腫瘤模型專題

1、腫瘤模型專題 腫瘤模型專題 1. 最新的藥效學指導原則要求化藥臨床前進行至少5種人源腫瘤的體內(nèi)抗癌活性評價，以確定藥效及抗瘤譜。 2. 瘤株對藥物的敏感性通過體外篩選可以說明，而體內(nèi)評價更大程度上是考慮藥物經(jīng)體內(nèi)吸收、分布、代謝之后的活性，由于目前的腫瘤模型多采用皮下接種，并不能完全反映藥物的組織分布對其影響，所以感覺這種要求就顯得不是很必要。注解：體內(nèi)的敏感性不是僅考慮吸收分布代謝的影響，一些樣品，體外活性都是不錯的，體內(nèi)甚至是瘤內(nèi)直接注射給到很高劑量都沒有效果，腫瘤細胞在體內(nèi)和體外的生存環(huán)境差別很大，體外模擬的生存環(huán)境完全不能體現(xiàn)出體內(nèi)的狀態(tài)。 3. 皮下接種是一個目前能找到的最好的權宜之

2、計了，實際上，sfda明確表示，鼓勵原位腫瘤模型，但是由于技術的原因，很多瘤株都無法實現(xiàn)。而皮下模型有它的一系列優(yōu)點：穩(wěn)定，便于觀察，易于構(gòu)建，易于控制等等，能夠在一定程度上反映藥物經(jīng)過體內(nèi)過程的療效，所以目前只能用它來進行評價。 4. 實際上原位腫瘤模型仍然不能很好的反映臨床腫瘤的特點，目前能夠預見得到最好的模型應該是經(jīng)過基因修飾（轉(zhuǎn)基因等）的能夠集中比較均勻的自發(fā)模型，這才是和臨床最接近的腫瘤模型。 但是目前的經(jīng)過基因修飾的自發(fā)腫瘤模型種類很少，而且可控制性差，周期長，所以還要經(jīng)過很長時間的改善才能大規(guī)模的應用。 5. 常規(guī)的腫瘤細胞株接種后如果不能成瘤，細胞懸液就會被動物吸收 6. 瘤體

3、積可用游標卡尺量最長徑（a)和最短徑（b），體積計算公式：v=ab/6,每2-3天測一次。體積=寬*長/2的公式計算腫瘤體積；抑瘤率=（對照組-治療組）/對照組*100%； tumor size = width2 length 0.52).； ab2/6；關于腫瘤體積的計算：3.1415926./6約等于/2。如果想做得講究一點，應該用rtv計算腫瘤體積： rtv（某日某老鼠的相對腫瘤體積）=tv(測量當天該老鼠的腫瘤體積）/tv（分組當天該老鼠的腫瘤體積）*100，在此基礎上進行平均值sd等數(shù)據(jù)的計算 7. 是否必須稱重小鼠的胸腺和脾臟 8. 超過7天的腹水再傳代就很容易出現(xiàn)血性；動物的周齡

4、也不要太大，6周左右。傳代次數(shù)太多也很容易出現(xiàn)血性腹水。血性腹水可以離心后加0.17 n的nh4cl溶液破紅細胞，然后精確一些的控制條件（接種量，傳代時間，動物周齡等）傳幾代，很多情況下再傳一兩代后會有不血性的種鼠出現(xiàn)，然后用這只種鼠的腹水繼續(xù)傳代 9. 皮下接種與剝瘤子：小鼠腫瘤剝瘤子是一個艱難的過程，但是可以一定程度上的改善一下：接種的時候要精確控制接種在皮下，靠皮內(nèi)會與皮膚強烈粘連，靠肌肉會與肌肉強烈粘連，而且不要 太靠腋窩里面，可以往尾部靠一些，也可以稍微的往背部靠一點，不要往腹部靠，容易使腫瘤被墊料磨爛。 10. ld50是毒理中的半數(shù)致死量，ed50是體外試驗中的半數(shù)有效量，一般體

5、內(nèi)實驗沒有類似的指標，如果想比較幾個類似物的藥效還是做量效曲線比較好。 11. 劑量設置應該按照ld10(10%致死劑量，也叫最大耐受劑量）來分組，一般分別采用 1/2 ld10, 1/4 ld10, 1/7 ld10 或 1/10 ld,但最大劑量不得超過ld10。這里面還得考慮ed 50，ld10與ed50的劑量相差越大越好。 用ld50作為標準設置劑量是不現(xiàn)實的，因為動物實驗是不可能允許10%以上動物死亡的。 12. 說到療效的比較，如只是發(fā)文章，比較不同基團之間可能對母體抑瘤率的影響，一般做做體外試驗，比一比大家的ic50就好了，不太做體內(nèi)。如是真正的篩藥，我個人有些觀點：這個不是孤立

6、起來看某個或者某幾個劑量下誰比誰的抑瘤率高。主要要看誰更具有可開發(fā)性。首先，要考慮它的毒性以及治療窗口的大小，通俗的說，就是這個要在發(fā)揮療效的劑量下，毒性是否大？比如a藥，10mg抑瘤率有50%，但是體重下降了20%;而b藥，10mg的時候根本無效，30mg的時候有40%的抑瘤率，60mg的時候抑瘤率高達80%，而且體重幾乎沒有下降，這個時候a藥與b藥如何比較？特別如果是公司篩選新藥，還要考慮成本，病人可接受度（動物上的有效劑量換算到人一天要吃2斤，這種藥也是不現(xiàn)實的），制劑，工藝等等方面。如果單純從藥理的角度給出答案， 至少要考慮毒性和劑量限制的問題。 13. 關于劑量選擇，ld50的幾分之

7、一是一種比較通用的方法，目前相對更合理一些的劑量選擇是做一個簡單的多次給藥的毒理試驗來確定劑量，我們一般會連續(xù)給藥一周，然后再觀察一周，這樣摸出來的最大劑量可以直接用于藥效試驗，然后其他的劑量都在此劑量的基礎上往下減。 14. 說到給藥療程，一般初篩的藥物都是連續(xù)天天給藥，qd。但是給藥途徑，特別是i.v與i.p的選擇，我們都是先做一個簡單的pk試驗考察一下，再確定，特別是如果pk試驗的結(jié)果顯示，血藥濃度甚至達不到體外ic50的濃度，那么是否進行體內(nèi)試驗，就有待商榷了。連續(xù)i.p，小鼠的皮膚有時候會變厚，你可以換一邊給藥。 15. 動物選擇: km小鼠,裸鼠,c57 等均可作為,但是個人認為k

8、m能做出來最好,畢竟比較有普遍性,還是正常生理狀態(tài)的健康動物,比較有說服力,還便宜,裸鼠或者其他特定品種,比較適合特定的瘤株 16. 關于腫瘤細胞活力的問題: 一般培養(yǎng)的腫瘤細胞活力往往是不夠的,很難在短時間內(nèi)長到規(guī)定重量,所以建議至少在動物體內(nèi)傳2代,讓腫瘤細胞活力充分體現(xiàn)以后再開始用于實驗. 傳代數(shù)次的原因在于讓腫瘤細胞充分活化，要不活化也行，多接種點吧 17. 關于接種部位的問題:以小鼠為例一般可以選擇腋下或者后肢,背部血管不發(fā)達,營養(yǎng)不夠,一般不建議采用.接種一般采用皮下注射,針頭沿皮膚水平進入,然后挑起表皮,注射 18. 關于腫瘤重量的問題: 模型組腫瘤重量應該不低于0.5g 19.

9、 肺內(nèi)原位注射制作腫瘤模型效果頗好,流程如下:麻醉-固定-皮膚消毒-剪開左側(cè)胸部皮膚,大約第2-3肋間的位置-用鑷子輕輕撥開皮下筋膜,可以看到呼吸運動的肺葉-將準備好的腫瘤細胞注射入肺,分層縫合ok 20.胸膜活檢穿刺針 規(guī)格： #20 #25(14g 12g) l 65 mm；用途： 供人體胸腔穿刺，鉤取胸膜活體組織用 21. 開始做腫瘤藥效評價，應該采用s180這些小鼠腫瘤模型。一個方面這些腫瘤對于藥物很敏感，而且周期短，花費也少。但如果要成藥，裸鼠模型是必需的。 22. 一般瘤重的sd在平均值的7080%以下就還湊活，漂亮一點的是在30%以下，實在不行，100%也勉強，就是特別難看，但是sd越大，統(tǒng)計上就越不利 23. 皮下腫瘤模型中，腋下最適合腫瘤生長。接種時由裸鼠體側(cè)腰部稍靠上的部位進針，要保證與接種點的距離小于針頭的長度，向頭部方穿行，絕對不能刺破皮膚或者刺破肌肉層，當針頭到達接種位點時注射，退出針頭，這樣操作的目