藥理學專業(yè)畢業(yè)論文 [精品論文] 中藥復方中綠原酸與綠原酸單體的跨細胞轉(zhuǎn)運及其機制的比較研究

藥理學專業(yè)畢業(yè)論文精品論文中藥復方中綠原酸與綠原酸單體的跨細胞轉(zhuǎn)運及其機制的比較研究關(guān)鍵詞中藥復方綠原酸綠原酸單體跨細胞轉(zhuǎn)運藥動學摘要中藥復方藥動學研究是中藥現(xiàn)代化進程中必須解決的重大和難點課題。藥動學包括藥物的吸收、分布、代謝和排泄（ADME）四個方面。其中吸收、分布和排泄直接決定于藥物的跨膜/跨細胞轉(zhuǎn)運。因此藥物的跨膜/跨細胞轉(zhuǎn)運是藥動學研究首先要解決的核心問題。藥物跨膜/跨細胞轉(zhuǎn)運機制依賴于建立合適的藥物體外吸收模型。來源于人結(jié)腸癌細胞的CACO2細胞系和來源于狗腎近曲小管上皮的MDCK細胞系，是國際上研究藥物跨細胞轉(zhuǎn)運機制的常用模型細胞。本論文建立了CACO2、MDCK兩種細胞模型，以中藥有效成分綠原酸（CHLOROGENICACID）為研究對象，對綠原酸標準品（CGA）和中藥復方雙黃連口服液中綠原酸（CGASHL）的跨細胞轉(zhuǎn)運特點及其機制進行了較詳盡的比較研究，為復方中藥的藥動學研究提供可借鑒的經(jīng)驗。1細胞單層模型的建立與驗證。采用美國組織培養(yǎng)中心（AMERICANTISSUECULTURECENTER，ATCC）的CACO2、MDCK細胞株，MILLIPORE公司的MILLICELL系統(tǒng)，建立了CACO2、MDCK細胞單層模型。通過顯微鏡觀察細胞的形態(tài)特征，采用跨膜電阻（THETRANSEPITHELIAELECTRICALRESISTANCE，TEER）和熒光素鈉透過等方法對細胞單層模型進行質(zhì)控，結(jié)果顯示CACO2細胞生長21天左右，TEER值達到500700C。MDCK細胞生長7天左右，TEER值均大于140C。用熒光素鈉進行正向透過實驗，2小時后熒光素鈉在CACO2細胞單層的凈透過量為376GH1CM2，在MDCK細胞單層的滲透率為079106CMS1，均符合CACO2、MDCK細胞模型的要求，表明CACO2、MDCK細胞模型建立成功。2利用細胞單層模型探討雙黃連口服液中綠原酸的跨細胞轉(zhuǎn)運。對CGASHL進行雙向轉(zhuǎn)運實驗。用M2E酶標儀測定CGASHL在不同方向，不同濃度下的跨細胞轉(zhuǎn)運情況并計算累積透過量。在兩種細胞模型上，CGASHL均有不同程度的吸收和分泌。CGASHL在CACO2細胞模型上的吸收無劑量依賴性。與CGA比較，CGASHL吸收快得多，尤其是在吸收早期（30MIN），有飽和特征；在MDCK細胞模型上CGASHL的累積吸收量隨時間逐漸增加，90120MIN達峰值，其后累積吸收量反而減少。與CGA相比，達峰時間短，峰值大；與CGA比較，CGASHL在CACO2細胞模型上的分泌量較小，且無劑量依賴性特點；CGASHL在MDCK細胞模型上的累積分泌曲線與CACO2模型的結(jié)果類似具有飽和性。在MDCK細胞單層模型上，CGASHL的分泌是一可飽和過程。維拉帕米（VERAPAMIL，VER）顯著抑制CGASHL的跨細胞分泌，特別是對小劑量，中劑量組CGASHL的外排抑制作用強，但對高劑量組作用弱。合用丙磺舒（PROBENECID，PBD）、?；撬幔═AURINE，TAU）、青霉素鈉（BENZYLPENICILLINSODIUM，PCGNA）后，CGASHL的分泌量均明顯降低。上述研究證明，CGA和CGASHL跨細胞轉(zhuǎn)運存在多種轉(zhuǎn)運方式，既有被動轉(zhuǎn)運，又有主動轉(zhuǎn)運，且轉(zhuǎn)運是雙向的，即同時存在吸收和分泌過程，吸收時有反向的外排，分泌時有吸收/重吸收的影響。主動轉(zhuǎn)運過程又有多種轉(zhuǎn)運蛋白參與，P糖蛋白（PGP）、有機陰離子轉(zhuǎn)運蛋白（OAT）均介導參與CGASHL的分泌。CGA和CGASHL的吸收與分泌均有非常明顯的差異。不能以有效單體的藥動學參數(shù)來解釋、推斷復方中有效成分的藥動學特點，是本文的重要結(jié)論之一。正文內(nèi)容中藥復方藥動學研究是中藥現(xiàn)代化進程中必須解決的重大和難點課題。藥動學包括藥物的吸收、分布、代謝和排泄（ADME）四個方面。其中吸收、分布和排泄直接決定于藥物的跨膜/跨細胞轉(zhuǎn)運。因此藥物的跨膜/跨細胞轉(zhuǎn)運是藥動學研究首先要解決的核心問題。藥物跨膜/跨細胞轉(zhuǎn)運機制依賴于建立合適的藥物體外吸收模型。來源于人結(jié)腸癌細胞的CACO2細胞系和來源于狗腎近曲小管上皮的MDCK細胞系，是國際上研究藥物跨細胞轉(zhuǎn)運機制的常用模型細胞。本論文建立了CACO2、MDCK兩種細胞模型，以中藥有效成分綠原酸（CHLOROGENICACID）為研究對象，對綠原酸標準品（CGA）和中藥復方雙黃連口服液中綠原酸（CGASHL）的跨細胞轉(zhuǎn)運特點及其機制進行了較詳盡的比較研究，為復方中藥的藥動學研究提供可借鑒的經(jīng)驗。1細胞單層模型的建立與驗證。采用美國組織培養(yǎng)中心（AMERICANTISSUECULTURECENTER，ATCC）的CACO2、MDCK細胞株，MILLIPORE公司的MILLICELL系統(tǒng)，建立了CACO2、MDCK細胞單層模型。通過顯微鏡觀察細胞的形態(tài)特征，采用跨膜電阻（THETRANSEPITHELIAELECTRICALRESISTANCE，TEER）和熒光素鈉透過等方法對細胞單層模型進行質(zhì)控，結(jié)果顯示CACO2細胞生長21天左右，TEER值達到500700C。MDCK細胞生長7天左右，TEER值均大于140C。用熒光素鈉進行正向透過實驗，2小時后熒光素鈉在CACO2細胞單層的凈透過量為376GH1CM2，在MDCK細胞單層的滲透率為079106CMS1，均符合CACO2、MDCK細胞模型的要求，表明CACO2、MDCK細胞模型建立成功。2利用細胞單層模型探討雙黃連口服液中綠原酸的跨細胞轉(zhuǎn)運。對CGASHL進行雙向轉(zhuǎn)運實驗。用M2E酶標儀測定CGASHL在不同方向，不同濃度下的跨細胞轉(zhuǎn)運情況并計算累積透過量。在兩種細胞模型上，CGASHL均有不同程度的吸收和分泌。CGASHL在CACO2細胞模型上的吸收無劑量依賴性。與CGA比較，CGASHL吸收快得多，尤其是在吸收早期（30MIN），有飽和特征；在MDCK細胞模型上CGASHL的累積吸收量隨時間逐漸增加，90120MIN達峰值，其后累積吸收量反而減少。與CGA相比，達峰時間短，峰值大；與CGA比較，CGASHL在CACO2細胞模型上的分泌量較小，且無劑量依賴性特點；CGASHL在MDCK細胞模型上的累積分泌曲線與CACO2模型的結(jié)果類似具有飽和性。在MDCK細胞單層模型上，CGASHL的分泌是一可飽和過程。維拉帕米（VERAPAMIL，VER）顯著抑制CGASHL的跨細胞分泌，特別是對小劑量，中劑量組CGASHL的外排抑制作用強，但對高劑量組作用弱。合用丙磺舒（PROBENECID，PBD）、?；撬幔═AURINE，TAU）、青霉素鈉（BENZYLPENICILLINSODIUM，PCGNA）后，CGASHL的分泌量均明顯降低。上述研究證明，CGA和CGASHL跨細胞轉(zhuǎn)運存在多種轉(zhuǎn)運方式，既有被動轉(zhuǎn)運，又有主動轉(zhuǎn)運，且轉(zhuǎn)運是雙向的，即同時存在吸收和分泌過程，吸收時有反向的外排，分泌時有吸收/重吸收的影響。主動轉(zhuǎn)運過程又有多種轉(zhuǎn)運蛋白參與，P糖蛋白（PGP）、有機陰離子轉(zhuǎn)運蛋白（OAT）均介導參與CGASHL的分泌。CGA和CGASHL的吸收與分泌均有非常明顯的差異。不能以有效單體的藥動學參數(shù)來解釋、推斷復方中有效成分的藥動學特點，是本文的重要結(jié)論之一。中藥復方藥動學研究是中藥現(xiàn)代化進程中必須解決的重大和難點課題。藥動學包括藥物的吸收、分布、代謝和排泄（ADME）四個方面。其中吸收、分布和排泄直接決定于藥物的跨膜/跨細胞轉(zhuǎn)運。因此藥物的跨膜/跨細胞轉(zhuǎn)運是藥動學研究首先要解決的核心問題。藥物跨膜/跨細胞轉(zhuǎn)運機制依賴于建立合適的藥物體外吸收模型。來源于人結(jié)腸癌細胞的CACO2細胞系和來源于狗腎近曲小管上皮的MDCK細胞系，是國際上研究藥物跨細胞轉(zhuǎn)運機制的常用模型細胞。本論文建立了CACO2、MDCK兩種細胞模型，以中藥有效成分綠原酸（CHLOROGENICACID）為研究對象，對綠原酸標準品（CGA）和中藥復方雙黃連口服液中綠原酸（CGASHL）的跨細胞轉(zhuǎn)運特點及其機制進行了較詳盡的比較研究，為復方中藥的藥動學研究提供可借鑒的經(jīng)驗。1細胞單層模型的建立與驗證。采用美國組織培養(yǎng)中心（AMERICANTISSUECULTURECENTER，ATCC）的CACO2、MDCK細胞株，MILLIPORE公司的MILLICELL系統(tǒng)，建立了CACO2、MDCK細胞單層模型。通過顯微鏡觀察細胞的形態(tài)特征，采用跨膜電阻（THETRANSEPITHELIAELECTRICALRESISTANCE，TEER）和熒光素鈉透過等方法對細胞單層模型進行質(zhì)控，結(jié)果顯示CACO2細胞生長21天左右，TEER值達到500700C。MDCK細胞生長7天左右，TEER值均大于140C。用熒光素鈉進行正向透過實驗，2小時后熒光素鈉在CACO2細胞單層的凈透過量為376GH1CM2，在MDCK細胞單層的滲透率為079106CMS1，均符合CACO2、MDCK細胞模型的要求，表明CACO2、MDCK細胞模型建立成功。2利用細胞單層模型探討雙黃連口服液中綠原酸的跨細胞轉(zhuǎn)運。對CGASHL進行雙向轉(zhuǎn)運實驗。用M2E酶標儀測定CGASHL在不同方向，不同濃度下的跨細胞轉(zhuǎn)運情況并計算累積透過量。在兩種細胞模型上，CGASHL均有不同程度的吸收和分泌。CGASHL在CACO2細胞模型上的吸收無劑量依賴性。與CGA比較，CGASHL吸收快得多，尤其是在吸收早期（30MIN），有飽和特征；在MDCK細胞模型上CGASHL的累積吸收量隨時間逐漸增加，90120MIN達峰值，其后累積吸收量反而減少。與CGA相比，達峰時間短，峰值大；與CGA比較，CGASHL在CACO2細胞模型上的分泌量較小，且無劑量依賴性特點；CGASHL在MDCK細胞模型上的累積分泌曲線與CACO2模型的結(jié)果類似具有飽和性。在MDCK細胞單層模型上，CGASHL的分泌是一可飽和過程。維拉帕米（VERAPAMIL，VER）顯著抑制CGASHL的跨細胞分泌，特別是對小劑量，中劑量組CGASHL的外排抑制作用強，但對高劑量組作用弱。合用丙磺舒（PROBENECID，PBD）、牛磺酸（TAURINE，TAU）、青霉素鈉（BENZYLPENICILLINSODIUM，PCGNA）后，CGASHL的分泌量均明顯降低。上述研究證明，CGA和CGASHL跨細胞轉(zhuǎn)運存在多種轉(zhuǎn)運方式，既有被動轉(zhuǎn)運，又有主動轉(zhuǎn)運，且轉(zhuǎn)運是雙向的，即同時存在吸收和分泌過程，吸收時有反向的外排，分泌時有吸收/重吸收的影響。主動轉(zhuǎn)運過程又有多種轉(zhuǎn)運蛋白參與，P糖蛋白（PGP）、有機陰離子轉(zhuǎn)運蛋白（OAT）均介導參與CGASHL的分泌。CGA和CGASHL的吸收與分泌均有非常明顯的差異。不能以有效單體的藥動學參數(shù)來解釋、推斷復方中有效成分的藥動學特點，是本文的重要結(jié)論之一。中藥復方藥動學研究是中藥現(xiàn)代化進程中必須解決的重大和難點課題。藥動學包括藥物的吸收、分布、代謝和排泄（ADME）四個方面。其中吸收、分布和排泄直接決定于藥物的跨膜/跨細胞轉(zhuǎn)運。因此藥物的跨膜/跨細胞轉(zhuǎn)運是藥動學研究首先要解決的核心問題。藥物跨膜/跨細胞轉(zhuǎn)運機制依賴于建立合適的藥物體外吸收模型。來源于人結(jié)腸癌細胞的CACO2細胞系和來源于狗腎近曲小管上皮的MDCK細胞系，是國際上研究藥物跨細胞轉(zhuǎn)運機制的常用模型細胞。本論文建立了CACO2、MDCK兩種細胞模型，以中藥有效成分綠原酸（CHLOROGENICACID）為研究對象，對綠原酸標準品（CGA）和中藥復方雙黃連口服液中綠原酸（CGASHL）的跨細胞轉(zhuǎn)運特點及其機制進行了較詳盡的比較研究，為復方中藥的藥動學研究提供可借鑒的經(jīng)驗。1細胞單層模型的建立與驗證。采用美國組織培養(yǎng)中心（AMERICANTISSUECULTURECENTER，ATCC）的CACO2、MDCK細胞株，MILLIPORE公司的MILLICELL系統(tǒng)，建立了CACO2、MDCK細胞單層模型。通過顯微鏡觀察細胞的形態(tài)特征，采用跨膜電阻（THETRANSEPITHELIAELECTRICALRESISTANCE，TEER）和熒光素鈉透過等方法對細胞單層模型進行質(zhì)控，結(jié)果顯示CACO2細胞生長21天左右，TEER值達到500700C。MDCK細胞生長7天左右，TEER值均大于140C。用熒光素鈉進行正向透過實驗，2小時后熒光素鈉在CACO2細胞單層的凈透過量為376GH1CM2，在MDCK細胞單層的滲透率為079106CMS1，均符合CACO2、MDCK細胞模型的要求，表明CACO2、MDCK細胞模型建立成功。2利用細胞單層模型探討雙黃連口服液中綠原酸的跨細胞轉(zhuǎn)運。對CGASHL進行雙向轉(zhuǎn)運實驗。用M2E酶標儀測定CGASHL在不同方向，不同濃度下的跨細胞轉(zhuǎn)運情況并計算累積透過量。在兩種細胞模型上，CGASHL均有不同程度的吸收和分泌。CGASHL在CACO2細胞模型上的吸收無劑量依賴性。與CGA比較，CGASHL吸收快得多，尤其是在吸收早期（30MIN），有飽和特征；在MDCK細胞模型上CGASHL的累積吸收量隨時間逐漸增加，90120MIN達峰值，其后累積吸收量反而減少。與CGA相比，達峰時間短，峰值大；與CGA比較，CGASHL在CACO2細胞模型上的分泌量較小，且無劑量依賴性特點；CGASHL在MDCK細胞模型上的累積分泌曲線與CACO2模型的結(jié)果類似具有飽和性。在MDCK細胞單層模型上，CGASHL的分泌是一可飽和過程。維拉帕米（VERAPAMIL，VER）顯著抑制CGASHL的跨細胞分泌，特別是對小劑量，中劑量組CGASHL的外排抑制作用強，但對高劑量組作用弱。合用丙磺舒（PROBENECID，PBD）、?；撬幔═AURINE，TAU）、青霉素鈉（BENZYLPENICILLINSODIUM，PCGNA）后，CGASHL的分泌量均明顯降低。上述研究證明，CGA和CGASHL跨細胞轉(zhuǎn)運存在多種轉(zhuǎn)運方式，既有被動轉(zhuǎn)運，又有主動轉(zhuǎn)運，且轉(zhuǎn)運是雙向的，即同時存在吸收和分泌過程，吸收時有反向的外排，分泌時有吸收/重吸收的影響。主動轉(zhuǎn)運過程又有多種轉(zhuǎn)運蛋白參與，P糖蛋白（PGP）、有機陰離子轉(zhuǎn)運蛋白（OAT）均介導參與CGASHL的分泌。CGA和CGASHL的吸收與分泌均有非常明顯的差異。不能以有效單體的藥動學參數(shù)來解釋、推斷復方中有效成分的藥動學特點，是本文的重要結(jié)論之一。中藥復方藥動學研究是中藥現(xiàn)代化進程中必須解決的重大和難點課題。藥動學包括藥物的吸收、分布、代謝和排泄（ADME）四個方面。其中吸收、分布和排泄直接決定于藥物的跨膜/跨細胞轉(zhuǎn)運。因此藥物的跨膜/跨細胞轉(zhuǎn)運是藥動學研究首先要解決的核心問題。藥物跨膜/跨細胞轉(zhuǎn)運機制依賴于建立合適的藥物體外吸收模型。來源于人結(jié)腸癌細胞的CACO2細胞系和來源于狗腎近曲小管上皮的MDCK細胞系，是國際上研究藥物跨細胞轉(zhuǎn)運機制的常用模型細胞。本論文建立了CACO2、MDCK兩種細胞模型，以中藥有效成分綠原酸（CHLOROGENICACID）為研究對象，對綠原酸標準品（CGA）和中藥復方雙黃連口服液中綠原酸（CGASHL）的跨細胞轉(zhuǎn)運特點及其機制進行了較詳盡的比較研究，為復方中藥的藥動學研究提供可借鑒的經(jīng)驗。1細胞單層模型的建立與驗證。采用美國組織培養(yǎng)中心（AMERICANTISSUECULTURECENTER，ATCC）的CACO2、MDCK細胞株，MILLIPORE公司的MILLICELL系統(tǒng)，建立了CACO2、MDCK細胞單層模型。通過顯微鏡觀察細胞的形態(tài)特征，采用跨膜電阻（THETRANSEPITHELIAELECTRICALRESISTANCE，TEER）和熒光素鈉透過等方法對細胞單層模型進行質(zhì)控，結(jié)果顯示CACO2細胞生長21天左右，TEER值達到500700C。MDCK細胞生長7天左右，TEER值均大于140C。用熒光素鈉進行正向透過實驗，2小時后熒光素鈉在CACO2細胞單層的凈透過量為376GH1CM2，在MDCK細胞單層的滲透率為079106CMS1，均符合CACO2、MDCK細胞模型的要求，表明CACO2、MDCK細胞模型建立成功。2利用細胞單層模型探討雙黃連口服液中綠原酸的跨細胞轉(zhuǎn)運。對CGASHL進行雙向轉(zhuǎn)運實驗。用M2E酶標儀測定CGASHL在不同方向，不同濃度下的跨細胞轉(zhuǎn)運情況并計算累積透過量。在兩種細胞模型上，CGASHL均有不同程度的吸收和分泌。CGASHL在CACO2細胞模型上的吸收無劑量依賴性。與CGA比較，CGASHL吸收快得多，尤其是在吸收早期（30MIN），有飽和特征；在MDCK細胞模型上CGASHL的累積吸收量隨時間逐漸增加，90120MIN達峰值，其后累積吸收量反而減少。與CGA相比，達峰時間短，峰值大；與CGA比較，CGASHL在CACO2細胞模型上的分泌量較小，且無劑量依賴性特點；CGASHL在MDCK細胞模型上的累積分泌曲線與CACO2模型的結(jié)果類似具有飽和性。在MDCK細胞單層模型上，CGASHL的分泌是一可飽和過程。維拉帕米（VERAPAMIL，VER）顯著抑制CGASHL的跨細胞分泌，特別是對小劑量，中劑量組CGASHL的外排抑制作用強，但對高劑量組作用弱。合用丙磺舒（PROBENECID，PBD）、?；撬幔═AURINE，TAU）、青霉素鈉（BENZYLPENICILLINSODIUM，PCGNA）后，CGASHL的分泌量均明顯降低。上述研究證明，CGA和CGASHL跨細胞轉(zhuǎn)運存在多種轉(zhuǎn)運方式，既有被動轉(zhuǎn)運，又有主動轉(zhuǎn)運，且轉(zhuǎn)運是雙向的，即同時存在吸收和分泌過程，吸收時有反向的外排，分泌時有吸收/重吸收的影響。主動轉(zhuǎn)運過程又有多種轉(zhuǎn)運蛋白參與，P糖蛋白（PGP）、有機陰離子轉(zhuǎn)運蛋白（OAT）均介導參與CGASHL的分泌。CGA和CGASHL的吸收與分泌均有非常明顯的差異。不能以有效單體的藥動學參數(shù)來解釋、推斷復方中有效成分的藥動學特點，是本文的重要結(jié)論之一。中藥復方藥動學研究是中藥現(xiàn)代化進程中必須解決的重大和難點課題。藥動學包括藥物的吸收、分布、代謝和排泄（ADME）四個方面。其中吸收、分布和排泄直接決定于藥物的跨膜/跨細胞轉(zhuǎn)運。因此藥物的跨膜/跨細胞轉(zhuǎn)運是藥動學研究首先要解決的核心問題。藥物跨膜/跨細胞轉(zhuǎn)運機制依賴于建立合適的藥物體外吸收模型。來源于人結(jié)腸癌細胞的CACO2細胞系和來源于狗腎近曲小管上皮的MDCK細胞系，是國際上研究藥物跨細胞轉(zhuǎn)運機制的常用模型細胞。本論文建立了CACO2、MDCK兩種細胞模型，以中藥有效成分綠原酸（CHLOROGENICACID）為研究對象，對綠原酸標準品（CGA）和中藥復方雙黃連口服液中綠原酸（CGASHL）的跨細胞轉(zhuǎn)運特點及其機制進行了較詳盡的比較研究，為復方中藥的藥動學研究提供可借鑒的經(jīng)驗。1細胞單層模型的建立與驗證。采用美國組織培養(yǎng)中心（AMERICANTISSUECULTURECENTER，ATCC）的CACO2、MDCK細胞株，MILLIPORE公司的MILLICELL系統(tǒng)，建立了CACO2、MDCK細胞單層模型。通過顯微鏡觀察細胞的形態(tài)特征，采用跨膜電阻（THETRANSEPITHELIAELECTRICALRESISTANCE，TEER）和熒光素鈉透過等方法對細胞單層模型進行質(zhì)控，結(jié)果顯示CACO2細胞生長21天左右，TEER值達到500700C。MDCK細胞生長7天左右，TEER值均大于140C。用熒光素鈉進行正向透過實驗，2小時后熒光素鈉在CACO2細胞單層的凈透過量為376GH1CM2，在MDCK細胞單層的滲透率為079106CMS1，均符合CACO2、MDCK細胞模型的要求，表明CACO2、MDCK細胞模型建立成功。2利用細胞單層模型探討雙黃連口服液中綠原酸的跨細胞轉(zhuǎn)運。對CGASHL進行雙向轉(zhuǎn)運實驗。用M2E酶標儀測定CGASHL在不同方向，不同濃度下的跨細胞轉(zhuǎn)運情況并計算累積透過量。在兩種細胞模型上，CGASHL均有不同程度的吸收和分泌。CGASHL在CACO2細胞模型上的吸收無劑量依賴性。與CGA比較，CGASHL吸收快得多，尤其是在吸收早期（30MIN），有飽和特征；在MDCK細胞模型上CGASHL的累積吸收量隨時間逐漸增加，90120MIN達峰值，其后累積吸收量反而減少。與CGA相比，達峰時間短，峰值大；與CGA比較，CGASHL在CACO2細胞模型上的分泌量較小，且無劑量依賴性特點；CGASHL在MDCK細胞模型上的累積分泌曲線與CACO2模型的結(jié)果類似具有飽和性。在MDCK細胞單層模型上，CGASHL的分泌是一可飽和過程。維拉帕米（VERAPAMIL，VER）顯著抑制CGASHL的跨細胞分泌，特別是對小劑量，中劑量組CGASHL的外排抑制作用強，但對高劑量組作用弱。合用丙磺舒（PROBENECID，PBD）、?；撬幔═AURINE，TAU）、青霉素鈉（BENZYLPENICILLINSODIUM，PCGNA）后，CGASHL的分泌量均明顯降低。上述研究證明，CGA和CGASHL跨細胞轉(zhuǎn)運存在多種轉(zhuǎn)運方式，既有被動轉(zhuǎn)運，又有主動轉(zhuǎn)運，且轉(zhuǎn)運是雙向的，即同時存在吸收和分泌過程，吸收時有反向的外排，分泌時有吸收/重吸收的影響。主動轉(zhuǎn)運過程又有多種轉(zhuǎn)運蛋白參與，P糖蛋白（PGP）、有機陰離子轉(zhuǎn)運蛋白（OAT）均介導參與CGASHL的分泌。CGA和CGASHL的吸收與分泌均有非常明顯的差異。不能以有效單體的藥動學參數(shù)來解釋、推斷復方中有效成分的藥動學特點，是本文的重要結(jié)論之一。中藥復方藥動學研究是中藥現(xiàn)代化進程中必須解決的重大和難點課題。藥動學包括藥物的吸收、分布、代謝和排泄（ADME）四個方面。其中吸收、分布和排泄直接決定于藥物的跨膜/跨細胞轉(zhuǎn)運。因此藥物的跨膜/跨細胞轉(zhuǎn)運是藥動學研究首先要解決的核心問題。藥物跨膜/跨細胞轉(zhuǎn)運機制依賴于建立合適的藥物體外吸收模型。來源于人結(jié)腸癌細胞的CACO2細胞系和來源于狗腎近曲小管上皮的MDCK細胞系，是國際上研究藥物跨細胞轉(zhuǎn)運機制的常用模型細胞。本論文建立了CACO2、MDCK兩種細胞模型，以中藥有效成分綠原酸（CHLOROGENICACID）為研究對象，對綠原酸標準品（CGA）和中藥復方雙黃連口服液中綠原酸（CGASHL）的跨細胞轉(zhuǎn)運特點及其機制進行了較詳盡的比較研究，為復方中藥的藥動學研究提供可借鑒的經(jīng)驗。1細胞單層模型的建立與驗證。采用美國組織培養(yǎng)中心（AMERICANTISSUECULTURECENTER，ATCC）的CACO2、MDCK細胞株，MILLIPORE公司的MILLICELL系統(tǒng)，建立了CACO2、MDCK細胞單層模型。通過顯微鏡觀察細胞的形態(tài)特征，采用跨膜電阻（THETRANSEPITHELIAELECTRICALRESISTANCE，TEER）和熒光素鈉透過等方法對細胞單層模型進行質(zhì)控，結(jié)果顯示CACO2細胞生長21天左右，TEER值達到500700C。MDCK細胞生長7天左右，TEER值均大于140C。用熒光素鈉進行正向透過實驗，2小時后熒光素鈉在CACO2細胞單層的凈透過量為376GH1CM2，在MDCK細胞單層的滲透率為079106CMS1，均符合CACO2、MDCK細胞模型的要求，表明CACO2、MDCK細胞模型建立成功。2利用細胞單層模型探討雙黃連口服液中綠原酸的跨細胞轉(zhuǎn)運。對CGASHL進行雙向轉(zhuǎn)運實驗。用M2E酶標儀測定CGASHL在不同方向，不同濃度下的跨細胞轉(zhuǎn)運情況并計算累積透過量。在兩種細胞模型上，CGASHL均有不同程度的吸收和分泌。CGASHL在CACO2細胞模型上的吸收無劑量依賴性。與CGA比較，CGASHL吸收快得多，尤其是在吸收早期（30MIN），有飽和特征；在MDCK細胞模型上CGASHL的累積吸收量隨時間逐漸增加，90120MIN達峰值，其后累積吸收量反而減少。與CGA相比，達峰時間短，峰值大；與CGA比較，CGASHL在CACO2細胞模型上的分泌量較小，且無劑量依賴性特點；CGASHL在MDCK細胞模型上的累積分泌曲線與CACO2模型的結(jié)果類似具有飽和性。在MDCK細胞單層模型上，CGASHL的分泌是一可飽和過程。維拉帕米（VERAPAMIL，VER）顯著抑制CGASHL的跨細胞分泌，特別是對小劑量，中劑量組CGASHL的外排抑制作用強，但對高劑量組作用弱。合用丙磺舒（PROBENECID，PBD）、牛磺酸（TAURINE，TAU）、青霉素鈉（BENZYLPENICILLINSODIUM，PCGNA）后，CGASHL的分泌量均明顯降低。上述研究證明，CGA和CGASHL跨細胞轉(zhuǎn)運存在多種轉(zhuǎn)運方式，既有被動轉(zhuǎn)運，又有主動轉(zhuǎn)運，且轉(zhuǎn)運是雙向的，即同時存在吸收和分泌過程，吸收時有反向的外排，分泌時有吸收/重吸收的影響。主動轉(zhuǎn)運過程又有多種轉(zhuǎn)運蛋白參與，P糖蛋白（PGP）、有機陰離子轉(zhuǎn)運蛋白（OAT）均介導參與CGASHL的分泌。CGA和CGASHL的吸收與分泌均有非常明顯的差異。不能以有效單體的藥動學參數(shù)來解釋、推斷復方中有效成分的藥動學特點，是本文的重要結(jié)論之一。中藥復方藥動學研究是中藥現(xiàn)代化進程中必須解決的重大和難點課題。藥動學包括藥物的吸收、分布、代謝和排泄（ADME）四個方面。其中吸收、分布和排泄直接決定于藥物的跨膜/跨細胞轉(zhuǎn)運。因此藥物的跨膜/跨細胞轉(zhuǎn)運是藥動學研究首先要解決的核心問題。藥物跨膜/跨細胞轉(zhuǎn)運機制依賴于建立合適的藥物體外吸收模型。來源于人結(jié)腸癌細胞的CACO2細胞系和來源于狗腎近曲小管上皮的MDCK細胞系，是國際上研究藥物跨細胞轉(zhuǎn)運機制的常用模型細胞。本論文建立了CACO2、MDCK兩種細胞模型，以中藥有效成分綠原酸（CHLOROGENICACID）為研究對象，對綠原酸標準品（CGA）和中藥復方雙黃連口服液中綠原酸（CGASHL）的跨細胞轉(zhuǎn)運特點及其機制進行了較詳盡的比較研究，為復方中藥的藥動學研究提供可借鑒的經(jīng)驗。1細胞單層模型的建立與驗證。采用美國組織培養(yǎng)中心（AMERICANTISSUECULTURECENTER，ATCC）的CACO2、MDCK細胞株，MILLIPORE公司的MILLICELL系統(tǒng)，建立了CACO2、MDCK細胞單層模型。通過顯微鏡觀察細胞的形態(tài)特征，采用跨膜電阻（THETRANSEPITHELIAELECTRICALRESISTANCE，TEER）和熒光素鈉透過等方法對細胞單層模型進行質(zhì)控，結(jié)果顯示CACO2細胞生長21天左右，TEER值達到500700C。MDCK細胞生長7天左右，TEER值均大于140C。用熒光素鈉進行正向透過實驗，2小時后熒光素鈉在CACO2細胞單層的凈透過量為376GH1CM2，在MDCK細胞單層的滲透率為079106CMS1，均符合CACO2、MDCK細胞模型的要求，表明CACO2、MDCK細胞模型建立成功。2利用細胞單層模型探討雙黃連口服液中綠原酸的跨細胞轉(zhuǎn)運。對CGASHL進行雙向轉(zhuǎn)運實驗。用M2E酶標儀測定CGASHL在不同方向，不同濃度下的跨細胞轉(zhuǎn)運情況并計算累積透過量。在兩種細胞模型上，CGASHL均有不同程度的吸收和分泌。CGASHL在CACO2細胞模型上的吸收無劑量依賴性。與CGA比較，CGASHL吸收快得多，尤其是在吸收早期（30MIN），有飽和特征；在MDCK細胞模型上CGASHL的累積吸收量隨時間逐漸增加，90120MIN達峰值，其后累積吸收量反而減少。與CGA相比，達峰時間短，峰值大；與CGA比較，CGASHL在CACO2細胞模型上的分泌量較小，且無劑量依賴性特點；CGASHL在MDCK細胞模型上的累積分泌曲線與CACO2模型的結(jié)果類似具有飽和性。在MDCK細胞單層模型上，CGASHL的分泌是一可飽和過程。維拉帕米（VERAPAMIL，VER）顯著抑制CGASHL的跨細胞分泌，特別是對小劑量，中劑量組CGASHL的外排抑制作用強，但對高劑量組作用弱。合用丙磺舒（PROBENECID，PBD）、?；撬幔═AURINE，TAU）、青霉素鈉（BENZYLPENICILLINSODIUM，PCGNA）后，CGASHL的分泌量均明顯降低。上述研究證明，CGA和CGASHL跨細胞轉(zhuǎn)運存在多種轉(zhuǎn)運方式，既有被動轉(zhuǎn)運，又有主動轉(zhuǎn)運，且轉(zhuǎn)運是雙向的，即同時存在吸收和分泌過程，吸收時有反向的外排，分泌時有吸收/重吸收的影響。主動轉(zhuǎn)運過程又有多種轉(zhuǎn)運蛋白參與，P糖蛋白（PGP）、有機陰離子轉(zhuǎn)運蛋白（OAT）均介導參與CGASHL的分泌。CGA和CGASHL的吸收與分泌均有非常明顯的差異。不能以有效單體的藥動學參數(shù)來解釋、推斷復方中有效成分的藥動學特點，是本文的重要結(jié)論之一。中藥復方藥動學研究是中藥現(xiàn)代化進程中必須解決的重大和難點課題。藥動學包括藥物的吸收、分布、代謝和排泄（ADME）四個方面。其中吸收、分布和排泄直接決定于藥物的跨膜/跨細胞轉(zhuǎn)運。因此藥物的跨膜/跨細胞轉(zhuǎn)運是藥動學研究首先要解決的核心問題。藥物跨膜/跨細胞轉(zhuǎn)運機制依賴于建立合適的藥物體外吸收模型。來源于人結(jié)腸癌細胞的CACO2細胞系和來源于狗腎近曲小管上皮的MDCK細胞系，是國際上研究藥物跨細胞轉(zhuǎn)運機制的常用模型細胞。本論文建立了CACO2、MDCK兩種細胞模型，以中藥有效成分綠原酸（CHLOROGENICACID）為研究對象，對綠原酸標準品（CGA）和中藥復方雙黃連口服液中綠原酸（CGASHL）的跨細胞轉(zhuǎn)運特點及其機制進行了較詳盡的比較研究，為復方中藥的藥動學研究提供可借鑒的經(jīng)驗。1細胞單層模型的建立與驗證。采用美國組織培養(yǎng)中心（AMERICANTISSUECULTURECENTER，ATCC）的CACO2、MDCK細胞株，MILLIPORE公司的MILLICELL系統(tǒng)，建立了CACO2、MDCK細胞單層模型。通過顯微鏡觀察細胞的形態(tài)特征，采用跨膜電阻（THETRANSEPITHELIAELECTRICALRESISTANCE，TEER）和熒光素鈉透過等方法對細胞單層模型進行質(zhì)控，結(jié)果顯示CACO2細胞生長21天左右，TEER值達到500700C。MDCK細胞生長7天左右，TEER值均大于140C。用熒光素鈉進行正向透過實驗，2小時后熒光素鈉在CACO2細胞單層的凈透過量為376GH1CM2，在MDCK細胞單層的滲透率為079106CMS1，均符合CACO2、MDCK細胞模型的要求，表明CACO2、MDCK細胞模型建立成功。2利用細胞單層模型探討雙黃連口服液中綠原酸的跨細胞轉(zhuǎn)運。對CGASHL進行雙向轉(zhuǎn)運實驗。用M2E酶標儀測定CGASHL在不同方向，不同濃度下的跨細胞轉(zhuǎn)運情況并計算累積透過量。在兩種細胞模型上，CGASHL均有不同程度的吸收和分泌。CGASHL在CACO2細胞模型上的吸收無劑量依賴性。與CGA比較，CGASHL吸收快得多，尤其是在吸收早期（30MIN），有飽和特征；在MDCK細胞模型上CGASHL的累積吸收量隨時間逐漸增加，90120MIN達峰值，其后累積吸收量反而減少。與CGA相比，達峰時間短，峰值大；與CGA比較，CGASHL在CACO2細胞模型上的分泌量較小，且無劑量依賴性特點；CGASHL在MDCK細胞模型上的累積分泌曲線與CACO2模型的結(jié)果類似具有飽和性。在MDCK細胞單層模型上，CGASHL的分泌是一可飽和過程。維拉帕米（VERAPAMIL，VER）顯著抑制CGASHL的跨細胞分泌，特別是對小劑量，中劑量組CGASHL的外排抑制作用強，但對高劑量組作用弱。合用丙磺舒（PROBENECID，PBD）、牛磺酸（TAURINE，TAU）、青霉素鈉（BENZYLPENICILLINSODIUM，PCGNA）后，CGASHL的分泌量均明顯降低。上述研究證明，CGA和CGASHL跨細胞轉(zhuǎn)運存在多種轉(zhuǎn)運方式，既有被動轉(zhuǎn)運，又有主動轉(zhuǎn)運，且轉(zhuǎn)運是雙向的，即同時存在吸收和分泌過程，吸收時有反向的外排，分泌時有吸收/重吸收的影響。主動轉(zhuǎn)運過程又有多種轉(zhuǎn)運蛋白參與，P糖蛋白（PGP）、有機陰離子轉(zhuǎn)運蛋白（OAT）均介導參與CGASHL的分泌。CGA和CGASHL的吸收與分泌均有非常明顯的差異。不能以有效單體的藥動學參數(shù)來解釋、推斷復方中有效成分的藥動學特點，是本文的重要結(jié)論之一。中藥復方藥動學研究是中藥現(xiàn)代化進程中必須解決的重大和難點課題。藥動學包括藥物的吸收、分布、代謝和排泄（ADME）四個方面。其中吸收、分布和排泄直接決定于藥物的跨膜/跨細胞轉(zhuǎn)運。因此藥物的跨膜/跨細胞轉(zhuǎn)運是藥動學研究首先要解決的核心問題。藥物跨膜/跨細胞轉(zhuǎn)運機制依賴于建立合適的藥物體外吸收模型。來源于人結(jié)腸癌細胞的CACO2細胞系和來源于狗腎近曲小管上皮的MDCK細胞系，是國際上研究藥物跨細胞轉(zhuǎn)運機制的常用模型細胞。本論文建立了CACO2、MDCK兩種細胞模型，以中藥有效成分綠原酸（CHLOROGENICACID）為研究對象，對綠原酸標準品（CGA）和中藥復方雙黃連口服液中綠原酸（CGASHL）的跨細胞轉(zhuǎn)運特點及其機制進行了較詳盡的比較研究，為復方中藥的藥動學研究提供可借鑒的經(jīng)驗。1細胞單層模型的建立與驗證。采用美國組織培養(yǎng)中心（AMERICANTISSUECULTURECENTER，ATCC）的CACO2、MDCK細胞株，MILLIPORE公司的MILLICELL系統(tǒng)，建立了CACO2、MDCK細胞單層模型。通過顯微鏡觀察細胞的形態(tài)特征，采用跨膜電阻（THETRANSEPITHELIAELECTRICALRESISTANCE，TEER）和熒光素鈉透過等方法對細胞單層模型進行質(zhì)控，結(jié)果顯示CACO2細胞生長21天左右，TEER值達到500700C。MDCK細胞生長7天左右，TEER值均大于140C。用熒光素鈉進行正向透過實驗，2小時后熒光素鈉在CACO2細胞單層的凈透過量為376GH1CM2，在MDCK細胞單層的滲透率為079106CMS1，均符合CACO2、MDCK細胞模型的要求，表明CACO2、MDCK細胞模型建立成功。2利用細胞單層模型探討雙黃連口服液中綠原酸的跨細胞轉(zhuǎn)運。對CGASHL進行雙向轉(zhuǎn)運實驗。用M2E酶標儀測定CGASHL在不同方向，不同濃度下的跨細胞轉(zhuǎn)運情況并計算累積透過量。在兩種細胞模型上，CGASHL均有不同程度的吸收和分泌。CGASHL在CACO2細胞模型上的吸收無劑量依賴性。與CGA比較，CGASHL吸收快得多，尤其是在吸收早期（30MIN），有飽和特征；在MDCK細胞模型上CGASHL的累積吸收量隨時間逐漸增加，90120MIN達峰值，其后累積吸收量反而減少。與CGA相比，達峰時間短，峰值大；與CGA比較，CGASHL在CACO2細胞模型上的分泌量較小，且無劑量依賴性特點；CGASHL在MDCK細胞模型上的累積分泌曲線與CACO2模型的結(jié)果類似具有飽和性。在MDCK細胞單層模型上，CGASHL的分泌是一可飽和過程。維拉帕米（VERAPAMIL，VER）顯著抑制CGASHL的跨細胞分泌，特別是對小劑量，中劑量組CGASHL的外排抑制作用強，但對高劑量組作用弱。合用丙磺舒（PROBENECID，PBD）、?；撬幔═AURINE，TAU）、青霉素鈉（BENZYLPENICILLINSODIUM，PCGNA）后，CGASHL的分泌量均明顯降低。上述研究證明，CGA和CGASHL跨細胞轉(zhuǎn)運存在多種轉(zhuǎn)運方式，既有被動轉(zhuǎn)運，又有主動轉(zhuǎn)運，且轉(zhuǎn)運是雙向的，即同時存在吸收和分泌過程，吸收時有反向的外排，分泌時有吸收/重吸收的影響。主動轉(zhuǎn)運過程又有多種轉(zhuǎn)運蛋白參與，P糖蛋白（PGP）、有機陰離子轉(zhuǎn)運蛋白（OAT）均介導參與CGASHL的分泌。CGA和CGASHL的吸收與分泌均有非常明顯的差異。不能以有效單體的藥動學參數(shù)來解釋、推斷復方中有效成分的藥動學特點，是本文的重要結(jié)論之一。中藥復方藥動學研究是中藥現(xiàn)代化進程中必須解決的重大和難點課題。藥動學包括藥物的吸收、分布、代謝和排泄（ADME）四個方面。其中吸收、分布和排泄直接決定于藥物的跨膜/跨細胞轉(zhuǎn)運。因此藥物的跨膜/跨細胞轉(zhuǎn)運是藥動學研究首先要解決的核心問題。藥物跨膜/跨細胞轉(zhuǎn)運機制依賴于建立合適的藥物體外吸收模型。來源于人結(jié)腸癌細胞的CACO2細胞系和來源于狗腎近曲小管上皮的MDCK細胞系，是國際上研究藥物跨細胞轉(zhuǎn)運機制的常用模型細胞。本論文建立了CACO2、MDCK兩種細胞模型，以中藥有效成分綠原酸（CHLOROGENICACID）為研究對象，