主要熒光素一覽表

（1）熒光素類 Fluorescein標(biāo)準(zhǔn)熒光素（Reference standard）之一,在其基礎(chǔ)上進(jìn)行結(jié)構(gòu)改造,可產(chǎn)生一系列熒光素衍生物。Fluorescein適用于Argon-ion Laser的488nm光譜線，有相對(duì)高的熒光吸收，較好的熒光產(chǎn)率以及良好的水溶性。標(biāo)記蛋白時(shí)通常不會(huì)產(chǎn)生蛋白沉淀。與其他熒光素類衍生物一樣，F(xiàn)luorescein具有光淬滅率高，pH敏感性強(qiáng)與發(fā)射波譜寬的缺點(diǎn)。主要應(yīng)用于聚焦激光掃描微陣列（Confocal laser scanning microscopy）和流式細(xì)胞計(jì)應(yīng)用（Flow cytometry）。FITC異硫氰酸熒光素，F(xiàn)luorescein isothiocyanate，是熒光素衍生物的一種，5-FITC較6-FITC更經(jīng)常使用。FITC的異硫氰酸基能與氨基反應(yīng)，可用于標(biāo)記氨基修飾DNA，一旦形成，產(chǎn)物極為穩(wěn)定。適用于Argon-ion Laser的488nm光譜線，Abs/Em=492/519nm（pH=9.0）。與蛋白的結(jié)合力也強(qiáng)。FITC具有熒光素衍生物的普遍特性。在水中易變壞，不能長久保存。FITC-Oligo 廣泛用于雜交探針；FITC-多肽用于Edman降解蛋白測序；FITC也經(jīng)常被用于蛋白電泳檢測（即使是毛細(xì)管電泳）和熒光能量激發(fā)轉(zhuǎn)移測試。FAM羧基熒光素，Carboxyfluorescein，是熒光素衍生物的一種，5-FAM較6-FAM更經(jīng)常使用。Carboxyfluorescein-5-succimidyl ester，即5-FAM（NHS）廣泛存在于熒光標(biāo)記試劑盒。與FITC相比，F(xiàn)AM與氨基反應(yīng)更快，產(chǎn)物也更穩(wěn)定，但FITC結(jié)合蛋白的量更大且進(jìn)程更易于控制。FAM也適用于Argon-ion Laser的488nm光譜線，Abs/Em=492/518nm（pH=9.0），具有熒光素衍生物的普遍特性，在水中穩(wěn)定。5-FAM主要應(yīng)用于DNA自動(dòng)測序中，標(biāo)記其中的d/ddCTP（PE公司），也經(jīng)常用于PCR產(chǎn)物定量，核酸探針等。TET四氯熒光素，Tetrachloro fluorescein，是熒光素衍生物的一種。TET以及HEX均是在FAM基礎(chǔ)上加以改進(jìn)的，氯原子使FAM的Abs與Em值都產(chǎn)生一定的紅移，并在一定程度上減弱了pH敏感性。TET也適用于Argon-ion Laser激發(fā)光源，Abs/Em=521/536nm 。TET，HEX，F(xiàn)AM和TAMRA可配合用于DNA自動(dòng)測序中，其中TET用于標(biāo)記d/ddATP，HEX用于標(biāo)記d/ddGTP或d/ddATP（PE公司）HEX六氯熒光素，Hexachloro fluorescein，是熒光素衍生物的一種。適用于Argon-ion Laser激發(fā)光源，Abs/Em=535/556nm。（請(qǐng)參見TET介紹）JOE羧基-4,5-二氯-2,7-二甲氧基熒光素，Carboxy-4,5-dichloro-2，7-dimethoxyfluorescein，是熒光素衍生物的一種，6-JOE更被廣泛使用。JOE熒光產(chǎn)量高，pH敏感性弱，適合于標(biāo)記蛋白。6-JOE也適合于Argon-ion Laser激發(fā)光源，Abs/Em=520/548（pH=9.0）常用于DNA自動(dòng)測序，標(biāo)記d/ddATP，也經(jīng)常被用于進(jìn)行電泳檢測與PCR產(chǎn)物定量。（2）羅丹明類（Rhodamine dye） R 110標(biāo)準(zhǔn)熒光素（Reference standard）之一,在其基礎(chǔ)上進(jìn)行結(jié)構(gòu)改造,即可產(chǎn)生一系列羅丹明類衍生物。與Fluorescein類衍生物相比，羅丹明類熒光素具有更強(qiáng)的光穩(wěn)定性，更高的熒光產(chǎn)量以及更低的pH敏感性羅丹明類熒光素極為適合于標(biāo)記寡核甘酸，但蛋白會(huì)引起大多數(shù)羅丹明類熒光素的熒光淬滅，故大多數(shù)不適宜用于標(biāo)記蛋白。R110被用于DNA自動(dòng)測序。TAMRA全稱羧基四甲基羅丹明，即Carboxytetramethylrhodamine，是羅丹明類熒光素衍生物，6- TAMRA被廣泛使用。TAMRA是少數(shù)幾個(gè)能用于標(biāo)記蛋白的，6- TAMRA適用于Argon-ion Laser激發(fā)光源，Abs/Em=547/573nm（Ph=8.0），6-TAMRA（NHS）常用于熒光標(biāo)記試劑盒中。6- TAMRA主要用于DNA自動(dòng)測序中。Texas RedTexas Red是一個(gè)長波長熒光素,與Fluorescein幾乎沒有波譜重疊,只適合于Ar-Kr Laser的568nm光譜線或He-Ne Laser的594光譜線,比Tetramethylrhodamine和LissamineTM Rhodamine B波長更長，熒光量更高。Texas Red在熒光微陣列和流式細(xì)胞計(jì)中更被經(jīng)常作為第三波長標(biāo)記(Third labels)。（3）BODIPY類 BODIPY類熒光素是由分子探針公司開發(fā)，以用來替代那些有部分缺陷的傳統(tǒng)熒光素，普遍具有熒光產(chǎn)量高，pH敏感性低（無離子變化），光穩(wěn)定性強(qiáng)以及發(fā)射波譜窄的優(yōu)點(diǎn)，故BODIPY類熒光素已被廣泛用于核酸，脂肪酸，磷脂以及各種受體。同時(shí)，由于在電泳過程中對(duì)序列片段影響小，故已被逐漸用于DNA自動(dòng)測序。但相對(duì)而言, BODIPY類熒光素并不特別適合標(biāo)記蛋白.BODIPY FL可代替FluoresceinBODIPY R6G可代替Rhodamine 6GBODIPY TMR可代替TetramethylrhodamineBODIPY TR可代替Texas Red這些BODIPY類熒光素具有與被替代物幾乎類似的光譜特征，能共用同樣的光過濾器與激發(fā)光源，但更具優(yōu)點(diǎn)。（4）其他熒光素 Cascade blueCascade blue是在芘 (pyrene)結(jié)構(gòu)基礎(chǔ)上改造得來的,即sulfonated pyrene,它是一種短波長紫外激發(fā)熒光素,與另一種常用的紫外熒光素Aminocoumarin相比,Cascade blue的Em與Fluorescein有更小的光譜重疊,有更高的熒光吸收和更大的熒光產(chǎn)量. Cascade blue在376nm處存在第二個(gè)吸收峰,水中不穩(wěn)定。Cascade blue 主要用于標(biāo)記蛋白,作為極性示蹤子(polar tracer)可進(jìn)行膜蛋白定位等.但也能用于標(biāo)記核酸和葡聚糖。Aminocoumarin一種短波長紫外激發(fā)熒光素，通常使用的是7-amino-4-methylcoumarin, 紅移現(xiàn)象明顯,比Cascade blue有更長的發(fā)射波長,肉眼觀察明顯，更適用于confocal。表1：主要熒光激發(fā)光源Excitation sourcePrincipal spectrum lines（nm）Mercury-arc Lamp366,405,436,546,578Xenon-arc Lamp250-1000(continous)Tungsten-halogen Lamp350-1000(continous)Cr:LiSAF Laser430Helium-cadmium Laser325,442Argon-ion Laser488,514Nd:YAG Laser532Helium-neon Laser543,594,633Krypton-ion Laser568,647表2：主要熒光素一覽表DyeAbs/Em Max(nm)NotesAcridine orange500/526green fluorescence bound to DNA, and red shift to 650 upon association with RNA, useful for flow cytometry.FAM492/518Most widely used green fluorescein, absorption overlaps the 488 nm spectral line of the argon-ion laser, prone to photobleaching, pH sensitive between pH 5-8,is widely used for automated DNA sequencingFITC494/519Subject to argon-ion laser, widespread use for hybridization, immunoreagent, protein sequencing and FRETHEX535/556pH insensitive, used for automated DNA sequencingJOE520/548Intermediate-wavelength spectra, important dye for automated DNA sequencing.Lissamine rhodamine B570/590Optimal for 568 nm excitation photostable,used in confocal laser scanning microscope.easier to label protein than TMR.Pyrene340/378 Excimer:470Long excited-state lifetime, spectral shifts due to excimer emission,used in protein comformation and oxygen sensors.ROX570/590spectra between Lissamine rhodamine B and Texas Red, used in automated DNA sequencing.TET521/536pH insensitive, used for automated DNA sequencingTetramethyl rhodamine555/580pH insensitive , photostable,Widely used for automated DNA sequencingTexas Red595/615Suited for the Ar-Kr 568nm and He-Ne 594nm spectra, brighter and lower background than other red dyes as third label, used in confocal laser scanning microscopesDansyl Chloride372/NDEnvironmentally sensitive, large stokes shift for protei sequencingDabcyl453/noneBroad absorption, no fluorescence, as a quenching group useful for fluorescence resonance energy transfer (FRET)CR-6G525/555Spectral between fluorescein and tetramethylrhodamine, good photostable, preferred nucleotide off proteinCascade Blue400/420Resistant to quenching upon protein conjugation, Water soluble.BODIPY R6G528/547Substitute for rhodamine 6G,Useful