臟和腎臟中的濃度比在肌肉和血液中低。藥

19、物代謝到 72 h , SMZ 和 TMP 在組織中的濃度仍然很高 , 分別為 26. 06 ,12. 14 ,7. 86 ,5. 98g/ ml 和 16. 17 ,22. 49 ,22. 02 ,22. 84g/ ml , TMP 在肝臟和腎臟中的濃度遠(yuǎn)大于 SMZ 在兩種組織中的濃度 ,這與 SMZ 在肝臟和腎臟中的乙?；视泻艽箨P(guān)系。2. 3 藥動(dòng)學(xué)模型及參數(shù)SMZ 的血液藥物濃度2時(shí)間數(shù)據(jù)符合一室開放動(dòng)力學(xué)模型。表 5 列出了鱸魚口服 SMZ 的藥動(dòng)學(xué)參數(shù)。鱸魚單次口服劑量為 200 10 - 6的復(fù)方新諾明 ,其主要成分磺胺甲唑( SMZ) 的血清 ka , Tmax ,表 3SM

20、Z 在 4 種組織中的濃度Tab. 3Concentrations of SMZ in four tissues時(shí)間濃度(g/ ml)( h)肌肉血液肝臟腎臟0 . 53 . 60 2 . 431 . 09 0 . 671 . 21 0 . 650 . 35 0 . 0519 . 96 2 . 616 . 22 1 . 5613 . 02 6 . 444 . 13 0 . 89212 . 47 2 . 329 . 17 4 . 3814 . 41 4 . 516 . 17 1 . 86419 . 82 2 . 289 . 08 5 . 2215 . 71 7 . 3110 . 00 2 . 3

21、9834 . 35 12 . 3117 . 85 7 . 7319 . 67 5 . 6112 . 97 6 . 431659 . 09 11 . 5760 . 83 12 . 4220 . 88 8 . 3829 . 75 16 . 113243 . 99 18 . 6822 . 90 4 . 5312 . 29 7 . 8811 . 37 2 . 954836 . 77 5 . 5216 . 52 4 . 589 . 55 3 . 918 . 07 2 . 267226 . 06 8 . 3212 . 14 4 . 547 . 86 2 . 805 . 98 2 . 10表 4TMP 在

22、4 種組織中的濃度Tab. 4Concentrations of TMP in four tissues時(shí)間濃度(g/ ml)( h)肌肉血液肝臟腎臟0 . 52 . 39 0 . 391 . 79 0 . 635 . 74 1 . 441 . 48 0 . 6614 . 84 1 . 852 . 65 0 . 9222 . 94 8 . 372 . 47 0 . 9627 . 41 2 . 6015 . 75 9 . 0725 . 43 8 . 609 . 01 2 . 3049 . 15 3 . 4922 . 81 13 . 5228 . 54 11 . 4615 . 83 2 . 958

23、13 . 01 2 . 5427 . 52 12 . 9332 . 05 10 . 9922 . 08 8 . 541629 . 32 4 . 1830 . 75 15 . 1138 . 07 11 . 2134 . 10 10 . 203226 . 22 9 . 0830 . 19 15 . 9134 . 67 19 . 1242 . 22 13 . 514821 . 72 9 . 6825 . 39 8 . 1127 . 24 10 . 1431 . 85 14 . 977216 . 17 6 . 0722 . 49 6 . 4922 . 02 8 . 1522 . 84 7 . 91Cm

24、ax分別為 0. 096 h - 1 , 21. 479 h , 50. 768g/ml , 血清T(1/ 2 ) Ka為 7. 250 h ,T(1/ 2 ) K38. 299 h ,說明復(fù)方新諾明的吸收、分布和消除速度都很慢。2. 4復(fù)方新諾明的臨床應(yīng)用本文所采用的方法為進(jìn)出口商品檢測(cè)所用的方法 , 檢測(cè)限可達(dá) 0. 05g/ ml 。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明鱸魚單次口服劑量 200 10 - 6的復(fù)方新諾明 72 h 后 , 其主要成分 SMZ 在肌肉、血液、肝臟和腎臟中的含量分別為 26. 06 , 12. 14 , 7. 86 ,5. 98g/ ml 。根據(jù)本實(shí)驗(yàn)室的結(jié)果 ,SMZ代謝 72 h

25、 后 ,組織中的藥物濃度均超過海水養(yǎng)殖常見致病菌的最小抑菌濃度( 0. 41. 6g/ ml) ,漁藥手冊(cè)規(guī)定在 100 10 - 6200 10 - 6的劑量下連續(xù)服用 5 d 可治療一般的細(xì)菌性疾病4 , 根據(jù)本實(shí)驗(yàn)的結(jié)果 , 建議減少藥物使用的劑量或者隔 1 d 服用 1 次藥物 , 否則會(huì)使藥物在魚體內(nèi)殘留過大 , 對(duì)食用者造成威脅。FDA 在 1985 年規(guī)定 SMZ 在可食性動(dòng)物組織中的殘留量不得超過 0. 1Marine Sciences/ Vol . 25 ,No . 2/ 200137g/ ml , Regist 1988 年報(bào)道 SMZ 能夠?qū)е氯祟惖募谞钕侔?, 因此提高

26、藥物的檢測(cè)水平、降低殘留量標(biāo)準(zhǔn)具有重要的現(xiàn)實(shí)意義。參考文獻(xiàn)研究報(bào)告R EPORTS1 王 群。海洋科學(xué)。1999 ,6 :33362 黃琪琰。魚病防治實(shí)用技術(shù)。北京:中國(guó)農(nóng)業(yè)出版社 , 1999 。4024033 農(nóng)業(yè)部漁藥手冊(cè)編撰委員會(huì)。漁藥手冊(cè)。北京:中國(guó)科學(xué)技術(shù)出版社 ,1998 。183PHARMACO KINETICS STUDY OF S UL FAMETHAZINE IN PERC HWANG QunSUN Xiu taoLIU De yueLIU QiLI Jian( Yellow Sea Fisheries Research Institute , Qingdao266071

27、)Received :July. , 13 , 2000Key Words :Sulfamethazine , Perch , PharmacokineticsAbstractThis article first reports Pharmacokinetic of Sulfamethazine in Perch after oral administration by high performanceliquid chromatography . The result demonstrates : dates of SMZ concentrations versus time were co

28、nformed to one compart ment open model after a single oral administration at a dose of 200 10 - 6 , and the primary parameters were shown bellow: Absorption rate constant(Ka)was 0. 096 h- 1. Time when maxium concentration was obtained( max)was 21. 479 h.T22Maxium concentration ( Cmax) was 50. 768g/ ml , Absorption half life ( T(1/ 2 ) Ka) was 7. 250 h , Elimination half life ( T(1/ 2 ) K)was 38. 299 h , Area under serum concentration