抗人球蛋白試驗

.,抗人球蛋白試驗,馬強虎,.,1945年，英國免疫學(xué)家?guī)炷匪梗–oombs）等人發(fā)明了能檢測紅細(xì)胞表面抗體的一種新試驗，即抗人球蛋白試驗。別名：Coombs試驗(庫姆斯試驗)。Coombs試驗是利用抗球蛋白抗體作為第二抗體，連接與紅細(xì)胞表面抗原結(jié)合的特異抗體，使紅細(xì)胞凝集。,.,抗人球法是檢測不完全抗體的經(jīng)典方法，分為直接試驗(直接反應(yīng))和間接試驗(間接反應(yīng))。直接Coombs試驗：是檢查被檢紅細(xì)胞上有無不完全抗體。間接Coombs試驗：是檢查血清中游離的不完全抗體。,.,直接抗人球蛋白試驗,直接抗人球蛋白試驗原理：患者體內(nèi)若有與紅細(xì)胞抗原不相合的不完全抗體存在，可與紅細(xì)胞結(jié)合形成抗原抗體復(fù)合物。但因不完全抗體分子量小，不能有效地連接抗原抗體復(fù)合物，僅使紅細(xì)胞處于致敏狀態(tài)。加入抗球蛋白血清，與紅細(xì)胞上吸咐的不完全抗體結(jié)合，在致敏紅細(xì)胞之間搭橋，出現(xiàn)肉眼可見的凝集。這種直接檢測體內(nèi)被抗體或（和）補體致敏紅細(xì)胞的試驗稱之為直接抗球蛋白試驗。,.,直接抗人球蛋白試驗,直接抗人球蛋白試驗操作：（65%凝膠，35%抗人球蛋白試劑）1.撕開檢測卡的封膜于反應(yīng)腔中加入待檢1%RBC生理鹽水懸液50ul；2.將檢測卡于離心機1800r/min1min,2500r/min1min離心；3.取出，結(jié)果判讀；,.,結(jié)果判讀,.,直接Coombs試驗,抗人球蛋白,自身抗體,致敏RBC,可見凝集,.,4.結(jié)果解釋陽性：待檢標(biāo)本RBC已致敏IgG不完全抗體或補體；陰性：待檢標(biāo)本RBC未致敏不完全IgG抗體。,.,間接抗人球蛋白試驗,間接抗人球蛋白試驗原理：用已知抗原的紅細(xì)胞檢測受檢者血清中相應(yīng)的不完全抗體；或用已知的不完全抗體檢測紅細(xì)胞上相應(yīng)的抗原。在37條件下，若被檢血清或紅細(xì)胞有對應(yīng)的不完全抗體或抗原，則抗原抗體作用使紅細(xì)胞致敏再加抗人球蛋白試劑，與紅細(xì)胞上不完全抗體結(jié)合，出現(xiàn)肉眼可見凝集。這種通過體外將紅細(xì)胞致敏后，再檢測紅細(xì)胞有無不完全抗體或抗原的試驗稱為間接抗人球蛋白試驗。,.,間接抗人球蛋白試驗,間接抗人球蛋白試驗操作：（65%凝膠，35%抗人球蛋白試劑）1.撕開檢測卡的封膜于反應(yīng)腔中依標(biāo)記分別加入相應(yīng)的0.5%篩選細(xì)胞LIM懸液100ul，各管再加入待檢血漿或血清25ul；2.將檢測卡37孵育10min，取出，置離心機1800r/min1min,2500r/min1min離心；3.取出，結(jié)果判讀；（方法同上）,.,間接Coombs試驗,抗人免疫球蛋白,同種異型抗體,.,4.結(jié)果解釋陽性：待檢血漿或血清中含有不完全抗體IgG或完全抗體IgM；陰性：待檢血漿或血清中不含不完全抗體IgG或完全抗體IgM；,.,抗人球蛋白試驗意義,1.本試驗是診斷自身免疫性溶血性貧血(AIHA)的重要依據(jù)，特別是IgG型引起的溶血性貧血，直接反應(yīng)常呈強陽性，間接反應(yīng)大多陰性，但亦可陽性。（血腎科有一病例）2.新生兒同種免疫溶血病：因Rh血型不合所致溶血病，直接及間接反應(yīng)均強陽性，持續(xù)數(shù)周、換血輸血后數(shù)天內(nèi)可變?yōu)殛幮?，由于“ABO”血型不合引起的溶血病，直接常為陰性或弱陽性，間接反應(yīng)為陽性.,.,3.藥物誘發(fā)的免疫性溶血性貧血-甲基多巴型：直接及間接反應(yīng)均陽性。青霉素型：直接反應(yīng)陽性，間接反應(yīng)陰性福阿亭型：（奎寧等藥物）抗體通常為IgM，偶有IgG型者，直接反應(yīng)為陽性，間接反應(yīng)陰性4.冷凝集素綜合征：直接反應(yīng)陽性，間接反應(yīng)陰性（37）。由于本病紅細(xì)胞膜附著的是補體C4和C3而不是IgG或IgM，如果用抗IgG或抗IgM抗血清做試驗時則結(jié)果陰性，如以抗補體的抗血清做試驗則直接反應(yīng)陽性。,.,5.紅細(xì)胞血型不合引起的輸血反應(yīng)6.ABO或Rh血型不合輸血，供者的紅細(xì)胞被受者的血型抗體致敏，在供者被致敏的紅細(xì)胞完全破壞以前，直接反應(yīng)陽性7.Rh陰性者如過去不曾接受過Rh陽性者的血或曾沒有妊娠Rh陽性胎兒者，間接反應(yīng)陽性，第一次輸血后（Rh陽性的血），數(shù)天之內(nèi)間接反應(yīng)也會變?yōu)殛栃?.,8.在傳染性單核細(xì)胞增多癥、SLE、惡性淋巴瘤、慢性淋巴細(xì)胞白血病、癌腫、鉛中毒、結(jié)節(jié)性動脈周圍炎、EVan氏綜合征等，病人直接反應(yīng)亦可陽性9.陣發(fā)性寒冷性血紅