




版權(quán)說(shuō)明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內(nèi)容提供方,若內(nèi)容存在侵權(quán),請(qǐng)進(jìn)行舉報(bào)或認(rèn)領(lǐng)
文檔簡(jiǎn)介
1、primer 6.0 引物設(shè)計(jì)教程首先,需要知道基因序列,如,我們要設(shè)計(jì)rat的 CK18 mRNA檢測(cè)的引物,我們先到/ 這個(gè)網(wǎng)站查找CK18 mRNA的基因序列,首先選擇Nucleotide 然后在搜索欄輸入基因序列號(hào)(如果不知道基因序列號(hào)則輸入 rat CK18)如圖然后點(diǎn)擊搜索,就會(huì)出現(xiàn)rat CK18 mRNA的基因序列基因序列號(hào)現(xiàn)在,往下拉就會(huì)看到基因序列將這個(gè)序列復(fù)制到primer 6.0中就可以進(jìn)行引物設(shè)計(jì),我們先打開(kāi)peimer 6.0破解版打開(kāi)會(huì)出現(xiàn)這個(gè)對(duì)話框,關(guān)閉即可點(diǎn)擊新建將序列復(fù)制至這個(gè)對(duì)話框點(diǎn)擊 Add點(diǎn)擊這個(gè)圖標(biāo)
2、出現(xiàn)下面對(duì)話框,這里可以選擇引物在序列哪些地方設(shè)計(jì)引物,我一般不更改,也就是引物可以設(shè)計(jì)在整個(gè)序列,你也可查一下序列有幾個(gè)區(qū),一般引物應(yīng)該跨兩個(gè)區(qū)。之后點(diǎn)擊 primer Parameters這里可以設(shè)置退火溫度、引物長(zhǎng)度、產(chǎn)物長(zhǎng)度等,我一般只是更改產(chǎn)物長(zhǎng)度,我一般設(shè)為100到300bp,因?yàn)槿绻a(chǎn)物太大,在染料法中會(huì)影響擴(kuò)增效率,之后點(diǎn)擊 Search 之后出現(xiàn)下面對(duì)話框點(diǎn)擊OK 出現(xiàn)下面引物序列這個(gè)時(shí)候引物設(shè)計(jì)完成,我們需要對(duì)引物進(jìn)行驗(yàn)證,我一般到NCBI(/)上驗(yàn)證,進(jìn)去后點(diǎn)擊最下面菜單中的BLAST點(diǎn)擊這個(gè)圖標(biāo)點(diǎn)擊這個(gè)圖標(biāo)之后點(diǎn)擊Pr
3、imer-BLAST將前引物復(fù)制到圖中位置在這輸入前引物將后引物復(fù)制(注復(fù)制前引物用 Copy Sense Primer,復(fù)制后引物用Copy Anti-sence Primer 點(diǎn)擊右鍵即出現(xiàn)復(fù)制菜單)后引物放到下圖位置在這輸入后引物之后將圖中位置的homo sapiens 刪除后輸入rat出現(xiàn)上圖對(duì)話框時(shí)選擇Rattus(taxid:10114)之后點(diǎn)擊Get Primers點(diǎn)這里這時(shí)會(huì)出現(xiàn)下圖情況,因?yàn)榉?wù)器在國(guó)外,請(qǐng)耐心等待之后出現(xiàn)他能擴(kuò)增很多大鼠基因,如CK18 產(chǎn)物為126bp,Ahsg 產(chǎn)物795bp,但是除了CK18 其他基因擴(kuò)增是產(chǎn)物較大,而且有點(diǎn)突變,所以在PCR反應(yīng)時(shí)這些東西是擴(kuò)增不出來(lái)的,也就是說(shuō)這個(gè)引物的特異性不錯(cuò),在擴(kuò)增時(shí)只會(huì)擴(kuò)增出我們需要的CK18這個(gè)基因,所以這個(gè)引物我們就可以訂出去,找公司合成。有的時(shí)候這樣的引物也不一定就可以用,所以當(dāng)我們收到合成好的引物后,可以做一下預(yù)實(shí)驗(yàn),看這個(gè)引物是否真的可以用,在需要引物時(shí)我們也可以到文獻(xiàn)中查找,一般發(fā)表在全球著名雜志中的外文文獻(xiàn)里的引物都是
溫馨提示
- 1. 本站所有資源如無(wú)特殊說(shuō)明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請(qǐng)下載最新的WinRAR軟件解壓。
- 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請(qǐng)聯(lián)系上傳者。文件的所有權(quán)益歸上傳用戶所有。
- 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網(wǎng)頁(yè)內(nèi)容里面會(huì)有圖紙預(yù)覽,若沒(méi)有圖紙預(yù)覽就沒(méi)有圖紙。
- 4. 未經(jīng)權(quán)益所有人同意不得將文件中的內(nèi)容挪作商業(yè)或盈利用途。
- 5. 人人文庫(kù)網(wǎng)僅提供信息存儲(chǔ)空間,僅對(duì)用戶上傳內(nèi)容的表現(xiàn)方式做保護(hù)處理,對(duì)用戶上傳分享的文檔內(nèi)容本身不做任何修改或編輯,并不能對(duì)任何下載內(nèi)容負(fù)責(zé)。
- 6. 下載文件中如有侵權(quán)或不適當(dāng)內(nèi)容,請(qǐng)與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
- 7. 本站不保證下載資源的準(zhǔn)確性、安全性和完整性, 同時(shí)也不承擔(dān)用戶因使用這些下載資源對(duì)自己和他人造成任何形式的傷害或損失。
最新文檔
- C語(yǔ)言考試思維訓(xùn)練試題及答案2025年
- 2025年計(jì)算機(jī)四級(jí)備考?jí)毫υ囶}及答案
- 計(jì)算機(jī)二級(jí)JAVA應(yīng)用環(huán)境的配置與管理試題及答案
- ACCESS考試重要試題及答案分享
- 二級(jí)C語(yǔ)言語(yǔ)言基礎(chǔ)與進(jìn)階試題及答案
- 2024年高考數(shù)學(xué)一輪復(fù)習(xí)講練測(cè)專題3.3利用導(dǎo)數(shù)研究函數(shù)的極值最值講文含解析
- C語(yǔ)言數(shù)據(jù)結(jié)構(gòu)應(yīng)用實(shí)例試題及答案
- 用戶體驗(yàn)測(cè)試實(shí)施方案試題及答案
- 談判合同協(xié)議書(shū)范本圖片
- 護(hù)工合同協(xié)議書(shū)范本
- 醫(yī)院支出管理制度
- 歸檔文件目錄模板docx
- 診所安全消防履職清單范本
- 《駝鹿消防員的一天》課件
- 競(jìng)聘運(yùn)輸經(jīng)理演講稿
- CPK計(jì)算模板(雙邊)
- 浙江省杭州市濱江區(qū)2022-2023學(xué)年七年級(jí)下學(xué)期期末語(yǔ)文試卷(含答案)
- 誠(chéng)信教育主題班會(huì)
- 氯磺化聚乙烯生產(chǎn)工藝技術(shù)
- 桐廬縣2023年三下數(shù)學(xué)期末綜合測(cè)試試題含解析
- 裝飾施工階段安全檢查表完整
評(píng)論
0/150
提交評(píng)論