生物工程下游技術(shù)復(fù)習(xí)題及解答

1、一、名詞解釋 1、連續(xù)培養(yǎng)反應(yīng)器：不斷地往反應(yīng)器中加入營(yíng)養(yǎng)物，利用罐中的菌體增殖得到產(chǎn)物，并不斷采出。在良好的控制下，罐內(nèi)菌體的增殖速度可以與采出速度相同而達(dá)到穩(wěn)態(tài)。2、菌體比生長(zhǎng)速率（）：?jiǎn)挝粷舛染w在一定條件下引起的反應(yīng)速率, 其值反映了培養(yǎng)菌體增長(zhǎng)的能力, 受菌株及各種物理化學(xué)環(huán)境的影響. 表示為=dx/x.dt3、得率系數(shù)：兩種物質(zhì)得失之間的計(jì)量比。Yx/s,Yp/s4、貼壁培養(yǎng): 貼壁依賴(lài)性細(xì)胞在培養(yǎng)中要貼附于壁上才能迅速鋪展,開(kāi)始有絲分裂并迅速進(jìn)入對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期,這種培養(yǎng)方式就叫貼壁培養(yǎng).多數(shù)動(dòng)物細(xì)胞的培養(yǎng)都采取這種方式.5、蛋白質(zhì)的復(fù)性：包含體蛋白質(zhì)溶解于變性劑溶液中，呈變性狀態(tài)，所

2、有的氫鍵、疏水鍵全部被破壞，疏水側(cè)鏈完全暴露，但一級(jí)結(jié)構(gòu)和共價(jià)鍵不被破壞，當(dāng)除去變性劑后，一部分蛋白質(zhì)可以自動(dòng)折疊成具有活性的正確構(gòu)型，這一折疊過(guò)程稱(chēng)為蛋白質(zhì)復(fù)性。6、濃差極化：指在分離過(guò)程中，料液中的溶劑在壓力驅(qū)動(dòng)下透過(guò)膜，溶質(zhì)被截留，于是在膜表面與臨近膜面區(qū)域濃度越來(lái)越高。在濃度梯度作用下，溶質(zhì)由膜面向本體溶液擴(kuò)散，形成邊界層，使流體阻力與局部滲透壓增加，從而導(dǎo)致溶劑透過(guò)量下降。溶劑向膜面流動(dòng)引起溶質(zhì)向膜面的流動(dòng)，這種流動(dòng)如果與濃度梯度所驅(qū)動(dòng)的溶質(zhì)向本體溶液擴(kuò)散的速度平衡時(shí)，在膜面附近就形成一個(gè)穩(wěn)定的濃度梯度區(qū)，這一區(qū)域就稱(chēng)為濃度極化邊界層，這一現(xiàn)象稱(chēng)為濃差極化。濃差極化是一個(gè)可逆的過(guò)程；

3、7、膜污染：物料中的微粒、膠體粒子或溶質(zhì)大分子由于與膜存在物理化學(xué)相互作用或機(jī)械作用而引起的在膜表面或膜孔內(nèi)吸、沉積造成膜孔徑變小或堵塞，使膜產(chǎn)生透過(guò)流量與分離特性的不可逆變化的現(xiàn)象。8、排阻色譜（Size exclusion chromatography，SEC）：又稱(chēng)凝膠色譜或凝膠滲透色譜，是利用被分離物質(zhì)分子量大小的不同和在填料上滲透程度的不同，以使組分分離。9、分配色譜：是利用溶液中被分離物質(zhì)在兩相中分配系數(shù)不同，以使組分分離。其中一相為液體，涂布或使之鍵合在固體載體上，稱(chēng)固定相；另一相為液體或氣體，稱(chēng)流動(dòng)相。10、有效柱長(zhǎng)（有效遷移距離）：溶質(zhì)從開(kāi)始遷移至其遷移速度等于流動(dòng)相速度時(shí)，

4、溶質(zhì)在色譜柱上遷移的距離稱(chēng)為有效遷移距離，也稱(chēng)為有效柱長(zhǎng)。11、吸附等溫線：指在一定溫度下物質(zhì)分子在兩相界面上進(jìn)行的吸附過(guò)程達(dá)到平衡時(shí)它們?cè)趦上嘀袧舛戎g的關(guān)系。12、切向流過(guò)濾：就是一種維持恒壓下高過(guò)濾速度的技術(shù)，其原理就是：使懸浮液在過(guò)濾介質(zhì)表面作切向流動(dòng)，利用液體的剪切作用將介質(zhì)表面的固體移走，當(dāng)移走固體與固體沉積速率相同時(shí)，過(guò)濾速度就保持恒定，控制不同的切向流速度就可以得到不同的過(guò)濾速度。（實(shí)際是維持了c).目前幾乎所有的膜固液分離都采用切向流方式13、包含體: 存在于基因工程細(xì)胞中，主要由蛋白質(zhì)構(gòu)成，其中大部分是克隆表達(dá)的產(chǎn)物，一級(jí)結(jié)構(gòu)正確，立體結(jié)構(gòu)錯(cuò)誤，沒(méi)生物學(xué)活性。難溶于水，只有

5、在變性劑溶液中才能溶解。15、雙水相萃?。豪帽惶崛∥镌诙嘀械姆峙洳煌鴮?shí)現(xiàn)分離的目的；由于蛋白質(zhì)在有機(jī)相中容易失活，因此采用的二相均為親水相，如PEG/葡聚糖、無(wú)機(jī)鹽等，稱(chēng)為雙水相，兩相密度不同，輕相富含一種高分子，重相可能富含另一高分子，細(xì)胞碎片和蛋白質(zhì)在二相間的分配系數(shù)不同，從而實(shí)現(xiàn)分離的目的。16、反滲透：在高于溶液滲透壓的壓力作用下，只有溶液中的水透過(guò)膜，而所有溶液中的大分子、小分子有機(jī)物及無(wú)機(jī)鹽全被截留。理想的反滲透膜應(yīng)被認(rèn)為是無(wú)孔的，它分離的原理是溶解擴(kuò)散（或毛細(xì)孔流學(xué)說(shuō)）。17、分配系數(shù)一定溫度下，組分在兩相間分配達(dá)到平衡時(shí)的濃度（單位：g / mL）比，稱(chēng)為分配系數(shù)，用K

6、表示18、色譜曲線基線：無(wú)試樣通過(guò)檢測(cè)器時(shí)，檢測(cè)到的信號(hào)即為基線。19、保留時(shí)間（tR）：組分從進(jìn)樣到柱后出現(xiàn)濃度極大值時(shí)所需的時(shí)間。20、死時(shí)間（tM）：不與固定相作用的氣體（如空氣）的保留時(shí)間。調(diào)整保留時(shí)間（tR ）：tR= tRtM 21、容量因子k：平衡時(shí)，組分在各相中總的質(zhì)量比23、排阻色譜：按分子大小分離。小分子可以擴(kuò)散到凝膠空隙，由其中通過(guò)，出峰最慢；中等分子只能通過(guò)部分凝膠空隙，中速通過(guò)；而大分子被排斥在外，出峰最快；溶劑分子小，故在最后出峰。24、親和色譜：利用生物大分子和固定相表面存在的某種特異性親和力，進(jìn)行選擇性分離。25、正相色譜法：親水性固定液常采用疏水性流動(dòng)相，即流

7、動(dòng)相的極性小于固定相的極性，極性柱也稱(chēng)正相柱。26、反相色譜：若流動(dòng)相的極性大于固定液的極性，非極性柱也稱(chēng)為反相柱。27、非線性色譜:Cm與Cs不存在線性關(guān)系的色譜.28、吸附等溫線：一定溫度下物質(zhì)分子在兩相界面上進(jìn)行的吸附過(guò)程達(dá)到平衡時(shí)它們?cè)趦上嘀袧舛戎g的關(guān)系。29、全交換容量:每克干介質(zhì)或每毫升濕介質(zhì)具有的功能基含量.是一個(gè)定值.30、工作容量:每克干介質(zhì)或每毫升濕介質(zhì)在一定的操作條件下的交換吸附蛋白質(zhì)的實(shí)際容量.是一個(gè)變值.31、疏水性色譜:填料表面具有弱疏水性,蛋白質(zhì)的疏水基團(tuán)與填料表面之間產(chǎn)生弱的疏水性相互作用.高濃度的鹽條件下,蛋白質(zhì)與疏水固定相的吸附能力高,隨著鹽濃度的下降,吸

8、附能力下降.當(dāng)淋洗液離子強(qiáng)度逐漸降低時(shí),蛋白質(zhì)樣品按其疏水性的不同依次被洗脫.32、徑向流色譜技術(shù)：即樣品和流動(dòng)相沿徑向流動(dòng),可從色譜柱的周?chē)飨驁A心,也可從圓心流向柱的周?chē)?通常采用從柱的周?chē)飨驁A心的方式.33、泳動(dòng)度(遷移率):帶電質(zhì)點(diǎn)在單位強(qiáng)度電場(chǎng)下的泳動(dòng)速度即:U=V/E=(d/t)/(V/L)34、變性膠：膠電脈在蛋白質(zhì)變性的狀態(tài)下進(jìn)行，主要指SDS變性條件下進(jìn)生45、非變性膠：電泳在蛋白質(zhì)保持天然狀態(tài)下進(jìn)行，不加變性劑37、 線性色譜:樣品的濃度流動(dòng)相中與固定相中之間是線性關(guān)系38、 生物過(guò)程動(dòng)力學(xué):定量地描述過(guò)程的速率以及影響過(guò)程速率的諸多因素.包括細(xì)胞生長(zhǎng)速率、各種基質(zhì)消耗的

9、速率、代謝產(chǎn)物的生成速率。39、 懸浮培養(yǎng)：是指細(xì)胞在培養(yǎng)器中自由懸浮生長(zhǎng)的過(guò)程.主要用于非貼壁依賴(lài)性細(xì)胞培養(yǎng),如雜交瘤細(xì)胞等。40、 固定化培養(yǎng)：利用吸附或包埋等固定化的方式將細(xì)胞限制在一定的空間內(nèi),然后以固定化的顆粒進(jìn)行懸浮培養(yǎng).該方法對(duì)貼壁性和非貼壁依賴(lài)性細(xì)胞都是適合的。41、 膜分離技術(shù)：以半透膜為選擇障礙層，允許某些組分透過(guò)而保留混合物中的其他組分，從而達(dá)到分離目的的技術(shù)。42、 離子交換法：通過(guò)帶電的溶質(zhì)分子與離子交換劑中可交換離子進(jìn)行交換而達(dá)到分離純化的方法。主要依賴(lài)電荷間的相互作用，利用帶電分子中電荷的微小差異而進(jìn)行分離。43、肽譜：指蛋白質(zhì)被酶解或化學(xué)降解后肽段的分離分析或制

10、備。二、填空題1、超聲波破碎細(xì)胞的效率與聲頻、聲能、處理時(shí)間、細(xì)胞濃度及細(xì)胞類(lèi)型等因素有關(guān)。2、目前用于固液分離的膜過(guò)濾法主要有以下三種: 微孔過(guò)濾(微濾)、超濾、 反滲透。3、在生物工程下游技術(shù)領(lǐng)域， 色譜 和 電泳 是目前所知最好的兩種分離蛋白的方法。4、在生物物質(zhì)分離中，可以依據(jù)一次進(jìn)樣量多少，將色譜分為： 分析色譜、 半制備色譜（中等規(guī)模制備色譜）、制備色譜 和工業(yè)生產(chǎn)規(guī)模色譜 4大類(lèi)。5、無(wú)論是什么類(lèi)型的液相或氣相色譜,其色譜裝置均應(yīng)包括: 流動(dòng)相供給、 進(jìn)樣、 色譜柱、 檢測(cè)器 等四大部分。6、在色譜過(guò)程中，有兩種將目標(biāo)產(chǎn)品從色譜柱上洗脫下來(lái)的方法： 一種是維持流動(dòng)相熱力學(xué)參數(shù)不變

11、的 等梯度洗脫法，另一種叫 梯度洗脫法。7、徑向色譜填料主要有： 離子交換樹(shù)脂 和 親和色譜填料 兩種。8、評(píng)價(jià)HPLC色譜填料性能的主要表征指標(biāo)包括： 保留值，選擇性，柱效率，填充柱的總空隙度和穿透性，分離度。11、羥基磷灰石在原理上一般被認(rèn)為是一種無(wú)機(jī)基質(zhì)高效色譜。請(qǐng)列舉二種測(cè)量蛋白質(zhì)含量的方法：雙縮脲法，考馬斯藍(lán)法。12、常見(jiàn)的無(wú)機(jī)色譜填料主要包括：多孔硅膠、可控孔徑玻璃、氧化鋁、氧化鈦、 羥基磷灰石 以及 碳 和 石墨 等基質(zhì)。13、無(wú)機(jī)HPLC填料最常見(jiàn)的是以多孔大硅膠為基本材料的填料；含硼的Na2O-B2O3-SiO2系玻璃經(jīng)過(guò)熱處理引起相分離，生成可溶于酸的Na2O-B2O3相及

12、不溶于酸的高硅相。將酸可溶相浸析出來(lái)后剩下的另一相就制成了可控孔徑玻璃，可控孔徑玻璃的主要化學(xué)成份就是SiO2。17、根據(jù)離子交換樹(shù)脂官能團(tuán)的性質(zhì)，將其分為（強(qiáng)酸型）、（弱酸型）、（強(qiáng)堿型）、（弱堿型） 、 （鰲合型）、（兩性）及（氧化還原）等 7 類(lèi)。18 指出三種交聯(lián)葡聚糖的微載體：Cytodex1微載體；Cytodex 2微載體；Cytodex 3微載體19指出蛋白質(zhì)復(fù)性的三種方法：稀釋法，透析法，液相色譜法等20固液分離的主要方式包括：離心法，微孔膜過(guò)濾法，雙水相萃取，泡沫分離法。21膜的孔徑一般為微米級(jí)，依據(jù)其孔徑的不同（或稱(chēng)為截留分子量），可將膜分為微濾膜、超濾膜、納濾膜和反滲透膜

13、22 色譜的保留值可以用保留時(shí)間也可以用保留體積來(lái)表示。23色譜的峰寬可以用半峰寬、峰底寬、標(biāo)準(zhǔn)偏差表示。24指出下列情況下色譜系統(tǒng)對(duì)容質(zhì)的柱效和分配系統(tǒng)差的關(guān)系： 柱效較高，K較大,完全分離； 柱效較高，K不是很大峰較窄，基本上完全分離； 柱效較低，K較大,但分離的不好； 柱效低， K 小，分離效果更差。25線性色譜的吸附等溫線是直線，非線性色譜的吸附等溫線的形狀常見(jiàn)的有：凸形、凹形、S形、H形、階梯形。從吸附等溫線的形狀可以預(yù)見(jiàn)色譜曲線的形狀，一般凸形的吸附等溫線代表色譜圖是拖尾的，凹形吸附等溫線代表的色譜圖是吐舌頭形狀、S形的色譜圖是波浪形的。27Shephadex G100是一種凝膠排

14、阻色譜，主要用于蛋白質(zhì)的純化。28DEAE-Shaphdex A25是一種離子交換層析介質(zhì)。29CM-纖維素是一種弱陽(yáng)離子交換介質(zhì)。30離子交換層析一般是通過(guò)梯度一般采用兩種方法達(dá)到分離蛋白質(zhì)的目的。 一種是增加洗脫液的離子強(qiáng)度，一種是改變洗脫液的pH值。31QAE-葡聚糖是強(qiáng)堿陰離子交換劑，SP是強(qiáng)酸陽(yáng)離子交換劑。33蛋白質(zhì)含量和純度測(cè)定方法。含量測(cè)定:克氏定氮法，TCA比濁度法、雙縮脲法、福林-酚法和紫外線法，考馬斯蘭法（Bradford法）。純度衡量:電泳法，層析法，質(zhì)譜法等。一般應(yīng)采用二種以上方法，而且同一原理的方法不應(yīng)該采用二次。34 細(xì)胞破碎法包括：機(jī)械力和非機(jī)械力破碎方法；機(jī)械方

15、式又包括：液體剪切力和固體剪切力方法，液體剪切力包括：高壓勻漿法和超聲破碎法；固體剪切力包括：高速珠磨法和壓榨法。35高壓勻漿法的主要困難包括：溫控和堵塞問(wèn)題26高壓勻漿法的破碎率決定于：勻漿閥的結(jié)構(gòu)，操作壓力，破碎次數(shù)。34蛋白質(zhì)的分子量測(cè)定：超離心法、光散射方法、凝膠過(guò)濾法、SDS-PAG電泳法。三、判斷題 3.絮凝劑須有長(zhǎng)鏈的線性結(jié)構(gòu)，越長(zhǎng)越好（）。 4.細(xì)胞壁破碎的主要阻力是連接細(xì)胞壁網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)的共價(jià)鍵（） 6.離子交換的推動(dòng)力是離子濃度差。（） 9.凝膠過(guò)濾操作中，通常上樣量越小，分辨率越高。16.層析過(guò)程中,有效柱長(zhǎng)是隨層析條件的變化而變化的. 17.層析過(guò)程中,可以通過(guò)改變洗脫劑的

16、濃度變化梯度改變有效柱長(zhǎng)和最短柱長(zhǎng). 23.HPLC填料的顆粒粒度的分布應(yīng)該是越小越好的，最好是能實(shí)現(xiàn)顆粒的單分散。28.葡聚糖凝膠排阻色譜中，上樣量越大，分辨率越高。29.同一蛋白質(zhì)在不同種類(lèi)的緩沖液中，只要緩沖液的pH值相同，則30.蛋白質(zhì)所帶的電荷數(shù)量也相同。37.為了減小樣品在洗脫過(guò)程的軸向擴(kuò)散，可采取增大進(jìn)樣濃度減少進(jìn)樣量的方式。40.動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)微戴體的密度應(yīng)略大于培養(yǎng)基。42.一般講，親水性膜及膜材料電荷與溶質(zhì)相同的膜較耐污染。43.色譜過(guò)程中試樣中的各組分具有不同的K值是分離的基礎(chǔ)。44.色譜過(guò)程一定溫度下，組分的分配系數(shù)K越大，出峰越慢。47.色譜柱效高說(shuō)明該色譜對(duì)物質(zhì)的分離

17、度高。51.分離度由色譜柱的柱效率和物質(zhì)間的分配系數(shù)的差異共同決定。53.在凝膠排阻層析中，流動(dòng)相的速度越慢越有利于色譜分離和分析。55.兩性的生物大分子所帶電荷的性質(zhì)和數(shù)量由其等電點(diǎn)及溶液環(huán)境(pH值)所決定。56.聚丙烯酰胺濃縮膠的原理包括其pH值=6.9為甘氨酸的等電點(diǎn)。59.樣品溶解不好容易造成拖尾。60.Monod常數(shù)隨菌體的濃度的變化而變化。61.Monod常數(shù)是細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中的一個(gè)對(duì)菌體性質(zhì)的特征性常數(shù)。62.色譜柱效可從峰寬得到，色譜峰越寬，柱效越低，峰寬相同，柱效相同。63.決定柱效的因素是分配系數(shù)。64.決定柱效的因素是容量因子。66.可以說(shuō)“A柱子的柱效高于B柱子。67.

18、分配系數(shù)與柱效沒(méi)有關(guān)系。68.容量因子與柱效有關(guān)系。69.柱效不能表示被分離組分的實(shí)際分離效果。70.用有效塔板數(shù)和有效塔板高度作為衡量柱效能的指標(biāo)時(shí)，應(yīng)指明測(cè)定物質(zhì)。72.發(fā)酵反應(yīng)器設(shè)計(jì)要求有盡量高的傳氧系數(shù)。73.生物放大器的常用控制方法是反饋調(diào)節(jié)。75.動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)就操作而言，深層培養(yǎng)可分為批式、流加式，半連續(xù)式、連續(xù)式和灌注式5種。80.明膠涂覆的多孔微載體適應(yīng)于一切的細(xì)胞系。86.產(chǎn)物提純過(guò)程包括初級(jí)分離階段和純化精制階段兩個(gè)階段。93溶液pH對(duì)蛋白質(zhì)在水中溶解性，荷電性及構(gòu)型有很大影響。94.膜分離技術(shù)中清洗過(guò)程中主要考慮膜的化學(xué)特性和污染物的特性二個(gè)因素。96.氣液色譜的固定液在

19、常溫下不一定為液體，但在使用溫度下一定呈液體狀態(tài)。98.用來(lái)衡量色譜峰寬度的參數(shù)有標(biāo)準(zhǔn)偏差(s)、半峰寬(Y1/2)和峰底寬(Wb)三種表示法。99.氣相色譜中容量因子越大，保留時(shí)間越長(zhǎng)。100.離子交換色譜對(duì)于大分子和小分子的保留機(jī)理基本相同。101示差折光檢測(cè)器是除紫外檢測(cè)器之外應(yīng)用最多的檢測(cè)器，此檢測(cè)器靈敏度低、對(duì)溫度敏感、不能用于梯度洗脫。102.液-固吸附色譜中非線形等溫吸附常引起峰的拖尾。104.非線性色譜基本理論包括吸附平衡熱力學(xué)、吸附平衡動(dòng)力學(xué)和色譜基本特料平衡方程。106.在非線性色譜中，峰高增加的速率隨濃度的增加而逐漸降低，因而峰高不能作為定量分析的指標(biāo)。109.凝膠過(guò)濾中

20、進(jìn)樣體積和樣品的濃度將明顯地影響蛋白質(zhì)的。110.膨化的凝膠可以直接高溫烘干。112.一般來(lái)說(shuō)只要能溶解被洗脫物質(zhì)并不使其變性的緩沖液都可以用于凝膠層析。113.離子交換用的層析柱一般粗而短，不宜過(guò)長(zhǎng)。115.Superdax是葡聚糖與交聯(lián)瓊脂糖的結(jié)合，而Superose是珠狀瓊脂糖經(jīng)兩次交聯(lián)。116.反相色譜以硅膠基質(zhì)的鍵合相填料為主，特別是鍵合C18，C8烷基以及苯基填料。117.不同填料的化學(xué)結(jié)構(gòu)是通過(guò)對(duì)基質(zhì)材料的化學(xué)改性而實(shí)現(xiàn)的。118.疏水性相互作用色譜是為了適應(yīng)活性生物大分子特別是蛋白質(zhì)的分離而發(fā)展起來(lái)的種液相色譜方法。120.作為分離材料的硅膠，其顆粒的形狀與大小、孔的結(jié)構(gòu)、孔徑

21、及其分布、總孔容、比表面積及機(jī)械強(qiáng)度等，均為重要的物理參數(shù)。121.硅膠的化學(xué)修飾大致可以三種不同的方式進(jìn)行，即整體修飾、通過(guò)表面硅羥基的化學(xué)修飾以及涂層法。122.物理吸附水的去除是硅膠衍生反應(yīng)中不可或缺的一步。123.硅膠一般有耐受高壓力,耐壓能力隨孔徑及孔度而下降。129.泳動(dòng)度(遷移率)只取決于帶電質(zhì)點(diǎn)的性質(zhì)。131.丙烯酰胺濃度和交聯(lián)劑濃度決定膠的物理狀態(tài)及分子篩的孔徑的大小。132.電泳中緩沖液的種類(lèi),濃度和其他電解質(zhì)濃度影響蛋白質(zhì)所帶電荷的極性和數(shù)量,同時(shí)還影響蛋白質(zhì)分子間的相互作用。138.選擇具高選擇的填料可以克服徑向色譜直徑短的缺點(diǎn),發(fā)揮徑向色譜柱速度快,處理量大的優(yōu)點(diǎn)。四

22、單選題12. 在理想狀態(tài)下,下列哪種色譜對(duì)二種物質(zhì)的分離度可以隨柱長(zhǎng)的延長(zhǎng)而無(wú)限增加:(A) 凝膠排阻色譜;(B) 離子交換色譜;(C) 親和色譜;(D) 分配色譜;17. 聚合物型基質(zhì)材料中，下列哪種是應(yīng)用最為廣泛的：（A）交聯(lián)聚苯乙烯樹(shù)脂；18對(duì)于硅膠而言，其表面的硅羥基是進(jìn)行化學(xué)修飾的基礎(chǔ)，硅膠表面的硅羥基的主要存在形式是：（A） 硅三羥基； （B） 硅二羥基；（C）鄰位硅羥基；（D）單硅羥基；19不經(jīng)過(guò)化學(xué)修飾或改性的硅膠本身可以做為：（A）正相色譜填料；（B）反相色譜填料；（C）離子交換色譜填料；（D）親和色譜填料；29、目前細(xì)胞培養(yǎng)產(chǎn)物的收率很低，不及總蛋白的1%，主要原因不包括：

23、 (A) 血清蛋白質(zhì)的污染(B) 細(xì)胞表達(dá)產(chǎn)物濃度低 (C) 產(chǎn)物在培養(yǎng)條件下不穩(wěn)定(D)分離技術(shù)限制30、生化分離用離子交換劑的特點(diǎn)不包括（A）粒徑小，分布均勻 (B)疏水性(C)生物相容性(D)適當(dāng)?shù)碾姾擅芏?1、微囊化使一下哪個(gè)受到消極影響（A）抗剪切力（B）細(xì)胞生長(zhǎng)環(huán)境（C）傳質(zhì)效率（D）產(chǎn)物濃度33、表征膜對(duì)某一大分子溶質(zhì)的截留能力的是：。A. 孔道特征B. 水通量C. 截留率D. 截留分子量35、無(wú)機(jī)鹽對(duì)蛋白質(zhì)鹽析效果，下列選項(xiàng)錯(cuò)誤的是。A. 檸檬酸鹽磷酸鹽硫酸鹽B. 硫酸鹽醋酸鹽鹽酸鹽C. 鹽酸鹽硝酸鹽硫氰酸鹽 D. 鹽酸鹽硝酸鹽硫氰酸鹽38、可測(cè)定蛋白質(zhì)亞基分子量以及未知蛋白質(zhì)

24、分子量的電泳技術(shù)有。A. CEB. HPLCC. IEFD. SDS-PAGE39、可用于了解蛋白組成，蛋白分子和等電點(diǎn)的電泳技術(shù)是。A. 凝膠電泳B. 等電點(diǎn)聚焦電泳C. 毛細(xì)管電泳D. 雙向電泳41、強(qiáng)酸性陽(yáng)離子交換樹(shù)脂的功能基團(tuán)是。A. 一SO3HB. 一PO(OH)2C. COOHD. OH42、與離子交換樹(shù)脂的總交換容量有關(guān)的是。A. 樹(shù)脂種類(lèi)B. 溶液的pHC. 溶液的溶質(zhì)濃度D. 溶液中溶質(zhì)的電荷數(shù)45、在采用離子交換技術(shù)時(shí)，對(duì)弱酸性樹(shù)脂pH應(yīng)選擇。A. pHpK產(chǎn)物pK樹(shù)脂B. pK產(chǎn)物pHpK樹(shù)脂C. pK產(chǎn)物pK樹(shù)脂pHD. pK樹(shù)脂pHpK物質(zhì)47、在低濃度下已吸附的被吸

25、附分子又能吸附在液相中的分子，其吸附等溫表現(xiàn)為。A. 凸形B. 凹形C. S形D. 階梯形49、當(dāng)溶質(zhì)濃度增加時(shí)，分子在固相表面逐漸吸附，趨于穩(wěn)定后被吸附的分子又吸附其他分子，其吸附等溫表現(xiàn)為。A. 凸形B. 凹形C. 正S形D. 反S形50、被吸附的分子在吸附劑表面隨液相中溶質(zhì)濃度的增加會(huì)發(fā)生吸附取向的變化或吸附狀態(tài)的改變，其吸附等溫表現(xiàn)為。A. 凸形B. 凹形C. S形D. 階梯形51、在應(yīng)用吸附分離技術(shù)時(shí)，根據(jù)經(jīng)驗(yàn)，吸附劑孔徑等于溶質(zhì)分子直徑的多少較適合。A. 1倍B. 2倍C. 4倍D. 6倍52、檢測(cè)蛋白質(zhì)是否變異的常用方法有。 A肽譜 B. HPLC C.等電聚焦 D.毛細(xì)管電泳

26、E.以上都對(duì)53、下列蛋白質(zhì)含量測(cè)定法，哪項(xiàng)靈敏度最高。A凱氏定氮法 B. 考馬斯亮藍(lán)法 C.Folin酚試劑法 D.紫外吸收法55、在有機(jī)相中添加下列哪項(xiàng)，將在表面活性劑總濃度不變的情況下可以提高反膠團(tuán)尺寸，增大反膠團(tuán)萃取的操作pH范圍。A. 助溶劑B. 帶溶劑C. 稀釋劑D. 助表面活性劑56、雙水相萃取技術(shù)與生物轉(zhuǎn)化過(guò)程結(jié)合，下列哪項(xiàng)不是其優(yōu)勢(shì)。A. 消除產(chǎn)物反饋抑制B. 細(xì)胞（酶）可循環(huán)使用C. 生產(chǎn)能力、收率及分離效率高D. 傳質(zhì)面積增大57、關(guān)于溫度對(duì)雙水相萃取的影響，下列說(shuō)法正確的是。A. 在臨界點(diǎn)附近，對(duì)蛋白質(zhì)分配系數(shù)影響較小B. 遠(yuǎn)離臨界點(diǎn)時(shí)，對(duì)蛋白質(zhì)分配系數(shù)影響較大C. 影

27、響雙水相黏度和密度，從而影響蛋白質(zhì)的分配系數(shù)D. 大規(guī)模的雙水相萃取操作需在冷卻狀態(tài)下進(jìn)行58、下列哪個(gè)組合不可能形成雙水相系統(tǒng)。A. PEG/ DexB. PEG/Inorganic saltC. 乙醇/硫酸鹽D. 磷酸鹽/硫酸鹽59、在溶劑萃取中，在水相中加入無(wú)機(jī)鹽，下述哪項(xiàng)不是其目的。A. 由于鹽析作用，使產(chǎn)物在水中的溶解度下降，而有利于轉(zhuǎn)入有機(jī)相B. 增加兩相間密度差，減少有機(jī)溶劑和水之間的互溶度C. 減輕乳化現(xiàn)象，使其容易分離D. 沉淀雜質(zhì)60、萃取劑對(duì)目標(biāo)產(chǎn)物和雜質(zhì)的分離能力可用下列哪項(xiàng)來(lái)表征。A. 分離因素（）B. 萃取因素C. 分配系數(shù)D. 活度系數(shù)65、在GC和LC中, 影響

28、柱選擇性的不同的因素是A.固定相的種類(lèi)；B. 柱溫； C流動(dòng)相的種類(lèi)；D分配比。66、在液相色譜中, 某組分的保留值大小實(shí)際反映了哪些部分的分子間作用力？A組分與流動(dòng)相；B組分與固定相；C組分與流動(dòng)相和固定相；D組分與組分。68、在液相色譜中，梯度洗脫最宜于分離：A幾何異構(gòu)體；B沸點(diǎn)相近，官能團(tuán)相同的試樣； C沸點(diǎn)相差大的試樣；D分配比變化范圍寬的試樣。五、簡(jiǎn)答題1. 高效液相色譜是如何實(shí)現(xiàn)高效、快速、靈敏的？從氣相色譜的高效、高速和高靈敏度得到啟發(fā)，采用5-10m微粒固定相以提高柱效， 用高壓泵加快液體流動(dòng)相的流速；設(shè)計(jì)高靈敏度、死體積小的紫外、熒光等檢測(cè)器，提高檢測(cè)靈敏度，克服經(jīng)典液相色譜

29、的缺點(diǎn)，從而達(dá)到高效、快速、靈敏。2. 簡(jiǎn)述液相色譜中引起色譜峰擴(kuò)展的主要因素，如何減少譜帶擴(kuò)寬，提高柱效？因素:渦流擴(kuò)散、流動(dòng)相傳質(zhì)、停留流動(dòng)相傳質(zhì)及柱外效應(yīng)。 減少填料顆粒直徑，減小填料孔穴深度，提高裝填的均勻性，采用低黏度溶劑作流動(dòng)相，流速盡可能低，同時(shí)要盡可能采用死體積較小的進(jìn)樣器、檢測(cè)器、接頭和傳輸管線等。3. 色譜柱A柱長(zhǎng)為15cm，載體粒度為5m。另一B柱長(zhǎng)為30cm，載體粒度為10m。兩柱的柱效相等嗎？l=L/dp lA=15/0.0005=30000 lB= 30/0.0010=30000 A柱的折合柱長(zhǎng)為30000，B柱的折合柱長(zhǎng)也為30000，表明組分在兩根柱內(nèi)從柱入口到

30、出口都經(jīng)過(guò)30000個(gè)載體顆粒，兩柱的柱效相等。4. 為什么體積排阻色譜中任何組分的分配系數(shù)必須符合0K1？如果K1說(shuō)明什么問(wèn)題?因?yàn)榻M分的分配系數(shù)為K=Cs/Cm,Cs與Cm分別為組分在固定相和流動(dòng)相中的濃度,當(dāng)分子直徑大于孔徑時(shí),此時(shí)Cm=0,K=0。當(dāng)分子直徑小于固定相孔徑時(shí),組分向空隙內(nèi)流動(dòng)相擴(kuò)散,達(dá)到平衡時(shí),一半組分在空隙內(nèi),一半組分在空隙外,此時(shí)K=1,若分子直徑介于以上兩種極限情況之間,K一定介于0與1之間,可見(jiàn)體積排阻色譜中,任何組分的分配系數(shù)為0K1,如果K1說(shuō)明此時(shí)的分離方式已不是純粹的體積排阻色譜,其分離過(guò)程受到其他作用力(如吸附)的支配.5.HPLC操作中，流動(dòng)相為什么

31、要脫氣？常用的脫氣方法有拿幾種？害處：（1）氣泡進(jìn)入檢測(cè)器，引起光吸收或電信號(hào)的變化，基線突然跳動(dòng)，干擾檢測(cè)； （2）溶解在溶劑中的氣體進(jìn)入色譜柱時(shí)，可能與流動(dòng)相或固定相發(fā)生化學(xué)反應(yīng)；（3）溶解氣體還會(huì)引起某些樣品的氧化降解，對(duì)分離和分析結(jié)果帶來(lái)誤差。脫氣法:（1）加熱脫氣法（2）抽吸脫氣法； （3）吹氦脫氣法；（4）超聲波振蕩脫氣法。6. 生物工程下游技術(shù)的基本步驟。（1）建立分析方法：生物測(cè)定方法；理化測(cè)定方法；理化方法與生物學(xué)方法結(jié)合測(cè)定；（2）選擇提取材料；（3）選擇提取方法；（4）分離純化方法的探索； (5）均一性的鑒定。7、生物工程下游技術(shù)按生產(chǎn)過(guò)程劃分幾個(gè)階段？各階段的任務(wù)是什么

32、？發(fā)酵液預(yù)處理、固液分離、細(xì)胞破碎：除去發(fā)酵液中的不溶性固形物雜質(zhì)和分離菌體細(xì)胞；分離胞內(nèi)產(chǎn)物，收集細(xì)胞后進(jìn)行細(xì)胞的破碎和細(xì)胞碎片分離。提?。撼ヅc產(chǎn)物性質(zhì)差異較大的雜質(zhì)濃縮：主要去除水分，提高產(chǎn)物濃度純化：去除與產(chǎn)物的物理化學(xué)性質(zhì)比較接近的雜質(zhì)。成品化：根據(jù)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)和產(chǎn)品劑型制作產(chǎn)品。8. 發(fā)酵液預(yù)處理的目的是什么，如何選擇發(fā)酵液預(yù)處理過(guò)程？去除部分雜質(zhì)改善理化性質(zhì)，有利于固液分離使產(chǎn)物轉(zhuǎn)入便于后處理的一相中如何選擇發(fā)酵液預(yù)處理過(guò)程：胞外產(chǎn)物，發(fā)酵通過(guò)離心或過(guò)濾實(shí)現(xiàn)固液分離，使其轉(zhuǎn)入液相；胞內(nèi)產(chǎn)物，先通過(guò)離心或過(guò)濾收集細(xì)胞并洗滌，然后細(xì)胞經(jīng)破碎或整體細(xì)胞萃取使目標(biāo)產(chǎn)物釋放，轉(zhuǎn)入液相，再進(jìn)行細(xì)

33、胞碎片分離。細(xì)胞本身，通過(guò)離心或過(guò)濾獲得細(xì)胞，然后對(duì)細(xì)胞進(jìn)行洗滌、干燥。9. 超臨界CO2破碎細(xì)胞技術(shù)的原理是什么？超臨界流體CO2在高壓條件下滲透到細(xì)胞內(nèi)，突然降壓后，CO2變成氣體，使細(xì)胞內(nèi)外壓力差增加，細(xì)胞急劇膨脹發(fā)生破裂。另外CO2對(duì)脂質(zhì)有萃取作用，細(xì)胞碎片較大。10. 在溶劑萃取時(shí)，為什么要進(jìn)行破壞乳化？乳化是水或有機(jī)溶劑以微小液滴形式分散于有機(jī)相或水相中的現(xiàn)象。有機(jī)溶劑相和水相分層困難，出現(xiàn)兩種夾帶：發(fā)酵廢液（萃余液）中夾帶有機(jī)溶劑（萃取液）微滴，使目標(biāo)產(chǎn)物受到損失；有機(jī)溶劑（萃取液）中夾帶發(fā)酵液（萃余液），給后處理操作帶來(lái)困難。產(chǎn)生乳化有時(shí)即使采用離心機(jī)也往往不能將兩相分離完全，

34、所以必須破壞乳化。11. 超臨界萃取的原理是什么？溶質(zhì)在超臨界流體中的溶解度，與其密度有關(guān)，密度越大，溶解度越大。在臨界點(diǎn)附近，微小的壓力增加或溫度下降，則超臨界流體的密度大幅度增加，對(duì)溶質(zhì)的溶解度將大幅度增加，有利于溶質(zhì)的萃取。而在臨界點(diǎn)附近，微小的壓力下降或溫度上升，則超臨界流體的密度大幅度減少，對(duì)溶質(zhì)的溶解度將大幅減少，有利于溶質(zhì)的分離和溶劑的回收。 12. 膜的濃差極化對(duì)生產(chǎn)有何影響？減少濃差極化有哪些措施？濃差極化：在膜過(guò)濾時(shí)，隨溶劑不斷透過(guò)膜，大分子溶質(zhì)被帶到膜表面，但不能透過(guò)，就被截留在膜的表面上，造成膜面濃度升高，產(chǎn)生膜面到主體溶液之間的濃度梯度，這種濃度差導(dǎo)致溶質(zhì)自膜面反擴(kuò)散

35、至主體溶液中的現(xiàn)象稱(chēng)為濃差極化。影響：提高滲透壓，降低水通量；降低膜的截留率；產(chǎn)生結(jié)垢現(xiàn)象，造成物理阻塞，使膜逐漸失去透水能力。措施：對(duì)處理液攪動(dòng)、振動(dòng)、錯(cuò)流以及加快液流速度等。13. 有機(jī)溶劑沉淀法原理是什么？加入有機(jī)溶劑于蛋白質(zhì)溶液中可產(chǎn)生多種效應(yīng)，這些效應(yīng)結(jié)合起來(lái)，使蛋白質(zhì)沉淀。有機(jī)溶劑，使溶液介電常數(shù)降低，蛋白質(zhì)、核酸、多糖等帶溶質(zhì)間靜電引力增大，從而相互吸引、聚集而沉淀。有機(jī)溶劑減小水的極性，使兩性溶質(zhì)在溶液中的溶解度降低。由于有機(jī)溶劑的水合作用，降低了自由水的濃度，從而降低了親水溶質(zhì)表面水化層的厚度和溶質(zhì)的親水性，導(dǎo)致脫水凝聚。極性有機(jī)溶劑破壞溶質(zhì)的某種鍵（如氫鍵），使其空間結(jié)構(gòu)發(fā)

36、生變形，使原來(lái)包在內(nèi)部的疏水基團(tuán)結(jié)合形成疏水層。14. 聚丙烯酰胺凝膠電泳原理。 由于聚丙烯酰胺凝膠是多孔介質(zhì)，不僅能防止對(duì)流，把擴(kuò)散減少到最低；而且其孔徑大小與生物大分子具有相似的數(shù)量級(jí)，能主動(dòng)參與生物分子的分離，具有分子篩效應(yīng)。因此，在使用聚丙烯酰胺凝膠電泳進(jìn)行蛋白質(zhì)分離時(shí)，在電泳過(guò)程中不僅取決于蛋白質(zhì)的電荷密度學(xué)（電荷效應(yīng)），還取決于蛋白質(zhì)的大?。ǚ肿恿浚┖托螤睿ǚ肿雍Y效應(yīng)）。15. 簡(jiǎn)述SDSPAGE電泳測(cè)定未知蛋白分子量的方法。以不同的標(biāo)準(zhǔn)分子量蛋白MARK，與未知蛋白樣品一同進(jìn)行SDS PAGE電泳。染色后分別計(jì)算未知蛋白、標(biāo)準(zhǔn)分子量蛋白MARK的遷移率，然后根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)分子量蛋白MA

37、RK遷移率與其分子量的對(duì)數(shù)值作圖，可得一標(biāo)準(zhǔn)曲線并擬合方程。將未知蛋白遷移率代入擬合方程，求出未知蛋白的分子量。16. 影響離子交換能力和選擇性因素有哪些？離子交換能力和選擇性的好壞集中反映在離子交換常數(shù)K上，K值越大，說(shuō)明離子交換能力和選擇性越好。影響K值的因素有：（1）被交換離子的水化半徑和化合價(jià)：樹(shù)脂對(duì)水化半徑小的離子和化合價(jià)高的離子選擇性好。（2）溶液濃度：樹(shù)脂對(duì)離子交換吸附的選擇性，在稀溶液中比較大，而在濃溶液中選擇性較小。（3）溶液的pH：pH必須滿足使樹(shù)脂和生化物質(zhì)都呈離子狀態(tài)。（4）交聯(lián)度：對(duì)凝膠樹(shù)脂，交聯(lián)度小，樹(shù)脂的孔徑大，選擇性降低。（5）有機(jī)溶劑：當(dāng)有機(jī)溶劑存在時(shí)，常會(huì)使

38、樹(shù)脂對(duì)有機(jī)離子的選擇性降低，而容易吸附無(wú)機(jī)離子。因此進(jìn)行交換吸附時(shí)，料液中不應(yīng)存在有機(jī)溶劑。但在解吸附（洗脫）時(shí)，可采用有機(jī)溶劑來(lái)提高解吸的收率。18. 色譜方法共分幾類(lèi)？常用的蛋白質(zhì)分離方法有哪些？并簡(jiǎn)述其原理（1）按溶質(zhì)分子與固定相相互作用的機(jī)理不同，色譜分離可大致分成如下 5 大類(lèi)：吸附色譜分離，分配色譜，離子交換色譜，凝膠色譜，親和色譜。（2）根據(jù)固定相的形狀不同，色譜分離技術(shù)可分為柱色譜分離、紙上色譜分離、薄層色譜 分離。（3）根據(jù)流動(dòng)相的物態(tài)不同，色譜分離技術(shù)可分為氣相色譜分離、液相色譜分離、超臨 界色譜分離。（4）根據(jù)操作壓力不同，色譜分離技術(shù)不同可分為低壓色譜分離、中壓色譜分離

39、、高壓色譜分離。19. 在吸附分離技術(shù)中，如何選擇洗脫劑？（1）洗脫劑：選擇與吸附劑溶解度參數(shù)相近的試劑作為洗脫劑；洗脫劑對(duì)被吸附物有較大的溶解度；（2）洗脫劑為水溶液時(shí)，需考慮洗脫pH：對(duì)于弱酸性物質(zhì)，在偏酸性條件吸附，洗脫應(yīng)為堿性水溶液；弱堿性物質(zhì)則相反。（3）如果吸附在高濃度鹽溶液中，則洗脫可僅用水。（4）易揮發(fā)性物質(zhì)，可用熱水或蒸汽解吸。20. 蛋白質(zhì)含量/濃度測(cè)定方法有哪些？各有什么特點(diǎn)？蛋白質(zhì)含量（濃度）測(cè)定，是生化檢測(cè)中的基本內(nèi)容，常見(jiàn)的測(cè)定方法有：凱氏定氮法，雙縮尿法（Biuret法）、Folin酚試劑法（Lowry法）和紫外吸收法。考馬斯亮藍(lán)法（Bradford法）。 1）凱

40、氏定氮 靈敏度低，適用于0.2 1.0mg氮，誤差為 2 費(fèi)時(shí) 810小時(shí) 將蛋白氮轉(zhuǎn)化為氨，用酸吸收后滴定 非蛋白氮（可用三氯乙酸沉淀蛋白質(zhì)而分離） 用于標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)含量的準(zhǔn)確測(cè)定；干擾少；費(fèi)時(shí)太長(zhǎng) 2）雙縮脲法（Biuret法） 靈敏度低 120mg 中速 2030分鐘 多肽鍵堿性Cu2紫色絡(luò)合物 硫酸銨；Tris緩沖液；某些氨基酸 用于快速測(cè)定，但不太靈敏；不同蛋白質(zhì)顯色相似 3）紫外吸收法 較為靈敏 50100g 快速 510分鐘 蛋白質(zhì)中的酪氨酸和色氨酸殘基在280nm處的光吸收 各種嘌吟和嘧啶； 4）Folin酚試劑法（Lowry法） 靈敏度高 5g 慢速 4060分鐘 雙縮脲反應(yīng)；

41、磷鉬酸磷鎢酸試劑被Tyr和Phe還原 硫酸銨；Tris緩沖液；甘氨酸；各種硫醇 耗費(fèi)時(shí)間長(zhǎng)；操作要嚴(yán)格計(jì)時(shí)；顏色深淺隨不同蛋白質(zhì)變化 5）考馬斯亮藍(lán)法(Bradford法) 靈敏度最高 15g 快速515分鐘 考馬斯亮藍(lán)染料與蛋白質(zhì)結(jié)合時(shí)，其lmax由465nm變?yōu)?95nm 強(qiáng)堿性緩沖液；21. （重組）蛋白質(zhì)量檢測(cè)方法有哪些？（重組）蛋白必須經(jīng)過(guò)嚴(yán)格的質(zhì)量控制才能成為產(chǎn)品。重組蛋白的質(zhì)量控制指標(biāo)包括：1）重組蛋白的鑒別（序列）2）重組蛋白的純度（雜質(zhì)的類(lèi)型）3）重組蛋白的活性（檢測(cè)方法）4）重組蛋白的安全性 5）重組蛋白的穩(wěn)定性6）重組蛋白的一致性（構(gòu)象與構(gòu)型）具體的檢測(cè)項(xiàng)目和方法有：1）

42、產(chǎn)品是否含內(nèi)毒素 家兔熱原法2）蛋白質(zhì)是否變異 肽譜、HPLC、等電聚焦、毛細(xì)管電泳3）甲硫氨酸是否被甲酰化肽譜、質(zhì)譜、HPLC、Edman分析4）蛋白質(zhì)是否變性、聚合、脫氨基SDS-PAGE、凝膠層析、等電聚焦、質(zhì)譜、HPLC、毛細(xì)管電泳、Edman分析5）配體是否脫落 SDS-PAGE、免疫分析6）氨基酸是否發(fā)生取代 氨基酸分析、肽譜、質(zhì)譜、毛細(xì)管電泳7）產(chǎn)品是否被細(xì)菌、病毒、支原體等污染 微生物學(xué)檢測(cè)22、生物技術(shù)產(chǎn)品的分離提取工藝應(yīng)考慮那些因素？ 某一具體產(chǎn)品的分離提取工藝與下列情況有關(guān)： (1)是胞內(nèi)產(chǎn)物還是胞外產(chǎn)物；(2) 原料中產(chǎn)物和主要雜質(zhì)濃度；(3)產(chǎn)物和主要雜質(zhì)的物理化學(xué)特

43、性及差異； (4)產(chǎn)品用途和質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)；(5)產(chǎn)品的市場(chǎng)價(jià)格；(6)廢液的處理方法等。 23、“清潔生產(chǎn)”應(yīng)該包括哪三方面的內(nèi)容？ (1)清潔生產(chǎn)工藝技術(shù)和過(guò)程：含先進(jìn)的無(wú)廢少?gòu)U技術(shù)、高效的裝備和完善的管理；(2)清潔產(chǎn)品：使用中和使用后對(duì)人體和環(huán)境無(wú)害；(3)清潔能源：包括常規(guī)能源清潔利用、采用節(jié)能技術(shù)、再生能源和新能源的開(kāi)發(fā)利用。 六、 綜合題 1 試述非線性色譜的概念及其特點(diǎn)?非線性色譜: 流動(dòng)相中的樣品濃度(Cm)與固定相中的樣品濃度(Cs)不呈線性關(guān)系的色譜.分析色譜大多屬于線性色譜;制備色譜大多屬于非線性色譜非線性色譜的特點(diǎn). 樣品的保留值可變:非線性色譜的保留值隨樣品及其濃度的不同

44、而變化;. 峰形的不對(duì)稱(chēng)性:不是高斯正態(tài)分布的;. 色譜峰的峰高與濃度不是線性關(guān)系:峰高增加的速率隨濃度的增加而下降.2 什么叫吸附等溫線?研究吸附等溫線有什么意義?附等溫線：指在一定溫度下物質(zhì)分子在兩相界面上進(jìn)行的吸附過(guò)程達(dá)到平衡時(shí)它們?cè)趦上嘀袧舛戎g的關(guān)系。研究吸附等溫線可以提供得到以下方面的信息：. 預(yù)測(cè)代表該吸附等溫線的組分在非線性色譜中色譜峰的形狀；. 為非線性色譜分離與純化物質(zhì)選擇最佳條件；. 反映被分離物質(zhì)分子與固定相表面的作用，從而研究分子的構(gòu)型及吸附狀態(tài)。. 建立分子結(jié)構(gòu)-吸附之間的定量關(guān)系，從而由分子結(jié)構(gòu)預(yù)測(cè)吸附性能。3 做為優(yōu)良的凝色譜介質(zhì)應(yīng)該具備什么基本特點(diǎn)?. 介質(zhì)本

45、身為惰性物質(zhì)，不與溶質(zhì)、溶劑分子發(fā)生任何作用；. 應(yīng)盡量減少介質(zhì)內(nèi)含的帶電離子基團(tuán)，以減少特異性吸附，提高蛋白質(zhì)的收率；. 介質(zhì)內(nèi)孔徑大小要分布均勻，即孔徑分布較窄。. 凝膠珠粒大小均勻；. 介質(zhì)要有良好的物理化學(xué)穩(wěn)定性及較高的機(jī)械強(qiáng)度，易于消毒。4 做為優(yōu)良的HPLC填料應(yīng)具備什么基本的物理化學(xué)特性?在物理結(jié)構(gòu)上的要求: 合適的顆粒大小及較窄的粒度分布; 一定的顆粒強(qiáng)度; 一定的孔徑大小和孔徑分布,避免復(fù)雜的微孔結(jié)構(gòu); 一定的溶脹及收縮水平;優(yōu)良的HPLC填料目前的主要發(fā)展方向: 顆粒單分散的填料; 貫穿性超大孔結(jié)構(gòu)的填料; 小顆粒的非多孔填料; 在化學(xué)結(jié)構(gòu)上的要求:填料的化學(xué)結(jié)構(gòu),特別是顆

46、粒表面和內(nèi)孔表面的化學(xué)結(jié)構(gòu)(如連接在基質(zhì)上的官能基團(tuán)或鏈段)是影響色譜熱力學(xué)行為(保留值,選擇性等)的主要因素 特定的選擇性; 良好的化學(xué)穩(wěn)定性; 避免不可逆吸附;5 試述羥基磷灰石做為一種有廣闊發(fā)展前途的色譜填料的主要特點(diǎn).羥基磷灰石(hydroxyapatite, HAP)是一種弱陽(yáng)離子或弱陰離子交換層析材料.其材料本是骨骼和牙齒等生物硬組織的主要無(wú)機(jī)成分,與生物組織有特異性的親和力和相容性.其優(yōu)點(diǎn)是:能精確地分離,純化結(jié)構(gòu)上只有微小差別的生物大分子.做為一種優(yōu)良的色譜填料,羥基磷灰石具有以下特點(diǎn):. 高機(jī)械強(qiáng)度:可以耐受15MPa以上壓力,陶瓷HAP可以耐受幾十MPa的壓力. 高柱效:球

47、形HAP顆粒大小,形狀及孔隙大小均適合HPLC的要求.其顆粒及孔徑小,有比較高的柱效. 化學(xué)和熱穩(wěn)定性:是磷酸鈣鹽中最穩(wěn)定的,在中性和堿性不相中非常穩(wěn)定,溶解度很低,熱穩(wěn)定性很高,可采用高溫制備方法生產(chǎn). 低的非可逆性吸附:HAP有非常低的非可逆性吸附. 表面修飾性:HAP表面比較容易進(jìn)行各種化學(xué)修飾. 總之HAP:高選擇性,高鍵合容量,低的非可逆吸附,良好的化學(xué)和熱穩(wěn)定性。6 與傳統(tǒng)的稀釋法和透析法相比，液相色譜復(fù)性的優(yōu)點(diǎn)是：. 在進(jìn)樣后可很快的除去變性劑；. 色譜固定相對(duì)變性蛋白質(zhì)的吸附可明顯的減少、甚至完全消除變性蛋白質(zhì)分子在脫離變性劑環(huán)境后的分子聚集，從而避免了沉淀的產(chǎn)生，提高蛋白質(zhì)復(fù)

48、性的質(zhì)量和活性回收率；. 在蛋白質(zhì)復(fù)性的同時(shí)，可使目標(biāo)蛋白質(zhì)與雜蛋白分離達(dá)到純化的目的，使復(fù)性和純化同時(shí)進(jìn)行；. 便于回收變性劑，降低廢水處理成本。7 在對(duì)包含體蛋白質(zhì)進(jìn)行增溶和復(fù)性的過(guò)程中為什么要加入還原劑,同時(shí)為什么還必須加入金屬螯合劑?常用的還原劑有哪些?在復(fù)性后為什么要加入氧化劑?常用的氧化劑有哪些?（見(jiàn)21）8 什么叫雙水相萃取?在雙水相萃取中為什么要盡量將細(xì)胞碎片集中在下相?可以采取什么可能的措施在使細(xì)胞碎片盡量集中在下相的同時(shí),使目標(biāo)蛋白質(zhì)盡可能集中在上相? 9 什么是徑向色譜?徑向色譜應(yīng)用于生物物質(zhì)分離有什么優(yōu)點(diǎn)?采用徑向流技術(shù)的色譜，即樣品和流動(dòng)相沿徑向流動(dòng)，可以從色譜柱的周

49、圍流向圓心，也可以從圓心流向柱的周?chē)Ｍǔ２捎脧闹闹車(chē)飨驁A心的方式。優(yōu)點(diǎn)：可以在較小的柱床層高度時(shí)使用較大的流動(dòng)相速度；在較高流動(dòng)相速度時(shí)，反壓降低；可以線性地增加樣品處理量，樣品可以在完全相同的色譜條件下直接放大。10 利用微載體進(jìn)行動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的優(yōu)點(diǎn)有哪些？微載體培養(yǎng)的優(yōu)點(diǎn): 表面積/體積比大; 微載體懸浮于培養(yǎng)基中,細(xì)胞生長(zhǎng)環(huán)境均一,便于監(jiān)測(cè)和控制; 培養(yǎng)基利用率高; 采樣重演性好; 收獲過(guò)程不復(fù)雜; 放大較容易; 勞動(dòng)強(qiáng)度小,占用空間小.11 為什么動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)要用血清培養(yǎng)基？血清培養(yǎng)基使用有何缺點(diǎn)？答：1）因?yàn)閯?dòng)物細(xì)胞正常生長(zhǎng)所需要的一些必要成份均存在于血清中，而且這些成份的組成

50、及其含量至今沒(méi)有被闡明，因此只能直接采用血清進(jìn)行培養(yǎng)，而目前尋找無(wú)血清的制品代替進(jìn)行培養(yǎng)并沒(méi)有獲得廣泛的成功。2）采用血清培養(yǎng)基有以下缺點(diǎn)： 血清是培養(yǎng)基成本的主要部分；血清中含有細(xì)胞生長(zhǎng)必須的微量組分，但這些組分的成分及其作用至今未清楚，因此無(wú)法取代； 血清的存在是產(chǎn)物純化的主要障礙； 血清是病毒污染及其他未知因素影響的主要來(lái)源，增加了細(xì)胞培養(yǎng)產(chǎn)品潛在的使用危險(xiǎn)； 血清同時(shí)也有生長(zhǎng)抑制的作用； 血清使用使實(shí)驗(yàn)和生產(chǎn)過(guò)程標(biāo)準(zhǔn)化變得困難。12 試述聚賴(lài)氨酸/海藻酸（PLL/ALG）微囊化的原理：原理是：海藻酸的水溶液以鈣鹽形式存在是呈凝膠狀態(tài)，用螯合劑去除鈣離子后又恢復(fù)溶液狀態(tài)，當(dāng)海藻酸鈣用聚賴(lài)

51、氨酸預(yù)先處理后，就不再被螯合劑去鈣而溶解。據(jù)此，先將動(dòng)物細(xì)胞與海藻酸混合，滴入CaCL2溶液中成微珠，用聚賴(lài)氨酸處理表面，再用螯合劑處理，則表面還是呈凝膠狀態(tài)而中間成液態(tài)。13 影響聚賴(lài)氨酸/海藻酸微囊化的一些因素：答：1）半透膜的孔徑大小是關(guān)鍵，由PLL的分子量所決定；2）海藻酸的純度、黏度及甘露糖醛酸/古羅糖醛酸比例都會(huì)影響微囊化的形成及機(jī)械性能；3）動(dòng)物細(xì)胞的存活率與微囊化過(guò)程的時(shí)間及溫度pH、滲透壓等有關(guān)；14 高壓勻漿法的作用機(jī)理：作用機(jī)理：高壓泵將電機(jī)的旋轉(zhuǎn)運(yùn)動(dòng)轉(zhuǎn)變成勻漿閥柱桿的直線運(yùn)動(dòng)，從高壓室（幾十兆帕）壓出細(xì)胞懸浮液，經(jīng)過(guò)碰撞環(huán)的撞擊后改變方向從出口管?chē)姵?，使?xì)胞經(jīng)歷較高的流

52、速下的剪切碰撞發(fā)生較大的變形，從而達(dá)到破碎細(xì)胞的目的15 化學(xué)滲透法破碎細(xì)胞的原理及其優(yōu)缺點(diǎn)。答：作用機(jī)理：某些有機(jī)溶劑，抗生素，表面活性劑，金屬螯合劑，變性劑等化學(xué)藥品都可以改變細(xì)胞壁或膜的通透性，從而使內(nèi)容物有選擇地滲透出來(lái)，這種處理方法叫滲透法。優(yōu)點(diǎn)（相對(duì)機(jī)械破碎）：對(duì)產(chǎn)物釋出有一定的選擇性；細(xì)胞保持完整，碎片少，利于進(jìn)一步提??；核酸釋放量少，黏度低，便于進(jìn)一步分離。缺陷：時(shí)間長(zhǎng)，效率低；化學(xué)試劑有毒；通用性差。16 酶溶法破細(xì)胞的原理、優(yōu)缺點(diǎn)是什么？機(jī)理：就是利用生物酶將細(xì)胞壁和細(xì)胞膜消化溶解的方法。優(yōu)點(diǎn)：一定的選擇性；細(xì)胞外形完整，核酸釋放少，有利于進(jìn)一步分離過(guò)程缺點(diǎn)：（只能用于實(shí)驗(yàn)

53、室）產(chǎn)物抑制造成效率低下；溶酶價(jià)格高；通用性差， 不易確定最佳條件；17 微波加熱法胞的原理、優(yōu)缺點(diǎn)是什么？機(jī)理：微波加熱導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)極性物質(zhì)，尤其是水分子吸收微波能，產(chǎn)生大量熱量，使胞內(nèi)溫度迅速上升，液態(tài)水汽化產(chǎn)生的壓力將細(xì)胞膜和細(xì)胞壁沖裂，形成微小孔洞，進(jìn)一步加熱可導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)部和細(xì)胞壁水分減少，細(xì)胞收縮，表面出現(xiàn)裂紋。優(yōu)點(diǎn)：微波穿透性強(qiáng)，選擇性高、加熱效率高。缺陷：一般只適合對(duì)熱穩(wěn)定物質(zhì)的分離；被處理的物料要具有良好的吸水性；不適于富含淀粉和樹(shù)膠等的天然植物。18 包含體蛋白溶解的主要方式是什么？在溶解過(guò)程中為什么要加入還原劑答：包涵體的溶解必須用很強(qiáng)的變性劑，如8mol/L尿素、68mol

54、/L鹽酸胍，通過(guò)離子間的相互作用破壞包涵體蛋白間的氫鍵而增溶蛋白。其中尿素的增溶效果稍差，異氰鹽酸胍最強(qiáng)；去污劑，如SDS，可以破壞蛋白內(nèi)的疏水鍵，可以增溶幾乎所有的蛋白，但由于無(wú)法徹底去除而不允許用在制藥行業(yè)中；酸，如70%甲酸，可以破壞蛋白的次級(jí)鍵從而增溶蛋白，這種方法只適合少數(shù)蛋白質(zhì)。對(duì)于含有半胱氨酸的蛋白，在增溶時(shí)應(yīng)加入還原劑（如DTT、GSH、-ME）打開(kāi)蛋白質(zhì)中所有二硫鍵，對(duì)于沒(méi)有二硫鍵的目標(biāo)蛋白有時(shí)也應(yīng)使用還原劑，因?yàn)楹蜴I的雜蛋白會(huì)影響包涵體的溶解，同時(shí)還應(yīng)加入金屬螯合劑，如EDTA或EGTA，用來(lái)螯合Cu2+、Fe3+等金屬離子以防止其與還原狀態(tài)的巰基發(fā)生氧化反應(yīng)。19 包

55、涵體蛋白質(zhì)含有二個(gè)以上二硫鍵應(yīng)該如何處理？為什么要在復(fù)性完成后再加入氧化劑？包涵體蛋白首先用高溶度的變性劑促進(jìn)蛋白質(zhì)的溶解，為了曾溶往往在溶液中加入一定量的還原劑打開(kāi)蛋白質(zhì)的二硫鍵，如DTT、GSH或巰基乙醇（-ME）等，同時(shí)也加入金屬螯合劑，絡(luò)合高價(jià)金屬例子，防止其與-SH結(jié)合。復(fù)性時(shí)，加入氧化劑可以引發(fā)變性蛋白質(zhì)形成正確的S-S鍵而復(fù)性，并與前面加入的還原劑形成氧化還原對(duì)，能促進(jìn)非正確折疊的二硫鍵快速交換，達(dá)到正確配對(duì)與折疊，促進(jìn)正確配對(duì)的產(chǎn)率。20 根據(jù)流體各組分尺寸大小的不同，利用高分子聚合膜，過(guò)濾分離微米級(jí)的細(xì)胞、細(xì)胞碎片和生物大分子的過(guò)程，叫微孔膜過(guò)濾。 優(yōu)點(diǎn)： 容易做到封閉式操作，不受環(huán)境污染 設(shè)備投資少，操作安全； 加工量可大可小，十分方便； 有利于分離密度差小而難以離心的固體，可直接用于下游的層析