Bruker-儀器維護(hù)和參數(shù)校正

.,Bruker核磁儀參數(shù)校正實(shí)驗(yàn)設(shè)置儀器維護(hù),.,第一部分：參數(shù)校正,通常一個(gè)實(shí)驗(yàn)中最后真正的采樣只是采集一種原子核的信號(hào)，因此BRUKER儀器中第一通道應(yīng)設(shè)置為需要采樣的原子核頻率，該通道一般也稱為采樣通道或觀察道(F1通道)，其余的通道有時(shí)也稱為去偶通道（F2通道）90脈沖的測(cè)定就是在一定的功率下，測(cè)試90脈寬對(duì)應(yīng)的時(shí)間；或是在一定的脈寬長(zhǎng)度下，測(cè)試90脈沖對(duì)應(yīng)的功率。功率越大，對(duì)應(yīng)的90脈沖時(shí)間越短,900脈沖的測(cè)定,.,實(shí)驗(yàn)一：HF1（觀察通道）通道的900脈沖(P1值)測(cè)定,標(biāo)樣0.1%Ethylbenzol-CDCl3脈沖(zg30)，如下圖所示具體操作如下：,zg30PulseSequence,.,第一步：將0.1%Ethylbenzol-CDCl3標(biāo)準(zhǔn)品放入磁體中，輸入edc命令，出現(xiàn)如下對(duì)話框，先采一個(gè)H譜,.,第二步：鎖場(chǎng)，勻場(chǎng),.,勻場(chǎng)完成后，輸入wobb命令進(jìn)行調(diào)諧,第三步：調(diào)諧,.,輸入getprosol,第四步：（1）在Acqupars中設(shè)置參數(shù)（2）采樣,.,第五步：將2.75ppm左右的四重峰放大，紅線放在四重峰的中間，然后按下列步驟進(jìn)行即可將o1p設(shè)為2.75ppm,.,ns設(shè)為1ds設(shè)為0d1設(shè)為3,第六步：設(shè)置參數(shù),.,第七步：運(yùn)行Paropt命令，出現(xiàn)如下對(duì)話框，按提示填好后，采樣即可,Paropt是一AU程序它可改變某一參數(shù)(P1,D1,O1等)并將一系列處理的譜圖列出。譜圖儲(chǔ)存在處理數(shù)控的文件中。,.,此處給出的P1值為900時(shí)的值，由于Bruker儀器中H的采樣脈沖為zg30,所以寫入edprosol表中的數(shù)值應(yīng)該為15.33（46/3）。如下圖所示：,第八步：實(shí)驗(yàn)結(jié)果,.,表中1處必須為H，將上面測(cè)得的H的F1值寫在2處，點(diǎn)save,第九步：將實(shí)驗(yàn)結(jié)果寫入探頭,.,標(biāo)樣40%ASTM-C6D6具體操作如下：1.先采一個(gè)H譜讀o2p的值，脈沖序列(zg30)如右圖：2.一個(gè)C譜讀o1p的值，脈沖序列為(zgpg30)如下圖：,實(shí)驗(yàn)二：13CF1（觀察通道）通道的900脈沖(P1值)測(cè)定,zg30PulseSequence,zgpg30PulseSequence,.,3.以脈沖序列zgpg采H譜，測(cè)定P1值，脈沖序列如下圖：,.,第一步：將40%ASTM-C6D6標(biāo)樣放入磁體中，先采一個(gè)氫譜讀o2p的值，具體操作如下：,edc,lockC6D6,shim,wobb,getprosol,g,讀o2p的值,.,第二步：采一個(gè)C譜讀o1p的值，具體操作如下：edc后出現(xiàn)如下對(duì)話框,lockshimwobbgetprosolg,.,第三步：在AcquPars中完成以下操作,o1p=66.81o2p=3.46ds=0ns=1d1=40運(yùn)行paropt（對(duì)某一實(shí)驗(yàn)參數(shù)做漸進(jìn)式的調(diào)整）命令p1,ok1,ok1,ok16,okg,.,由于我們?cè)O(shè)置的P1起始值為1，步長(zhǎng)為1，所以我們可以知道在1800脈沖時(shí)的時(shí)間為16.34，所以900脈沖的為8.17,將8.25填入edprosol表中，如下圖所示：,第四步：實(shí)驗(yàn)結(jié)果,.,表中1處必須為13C，將上面測(cè)得的13C的F1值寫在2處，點(diǎn)save,第五步：將實(shí)驗(yàn)結(jié)果寫入探頭,.,去偶通道900脈沖的測(cè)定,在去偶通道中激發(fā)的原子核磁化矢量隨脈沖作用時(shí)間的變化是無(wú)法直接觀察到的，只能通過偶合作用反應(yīng)到采樣通道中的原子核磁化矢量的變化上。例如確定1H在去偶通道的90脈寬，需要通過觀察采樣通道中與之有偶合的13C磁化矢量信號(hào)隨去偶通道1H的脈沖作用時(shí)間的變化。,.,實(shí)驗(yàn)三：HF2（去偶通道）通道的900脈沖(P3值)測(cè)定,DEPT90PulseSequence,當(dāng)P3值準(zhǔn)確時(shí)譜圖中只顯示CH的C信號(hào)，CH3和CH2的C信號(hào)將消失P1是采樣通道原子核的90脈沖，P3是所要確定的去偶通道原子核的90脈沖，d2是一段時(shí)間延遲，長(zhǎng)度為1/2J，J是兩個(gè)通道的原子核之間的偶合常數(shù)值，在90脈沖測(cè)定時(shí)，J值必須是已知的。,標(biāo)樣0.1%Ethylbenzol-CDCl3，脈沖(dept90）如下圖所示：,.,將0.1%Ethylbenzol-CDCl3標(biāo)準(zhǔn)品放入磁體中，輸入edc命令，出現(xiàn)如下對(duì)話框,.,在AcquPars中完成以下操作,.,o1p設(shè)為100o2p設(shè)為45d1設(shè)為2,.,輸入p3出現(xiàn)對(duì)話框，改變圖中p3的值，可得到不同的C譜,P3值太小出現(xiàn)如下C譜,.,P3值太大出現(xiàn)如下C譜,.,P3值合適時(shí)會(huì)出現(xiàn)如下C譜,將合適的p3值輸入到edprosol表中HF2通道中，如下圖所示：,.,表中1處必須為H，將上面測(cè)得的H的F2值寫在2處，點(diǎn)save,.,13CF2通道（去偶通道）的900脈沖（P3值）測(cè)定,標(biāo)樣1%CDCl3-Acetone具體操作如下：1.先采一個(gè)H譜讀o1p和cnst2的值，脈沖序列（zg30）如右圖：2.一個(gè)C譜讀o2p的值，脈沖序列為（zgpg30）如下圖：,zgpg30PulseSequence,zg30PulseSequence,.,3.以脈沖序列decp90采H譜，測(cè)定P3值，脈沖序列如下圖：,DECP90PulseSequence,上圖所示的脈沖序列是通過觀察采樣通道的13C信號(hào)強(qiáng)度的變化測(cè)定去偶通道1H的900脈寬，這里我們想確定去偶通道13C的900脈寬，只需輸入edasp命令將兩個(gè)通道設(shè)置的原子核互換即可。,.,將1%CDCl3-Acetone標(biāo)樣放入磁體中，先采一個(gè)H譜讀o1p和cnst2的值，具體操作如下：edc后出現(xiàn)如下對(duì)話框,.,nsdsrggetprosolg,.,.,再采一個(gè)C譜讀o2p的值，具體操作如下：,.,lockwobbshimmingns=8ds=4rg=128getprosolg,.,.,以脈沖序列decp90采H譜，測(cè)定P3值,.,.,運(yùn)行edasp命令，出現(xiàn)如下對(duì)話框，將F2通道換為13C，然后點(diǎn)擊default，save,注意：這里的F1和F2通道和脈沖序列里的不同。此處的F1和F2通道對(duì)應(yīng)儀器中的F1和F2通道，而脈沖序列中所有的觀察通道叫做F1通道，另一個(gè)通道叫做F2通道,.,getprosolns=1o1p=8o2p=78ds=0d1=5CNST2=215p3=1,.,.,將上圖調(diào)整相位，具體方法如下：1.將調(diào)整相位時(shí)的紅線放在C的衛(wèi)星峰，使C的衛(wèi)星峰一正一負(fù),.,2.在Procpars中設(shè)置參數(shù)Baselinecorrection,.,efp,出現(xiàn)如下譜圖,.,將上圖中紅線區(qū)域放大并運(yùn)行如下命令DplParopt(對(duì)某一實(shí)驗(yàn)參數(shù)做漸進(jìn)式的調(diào)整)p3,ok1,ok1,ok16,ok,.,當(dāng)P3脈沖為90時(shí)，采樣通道中全部是不可檢測(cè)的多量子相干信號(hào)，而大于或小于90時(shí)，都含有可檢測(cè)到的單量子相干信號(hào)，只是峰的相位正好相反。因此通過采樣通道峰的變化可以間接確定去偶通道的90脈寬。,.,由于我們?cè)O(shè)置的起始值為1，步長(zhǎng)為1，所以我們可以知道在1800脈沖時(shí)的時(shí)間為16.5，所以900脈沖即P3的值為8.25。將8.25填入edprosol表中，如下圖所示：,.,表中1處必須為13C，將上面測(cè)得的13C的F2值寫在2處，點(diǎn)save,.,Edlock表中Field的校準(zhǔn),原理超導(dǎo)磁體的磁場(chǎng)會(huì)隨時(shí)間而逐漸減小.為了保持特征頻率(如:400.13MHz)下氫正共振所需磁場(chǎng)不變,而需改變室溫勻場(chǎng)線圈中的電流,以補(bǔ)償磁場(chǎng)的變化.室溫線圈中的補(bǔ)償電流由Filed值表示.Filed值為正值時(shí)，室溫線圈補(bǔ)償磁場(chǎng)的方向與超導(dǎo)線圈的磁場(chǎng)方向相反Filed值為負(fù)值時(shí)，室溫線圈補(bǔ)償磁場(chǎng)的方向與超導(dǎo)線圈的磁場(chǎng)方向相同,.,校準(zhǔn)步驟,Bruker儀器的基礎(chǔ)場(chǎng)是以CDCL3為溶劑的標(biāo)樣勻出的，所以校準(zhǔn)Field值時(shí)需用CDCL3為溶劑的標(biāo)樣具體操作如下將以CDCL3為溶劑的標(biāo)樣放入磁體中選取CDCL3,Lock命令鎖場(chǎng)(目的將lockshift)設(shè)為對(duì)應(yīng)值按lock鍵,取消鎖場(chǎng)調(diào)整field使信號(hào)處于中間位置鍵入Edlock命令點(diǎn)擊下圖中的1圖標(biāo),系統(tǒng)讀入此時(shí)的Field的值,并更改表頂部的Field值選擇SAVE鍵保存,.,甲醇鎖偏場(chǎng)問題的處理,將以CDCL3為溶劑的標(biāo)樣放入磁體中選取CDCL3,Lock命令鎖場(chǎng)(目的將lockshift)設(shè)為對(duì)應(yīng)值按lock鍵,取消鎖場(chǎng)調(diào)整field使信號(hào)處于中間位置鍵入Edlock命令點(diǎn)擊下圖中的1圖標(biāo),系統(tǒng)讀入此時(shí)的Field的值,并更改表頂部的Field值選擇SAVE鍵保存,.,.,將以MeOD為溶劑的樣品放入磁體中選取MeOD,Lock命令鎖場(chǎng)(目的將lockshift)設(shè)為對(duì)應(yīng)值按lock鍵,取消鎖場(chǎng)調(diào)整field使信號(hào)處于中間位置按lock鍵,鎖場(chǎng)輸入loopadj命令(需在lock鎖定的狀態(tài)下)，將反饋lockfilt,lockgain,locktime的數(shù)值并數(shù)值填入到edlock表中相應(yīng)的位置將CDCL3和MeOD的field差值填入edlock表中field-correction列中save在ICON-NMR中選擇noauto點(diǎn)保存即可。,.,水峰壓制(WaterSuppression),核磁共振實(shí)驗(yàn)樣品有許多是溶在水中,而水的共振信號(hào)又是實(shí)際樣品的數(shù)千甚至數(shù)萬(wàn)倍.ADC的資源基本上被用來描述水峰而很少一部分用來描述實(shí)際的樣品以致樣品的信號(hào)被淹沒在噪音.存在的問題:-動(dòng)態(tài)范圍;-實(shí)際樣品的信號(hào)低S/N;-實(shí)際樣品的信號(hào)淹沒在基線噪音中;-接近水峰的信號(hào)”騎”在水峰上.解決方法在采樣前壓制水峰.一經(jīng)常用到的方法是預(yù)飽和,x64,.,預(yù)飽和(Presaturation),使用一長(zhǎng)約定1-2s而低的脈沖選擇的使水峰達(dá)飽和狀態(tài),然后用一硬900脈沖激發(fā)樣品.其結(jié)果是使接受器的增益參數(shù)增加而提高動(dòng)態(tài)范圍及S/N.運(yùn)用的脈沖序列為zgpr,如下圖所示：,zgprPulseSequence,壓水峰實(shí)驗(yàn),.,具體操作如下：1.脈沖序列zgpr2.預(yù)飽和時(shí)間為1.5s3.O1移到水峰位置4.逐漸的增加脈沖強(qiáng)度5.優(yōu)化勻場(chǎng)條件,并準(zhǔn)確調(diào)整O1位置,.,Watersuppressioncanbeachievedforinstancebyapplyingalong,lowpowerpulsetothewaterresonance,followedbyahard90degreepulsetoexcitethespinsofinterest.Thisso-calledpresaturationpulsetypicallylasts1-2sandithastheeffectthatitsaturatesthewaterresonance,whichmeansthatbythetimeweapplyanRFpulsetoobservethespectrum,thereisnonetwatermagnetizationleft.(Rememberthatalongpulsehasanarrowfrequencyresponse).Asaresultthereceivergaincanbeproperlysetforthelowintensityresonances,resultinginabettersignaltonoiseandabetterdynamicrange.,.,一般水峰壓制,步驟如下:,.,.,O1p定為水峰的位置在pulprog中將脈沖程序改為zgprGetprosold1=3PL9=5060dbg,.,.,討論：1.PL9可改變，如果溶劑峰很大可放大，溶劑峰小或不想完全壓為0，可放小。2.PL9不宜太大，太大會(huì)導(dǎo)致壓制的范圍很寬。,.,水峰或溶劑峰很大時(shí)可用下列方法壓制,在pulprog中選取noesygppr1d脈沖程序GetprosolD8=0.1GPZ1=50%，GPZ2=-10%將o1p設(shè)為要壓制的水峰或溶劑峰的位移值,.,.,多峰壓制,1.先采一個(gè)H譜2.rparLC*出現(xiàn)如下界面,.,L30=n(n為要壓制的峰的個(gè)數(shù)，順序?yàn)橛纱蟮叫?F1p=15,f2p=-1（F1p,f2p為要壓制的譜圖的范圍）CNST29=1getprosolns運(yùn)行xaua命令,.,壓制前后對(duì)比,.,比較單峰壓制和雙峰壓制,.,如何在Solvent表中增加新的溶劑,以DCl(30%DCl+D2O)為例,.,.,.,.,將已知的DCl的位移值寫入Edlock表中Distance列，其它列值可參照CDCl3的值填寫,.,Edlock表中DCl的lockfilt,lockgain,locktime的編輯,將以DCl為溶劑的樣品放入磁體中選取DCl,Lock命令鎖場(chǎng)(目的將lockshift)設(shè)為對(duì)應(yīng)值按lock鍵,取消鎖場(chǎng)調(diào)整field使信號(hào)處于中間位置按lock鍵,鎖場(chǎng)輸入loopadj命令,將反饋的lockfilt,lockgain,locktime數(shù)值填入到edlock表中相應(yīng)的位置save,.,重新起動(dòng)Topspin軟件,.,第二部分:實(shí)驗(yàn)設(shè)置,一.二維實(shí)驗(yàn),2DNMR譜圖常以輪廓圖表示而不用三維的方式.相同情況同樣使用在地圖上,.,.,絕對(duì)值與相敏(phasesensitive)的COSY絕對(duì)值COSY的峰都為正峰，相敏COSY的峰有正負(fù)（可調(diào)相位）。相敏COSY中的峰比絕對(duì)值COSY的峰更尖銳（可減小譜峰的重疊程度，但需要增加累加的數(shù)據(jù)點(diǎn)）。多量子濾波(MQF)COSY雙量子濾波DQFCOSY：濾掉（減?。﹩瘟孔臃澹▽?duì)角線峰和沒有偶合的溶劑峰）。叁量子濾波TQFCOSY：濾掉（減?。﹩瘟孔雍碗p量子峰,1H1HCOSY的種類,二者是可以互相結(jié)合的，如：DQFCOSY可以是絕對(duì)值的也可以是相敏的,COSY,.,2DCOSYexperiment(magnitudemode),.,2DCOSYexperiment(magnitudemode),.,與H-HCOSY900相比，選用H-HCOSY450減少平行躍遷間的磁化轉(zhuǎn)移強(qiáng)度，限制了多重峰內(nèi)的間接躍遷，對(duì)角線則因自身的自相關(guān)峰消失而被簡(jiǎn)化，H-HCOSY450譜中的對(duì)角線峰沿對(duì)角線變窄，減小了對(duì)鄰近的交叉峰的干擾,.,2Dlong-rangeCOSY(magnitudemode),.,2DCOSY-DQFexperiment(phase-sensitive),.,2DCOSYexperiment(phase-sensitive),.,DQF-COSY與相敏COSY的圖形基本相同，但DQF-COSY有以下的優(yōu)點(diǎn)：1.在二維譜中抑制了包括化合物所固有的強(qiáng)峰（如叔丁基，甲氧基等）和溶劑峰2.在相敏COSY中，交叉峰為吸收性，對(duì)角線峰為色散型，對(duì)角線旁的交叉峰易受干擾；DQF-COSY中，對(duì)角線峰與交叉峰峰均為吸收型，對(duì)角線的峰型有很大的改善,.,1H1HTOCSY,兩個(gè)（組）氫原子只要是在一個(gè)自旋體系中，無(wú)論是有直接偶合或是間接偶合，它們之間都會(huì)有相關(guān)峰出現(xiàn)。自旋體系是由多個(gè)原子核組成的體系，體系中任一原子核至少與本體系中另一原子核有J偶合，而體系中所有原子核都不與體系外的原子核有J偶合一個(gè)自旋體系中，原子核之間有J偶合存在，稱為直接偶合，沒有J偶合的，稱為間接偶合,.,TOCSY是運(yùn)用自旋鎖定的方法，將同一自旋系統(tǒng)中的所有氫均關(guān)聯(lián)，可以逐步增加自旋鎖定時(shí)間，使自旋系統(tǒng)中的各個(gè)1H依次相關(guān)，達(dá)到推定結(jié)構(gòu)的目的。有些象接力COSY譜。,.,1H1HCOSY,3,4,2,1,1,2,3,4,2-3,3-4,1-2,.,2D1H-1HTOCSY,混合時(shí)間50ms,2,.,TOCSY(TOtalCorrelationSpectroscopY)orHOHAHA(HomonuclearHartman-HahnSpectroscopy),不同的混合時(shí)間給出不同接力程度的TOCSY譜當(dāng)混合時(shí)間很小時(shí)，TOCSY譜相當(dāng)于COSY譜,.,2DGradientTOCSY,混合時(shí)間10ms,.,2DGradientCOSY-45,2,.,2DGradientTOCSY,混合時(shí)間20ms,4,3-4,.,2DGradientTOCSY,混合時(shí)間50ms,.,.,COSY和TOCSY譜比較（1）COSY交叉峰中主動(dòng)偶合的磁化矢量是反相組分，小J偶合信息可能被抵消，而TOCSY實(shí)驗(yàn)的主動(dòng)偶合是同相組分，提高了小J偶合的檢測(cè)靈敏度。（2）TOCSY譜的特征是提供COSY和同核接力相干轉(zhuǎn)移信息，接力轉(zhuǎn)移信息，接力轉(zhuǎn)移步數(shù)由自旋鎖定混合脈沖長(zhǎng)度控制，因此，可以不同的m參數(shù)得到不同偶合相關(guān)信息，在2D譜線橫截面等高圖上可以觀察到一個(gè)完整的自旋體系，簡(jiǎn)化譜線歸屬。,.,NOESY,.,Noesy的交叉峰表示原子相互在空間上相鄰.其強(qiáng)度可用來估算原子間距并以此推斷分子的空間結(jié)構(gòu).,.,NOE實(shí)驗(yàn)對(duì)環(huán)境變化非常敏感，為了得到高質(zhì)量的譜圖，有如下建議1）高質(zhì)量的樣品。樣品的分子量最好小于800或者大于2000。不然NOE信號(hào)會(huì)很小。在這種條件下，最好做ROE實(shí)驗(yàn)。2）樣品穩(wěn)定性好。3）高質(zhì)量的核磁管4）最好預(yù)先超聲或者通氬氣除氧5）NOE實(shí)驗(yàn)過程中最好做到恒溫。,.,2DNOESYexperiment(phase-sensitive),.,ge-2DNOESYexperiment(phasesensitive),.,NOESY和ROESY的區(qū)別：ROESY是旋轉(zhuǎn)坐標(biāo)系的NOESY譜，都提供通過空間作用的核自旋相關(guān)信息，但兩者有區(qū)別：（1）NOESY和ROESY的交叉峰都取決于相關(guān)自旋間存在交叉馳豫，但NOE是縱向交叉馳豫（Longitudinalcrossrelaxation）nn而ROE是橫向交叉馳豫（trasbversecrossrelaxation）。（2）檢測(cè)靈敏度的差異。NOE和ROE交叉峰強(qiáng)度與對(duì)角線峰強(qiáng)比值與相關(guān)時(shí)間m有關(guān)。NOESY交叉峰在分子量大和小兩個(gè)極端，靈敏度很大。而ROESY交叉峰在不同分子量的分子中變化不大。（3）NOESY相關(guān)峰為反相組分，而ROESY相關(guān)峰為同相組分，可以檢測(cè)小的相互作用。,.,ge-2DNOESYexperiment(phasesensitive),.,2DROESYexperiment(phasesensitive),.,異核相關(guān)譜可通過觀測(cè)碳(1H-13CHetcor)或觀測(cè)氫(HMQC,HSQC).觀測(cè)氫的實(shí)驗(yàn)也稱做反相實(shí)驗(yàn).,.,1H13CHSQC碳?xì)渲苯酉嚓P(guān)實(shí)驗(yàn),1H-13CHSQC實(shí)驗(yàn)是異核二維譜，沒有對(duì)角線峰。每個(gè)相關(guān)峰表示相交的氫、碳峰所對(duì)應(yīng)的氫、碳原子是直接（一鍵）相連的。HSQC實(shí)驗(yàn)可以使氫譜和碳譜中的譜峰指認(rèn)信息相互利用、相互印證。當(dāng)CH2上兩個(gè)氫的化學(xué)位移不等時(shí)，HSQC譜上，一個(gè)碳峰就會(huì)與兩個(gè)氫峰有相關(guān)峰。,.,2D1H-13CHSQCusingpresaturation(phasesensitive),.,Pl9=55-60dbD1=1.5-2s,.,ge-2D1H-13CHSQCwithaz-filter(phasesensitive),.,.,.,ge-2D1H-13CHSQCusingecho-antiecho(phasesensitive),.,.,.,ge-2D1H-13CHSQCwithimprovedsensitivity(phasesensitive),.,.,.,ge-2D1H-13Cedited-HSQCwithaz-filter(phasesensitive),.,.,.,ge-2D1H-13Cmultiplicity-editedHSQCusingecho-antiecho(phasesensitive),.,.,.,1H-13CHMBC氫碳遠(yuǎn)程相關(guān)實(shí)驗(yàn),HMBC是異核二維譜，沒有對(duì)角線峰。每個(gè)相關(guān)峰表示相交的氫、碳峰所對(duì)應(yīng)的氫碳原子是以兩鍵、叁鍵或四鍵相連的。HMBC譜上是否出峰與氫、碳原子相隔幾鍵沒有直接關(guān)系，只與實(shí)驗(yàn)參數(shù)設(shè)置中所設(shè)的J值有直接關(guān)系。氫碳兩鍵、三鍵或四鍵的J值范圍有很大部份是重疊的。由于脈沖序列的關(guān)系，HMBC譜中有時(shí)也會(huì)出現(xiàn)一鍵偶合的峰，是以一對(duì)相隔一百多Hz的小峰出現(xiàn)在對(duì)應(yīng)氫峰的化學(xué)位移兩邊。,.,2D1H-13CHMBCusinglow-passJfilter(magnitudemode),.,.,2D1H-13CHMBCusingpresaturation(magnitudemode),.,.,Magnitude-modege-2D1H-13CHMBC,.,.,.,ge-2D1H-13CHMBCwithlow-passJfilter(Magnitude-mode),.,.,.,化學(xué)位移相關(guān)譜提供兩健或大于兩鍵的C-H偶合信息。是建立C-C間關(guān)聯(lián)，甚至躍過氧，氮或其它原子的官能團(tuán)關(guān)聯(lián)的有效方法。成為推導(dǎo)結(jié)構(gòu)，歸屬同碳質(zhì)子，確定1H取向等立體結(jié)構(gòu)分析以及解決那些由屏敝效應(yīng)難以解釋的季碳?xì)w屬問題的強(qiáng)有力工具。同C-H相關(guān)一樣，COLOC的缺點(diǎn)是：1JC_H峰得不到有效的壓制；靈敏度通常用樣量2030mg，累加14-18小時(shí)。HMBC實(shí)驗(yàn)可以完全解決以上缺點(diǎn)?，F(xiàn)在已經(jīng)淘汰了COLOC實(shí)驗(yàn)方法。,.,樣品：,溶劑：DMSO;400MHz；軟件：TOPSPIN1.3,1，先做氫譜（勻場(chǎng)，調(diào)諧）2，在命令行鍵入：butselnmr，右側(cè)出現(xiàn)界面3，點(diǎn)擊selective4，進(jìn)入積分菜單，選擇需要激發(fā)的峰積分，saveregionsaveregiontoreg保存并返回ns=1,td=32k,點(diǎn)setpulsecalibrate自動(dòng)保存數(shù)據(jù)（第一次要求做此步，以后就可以不做了。）4，點(diǎn)擊右側(cè)界面上的selGrNOESYORCOSY，TOCSY5,re2;efp,apk;(NOE,ROESY信號(hào)弱，累加次數(shù)增加。),實(shí)驗(yàn)步驟：,.,樣品：,溶劑：DMSO;400MHz；軟件：TOPSPIN1.3,補(bǔ)充：實(shí)驗(yàn)步驟4的操作細(xì)節(jié),.,sp2:f1channelshapedpulseP12us:f1channel180degreeshapedpulse,.,采樣參數(shù)：asedO1：需要被激發(fā)峰的頻率,.,.,sp2:f1channelshapedpulseP12us:f1channel180degreeshapedpulse,.,.,采樣參數(shù)：ased,.,.,一維選擇性TOCSY：采樣參數(shù)設(shè)置,采樣參數(shù)：ased,.,.,xwin-nmr常用命令,lock:鎖場(chǎng)lockdisp：顯示鎖場(chǎng)窗口rga：根據(jù)樣品條件自動(dòng)調(diào)整增益zg:開始采樣acqu或a:顯示采樣窗口tr:中間取